Experimental Glaucoma induzida pela injeção de microesferas magnéticas Ocular

O objetivo deste procedimento é induzir pressão intraocular elevada no rato usando a injeção de microesferas paramagnéticas na câmara anterior do olho. Primeiro coloque um anel magnético ao redor do olho de um animal anestesiado, lave as microesferas magnéticas, ressuspenda-as em solução e, em seguida, coloque-as em uma seringa. Em seguida, injete as microesferas magnéticas na câmara anterior do olho.

Remova o anel magnético durante a recuperação. Os dados do processo obtidos a partir de análises histológicas, como coloração de túnel ou coloração do nervo óptico, podem medir a morte de células ganglionares da retina que resulta do aumento da pressão intraocular. Lave as esferas de microesferas magnéticas esterilizadas de oito mícrons três vezes em um mililitro de solução salina tamponada de hank por reus, suspendendo e centrifugando a 10.000 vezes G por cinco minutos.

Em seguida, suspenda novamente em 0,5 mililitros de HBSS para uma solução de 30 miligramas por mililitro. Agora, usando um ultrassonômetro de rebote calibrado para uso no olho do rato, faça cinco medições de PIO de linha de base nos animais acordados. Após a anestesia, os ratos aplicam pomada ocular no olho contralateral não classificado para mantê-lo úmido.

Durante a anestesia, aplique cloridrato de propano a 0,5%, anestésico local no olho operatório. Em seguida, lave este olho com 5% de iodopovidona em água. Após cinco minutos, retire a iodopovidona e lave o olho com solução salina estéril a 0,9%.

Mantenha o olho úmido durante a anestesia com a aplicação regular de solução salina estéril. Agora coloque um ímã esteróide ao redor do olho para minimizar o risco de trauma da íris e minimizar a perda de contas. Oriente a agulha tangencial à superfície da córnea o mais paralela possível à íris.

Prossiga para injetar 25 microlitros de 30 miligramas por mililitro, microesferas magnéticas irradiadas por gama na câmara anterior. Deixe a agulha no lugar por um minuto após a injeção para garantir que as esferas se depositem no ângulo da córnea do COI para impedir a drenagem aquosa da malha trabecular. Trabalhe levemente a agulha alguns segundos após as contas terem se acomodado inicialmente para permitir algum vazamento de água e minimizar aumentos transitórios na pressão intraocular.

Para garantir o uso contínuo da agulha em procedimentos separados, lave a agulha com PBS. Em seguida, 70% de etanol, seguido de água destilada nesta fase. Se necessário, remova o ímã e use-o para atrair contas em áreas de cobertura incompleta.

Deixe o ímã no lugar ao redor do olho por mais 10 minutos após a injeção. Para garantir que as contas se assentem bem no ângulo árido da córnea. Anestesia reversa com 0,25 miligramas por quilograma de cloridrato de ESOL.

Administre cloridrato de propano 0,5 para analgesia e pomada de cloranfenicol topicamente para prevenir infecções. Deixe os animais se recuperarem em um tapete térmico até que recuperem o movimento. Em seguida, transfira para uma caixa quente.

Use o olho contralateral como um controle não classificado. Repita as medições da PIO a cada dois ou três dias após a administração do grânulo e a cada dois a três dias a partir de então, defina os critérios para incluir os olhos nos estudos, incluindo a PIO elevada acima da pressão de controle contralateral em cinco milímetros de mercúrio, e a PIO não excede 60 milímetros de olhos de mercúrio onde a pressão retorna à linha de base uma semana após a injeção não deve ser incluída nos estudos. No entanto, é possível reinjetar grânulos nos olhos que não desenvolvem PIO alta, se desejado.

Fixe os olhos dissecados e o nervo óptico em 4% de paraldeído, avaliando o dano do neurônio da retina por coloração do túnel e o dano do nervo óptico pelo azul toine. Mancha. Neste experimento, a injeção de esferas magnéticas no ângulo írido da córnea induziu consistentemente um aumento prolongado e robusto da pressão. Além disso, o aumento da pressão foi mantido durante toda a duração do experimento.

A média da PIO em toda a extensão do experimento para olhos de controle sem injeção de contas foi de 19,7 mais menos 0,3 milímetros de mercúrio e 40,5 mais menos 2,8 milímetros de mercúrio para olhos injetados com contas. Além disso, o pico da PIO aumentou de 22,8 mais menos 0,3 milímetros de mercúrio para 49,9 mais menos 2,3 milímetros de mercúrio para determinar se a elevação da PIO leva à morte das células ganglionares da retina. A coloração em túnel foi realizada nas retinas e a histologia nas seções transversais do nervo óptico na retina.

Observamos um aumento na coloração do túnel em olhos injetados com esferas com PIO elevada. O número de núcleos apoptóticos aumentou aproximadamente 15 vezes a partir de retinas hipertensivas de controle contralateral, como esperado em olhos nos quais esferas magnéticas foram injetadas sem pressão, o número de células positivas do túnel não foi significativamente diferente daquelas dos controles injetados unin. Uma investigação mais aprofundada da patologia do nervo óptico no modelo de glaucoma mostrou o acúmulo de azul de odo em muitos dos axônios, indicando degeneração desses processos celulares.