Name: o In Ovo Chick Corioalantóide membrana (CAM) como um Ensaio Xenoenxerto modelo eficiente de carcinoma hepatocelular (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Aprenda a desenvolver tumores vascularizados tridimensionais de carcinoma hepatocelular usando o ensaio de membrana corioalantóide de embrião de galinha. Este modelo in vivo permite estudar angiogênese tumoral com taxas de sobrevivência embrionária de até 93%.

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A.S. foi parcialmente apoiado por doações do National Institutes of Health (NIH), National Institute of Dental and Craniofacial Research (5R03DE021741-02) e do National Cancer Institute (1K08CA154963-01A1). 
O Howard Hughes Medical Institute forneceu financiamento para ML por meio do Programa de Bolsas de Pesquisa Médica HHMI.

1. A incubação do ovo <ol><li> Obter 8 dias de idade ovos isentos de agentes patogénicos específicos embrionados. </li><li> Coloque os ovos na rotação bandeja de ovos, estampadas extremidades voltadas para cima, e coloque a bandeja girando dentro de uma incubadora de ovos. Incubar os ovos durante 48 horas a 36 ° C e 50% de humidade. </li></ol> 2. Deixar cair o CAM e abrindo os ovos <ol><li> Recolher os ovos da incubadora. Coloque os ovos na prateleira dos ovos, carimbado lado de cima, e trazer à capela de fluxo laminar. </li><li> Desligue as luzes da sala e do capô. </li><li> Segurar o fim visado de ovo levemente para o candler ovo para expor a vasculatura de CAM, bem como o saco de ar. NOTA: O candler ovo é uma fonte de luz usado para visualizar o desenvolvimento do embrião e do saco de ar associado e vasculatura. </li><li> Coloque uma marca de lápis entre dois grandes vasos sanguíneos. </li><li> Ligar as luzes e usar um pino estéril para fazer um orifício na ponta do ovo por cima do saco de ar (final estampado) e um furo na pemarca NCIL. Não empurre o pino do impulso durante todo o tempo; um furo de cerca de 3 mm de profundidade será normalmente suficiente. </li><li> Apaga as luzes. Squeeze bulbo segurança, pressionando a extremidade aberta firmemente contra o buraco acima do saco de ar. Aplicar sucção para puxar o ar para dentro do buraco na marca de lápis, fazendo com que o CAM a cair para longe do reservatório na marca de lápis. </li><li> Verifique se o saco de ar passou do final carimbado do ovo para o buraco marcado-lápis usando o candler. Se não tem, use o pino do impulso para fazer dois buracos um pouco mais profunda e, em seguida, voltar a aplicar sucção usando a lâmpada de segurança. </li><li> Acenda as luzes. Segurando o ovo em uma mão, ligar a ferramenta rotativa Dremel com um 15/16 polegadas roda de corte em anexo e fazer dois cortes transversais apenas profundo o suficiente para cortar a casca, mas não é profundo o suficiente para cortar todo o caminho para o deprimido CAM. Fazer os cortes de cerca de 2 cm de comprimento e 1 cm de distância um do outro. Fazer os cortes de largura suficiente de modo que um anel de silicone de 1 cm de diâmetro pode passar atravésmas mais fino do que a largura de fita adesiva padrão. </li><li> Em seguida, faça um corte longitudinal entre e nas extremidades dos dois cortes transversais tocando levemente a roda de corte para o shell. </li><li> Deslize uma pinça estéril sob a peça shell e paralelo ao shell. Pegue o pedaço shell com a pinça e retire toda a peça limpa. </li><li> Coloque fita adesiva sobre a janela recém-inaugurado, certificando-se de dobrar uma ponta sobre si mesmo para facilitar a remoção. </li><li> Coloque os ovos de volta na incubadora na bandeja do ovo (NOT nas prateleiras de ovos rotativas) até o momento da inoculação. </li></ol> 3. Inoculação <ol><li> Mantenha porão mistura de proteína de membrana, como matrigel, em gelo (para evitar a polimerização) e coloque na capa. </li><li> Use EDTA 2 mM, para separar as células (4 - 5 ml por frasco T75) e frascos de cultura de tecido em lugar incubadora durante 5 min. </li><li> Volte a suspender as células isoladas nos meios de comunicação e contar com um hemocitômetro e azul de tripano. Use entre 500.000 to 2.000.000 de células para enxertia sobre o CAM, dependendo da linha celular. Otimizar o número adequado de experimentos preliminares. </li><li> Medida do volume necessário para o número de células apropriado e centrifugar a 500 xg durante 5 min. </li><li> Descartar o sobrenadante e ressuspender em seguida sedimento celular em 40 μ l de PBS ++ e 20 μ l de mistura de membrana basal. NOTA: Neste ponto, as células podem ser tratadas com fármacos ou outros agentes de teste quanto necessário para as experiências por ressuspensão em suspensão a mistura membrana celular / porão. Alternativamente, os agentes podem ser pipetado para a suspensão de células de membrana mistura / cave após o enxerto. </li><li> Recuperar rack de ovo com os ovos da incubadora e lugar na capela de fluxo laminar. </li><li> Retire a fita da janela, recuperar um anel de silicone 1 mm do tampa de um frasco criogênico usando uma pinça esterilizados, e soltar o anel pela janela. </li><li> Pipetar a solução de células 60 μ l de PBS ++ e membrana basal MIXTURe directamente para o centro do anel de silicone que descansa sobre a CAM. </li><li> Re-tape a janela e mover prateleira dos ovos de volta à incubadora. Neste ponto, tenha cuidado ao mover os ovos como o anel e a suspensão de células pode facilmente se tornar deslocados. </li><li> Permitir que os tumores crescer durante 5 a 7 dias. </li></ol> 4. Colhendo Tumores <ol><li> Coloque sob-pad na capa. Preparar 35 x 10 mm pratos e recipientes de paraformaldeído, conforme necessário para a histologia. Colocar 1 mL de PBS ++ em cada placa de 35 mm x 10. </li><li> Coloque saco de risco biológico na capa. Pegue uma tesoura de dissecção estéril e introduza a ponta para dentro do ovo no buraco perto do final carimbado. </li><li> Corte em torno de todo o ovo longitudinalmente. NOTA: o CAM eo tumor com o anel deve ficar para a metade superior do reservatório com a janela. </li><li> Com uma tesoura de dissecção e uma pinça, dissecar o tumor longe do CAM e coloque tumor na placa de 35 mm x 10. Medir e pesar tumores. Tumores fixas em paraformaldehyde parafina e, em seguida, incorporar-los para uso em histologia e imunohistoquímica experimentos. </li></ol> 5. (Opcional): Tumor de dissociação de células <ol><li> Use tesouras de dissecação para picar o tumor na placa de 35 mm x 10. Pour tumor fragmentado em um tubo de centrífuga de 15 ml e remover o máximo de PBS ++ quanto possível através de pipetagem. </li><li> Adicionar 2 ml de colagenase (1 mg / ml em PBS ++), ao longo do tubo ligar várias vezes, e incubar a 37 ° tubo C durante pelo menos 30 minutos (até várias horas). </li><li> Adicionar 5 ml de mídia para cada tubo e ressuspender completamente pipetando cima e para baixo 20 - 40x. Pipetagem minuciosa é fundamental para a dissociação de células completa. </li><li> Permitir a sedimentação, e transferir o sobrenadante para um novo tubo. Centrifugar a 500 xg durante 5 min. Remover o sobrenadante, deixando para trás pelete de células dissociadas. NOTA: neste momento, os sedimentos celulares podem ser usadas para várias experiências (citometria de fluxo, a lise para uso na transferência de Western, o isolamento de ARN, etc.). A contagem total de células tumorais também pode ser obtido usando um hemocitómetro e coloração com azul de tripano. Note-se que, células ovais menores são células de galinha do CAM e não devem ser contadas como células tumorais. Deve haver um número mínimo de contaminação de células não tumorais (CAM) Se o tumor é dissecada cuidadosamente a partir da CAM. </li></ol>

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<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF+coordinates+interaction+of+pericytes+and+endothelial+cells+during+vasculogenesis+and+experimental+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">VEGF coordinates interaction of pericytes and endothelial cells during vasculogenesis and experimental angiogenesis.</a> Dev Dyn. 230 (1), 23-33 (2004).</li>
</ol>

A.S. recebe financiamento da empresa Advaxis Pharmaceutical para apoiar um ensaio clínico iniciado pelo investigador.

Vários passos principais neste protocolo mais provavelmente representam a sobrevivência embrionária melhorada bem como uma maior fiabilidade do crescimento do tumor. Soltando o CAM para longe do reservatório através da aplicação de sucção para o saco de ar é menos invasiva do que os outros métodos existentes (utilizando uma agulha para remover a albumina do ovo, dissecção cega, etc.). Usando um alfinete estéril para criar os dois pequenos furos necessários para este método é a parte mais desafiadora do protocolo. Usando...

O carcinoma hepatocelular (HCC) é a 3ª maior causa de mortalidade por câncer no mundo 1. Atualmente, apenas 30% dos pacientes com CHC são elegíveis para os tratamentos cirúrgicos potencialmente curativas 2, e quimioterapia sistêmica não é eficaz 3. Portanto, existe uma necessidade premente para clínica não satisfeita terapias HCC novos, e o desenvolvimento de sistemas modelo adequados para o teste eficiente de novos agentes. O corioalantï¿½ca membrana (CAM) ensaio pintainho fornece um método reprodutível, de custo-eficaz, rápido e de médio rendimento de testar potenciais fármacos anti-tumorais in vivo. O ensaio CAM tem sido amplamente utilizado para estudar angiogénese 4. Também foi desenvolvido com sucesso num modelo de xenoenxerto de tumor de cancros, incluindo o glioblastoma 5, 6 cancro pancreático, melanoma 7-9, 10-11 e osteossarcoma. Ambos in ovo 12 e ex ovo13 técnicas têm sido utilizadas na literatura, com detalhes que variam de protocolo para protocolo. Um grande desafio para o modelo CAM xenotransplante é a incidência relativamente elevada de morte embrionária após a manipulação do ovo, com taxas de mortalidade de embriões de pintainho publicados que variam 25-50 por cento 11-14. Neste artigo, descrevemos o desenvolvimento de um modelo in ovo de xenotransplante de HCC que produz de forma confiável crescimento de tridimensionais, tumores vascularizados que histologicamente se assemelham HCC indiferenciado. Temos adaptado um protocolo inicialmente descrito por Ossowski et ai. 14 e ter atingido pintainho embrionário taxas de sobrevivência de até 93% com o enxerto do tumor extremamente alta.

<table><tbody><tr><td>Ovos incubados premium</td><td>Charles River</td><td>N/A</td><td>http://www.criver.com/files/pdfs/avian/av_c_spf_egg_price_list.aspx</td></tr><tr><td>Incubadoras de ovos</td><td>GQF</td><td>Hova-Bator 2362N</td><td></td></tr><tr><td>Bandejas rotativas para ovos</td><td>GQF</td><td>1611 Girador</td><td></td>de ovos automático</tr><tr><td>Veleiro de ovos</td><td>Lyon</td><td>Hi-Power 950-070</td><td></td></tr><tr><td>Ferramenta rotativa Dremel 100 com disco de corte 15/16</td><td>Dremel</td><td>100-N/7</td><td></td></tr><tr><td>Pinça estéril, alfinete, tesoura de dissecação, fita</td><td></td><td></td><td></td>adesiva</tr><tr>Frascos criogênicos<td>Matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>356234</td><td></td></tr>, <tr><td>rosca externa com arruela de silicone</td><td>Corning</td><td>430659</td><td></td></tr><tr><td>colagenase de Clostridium histolyticum</td><td>Sigma</td><td>C9891</td><td></td></tr></tbody></table>

o<em&gt; in ovo</em&gt; chick corioalantóide membrana (cam) como um ensaio xenoenxerto modelo eficiente de carcinoma hepatocelular

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

A membrana corioalantï¿½ca pinto (CAM) começa a se desenvolver no dia 7 após a fertilização e amadurece a dia 12. O CAM é naturalmente imunodeficientes e altamente vascularizado, tornando-se um sistema ideal para a implantação do tumor. Além disso, a CAM contém proteínas da matriz extracelular, tais como fibronectina, laminina, colagénio, integrina alfa (V) beta3, e MMP-2, tornando-se um modelo atractivo para estudar a invasão tumoral e metástases. Os cientistas têm tomado longo vantagem da fisiologia da CAM usando-o como um modelo de angiogénese. Mais recentemente, o ensaio CAM foi modificado para funcionar como um sistema modelo in vivo de xenotransplante para vários tipos de câncer que preenche a lacuna entre o trabalho de base in vitro e modelos mais complexos de cancro animal. O ensaio CAM permite o estudo do crescimento do tumor, as terapias anti-tumorais, e vias moleculares pró-tumorais num sistema que é biologicamente importante tanto em termos de custos e tempo eficaz. Aqui, descrevemos o desenvolvimento da CAM xenograft modelo de carcinoma hepatocelular (HCC), com taxas de sobrevivência de embriões de até 93% e tumor confiável tomar levando a um crescimento de tridimensionais, tumores vascularizados.

Imagens representativas dos passos chave no protocolo são mostrados aqui. A Figura 1A demonstra o uso do candler para visualizar o embrião em desenvolvimento, o saco de ar, e a vasculatura da CAM. A Figura 1B-1C mostram o processo de deixar cair a CAM, fazendo os dois orifícios e, em seguida, a aplicação de pressão negativa usando a lâmpada de segurança, e a Figura 1D mostra uma removida com sucesso CAM com uma bolha de ar grande sob o buraco marcado lá...

A membrana corioalantóica (CAM) do pintinho é imunodeficiente e altamente vascularizada, tornando-se um modelo natural in vivo de crescimento tumoral e angiogênese. Neste protocolo, descrevemos um método confiável de crescimento de tumores tridimensionais de carcinoma hepatocelular vascularizado (CHC) usando o ensaio CAM.

o<em&gt; In Ovo</em&gt; Chick Corioalantóide membrana (CAM) como um Ensaio Xenoenxerto modelo eficiente de carcinoma hepatocelular

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

O objetivo geral deste experimento é desenvolver um modelo confiável de xenoenxerto em membrana corioalantoide de carcinoma hepatocelular. Isso é alcançado primeiramente incubando os ovos para prepará-los para inoculação. Como segundo passo, a membrana corioalantoide, ou cam, do ovo é rebaixada e uma janela é cortada na casca do ovo.Em seguida, o ovo é inoculado com células de carcinoma hepatocelular humano através da janela no casco para estabelecer o crescimento tumoral. Os resultados mostram que tumores tridimensionais vascularizados foram cultivados com sucesso utilizando linhagens celulares de carcinoma hepatocelular humano. Utilizando este protocolo, taxas de sobrevivência embrionária de até 93% foram alcançadas.As principais vantagens do ensaio CAM em comparação com outras técnicas in vivo, como modelos de tumor em camundongos, são o curto tempo do ensaio experimental, o baixo custo total do experimento e a facilidade. Os ensaios CAM podem ser utilizados para estudar angiogênese, tumor, invasão celular e metástase. Eles também podem ser usados para determinar o efeito de moléculas pequenas e fármacos sobre o crescimento e desenvolvimento de tumores.A demonstração visual deste procedimento é importante porque as diferentes etapas envolvidas na preparação do ovo, incluindo a candelação, a identificação da vasculatura, a realização de pequenas perfurações próximas ao saco aéreo e na parte superior do ovo sem drená-lo, podem ser desafiadoras para novos usuários. Cortar as janelas sem rachar a casca do ovo e garantir que a câmera permaneça intacta durante todos os processos também pode ser difícil. Para começar, posicione.Ovos de galinha nativa livres de patógenos específicos com oito dias de idade em uma bandeja giratória com as extremidades marcadas voltadas para cima. Coloque a bandeja giratória no interior de uma incubadora de ovos a 36 graus Celsius com umidade de 50% e incube os ovos por 48 horas. Após a incubação, coloque os ovos em uma grade para ovos com as extremidades marcadas voltadas para cima e posicione-os em uma cabine de fluxo laminar.Desligue as luzes da sala e da cabine e segure levemente a extremidade marcada do ovo contra o candeeiro para ovos, a fim de expor a vasculatura da membrana corioalantoideana do embrião de galinha, conhecida como CAM, e o saco de ar. Faça uma marca entre os dois principais vasos sanguíneos com um lápis. Em seguida, faça um furo na ponta do ovo, acima do saco de ar, na extremidade marcada, e um segundo furo na marca feita com o lápis.Usando um pino estéril, o orifício deve ter cerca de três milímetros de profundidade. Aperte o ar de uma bomba de segurança e pressione a extremidade aberta firmemente contra o orifício acima do saco de ar. Libere lentamente a bomba para aplicar sucção, puxando o ar para dentro do orifício no ponto marcado a lápis e fazendo com que o came se solte da concha.Confirme que o saco de ar se deslocou da extremidade marcada do ovo até o orifício marcado a lápis, utilizando o candeeiro. Caso contrário, faça ambos os orifícios ligeiramente mais profundos e reaplique a sucção com a lâmpada de segurança. Em seguida, segure o ovo com uma das mãos, utilizando uma ferramenta rotativa com um acessório de disco de corte de 1516 polegadas.Realize dois cortes transversais na concha sem tocar no came. Os cortes devem ter dois centímetros de comprimento e estar separados por um centímetro. Em seguida, faça cortes longitudinais nas extremidades dos dois cortes transversais tocando levemente a rodela de corte na concha.Para remover a casca, deslize uma pinça estéril sob a peça da casca e paralelamente a ela. Segure a peça com a pinça e remova-a limpidamente. Segure uma extremidade de um pedaço de fita adesiva sobre si mesma e, em seguida, posicione a fita sobre a abertura no ovo.Coloque o ovo em uma bandeja de ovos e posicione a bandeja na incubadora sem rotação por não mais de duas a três horas antes da inoculação. Para preparar a inoculação, coloque uma mistura de proteína da membrana basal, como matrigel, no gelo para evitar a polimerização. Em seguida, use quatro a cinco mililitros de uma solução de dois milimolares de EDTA por frasco para destacar as células tumorais e coloque o frasco na incubadora de cultura de tecidos por cinco minutos.Re-suspenda as células destacadas no meio e conte o número de células. Utilize entre 500.000 e 2 milhões de células para enxertia sobre a CAM, dependendo da linhagem celular. Em seguida, transfira o volume necessário para obter o número apropriado de células para um novo tubo e centrifugue por cinco minutos.À força de 500 vezes a gravidade, descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet celular em 40 microlitros de PBS contendo cálcio e magnésio, conhecido como PBS duplo positivo, e 20 microlitros de mistura de membrana basal. Neste ponto, medicamentos ou outros agentes de teste podem ser adicionados à suspensão celular.Em seguida, coloque a bandeja de ovos na câmara de fluxo laminar. Remova a fita do ovo e solte um anel de silicone estéril de um milímetro, proveniente de um frasco criogênico, através da abertura e sobre o tubo de câmara. Adicione a solução de 60 microlitros de células, PBS mais mais e mistura de membrana basal ao centro do anel de silicone, recoloque a fita sobre a janela e mova cuidadosamente a bandeja de ovos de volta para a incubadora.Deixe os tumores crescerem por cinco a sete dias. Para colher os tumores, coloque uma almofada absorvente e um saco de resíduos biológicos na cabine de segurança.Prepare placas de 35 milímetros por 10 milímetros contendo um mililitro de PBS mais mais e recipientes com paraformaldeído conforme necessário para histologia. Insira a extremidade pontiaguda da tesoura de dissecação estéril no ovo no orifício próximo à extremidade marcada e corte ao longo de todo o comprimento do ovo. A câmara e o tumor com o anel devem aderir à metade superior da casca com a abertura.Extraia o tumor da câmara usando dissecação, tesoura e pinça, e coloque o tumor em uma placa de 35 milímetros por 10 milímetros. Meça e pese o tumor. Fixe o tumor em paraformaldeído e inclua em parafina para uso em experimentos de histologia e imunohistoquímica.Após colher o tumor, pique o tecido tumoral na placa com tesoura de dissecação. Em seguida, transfira o tumor picado para um tubo cônico de 15 mililitros e remova o PBS mais mais por pipetagem. Adicione dois mililitros de uma solução de um miligrama por mililitro de colagenase em PBS mais mais e homogeneíze invertendo o tubo várias vezes.Incube o tubo a 37 graus Celsius por pelo menos 30 minutos e até várias horas. Em seguida, adicione cinco mililitros de meio ao tubo e misture bem pipetando de 20 a 40 vezes. Isso é essencial para dissociar completamente as células.Após a sedimentação do material, transfira o sobrenadante para um tubo novo, centrifugue o tubo a 500 vezes a gravidade durante cinco minutos e descarte o sobrenadante, deixando o pellet de células dissociadas. Quando a câmara foi implantada com células tumorais HUH sete, um tumor vascularizado era visível no interior do anel. Após cinco dias de crescimento, a histologia do tumor HUH sete proveniente do ensaio com CAM mostrou que as células tumorais se assemelham a células de carcinoma hepatocelular indiferenciado.Ao trabalhar com este método, é importante lembrar que algumas otimizações podem ser necessárias, dependendo das diferentes células ou diferentes fármacos envolvidos. Por exemplo, algumas linhagens celulares podem necessitar de densidades maiores ou menores para formar tumores tridimensionais.

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O filhote corioalantóicas membrana (CAM) é único, um ambiente de cultura naturalmente imunodeficientes apoio para estudar a angiogênese e tumorigênese. Este artigo vídeo demonstra as diferentes etapas no...

Pintinho Ex ovo Cultura e Ex ovo CAM Ensaio: como ele realmente funciona

Neste vídeo, descrevemos a implantação de células cancerígenas em uma membrana corioalantóide de galinha para gerar um modelo in ovo. O modelo enxerta com sucesso as células do câncer de ovário para estudar a progressão do câncer ginecológico.

Modelagem de câncer baseada em membrana corioalantóide de frango: um modelo in ovo para estudar tumorigênese e metástase de células cancerígenas

Neste vídeo, descrevemos o método de co-cultura de gânglios da raiz dorsal e células cancerígenas na membrana corioalantóide de pintinho ou CAM para estudar a invasão perineural.

Membrana corioalantóide de pintinho ou modelo de tumor CAM: um método in ovo para simular a invasão perineural de células tumorais

Este vídeo demonstra o isolamento da membrana corioalantóide portadora de tumor do embrião de galinha. O CAM colhido pode ser usado para outras aplicações a jusante.

Colheita de membrana corioalantóide de pintinho: um método para isolar a membrana corioalantóide com enxerto tumoral de ovo de galinha

O<em&gt; Em ovo</em&gt; CAM-ensaio como um Xenograftmodel para o Sarcoma

A invasão perineural é um phenotype agressivo para carcinomas de pilha Squamous da cabeça e da garganta e outros tumores. O modelo de membrana corioalantoica de pintinho tem sido usado para estudar angiogênese, invasão de câncer e metástase. Aqui nós demonstramos como este modelo pode ser utilizado para avaliar a invasão perineural in vivo.

A membrana Chorioalantoica Chick in vivo modelo para avaliar invasão perineural em câncer de cabeça e pescoço

Carcinoma de células renais metastáticas claras é uma doença sem um modelo animal abrangente para investigação pré-clínica completa. Este protocolo ilustra dois novos modelos animais para a doença: o modelo de camundongo sutópicamente implantado e o modelo de membrana chorioallantoico de frango, ambos demonstram metástase pulmonar semelhante a casos clínicos.

Comparando modelo de carcinoma de célula séuológica metastática clara estabelecida no rim do rato e na membrana chorioallantoico de frango

Apresentamos o modelo de membrana chorioallantoico de frango como uma alternativa, transplantável, no modelo vivo para o enenxerto de linhas de células cancerígenas ginecológicas e urológicas e tumores derivados do paciente.

Utilização da membrana chorioallantoico de frango em modelo vivo para estudar cânceres ginecológicos e urológicos

Este protocolo descreve três métodos sobre como obter e usar embriões de frango de 5 a 8 dias de idade e sua membrana corioalantóica (CAM) como um modelo in vivo para estudar imagens de ultrassom com contraste e entrega de drogas mediadas por microbolhas.

A preparação de embriões de frango ex ovo e vasos de membrana corioalantóica como modelo in vivo para imagens de ultrassom com contraste e estudos de liberação de drogas mediados por microbolhas

Aqui, descrevemos um protocolo para o desenvolvimento de um modelo de xenoenxertia de membrana corioalantóica (CAM) para tecido ovariano humano e demonstramos a eficácia da técnica, o tempo de revascularização do enxerto e a viabilidade tecidual ao longo de um período de enxertia de 6 dias.

Modelo de membrana corioalantóide de pintinhos (CAM) como ferramenta para o estudo do transplante de tecido ovariano

Aprenda a desenvolver tumores vascularizados tridimensionais de carcinoma hepatocelular usando o ensaio de membrana corioalantóide de embrião de galinha. Este modelo in vivo permite estudar angiogênese tumoral com taxas de sobrevivência embrionária de até 93%.

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