Um modelo murino de irreversível e reversível obstrução ureteral unilateral

Este vídeo apresenta um modelo murino de neuropatia obstrutiva induzida por obstrução ureteral unilateral, que pode ser irreversível ou reversível. Dados histológicos destacando a lesão estrutural resultante e sua recuperação após a reversão são apresentados. Este desenho esquemático ilustra as principais etapas deste modelo. Aqui observamos o rim esquerdo, ureter e bexiga.

Uma obstrução ureteral unilateral padrão é induzida pela ligadura do ureter. O ureter torna-se dilatado e o rim torna-se hidronefrótico ao longo do tempo. Para realizar uma obstrução ureteral unilateral reversível, o ureter é ligado próximo à bexiga e um tubo plástico de parede macia, mostrado em cinza, é colocado ao redor do ureter no ponto de obstrução.

Para limitar a dilatação ureteral excessiva, o rim torna-se hidronefrótico ao longo do tempo e é então desobstruído em um ponto temporal apropriado para o estudo. Sete dias neste experimento, o tubo de parede macia é removido e o ureter é seccionado logo acima do nível da ligadura. O ureter desobstruído é anastomosado à bexiga para permitir o fluxo de urina, e o rim geralmente se descomprime ao longo de vários dias.

O modelo de obstrução ureteral unilateral denominado UUO pode ser utilizado para estudar o desenvolvimento de lesão tecidual e fibrose após nefropatia obstrutiva. O modelo de obstrução ureteral reversível abreviado como RUUO pode ser usado para obter uma compreensão da remodelação tecidual que pode ocorrer após uma lesão. A seguir, apresenta-se a representação de um experimento típico que incorpora os procedimentos UUL e nossos procedimentos UUL.

Os camundongos são submetidos à UUL no dia zero e sete dias depois. Os camundongos são sacrificados para avaliar o grau de lesão ou os ureteres são desobstruídos para realizar uma RUUR. Os rins são então deixados descomprimir por sete dias antes de o tecido ser coletado.

O tecido pode ser avaliado quanto a lesão estrutural, infiltração de macrófagos, acúmulo de miofibroblastos e fibrose. Este é um exemplo típico de configuração cirúrgica. O procedimento é realizado utilizando instrumentos e consumíveis esterilizados em autoclave, posicionados dentro de um campo cirúrgico estéril.

Se vários animais forem operados, os instrumentos devem ser esterilizados entre os procedimentos por meio de esterilizador de contas, ou um novo conjunto de instrumentos deve ser usado para cada procedimento. Os operadores usam jaleco estéril, máscara, touca e luvas. Este camundongo macho da linhagem C57BL/6, com oito semanas de idade, foi anestesiado por injeção intraperitoneal de cloridrato de cetamina e meine.

A profundidade da anestesia foi confirmada pela ausência de reação ao aperto dos dedos dos pés. A área cirúrgica foi raspada e sanitizada utilizando uma solução diluída de clorexidina. Foi aplicada lubrificação ocular para prevenir a secagem da córnea.

O cloridrato de buprenorfina analgésica foi administrado por injeção subcutânea. A boca foi posicionada sobre uma placa cirúrgica aquecida esterilizada com campo cirúrgico, e os membros foram imobilizados utilizando tesoura separadora de tecidos, sendo realizada uma laparotomia mediana e uma incisão ao longo da linha avascular do cotovelo. Este próximo capítulo detalhará como realizar uma UUOA irreversível; um retrator calibra é inserido na incisão e o camundongo é coberto com campos cirúrgicos estéreis.

Os intestinos são deslocados e cobertos com gaze estéril úmida para expor o ureter esquerdo. O ureter é exposto e isolado utilizando pinças anguladas para induzir obstrução. O ureter é ligado duas vezes utilizando sutura de seda preta trançada 6-0.

O ureter pode ser obstruído em qualquer ponto entre a bexiga e a pelve renal. O ureter é então dividido entre os pontos de sutura. Este próximo capítulo detalhará como realizar uma obstrução ureteral que pode ser revertida.

Esta é a primeira fase de uma LURU. O ureter é exposto e isolado utilizando pinças anguladas para induzir obstrução. O ureter é ligado duas vezes utilizando fio de seda trançada preta 6.0.

O ureter deve ser obstruído próximo à bexiga para preservar um comprimento adequado de ureter para anastomose com a bexiga. Durante o procedimento de reversão, os pontos são cortados, mas um deles é deixado longo para uso posterior, e um tubo plástico de parede macia com aproximadamente cinco milímetros de comprimento é cortado. Em seguida, faz-se uma incisão longitudinal de modo que possa ser aberta em leque, permitindo que seja aplicada ao redor do ureter.

O tubo plástico de parede macia deve ter um diâmetro interno de um milímetro e um diâmetro externo de dois milímetros. Em seguida, o tubo plástico de parede macia é colocado cuidadosamente ao redor do ureter, garantindo que, ao ser fechado, a sutura longa emerja do centro da fenda. A seguir, um segmento de seis pontos de sutura de seda preta trançada é passado ao redor do tubo e amarrado.

Uma vez que o longo ponto de sutura que emerge do centro do tubo é então incorporado ao próximo laço. Isso é realizado para fixar com segurança o ureter e o tubo no lugar. O tubo ao redor do ureter impedirá a dilatação ureteral excessiva ao final dos procedimentos UUO e RUUO.

Os intestinos são reposicionados e o peritônio é suturado, enquanto a pele é fechada com clipes metálicos. O iodo também é aplicado na área cirúrgica. A anestesia é parcialmente revertida com uma injeção subcutânea de aamaz.

O cloreto de hidrogênio e os fluidos são administrados por injeção subcutânea de um mililitro de soro fisiológico aquecido. Os camundongos são monitorados até que recuperem a consciência e, em seguida, são deixados em recuperação numa caixa térmica mantida a 29 graus por 24 horas. Os rins tornam-se hidronefróticos nos dias seguintes à obstrução uterina.

Os camundongos podem ser sacrificados em vários momentos durante a fase de lesão ou após a reversão da obstrução. Este próximo capítulo detalha como realizar uma reversão, que é a segunda etapa do procedimento RUUO. O camundongo é anestesiado e preparado conforme descrito anteriormente.

Os clipes metálicos da pele são removidos e é realizada uma laparotomia. Os pontos na parede peritoneal são retirados e o peritônio pode ser suavemente aberto com pinça dentada. Em seguida, o camundongo é preparado e o ureter esquerdo é exposto conforme descrito anteriormente, utilizando pinça angulada.

O ureter e a tubulação plástica de parede macia são isolados do tecido circundante. Os pontos que mantêm a tubulação de parede macia no lugar são cortados com o bisturi e, em seguida, removidos. A tubulação plástica de parede macia é então cuidadosamente retirada, evidenciando um ureter dilatado.

O ureter é frágil no ponto de obstrução e pode romper-se acima da obstrução, como ocorreu neste clipe. No entanto, os pontos previamente colocados próximos à bexiga durante o primeiro estágio da OBU permanecerão intactos, o que garantirá que nenhuma urina vaze da bexiga para a cavidade peritoneal. Um pedaço de gaze estéril é colocado sob o ureter para coletar qualquer sedimento urinário que drenará do ureter previamente obstruído.

O comprimento restante do ureter obstruído deve ser deixado drenando até que seja produzida urina clara, para garantir que a luz do ureter esteja livre de qualquer debris. Uma vez que o ureter e a pelve renal tenham sido drenados, aplica-se uma longa sutura de seda preta trançada 6-0 na extremidade do ureter. Esta é utilizada para auxiliar a subsequente anastomose entre o ureter e a bexiga.

O ureter é então virado de modo que fique anterior à sua posição original e sobreponha o rim. Um único fio de sutura nano de poliamida monofilamento TAing é colocado na extremidade do ureter. Toma-se o cuidado para garantir que a sutura permaneça na camada muscular e não entre na luz ureteral.

O ponto é usado para fixar o ureter na bexiga posteriormente, preparando a bexiga para a anastomose; um canal é criado através da bexiga passando uma agulha de calibre 21 diagonalmente pela parede da bexiga. A agulha de calibre 21 é então usada para guiar uma agulha com olho através da bexiga. O ponto Nino previamente colocado no ureter é então passado através da primeira incisão na bexiga e para fora pela parede da bexiga adjacente ao ponto de entrada, para passar o ureter através da bexiga.

O fio cirúrgico longo seis zero colocado na extremidade do ureter é passado através do olho da agulha. Em seguida, a agulha com olho é lentamente retirada através da bexiga, garantindo-se que o ureter também seja puxado para dentro da bexiga. Uma vez que o ureter esteja posicionado dentro da bexiga, os pontos nano colocados na parede do ureter e da bexiga são amarrados para fixar o ureter no lugar e ancorá-lo com segurança.

Uma segunda sutura otax é colocada. Esta é novamente passada através do ureter, garantindo que permaneça dentro da camada muscular, depois através da incisão da bexiga e para fora através da parede da bexiga. Em seguida, é amarrada de maneira semelhante.

Um terceiro ponto de sutura nano tax também é colocado na parte traseira da bexiga. Em seguida, os cabos traseiros de uma tesoura aberta são usados para empurrar levemente a parede da bexiga para trás, expondo o comprimento do ureter. O ureter é então seccionado acima do ponto de sutura pulmonar.

O ureter pintado irá então retrair-se para dentro da bexiga em um ângulo. Quatro dicas são utilizadas para garantir que o ureter tenha se retraído completamente para dentro da bexiga. Por fim, a ferida de saída na bexiga é fechada com sutura de poliamida monofilamento 9-0 antes do fechamento, assegurando que o ureter esteja firmemente ancorado dentro da bexiga, próximo ao local.

O peritônio e a pele, conforme descrito anteriormente, recebem os cuidados pós-operatórios conforme descrito anteriormente. Todos os camundongos UUO têm permissão para se recuperar por sete dias neste estudo, para permitir que o rim desobstruído se descomprima, embora pontos temporais mais precoces ou tardios possam ser analisados. Apresentam-se a seguir dados que ilustram a aparência dos rins obstruídos e desobstruídos e o dano resultante.

Esta figura ilustra a aparência dos rins U-U-L-U-U-O nativos, pelve renal e ureteres em comparação com o rim nativo. O rim UUO que foi obstruído por sete dias apresenta-se hidronefrótico e de cor pálida. Após sete dias de desobstrução, o rim RUO tornou-se descomprimido, com a pelve renal e o ureter retornando a um tamanho e cor semelhantes aos do rim nativo.

Observe que o ureter IUO é mais curto do que os ureteres dos rins UUO e nativo devido à técnica de desestruturação e à anastomose na bexiga. Esta figura demonstra imagens representativas de cortes renais corados com H e E provenientes de rins nativos, UUO e RUUO. O interstício saudável do rim normal é composto por seções transversais de túbulos saudáveis e compactos.

Vários túbulos indicados pelas setas pretas exibem uma dilatação acentuada no sétimo dia. Após a LQU no tubo de contraste, a dilatação é acentuadamente reduzida sete dias após a reversão da LUN. O modelo de camundongo de nefropatia obstrutiva apresentado aqui é induzido pela obstrução ureteral unilateral, que pode ser irreversível ou reversível.

O modelo reversível descrito aqui permite a remoção da obstrução ureteral e a anastomose do ureter à bexiga para restaurar completamente o fluxo urinário. A descompressão resultante do rim possibilita o estudo da remodelação tecidual em experimentos pós-lesão. A inclusão de modelos de nefropatia obstrutiva tanto irreversível quanto reversível fornece aos pesquisadores uma visão poderosa dos processos da doença e de como intervenções terapêuticas modulam tanto o desenvolvimento da lesão quanto a subsequente remodelação tecidual.