Name: Um modelo murino de irreversível e reversível obstrução ureteral unilateral (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 5 s
Description: Aprenda a criar um modelo murino de obstrução ureteral unilateral reversível e irreversível em camundongos. Este método permite estudar lesão renal, fibrose e remodelamento tecidual após a desobstrução.

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O presente estudo foi apoiado por doações da Kidney Research UK (ST4/2011), do Cunningham Trust (CT11/14), do Mrs AE Hogg Charitable Trust for Kidney Research e do Renal Endowment Fund da Royal Infirmary of Edinburgh.

Diretrizes gerais: Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e normas impostas pelos Animais (Scientific Procedures) Act de 1986. Este protocolo eo protocolo de vídeo que acompanha são tanto para a UUO padrão e um R-UUO, que pode ser realizada em muitos linhagens de camundongos. No vídeo acompanhante, ambos os processos são realizados em ratos machos C57BL / 6 machos com idade de 8 semanas. Os dados apresentados na seção de resultados representativos foram obtidos a partir do sexo masculino FVB / n camundongos. NOTA: Este protocolo de acompanhamento e detalhes de vídeo como executar uma UUO padrão e R-UUO utilizando o uréter esquerdo, no entanto, as mesmas técnicas podem ser facilmente aplicados para a uréter direito. 1. Preparação Animal e Laparotomia <ol><li> Realizar todos os procedimentos com instrumentos esterilizados (autoclavados) e bens de consumo. </li><li> Injectar cloridrato de cetamina (70 mg / kg) e cloridrato de medetomidina (1mg / kg) por via intraperitoneal para anestesiaro mouse. Nota: A duração do plano anestésico resultante é de 4 h e sem anestesia suplementar se necessário. </li><li> Confirme a profundidade da anestesia, pela perda de reflexos, por exemplo, toe pitada. </li><li> Retirar todos os pêlos ao redor da área da incisão e preparar a pele para a cirurgia abdominal através da aplicação de uma solução diluída de clorexidina. </li><li> Posicione o mouse sobre uma almofada cirúrgica aquecida em decúbito dorsal e corrigir os membros para a almofada com fita adesiva de baixa aderência. </li><li> Durante o procedimento, o rato para monitorizar sinais de queimaduras como resultado de a almofada cirúrgico aquecido. Se possível usar uma fonte de calor não-elétrico. </li><li> Administrar analgésico por uma injecção subcutânea de cloridrato de buprenorfina (0,06 mg / kg) e aplicar lubrificante olho para evitar a secagem da córnea. </li><li> Adicione uma laparotomia mediana e uma incisão das avascular linea alba, utilizando tesouras de tecidos de separação para obter o acesso para a cavidade peritoneal. </li><li> Armar o mouse e inserir um colibriretractor na incisão. </li></ol> 2. Unilateral Ureteric Obstrução <ol><li> Usando cotonetes esterilizados expor o ureter esquerdo, deslocando o intestino para o lado direito da cavidade abdominal e cobri-los com cortinas umedecidos. </li><li> Utilizando uma pinça em ângulo isolar e levantar o ureter esquerdo. </li><li> Para criar uma obstrução ureteral, ligadura do ureter esquerdo duas vezes com 6 / O trançado preto de seda de sutura em qualquer lugar entre a bexiga e pelve renal. Para experimentos de longa duração, use fio absorvível para todas as cirurgias abdominais. Alternativamente, um agrafo de ligação pode ser aplicado para o ureter. </li><li> Para isolar a bexiga do ureter, dividir o ureter entre as duas suturas. </li><li> Recolocar cuidadosamente os intestinos para a cavidade peritoneal. </li><li> Siga os passos listados na Secção 4 - recuperação pós-operatória e Cuidados para fechar a incisão e reverter a anestesia. </li></ol> 3. Preparação para Reversible Unilateral Ureteric Obstrução <ol><li> Prepare um mouse para a cirurgia e isolar o ureter esquerdo, conforme detalhado nos Passos 1,1-2,2 acima. </li><li> Para criar uma obstrução ureteral que pode ser revertida, ligar o uréter esquerdo duas vezes com 6 / S preto sutura de seda trançada próximo da bexiga. Deixar uma extremidade superior do fio de sutura desde que este vai ser utilizado para o ancorar a tubagem de plástico de paredes suaves no lugar em torno do ureter. </li><li> Adicione uma fenda longitudinal em um 5 mm de comprimento de tubagem de plástico de paredes suaves de tal forma que ele pode ser espalmada aberta para permitir que seja aplicada para o ureter. Qualquer um tubo de plástico de silicone macio paredes, com um diâmetro interno de 1 milímetro e diâmetro externo de 2 milímetros, podem ser usados. </li><li> Coloque o tubo de plástico macio murada suavemente ao redor do ureter. Certifique-se de que o tempo de sutura sai do centro da fenda no tubo, uma vez que é fechada em torno do ureter. </li><li> Coloque um comprimento de 6 / S trançada preta sutura de seda em torno da tubagem de parede macia que envolve o ureter e amarraruma vez. Agora colocar a extremidade longa do fio de sutura, que emerge a partir do centro da fenda no tubo, longitudinalmente através do tubo de tal forma que ela se encontra na parte superior do fio previamente atadas. </li><li> Ate a sutura localizados em torno da tubagem de duas vezes para ancorar a tubagem e a extremidade longa sutura no lugar em torno do ureter. Nota: Para evitar a formação de aderências no ureter e o tubo de plástico com paredes moles, uma solução de redução de aderência pode ser aplicada à área em torno da tubagem. </li><li> Recolocar cuidadosamente os intestinos para a cavidade peritoneal. </li></ol> 4. Recuperação Pós-Operatória e Cuidados <ol><li> Feche o peritônio com ponto cobertor usando 5 / O preto trançado fio de seda e aproximar a pele com pele clips metálicos. </li><li> Para minimizar o risco de infecção pós-operatória, aplicar um anti-séptico tal como a solução de iodo / álcool para a pele abdominal. </li><li> Pouco anestesia reversa com cloridrato de atipamezol (2 mg / kg) por via subcutânea. </li&gt; <li> Administrar fluidos por uma injecção subcutânea de 1 mL de solução salina aquecida. </li><li> Monitore o rato até que ele se recuperou a consciência. </li><li> Permitir que o rato para recuperar numa caixa aquecida mantida a 29 ° C durante 24 horas. Alimento humedecido também pode ser fornecida para estimular a ingestão de fluidos e da nutrição. </li><li> Deixar o rato para recuperar para induzir um nível desejado de obstrução, normalmente 7 dias. </li><li> Para as experiências de recuperação a longo prazo, fornecer analgésicos em curso. Se o mouse está a ser recuperado para mais de 7 dias, retire os grampos da pele 7 dias após a cirurgia. </li><li> Uma vez que tenha sido induzida a nível desejado de obstrução, ou inverter a UUO, como descrito abaixo, ou a eutanásia por deslocamento cervical do rato e recolher os rins para exame histopatológico. </li></ol> 5. reversível Unilateral Ureteric Obstrução <ol><li> Para executar um R-UUO preparar um rato, o qual foi submetido a preparação de R-UUO, para a cirurgia tal como descrito nos passos 10,1-1,7. </li><li> Se estiver presente, remover os agrafos para pele e dividir ou remover as suturas no peritoneu para ganhar acesso à cavidade abdominal. Nota: Se o ureter foi obstruído por um longo prazo clips experimento pele deveria ter sido removido sete dias após a aplicação. </li><li> Prepare o rato e isolar o uréter esquerdo tal como descrito nos passos 1,8 a 2,2. </li><li> Usando fórceps angulares, libertar o tubo de plástico de paredes a partir de qualquer tecido macio granulomatosa que se tenha formado. </li><li> Cortar o fio de sutura que prende o tubo de plástico em torno do ureter obstruída com um bisturi e remover o tubo. </li><li> Confirmar UUO bem sucedida por meio da avaliação da presença de hidronefrose no rim esquerdo, o rim também deve aparecer pálido. </li><li> Divida o ureter entre as suturas. </li><li> Inserir o comprimento restante de ureter, ligado ao rim, em um pequeno pedaço de gaze estéril. Isto irá ser utilizado para recolher o sedimento urinário e células mortas que escoará de um ureternd pelve renal uma vez que a sutura é removida. </li><li> Dividir o ureter acima, mas próximo, o fio de sutura e permitir que o rim para drenar para a gaze. Deixar a sutura inferior, mais próxima da bexiga, intacta. Isto é para garantir que não irá vazar urina da bexiga e para dentro da cavidade peritoneal. </li><li> Uma vez que o ureter e pelve renal ter sido drenado, aplicar um longo 6 / S preto sutura de seda trançada para o fim do comprimento restante do ureter. Isto irá ser utilizado para auxiliar a anastomose do ureter bexiga realizada mais tarde. </li><li> Siga os passos abaixo para anastomosar o comprimento restante do ureter na bexiga: <ol><li> Ligue o ureter de tal modo que passa anteriormente à sua posição original e encontra-se sobre o rim. </li><li> Coloque um único 9 de E / S de poliamida monofilamento aderência sutura 2 mm da extremidade do ureter tal que emerge na direcção da bexiga. Tome cuidado para garantir que a sutura permanece no revestimento muscular e não entra no lúmen ureter. O wil aderência sutural ser utilizados para ancorar o ureter na bexiga. </li><li> Para criar um canal através da bexiga, passar uma agulha 21G diagonalmente através da bexiga tal que ele sai para a frontal (ventral) da parede da bexiga. </li><li> Descanse uma agulha de olhos no bisel da agulha 21G. Utilizar a agulha 21G para guiar a agulha de olhos através da bexiga. A agulha de olhos irá ser utilizado para tomar o ureter através da bexiga. </li><li> Passe o 9 / O aderência sutura, aplicado para o ureter no passo 5.11.2, através da primeira incisão na bexiga e para fora através da parede da bexiga adjacente ao ponto de entrada. Uma vez que o ureter é passado através da bexiga este vai ser amarrado para ancorar o ureter para a bexiga. </li><li> Coloque a longo 6 / S preto sutura de seda trançada aplicada à extremidade do ureter no passo 5.10, através da agulha de olhos. </li><li> Retirar cuidadosamente a agulha olhos para fora da bexiga, garantindo simultaneamente que o ureter é também puxado através da bexiga. </li><li> Uma vez que o ureter emerge thbexiga e remover a agulha olhos e aplicar um grampo para a sutura longa no final do ureter para impedir a retracção de volta para dentro da bexiga. </li><li> Para ancorar o ureter dentro lugar na bexiga, amarrar o 9 / O poliamida sutura monofilamento aderência, aplicado na etapa 5.11.5. </li><li> Aplicar solteiro 9 / O poliamida pontos adicionais tie monofilamento conforme descrito nas etapas 5.11.2 e 5.11.5 em dois locais ao redor do ponto de entrada para ancorar firmemente o ureter dentro da bexiga. </li><li> Usando a parte traseira de tesouras abertas, empurrar a parede da bexiga ligeiramente para trás para expor mais do ureter emergente. </li><li> Dividir o ureter acima da sutura longa localizado na extremidade do ureter. O ureter deve ser retraída para dentro do corpo da bexiga. É normal observar urina flui para fora da abertura na bexiga, confirmando o lúmen aberto do ureter. </li><li> Feche a saída de feridas na bexiga com uma sutura de monofilamento de poliamida 9 de E / S. </li></ol></li><li> Recolocar cuidadosamente os intestinos paraa cavidade peritoneal. </li><li> Fornecer cuidados pós-operatórios, conforme detalhado em passos 4,1-4,8. </li><li> Permitir que o mouse para se recuperar até o rim é descomprimido, tipicamente 7 dias. </li><li> No ponto final experimental, sacrificar o mouse por deslocamento cervical e recolher os rins para análise histopatológica. </li></ol>

<ol><li>Chevalier, R. L., Forbes, M. S., Thornhill, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ureteral+obstruction+as+a+model+of+renal+interstitial+fibrosis+and+obstructive+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Ureteral obstruction as a model of renal interstitial fibrosis and obstructive nephropathy.</a> Kidney Int. 75, 1145-1152 (2009).</li>
<li>Kipari, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+is+an+important+mediator+of+renal+tubular+epithelial+cell+death+in+vitro+and+in+murine+experimental+hydronephrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide is an important mediator of renal tubular epithelial cell death in vitro and in murine experimental hydronephrosis.</a> Am J Pathol. 169, 388-399 (2006).</li>
<li>Henderson, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin-3+expression+and+secretion+links+macrophages+to+the+promotion+of+renal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Galectin-3 expression and secretion links macrophages to the promotion of renal fibrosis.</a> Am J Pathol. 172, 288-298 (2008).</li>
<li>Kitamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+liposome+clodronate+on+renal+leukocyte+populations+and+renal+fibrosis+in+murine+obstructive+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of liposome clodronate on renal leukocyte populations and renal fibrosis in murine obstructive nephropathy.</a> J Pharmacol Sci. 111, 285-292 (2009).</li>
<li>Tapmeier, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reimplantation+of+the+ureter+after+unilateral+ureteral+obstruction+provides+a+model+that+allows+functional+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Reimplantation of the ureter after unilateral ureteral obstruction provides a model that allows functional evaluation.</a> Kidney Int. 73, 885-889 (2008).</li>
<li>Cochrane, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+structural+and+functional+repair+in+a+mouse+model+of+reversal+of+ureteral+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Renal structural and functional repair in a mouse model of reversal of ureteral obstruction.</a> J Am Soc Nephrol. 16, 3623-3630 (2005).</li>
<li>Puri, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+kidney+disease+induced+in+mice+by+reversible+unilateral+ureteral+obstruction+is+dependent+on+genetic+background%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Chronic kidney disease induced in mice by reversible unilateral ureteral obstruction is dependent on genetic background.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 298, F1024-F1032 (2010).</li>
<li>Heikkila, J., Holmberg, C., Kyllonen, L., Rintala, R., Taskinen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+risk+of+end+stage+renal+disease+in+patients+with+posterior+urethral+valves%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Long-term risk of end stage renal disease in patients with posterior urethral valves.</a> J Urol. 186, 2392-2396 (2011).</li>
<li>Ravanan, R., Tomson, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+postobstructive+nephropathy%3A+a+single-center+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Clin+Pract%22%5BJournal%5D)">Natural history of postobstructive nephropathy: a single-center retrospective study.</a> Nephron Clin Pract. 105, c165-c170 (2007).</li>
<li>Bascands, J. L., Schanstra, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obstructive+nephropathy%3A+insights+from+genetically+engineered+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Obstructive nephropathy: insights from genetically engineered animals.</a> Kidney Int. 68, 925-937 (2005).</li>
<li>Park, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postobstructive+regeneration+of+kidney+is+derailed+when+surge+in+renal+stem+cells+during+course+of+unilateral+ureteral+obstruction+is+halted%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Postobstructive regeneration of kidney is derailed when surge in renal stem cells during course of unilateral ureteral obstruction is halted.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 298, F357-F364 (2010).</li>
<li>Manson, S. R., Niederhoff, R. A., Hruska, K. A., Austin, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+BMP-7+is+a+critical+molecular+determinant+of+the+reversibility+of+obstruction-induced+renal+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Endogenous BMP-7 is a critical molecular determinant of the reversibility of obstruction-induced renal injuries.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 301, F1293-F1302 (2011).</li>
<li>Manson, S. R., Niederhoff, R. A., Hruska, K. A., Austin, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+BMP-7-Smad1%2F5%2F8+pathway+promotes+kidney+repair+after+obstruction+induced+renal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">The BMP-7-Smad1/5/8 pathway promotes kidney repair after obstruction induced renal injury.</a> J Urol. 185, 2523-2530 (2011).</li>
<li>Chaves, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+effects+of+systemic+monocyte%2Fmacrophage+and+CD4%2B+T+cell+depletion+in+a+reversible+ureteral+obstruction+mouse+model+of+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Contrasting effects of systemic monocyte/macrophage and CD4+ T cell depletion in a reversible ureteral obstruction mouse model of chronic kidney disease.</a> Clin Dev Immunol. 2013, 836-989 (2013).</li>
<li>Haque, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+changes+in+MRI+markers+in+a+reversible+unilateral+ureteral+obstruction+mouse+model%3A+preliminary+experience%5BTitle%5D)+AND+%22J+Magn+Reson+Imaging%22%5BJournal%5D)">Longitudinal changes in MRI markers in a reversible unilateral ureteral obstruction mouse model: preliminary experience.</a> J Magn Reson Imaging. 39, 835-841 (2014).</li>
<li>Bai, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterially+transplanted+mesenchymal+stem+cells+in+a+mouse+reversible+unilateral+ureteral+obstruction+model%3A+in+vivo+bioluminescence+imaging+and+effects+on+renal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Med+J%22%5BJournal%5D)">Arterially transplanted mesenchymal stem cells in a mouse reversible unilateral ureteral obstruction model: in vivo bioluminescence imaging and effects on renal fibrosis.</a> Chinese Med J. 126, 1890-1894 (2013).</li>
<li>Chaabane, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+functional+decline+and+glomerulotubular+injury+are+arrested+but+not+restored+by+release+of+unilateral+ureteral+obstruction+%28UUO%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Renal functional decline and glomerulotubular injury are arrested but not restored by release of unilateral ureteral obstruction (UUO).</a> Am J Physiol Renal Physiol. 304, F432-F439 (2013).</li>
<li>Thornhill, B. A., Burt, L. E., Chen, C., Forbes, M. S., Chevalier, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variable+chronic+partial+ureteral+obstruction+in+the+neonatal+rat%3A+a+new+model+of+ureteropelvic+junction+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Variable chronic partial ureteral obstruction in the neonatal rat: a new model of ureteropelvic junction obstruction.</a> Kidney Int. 67, 42-52 (2005).</li>
<li>Thornhill, B. A., Chevalier, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variable+partial+unilateral+ureteral+obstruction+and+its+release+in+the+neonatal+and+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Variable partial unilateral ureteral obstruction and its release in the neonatal and adult mouse.</a> Methods Mol Biol. 886, 381-392 (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm qualquer ameaça ou conflito de interesses para divulgar.

A obstrução do rim pode afetar rins nativos ou transplantados e resultar em lesão renal e cicatrizes. O modelo R-UUO é relevante para a doença humana, pois os pacientes geralmente apresentam obstrução do trato renal secundária à hipertrofia prostática, válvulas uretrais posteriores, etc., que requer descompressão com pacientes comumente deixados com insuficiência renal residual significativa que não tem opções de tratamento atuais e pode eventualmente levar à doença renal em estágio terminal. 8,9 Os modelos aq...

O objetivo geral do modelo experimental aqui descrito é induzir nefropatia obstrutiva por obstrução ureteral unilateral (UUO), que pode ser irreversível (UUO) ou reversível (R-UUO). Um modelo simples e irreversível de UUO é apresentado no qual o ureter esquerdo é permanentemente obstruído por ligadura com sutura ou pela aplicação de um clipe de ligadura. Isso resulta em dilatação acentuada do ureter, juntamente com redução do fluxo sanguíneo renal e filtração glomerular. A histologia renal demonstra dilatação tubular e inflamação e fibrose renal intersticial cada vez mais graves. O UUO irreversível é um modelo útil e foi adotado por muitos pesquisadores no estudo da inflamação renal e da fibrose. 1-4 Embora o modelo irreversível de UUO exija alguma experiência cirúrgica, ele é relativamente simples e é frequentemente usado para buscar insights sobre a patogênese da lesão renal intersticial e a fibrose resultante. Também é apresentado um modelo R-UUO usado com menos frequência usando uma modificação do método originalmente descrito por Tapmeier et al. 5 O modelo R-UUO tem muito potencial futuro para o estudo de processos inflamatórios e imunológicos, regeneração celular e tecidual, bem como a subsequente remodelação tecidual após a remoção de um estímulo prejudicial. 
O modelo R-UUO mais desafiador tem sido usado por um número limitado de investigadores, com alguns grupos empregando uma técnica cirúrgica significativamente diferente da descrita aqui6,7, embora com resultados interessantes. No modelo R-UUO apresentado, o ureter é ligado para induzir obstrução ureteral completa por um período de tempo suficiente para induzir o nível de lesão e fibrose desejado: 7 dias de UUO foram escolhidos no método aqui descrito. A obstrução ureteral é revertida e o rim pode descomprimir por um período de tempo determinado pelo investigador antes que os camundongos sejam abatidos e o rim removido para análise: 7 dias de descompressão foram escolhidos no método descrito aqui, embora um período mais longo fosse escolhido se a resolução da inflamação e fibrose estivesse sendo estudada. Embora o método descrito aqui exija experiência cirúrgica significativa, ele oferece várias vantagens sobre outros modelos R-UUO. A aplicação de tubos de plástico de paredes macias no ureter obstruído evita a dilatação ureteral excessiva e isso facilita a manipulação e anastomose subsequentes do ureter. Além disso, no modelo R-UUO descrito, o ureter é dividido, permitindo a remoção de qualquer sedimento urinário residual e detritos. Isso confirma que o lúmen do ureter restante está desobstruído e patente antes da anastomose com a bexiga. 
Experimentos que incorporam os modelos UUO irreversíveis e reversíveis podem fornecer aos pesquisadores uma visão poderosa dos mecanismos moleculares e celulares de lesão e subsequente resolução e regeneração. Assim, o modelo de R-UUO descrito aqui seria altamente relevante para pesquisadores interessados em remodelação tecidual pós-inflamatória e como isso pode ser modulado.

<table><tbody><tr><td>Tesoura de Dissecção Blunt</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>14072-10</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Mola - Pinça Reta</td> de <td>Belas Ciências</td>, <td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Dentada,</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td>, <td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Angular x 2</td>, Ferramentas de <td>Belas Ciências</td>, <td>00649-11</td><td></td></tr>, <tr><td>Pinça Reta,</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td>, <td>00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Afastador de fio Colibri 3 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-03</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas Castroviejo com trava</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de clipe de ferida</td><td>Fine Science Tools</td><td>12031-07</td><td></td></tr><tr><td>Clipes de 7 mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>12032-07</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulha micro Castroviejo com trava</td><td>Fine Science Tools</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>OPMI pico microscópio</td><td>Carl Zeiss</td><td>S100</td><td></td></tr><tr><td>Almofada eletrônica de calor</td><td>Cozee Comfort</td><td>n / a</td><td></td></tr><tr><td>6 / O sutura trançada de seda</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-3287</td><td></td></tr><tr><td>9 / O Dafilon (poliamida) sutura</td><td>B-Braun</td><td>G1111434</td><td></td></tr><tr><td>5 / O sutura de seda trançada</td><td>Harvard Apparatus</td><td>51-7680</td><td></td></tr><tr><td>Agulha chanfrada regular, 1 polegada, 21G</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305175</td><td></td></tr><tr><td>ponta deslizante da seringa de 1 ml</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>300184</td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes de papel Wypall</td><td>Kimberley-Clark</td><td>L40</td><td>Esterilizado (Autoclave)</td></tr><tr><td>Cotonetes</td><td>Johnson and Johnson</td><td>n/a</td><td>Esterilizado (Autoclave)</td></tr><tr><td>Cortinas lisas</td><td>Guardian</td><td>CB03</td><td>Tubo de borracha de silicone de parede macia esterilizado (autoclave)</td></tr> <tr><td></td><td>Tubo de silicone - diâmetro interno 1,0 mm; diâmetro externo 2,0 mm; espessura da parede 0,6 mm</td> (Lacri-Lube) Parafina macia branca 57,3%, óleo mineral 42,5% e álcoois de lanolina 0,2% Allergan Ltd 21956GB10X (Videne) Iodopovidona 10% Ecolab Ltd PL 04509/0041 (Vetalar V) Cloridrato de cetamina <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Pfizer Animal Health</td><td>Vm 42058/4165</td><td>100mg / ml solução</td></tr> <tr><td>(Domitor) Cloridrato de medetomidina</td><td>Orion Pharma</td><td>Vm 06043/4003</td><td>1mg / ml</td></tr> <tr><td>(Vetergesic) Cloridrato de bupernorfina</td><td>Alsto Animal Health</td><td>Vm 00063/4002</td><td>0,3mg / ml</td></tr> <tr><td>(Antisedan) Hidrocloreto de atipamezol</td><td>Orion Pharma</td><td>Vm 06043/4004</td><td>5mg / ml</td></tr> <tr><td>(Adepto) 4% Icodextrina</td><td>Solução de redução de adesão</td> <td>Baxter</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Baxter</td><td>FKE1323</td><td></td></tr></tbody></table>

um modelo murino de irreversível e reversível obstrução ureteral unilateral

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

A obstrução do rim pode afetar rins nativos ou transplantados e resulta em lesão renal e cicatrizes. Apresenta-se aqui um modelo de nefropatia obstrutiva induzida por obstrução ureteral unilateral (UUO), que pode ser irreversível (UUO) ou reversível (R-UUO). No modelo UUO irreversível, o ureter pode ser obstruído por períodos variáveis de tempo para induzir inflamação renal cada vez mais grave e cicatrizes fibróticas intersticiais. No modelo R-UUO reversível, o ureter é obstruído para induzir hidronefrose, dilatação tubular e inflamação. Após um período de tempo adequado, a obstrução ureteral é então revertida cirurgicamente por anastomose do ureter previamente obstruído cortado para a bexiga, a fim de permitir a descompressão completa do rim e a restauração do fluxo urinário para a bexiga. O modelo UUO irreversível tem sido usado para investigar vários aspectos da inflamação renal e cicatrizes, incluindo a patogênese da doença e o teste de possíveis terapias anti-inflamatórias ou antifibróticas. O modelo mais desafiador de R-UUO tem sido usado por alguns investigadores e oferece um potencial de pesquisa significativo, pois permite o estudo de processos inflamatórios e imunológicos e remodelação tecidual em um rim lesionado e cicatrizado após a remoção do estímulo lesivo. Como resultado, o modelo R-UUO oferece aos investigadores a oportunidade de explorar a resolução da inflamação renal, juntamente com os principais aspectos do reparo tecidual. Esses modelos experimentais são relevantes para a doença humana, pois os pacientes geralmente apresentam obstrução do trato renal que requer descompressão e geralmente ficam com insuficiência renal residual significativa que não tem opções de tratamento atuais e pode levar a uma eventual insuficiência renal em estágio terminal.

A aparência das alterações renais marcadamente após obstrução ureteral e torna-se mais pálida e tenso para a palpação com o tempo (Figura 1). Há cada vez mais a dilatação do ureter proximal à obstrução e da pelve renal. O rim torna-se cada vez mais atrófica como a duração da nefropatia obstrutiva aumenta com a obstrução prolongada resultando em um desbaste significativo do córtex e na medula renal. Após a reversão da obstrução ureteral, a cor do rim torna-se mais escura que aumenta o fluxo de sangue e r...

O modelo murino de obstrução ureteral unilateral irreversível (UUO) é apresentado juntamente com o modelo de UUO reversível no qual a obstrução ureteral é aliviada pela anastomose do ureter cortado na bexiga. Esses modelos permitem o estudo da inflamação e cicatrização renal, bem como a remodelação tecidual.

Um modelo murino de irreversível e reversível obstrução ureteral unilateral

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Este vídeo apresenta um modelo murino de neuropatia obstrutiva induzida por obstrução ureteral unilateral, que pode ser irreversível ou reversível. Dados histológicos destacando a lesão estrutural resultante e sua recuperação após a reversão são apresentados. Este desenho esquemático ilustra as principais etapas deste modelo. Aqui observamos o rim esquerdo, ureter e bexiga.Uma obstrução ureteral unilateral padrão é induzida pela ligadura do ureter. O ureter torna-se dilatado e o rim torna-se hidronefrótico ao longo do tempo. Para realizar uma obstrução ureteral unilateral reversível, o ureter é ligado próximo à bexiga e um tubo plástico de parede macia, mostrado em cinza, é colocado ao redor do ureter no ponto de obstrução.Para limitar a dilatação ureteral excessiva, o rim torna-se hidronefrótico ao longo do tempo e é então desobstruído em um ponto temporal apropriado para o estudo. Sete dias neste experimento, o tubo de parede macia é removido e o ureter é seccionado logo acima do nível da ligadura. O ureter desobstruído é anastomosado à bexiga para permitir o fluxo de urina, e o rim geralmente se descomprime ao longo de vários dias.O modelo de obstrução ureteral unilateral denominado UUO pode ser utilizado para estudar o desenvolvimento de lesão tecidual e fibrose após nefropatia obstrutiva. O modelo de obstrução ureteral reversível abreviado como RUUO pode ser usado para obter uma compreensão da remodelação tecidual que pode ocorrer após uma lesão. A seguir, apresenta-se a representação de um experimento típico que incorpora os procedimentos UUL e nossos procedimentos UUL.Os camundongos são submetidos à UUL no dia zero e sete dias depois. Os camundongos são sacrificados para avaliar o grau de lesão ou os ureteres são desobstruídos para realizar uma RUUR. Os rins são então deixados descomprimir por sete dias antes de o tecido ser coletado.O tecido pode ser avaliado quanto a lesão estrutural, infiltração de macrófagos, acúmulo de miofibroblastos e fibrose. Este é um exemplo típico de configuração cirúrgica. O procedimento é realizado utilizando instrumentos e consumíveis esterilizados em autoclave, posicionados dentro de um campo cirúrgico estéril.Se vários animais forem operados, os instrumentos devem ser esterilizados entre os procedimentos por meio de esterilizador de contas, ou um novo conjunto de instrumentos deve ser usado para cada procedimento. Os operadores usam jaleco estéril, máscara, touca e luvas. Este camundongo macho da linhagem C57BL/6, com oito semanas de idade, foi anestesiado por injeção intraperitoneal de cloridrato de cetamina e meine.A profundidade da anestesia foi confirmada pela ausência de reação ao aperto dos dedos dos pés. A área cirúrgica foi raspada e sanitizada utilizando uma solução diluída de clorexidina. Foi aplicada lubrificação ocular para prevenir a secagem da córnea.O cloridrato de buprenorfina analgésica foi administrado por injeção subcutânea. A boca foi posicionada sobre uma placa cirúrgica aquecida esterilizada com campo cirúrgico, e os membros foram imobilizados utilizando tesoura separadora de tecidos, sendo realizada uma laparotomia mediana e uma incisão ao longo da linha avascular do cotovelo. Este próximo capítulo detalhará como realizar uma UUOA irreversível; um retrator calibra é inserido na incisão e o camundongo é coberto com campos cirúrgicos estéreis.Os intestinos são deslocados e cobertos com gaze estéril úmida para expor o ureter esquerdo. O ureter é exposto e isolado utilizando pinças anguladas para induzir obstrução. O ureter é ligado duas vezes utilizando sutura de seda preta trançada 6-0.O ureter pode ser obstruído em qualquer ponto entre a bexiga e a pelve renal. O ureter é então dividido entre os pontos de sutura. Este próximo capítulo detalhará como realizar uma obstrução ureteral que pode ser revertida.Esta é a primeira fase de uma LURU. O ureter é exposto e isolado utilizando pinças anguladas para induzir obstrução. O ureter é ligado duas vezes utilizando fio de seda trançada preta 6.0.O ureter deve ser obstruído próximo à bexiga para preservar um comprimento adequado de ureter para anastomose com a bexiga. Durante o procedimento de reversão, os pontos são cortados, mas um deles é deixado longo para uso posterior, e um tubo plástico de parede macia com aproximadamente cinco milímetros de comprimento é cortado. Em seguida, faz-se uma incisão longitudinal de modo que possa ser aberta em leque, permitindo que seja aplicada ao redor do ureter.O tubo plástico de parede macia deve ter um diâmetro interno de um milímetro e um diâmetro externo de dois milímetros. Em seguida, o tubo plástico de parede macia é colocado cuidadosamente ao redor do ureter, garantindo que, ao ser fechado, a sutura longa emerja do centro da fenda. A seguir, um segmento de seis pontos de sutura de seda preta trançada é passado ao redor do tubo e amarrado.Uma vez que o longo ponto de sutura que emerge do centro do tubo é então incorporado ao próximo laço. Isso é realizado para fixar com segurança o ureter e o tubo no lugar. O tubo ao redor do ureter impedirá a dilatação ureteral excessiva ao final dos procedimentos UUO e RUUO.Os intestinos são reposicionados e o peritônio é suturado, enquanto a pele é fechada com clipes metálicos. O iodo também é aplicado na área cirúrgica. A anestesia é parcialmente revertida com uma injeção subcutânea de aamaz.O cloreto de hidrogênio e os fluidos são administrados por injeção subcutânea de um mililitro de soro fisiológico aquecido. Os camundongos são monitorados até que recuperem a consciência e, em seguida, são deixados em recuperação numa caixa térmica mantida a 29 graus por 24 horas. Os rins tornam-se hidronefróticos nos dias seguintes à obstrução uterina.Os camundongos podem ser sacrificados em vários momentos durante a fase de lesão ou após a reversão da obstrução. Este próximo capítulo detalha como realizar uma reversão, que é a segunda etapa do procedimento RUUO. O camundongo é anestesiado e preparado conforme descrito anteriormente.Os clipes metálicos da pele são removidos e é realizada uma laparotomia. Os pontos na parede peritoneal são retirados e o peritônio pode ser suavemente aberto com pinça dentada. Em seguida, o camundongo é preparado e o ureter esquerdo é exposto conforme descrito anteriormente, utilizando pinça angulada.O ureter e a tubulação plástica de parede macia são isolados do tecido circundante. Os pontos que mantêm a tubulação de parede macia no lugar são cortados com o bisturi e, em seguida, removidos. A tubulação plástica de parede macia é então cuidadosamente retirada, evidenciando um ureter dilatado.O ureter é frágil no ponto de obstrução e pode romper-se acima da obstrução, como ocorreu neste clipe. No entanto, os pontos previamente colocados próximos à bexiga durante o primeiro estágio da OBU permanecerão intactos, o que garantirá que nenhuma urina vaze da bexiga para a cavidade peritoneal. Um pedaço de gaze estéril é colocado sob o ureter para coletar qualquer sedimento urinário que drenará do ureter previamente obstruído.O comprimento restante do ureter obstruído deve ser deixado drenando até que seja produzida urina clara, para garantir que a luz do ureter esteja livre de qualquer debris. Uma vez que o ureter e a pelve renal tenham sido drenados, aplica-se uma longa sutura de seda preta trançada 6-0 na extremidade do ureter. Esta é utilizada para auxiliar a subsequente anastomose entre o ureter e a bexiga.O ureter é então virado de modo que fique anterior à sua posição original e sobreponha o rim. Um único fio de sutura nano de poliamida monofilamento TAing é colocado na extremidade do ureter. Toma-se o cuidado para garantir que a sutura permaneça na camada muscular e não entre na luz ureteral.O ponto é usado para fixar o ureter na bexiga posteriormente, preparando a bexiga para a anastomose; um canal é criado através da bexiga passando uma agulha de calibre 21 diagonalmente pela parede da bexiga. A agulha de calibre 21 é então usada para guiar uma agulha com olho através da bexiga. O ponto Nino previamente colocado no ureter é então passado através da primeira incisão na bexiga e para fora pela parede da bexiga adjacente ao ponto de entrada, para passar o ureter através da bexiga.O fio cirúrgico longo seis zero colocado na extremidade do ureter é passado através do olho da agulha. Em seguida, a agulha com olho é lentamente retirada através da bexiga, garantindo-se que o ureter também seja puxado para dentro da bexiga. Uma vez que o ureter esteja posicionado dentro da bexiga, os pontos nano colocados na parede do ureter e da bexiga são amarrados para fixar o ureter no lugar e ancorá-lo com segurança.Uma segunda sutura otax é colocada. Esta é novamente passada através do ureter, garantindo que permaneça dentro da camada muscular, depois através da incisão da bexiga e para fora através da parede da bexiga. Em seguida, é amarrada de maneira semelhante.Um terceiro ponto de sutura nano tax também é colocado na parte traseira da bexiga. Em seguida, os cabos traseiros de uma tesoura aberta são usados para empurrar levemente a parede da bexiga para trás, expondo o comprimento do ureter. O ureter é então seccionado acima do ponto de sutura pulmonar.O ureter pintado irá então retrair-se para dentro da bexiga em um ângulo. Quatro dicas são utilizadas para garantir que o ureter tenha se retraído completamente para dentro da bexiga. Por fim, a ferida de saída na bexiga é fechada com sutura de poliamida monofilamento 9-0 antes do fechamento, assegurando que o ureter esteja firmemente ancorado dentro da bexiga, próximo ao local.O peritônio e a pele, conforme descrito anteriormente, recebem os cuidados pós-operatórios conforme descrito anteriormente. Todos os camundongos UUO têm permissão para se recuperar por sete dias neste estudo, para permitir que o rim desobstruído se descomprima, embora pontos temporais mais precoces ou tardios possam ser analisados. Apresentam-se a seguir dados que ilustram a aparência dos rins obstruídos e desobstruídos e o dano resultante.Esta figura ilustra a aparência dos rins U-U-L-U-U-O nativos, pelve renal e ureteres em comparação com o rim nativo. O rim UUO que foi obstruído por sete dias apresenta-se hidronefrótico e de cor pálida. Após sete dias de desobstrução, o rim RUO tornou-se descomprimido, com a pelve renal e o ureter retornando a um tamanho e cor semelhantes aos do rim nativo.Observe que o ureter IUO é mais curto do que os ureteres dos rins UUO e nativo devido à técnica de desestruturação e à anastomose na bexiga. Esta figura demonstra imagens representativas de cortes renais corados com H e E provenientes de rins nativos, UUO e RUUO. O interstício saudável do rim normal é composto por seções transversais de túbulos saudáveis e compactos.Vários túbulos indicados pelas setas pretas exibem uma dilatação acentuada no sétimo dia. Após a LQU no tubo de contraste, a dilatação é acentuadamente reduzida sete dias após a reversão da LUN. O modelo de camundongo de nefropatia obstrutiva apresentado aqui é induzido pela obstrução ureteral unilateral, que pode ser irreversível ou reversível.O modelo reversível descrito aqui permite a remoção da obstrução ureteral e a anastomose do ureter à bexiga para restaurar completamente o fluxo urinário. A descompressão resultante do rim possibilita o estudo da remodelação tecidual em experimentos pós-lesão. A inclusão de modelos de nefropatia obstrutiva tanto irreversível quanto reversível fornece aos pesquisadores uma visão poderosa dos processos da doença e de como intervenções terapêuticas modulam tanto o desenvolvimento da lesão quanto a subsequente remodelação tecidual.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra o procedimento para gerar um modelo de camundongo com obstrução ureteral unilateral. O procedimento envolve o corte de um dos ureteres do camundongo para obstruir o fluxo de urina.

Modelo murino de obstrução ureteral unilateral: um procedimento cirúrgico para obstruir o fluxo urinário de um rim em modelos de camundongos

Descrevemos um método para avaliar a expressão de microRNA nos rins de camundongos com obstrução ureteral unilateral (UUO) por reação quantitativa em cadeia de polimerase de transcrição reversa. Este protocolo é adequado para estudar perfis de expressão de microRNA renal em camundongos com UUO e no contexto de outras condições patológicas.

Avaliação quantitativa de PCR em tempo real de expressões de microRNA no rim do rato com obstrução ureteral unilateral

Aqui, apresentamos um protocolo utilizando microscopia de 2 fótons em ratos Wistar Fromter de Munique com glomérulos superficiais para quantificar os efeitos da obstrução ureteral prolongada na dinâmica e função glomerular.

Usando a microscopia de 2-fótons para quantificar os efeitos da obstrução ureteral unilateral crônica nos processos glomerulares

O presente protocolo descreve um modelo passo a passo reprodutível de obstrução ureteral unilateral.

Um modelo murino imaturo de obstrução ureteral unilateral reversível

Este protocolo descreve um método para induzir obstrução ureteral unilateral (UUO) em camundongos para estudar a progressão da fibrose tecidual na nefropatia obstrutiva. Inclui procedimentos cirúrgicos, cuidados pós-operatórios e métodos para avaliação da fibrose.

Modelo de obstrução ureteral unilateral para investigação de fibrose intersticial renal

Este artigo fornece instruções detalhadas para permitir que os investigadores realizem obstrução ureteral unilateral reversível em camundongos usando um modelo padronizado que permite a análise dos resultados estruturais e funcionais de longo prazo após a reversão da obstrução ureteral prolongada.

Um modelo de camundongo para avaliar os resultados estruturais e funcionais de longo prazo após a reversão da obstrução ureteral unilateral prolongada

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Um Modelo contundente de lesão da medula espinhal cervical unilateral Usando o Impactor horizonte infinito

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Um modelo murino de irreversível e reversível obstrução ureteral unilateral

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