A medição da função do músculo liso nas Isolado tecido de banho-aplicativos para Farmacologia Research

O objetivo geral deste procedimento é medir o tônus do músculo liso. Isso é feito primeiro dissecando e preparando os tecidos. O segundo passo é montar o tecido em um banho de tecido isolado.

Em seguida, a viabilidade do tecido é testada e as medições de contração isométrica são feitas. Em última análise, a preparação do banho de tecido isolado é usada para testar a função do receptor, a sinalização do receptor e a reatividade do músculo liso. Em geral, As principais vantagens desta técnica são a flexibilidade do sistema, a rapidez de obtenção de resultados e a manutenção de todo o tecido intacto.

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave Em qualquer campo que use drogas para interferir na sinalização dos receptores ou na alma do músculo liso, existem algumas preparações que devem ser enfatizadas. É vital pré-aquecer o sistema de banho de tecido a 37 graus Celsius, ligando o banho-maria aquecido recirculante. A água deve fluir para cada componente na conexão farpada mais baixa e fluir para fora na conexão farpada mais alta.

Cada componente deve ser conectado. Os transdutores de força devem ser calibrados e também devem ser ligados pelo menos 15 minutos antes do experimento para equilibrar sua temperatura. Em seguida, ao conectar o gás, verifique se há vazamentos e pressurize o sistema.

Depois de encher o sistema com solução, certifique-se de prepará-lo e remover quaisquer bolhas de ar. O teste dos aeradores de banho de tecido também é garantido. Uma boa aeração distribuirá os medicamentos de forma eficaz, mas não desestabilizará o tecido imediatamente antes do experimento.

Disseque o tecido. Depois de anestesiar o rato, crie um pneumotórax usando uma tesoura. Xingar ao longo do diafragma na parte inferior da caixa torácica.

Em seguida, corte da parte inferior da caixa torácica até o esterno e corte o tecido ao meio. Limpe os órgãos sobre a coluna vertebral para localizar a aorta, que fica diretamente ao longo da coluna vertebral. Agora corte todas as conexões com a aorta e corte a aorta perpendicular à coluna vertebral ao nível do diafragma.

Em seguida, segure suavemente a aorta e disseque a aorta da coluna. Comece na área do diafragma inferior adjacente à coluna e trabalhe em direção ao coração. Apenas tome cuidado para não puxar ou puxar o tecido aórtico, pois isso pode danificá-lo imediatamente.

Coloque a aorta em uma placa de dissecção contendo PSS. Agora pegue um fio e faça um pequeno ângulo de 90 graus. Em uma extremidade, ancore a extremidade angular do fio na base do prato de dissecação.

Em seguida, rosqueie cuidadosamente o fio-guia no lúmen da aorta e deslize a aorta no fio. Quando a extremidade livre do fio se tornar visível, dobre-a suavemente e empurre-a para dentro da fundação, estabilizando assim o tecido. Agora, usando pequenas tesouras e pinças de Vênus, remova o tecido adiposo perivascular e outros tecidos estranhos até que a aorta torácica pareça branca e um tanto fibrosa.

Uma vez limpo do excesso de tecidos, remova cuidadosamente a aorta limpa do fio. Termine esta seção cortando a aorta em anéis de três a cinco milímetros de largura. Um anel aórtico de alcance.

Preparei dois ganchos de tecido com suturas para prendê-lo na câmara de banho. Um gancho deve ter uma sutura com um pequeno laço com nós para fixação a uma haste. O outro gancho precisa de um pedaço de sutura de 10 a 14 centímetros de comprimento.

Para dar um nó, prenda cuidadosamente um par desses ganchos de tecido em cada anel aórtico. Tenha cuidado para evitar emaranhar os ganchos. Em seguida, transfira cada pedaço de tecido para um prato de PSS em temperatura ambiente com um porta-lenços preso a um suporte de anel.

Em seguida, deslize o laço com nós no pino da haste e use o pedaço longo de sutura para segurar o tecido. Em seguida, coloque a haste na câmara e certifique-se de que a haste esteja segura. Agora, amarre a sutura do gancho restante ao transdutor de força.

Deixe folga suficiente na sutura, para que a tensão entre o transdutor de força e o tecido possa ser ajustada pelo micrômetro. Repita esse processo para cada anel em cada câmara. Agora, defina a tensão passiva.

Use o micrômetro para aumentar a tensão para dois gramas e espere que a tensão no tecido pare de aumentar. Em seguida, aumente a tensão em mais dois gramas e, novamente, aguarde a mudança na tensão. Para terminar.

A tensão agora deve estar em torno de 3,2 gramas. Repita esse processo em cada anel em cada câmara. Depois de definir todas as tensões passivas, deixe os tecidos se equilibrarem por uma hora.

Durante esse tempo, substitua o PSS a cada 15 minutos e faça outros preparativos para o experimento, como o preparo dos medicamentos ao final do período de equilíbrio. Lave o lenço uma última vez, salve os dados e reinstale todas as entradas. Em seguida, seguindo os detalhes do protocolo de texto, faça o desafio inicial.

Certifique-se de documentar essas ações no software. Após o desafio inicial, a mudança de tensão se estabilizará. Em seguida, lave o medicamento de desafio para que o tom do tecido atinja uma linha de base.

Deixe o tecido descansar neste tom de linha de base por cerca de 10 minutos agora para um banho no veículo, neste caso, água para o outro. Adicione prazocina suficiente para uma concentração de cinco nanomolares no banho. Deixe os banhos de tecido incubarem por uma hora sem lavar.

Enquanto isso, repare a rina de fenol em uma ampla gama de concentrações ao longo de uma curva logarítmica. Após uma hora, adicione o agonista fenilrina em concentrações crescentes ao banho para gerar uma resposta cumulativa de concentração. Após cada adição, aguarde o platô da resposta tecidual antes de adicionar a próxima concentração.

Continue fazendo adições até que elas não mudem mais o tônus do tecido ou até que toda a curva de resposta tenha se estabilizado. Em vez disso, a aorta torácica foi incubada no antagonista do receptor adrenérgico alfa um POZ sim por uma hora antes de adicionar o agonista adrenérgico alfa um fenilrina ao banho tecidual e gerar curvas de resposta de contração cumulativa as contrações máximas e meia máximas de fenilina. Somente no veículo, os tecidos de controle são marcados em verde.

A metade máxima identifica a concentração efetiva do medicamento. As mesmas medidas para o tecido tratado com razin são vistas em preto. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como medir a função do músculo liso em um banho de tecido isolado.