Name: Whole humor vítreo Dissecção de Análise Vitreodynamic (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: Aprenda a dissecar o humor vítreo intacto de olhos de porco post-mortem para estudos em oftalmologia. Este método preserva a estrutura anatômica e permite análises das propriedades físicas e químicas do vítreo.

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Os autores reconhecem as seguintes fontes de financiamento: Whittier Foundation, Harrington Foundation, National Institutes of Health e Research to Prevent Blindness.

Todos os olhos enucleados foram obtidos a partir de um matadouro e todos os experimentos foram realizados de acordo com as leis de biossegurança institucionais. <ol><li> Fixe olho enucleado para baixo em uma superfície. Fazer isso colocando os pinos do tecido através do excesso de tecido em torno do olho e prendendo-o para baixo em uma placa de isopor. </li><li> Dissecar e retire conjuntiva perilimbal de olho. <ol><li> Use uma pinça fina (0,3 fórceps) e microtesoura (tesoura Westcott) para inciso conjuntiva no limbo e sem rodeios dissecá-lo fora da esclera. Cortar a conjuntiva ao longo do limbo como a dissecção romba prossegue para permitir posterior dissecação. </li><li> Remover conjuntiva a toda a volta do olho (360 graus) para expor tanto quanto possível esclera. NOTA: É útil para deixar uma pequena quantidade de conjuntiva para facilitar a fixação do olho com os pinos de uma pinça cirúrgica ou durante o resto do procedimento. </li></ol></li><li> Criar um retalho escleral de espessura total ao longo de umlado do olho (lâmina de bisturi 69). <ol><li> Adicione uma ~ 5 milímetros incisão escleral paralela ao limbo e 3 mm posterior ao limbo cortando suavemente para dentro da esclerótica com um bisturi (lâmina de bisturi 11) até coróide pigmentadas é visível. Tenha cuidado para não inciso a própria coróide. </li><li> Cuidadosamente dissecar ao longo do plano entre a esclera e coróide, ou com tesouras (utilizando uma dissecção romba) ou com o bisturi, até que seja possível aumentar o espaço de potencial entre estes tecidos, empurrando suavemente para dentro da coróide. </li><li> Fazer uma outra incisão escleral perpendicular à primeira incisão escleral com microtesouras afiadas, criando uma incisão em forma de T. </li><li> Em seguida, continuar a dissecar bruscamente de um modo circunferencial para remover o tecido a partir da coróide esclerótica subjacente e empurre o coróide longe da esclera como mencionado acima. </li><li> Ampliar a retalho escleral, conforme necessário. <ol><li> Suavemente sem corte dissecar a coróide longe da escleradurante todo o processo. </li><li> Aumentar a aba até que a incisão feita perpendicularmente ao limbo atinge o nervo óptico e a incisão feita paralela ao limbo é, pelo menos, um terço da circunferência do olho (45 °). </li><li> Use a retalho escleral como fonte de alavancagem para manipular o olho durante a dissecção romba. O contra-tração na aba torna mais fácil para dissecção romba. </li></ol></li><li> Repita o passo anterior no outro retalho escleral. </li></ol></li><li> Cortaram os retalhos esclerais para expor uma grande área de coróide. </li><li> Continuar a incisão feita no passo 3 em torno da circunferência do olho (360 graus). </li><li> Remover o tecido coróide-restante retina. <ol><li> Dentro da região exposta, use um algodão-ponta para escovar suavemente o tecido coróide-retina restante. Alternativamente, agarram delicadamente o tecido com uma pinça e retire-a do corpo vítreo subjacente. </li><li> Se for necessário fazer uma incisão na coróide starting do nervo óptico. Em seguida, retire a coróide suavemente para expor a retina eo córtex vítreo. </li></ol></li><li> Continuar sem corte dissecar a coróide longe da esclera e, em seguida, retire a coróide obter todo o vítreo intacta. </li><li> Utilizar o aro escleral fixada na córnea para posicionar todo o vítreo em local desejado. Neste ponto, o vítreo é ligada à esclerótica anterior e lente. </li><li> Blunt dissecar o vítreo a partir do interior da esclerótica, à volta da lente, a remoção de todos esclera. </li><li> Use uma ferramenta sem corte para colher a lente de distância do vítreo se for necessário. Use o exemplo para várias experiências vitreodynamic. <ol><li> Colocar a amostra num copo de vidro com uma área superficial conhecida exposta ao ar. Coloque sonda sensível ao oxigénio no bordo da amostra. Usar um micro-manipulador para mover a sonda para uma distância conhecida (R) na amostra. </li><li> Use Lei de Fick para obter a equação de difusão teórico. Com a data recolhidas no passo 10.1, obtenha o termo coeficiente de difusão experimental / reação etc. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siggers, J. H., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+Mechanics+of+the+Eye%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Fluid+Mechanics%22%5BJournal%5D)">Fluid Mechanics of the Eye.</a> Annual Review of Fluid Mechanics. 44 (1), 347-372 (2012).</li>
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<li>Burk, S. E., Da Mata, A. P., Snyder, M. E., Schneider, S., Osher, R. H., Cionni, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+vitreous+using+kenalog+suspension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Visualizing vitreous using kenalog suspension.</a> J Cataract Refract Surg. 29 (4), 645-651 (2003).</li>
<li>Spaide, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+the+Posterior+Vitreous+with+Dynamic+Focusing+and+Windowed+Averaging+Swept+Source+Optical+Coherence+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Visualization of the Posterior Vitreous with Dynamic Focusing and Windowed Averaging Swept Source Optical Coherence Tomography.</a> Am J Ophthalmol. S0002-9394 (14), 00537-00536 (2014).</li>
<li>Domalpally, A., Gangaputra, S., Danis, R. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDomalpally%2C+A+%22Diseases+of+the+Vitreo-Macular+Interface%22">Diseases of the Vitreo-Macular Interface</a>. 21, Springer. Berlin Heidelberg: Berlin, Heidelberg. 21-27 (2014).</li>
<li>Stocchino, R., Repetto, A., Cafferata, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+investigation+of+vitreous+humour+motion+within+a+human+eye+model%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Experimental investigation of vitreous humour motion within a human eye model.</a> Phys Med Biol. 50 (19), 4729-4743 (2005).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Existem dois passos críticos que devem ser cuidadosamente realizados durante a dissecção vítreo. Passo 3, a criação de uma aba escleral de espessura total, é crucial para toda a dissecção. Cuidados devem ser tomados para não cortar na coróide ao criar a espessura total retalho escleral. O outro passo crítico é dissecar afastado da esclera da coróide. Esta etapa deve ser feito com cuidado para evitar a criação de vários buracos na coróide de que o vítreo pode derramar. Existe uma maneira de modificar o protocolo e ainda ...

O objectivo deste método é a de detalhe uma técnica para isolar todo um corpo vítreo, intacta, com o núcleo vítreo e córtex intacto, a partir de um olho de cadáver, para efeitos de análise vitreodynamic. Como o campo da fisiologia vítreo tem crescido, pesquisadores multidisciplinares, tais como mecânica dos fluidos pesquisadores, estão a investigar as propriedades físicas e biomecânicas do vítreo 1. Para este fim, é essencial detalhe uma técnica para isolar todo o, corpo vítreo intacta para ajudar os investigadores multidisciplinares. Sebag et al. 2 e 3 outros realizados inteiras elegantes dissecações de cadáveres vítreas em olhos humanos e mostrou ilustrações dos resultados. No entanto, a técnica utilizada não foi descrito em pormenor e não especialistas não seria capaz de se replicar independentemente do método. Outros estudos têm colhido vítreo de cadáveres olhos usando métodos mais simples, como aspiração ou dissecação parcial,ambas as quais não resultam em conjunto um corpo vítreo, intacta. Gisladottis et al. 4 e Xu et al. 5 investigar permeabilidade no humor vítreo colhida a partir de olhos de cadáveres. No entanto, uma vez que nenhum método de extracção vítreo foi descrito, assumiu-se que eles aspirado do humor vítreo com uma seringa. Watts et al. 6 foi um passo adiante, descrevendo um método de isolamento de coelho humor vítreo com uma técnica cirúrgica. No entanto, este método resulta num isolamento de apenas o núcleo vítreo e não no córtex vítreo. Skeie et al. 7 posteriormente organizou o vítreo em 4 regiões únicas e elegantemente descrito um método para dissecar cada parte para análise. Esta técnica no entanto, não resultar numa vítreo intacto como um todo. A técnica actual foi desenvolvido para facilitar experiências biofísicas que actualmente apenas são realizadas em cadáveres olhos. Os métodos anteriores, como descrito umbove, são limitados porque 1) nenhuma isolar completamente todo o corpo vítreo, núcleo e córtex vítreo 2) colhidas são homogeneizados, 3) estrutura anatômica vítreo não é mantido, ou 4) técnicas de dissecação não são adequadamente detalhados para a replicação por pesquisadores em outros campos . Além disso, devido à opacidade da esclera e coróide, visualização do corpo vítreo é limitado no globo ocular intacto. Isto limita a precisão das medições de viabilidade e que podem ser feitas dentro de todo o olho. Além disso, as estruturas anatómicas circundantes do vítreo pode confundir o estudo das propriedades bioquímicas e físicas do vítreo. Nos últimos anos, o corpo vítreo da ciência tem crescido muito e não há razão para acreditar que todo o corpo vítreo tem propriedades diferentes do que suas partes individuais. Há um crescente interesse em investigar as propriedades físicas, biomecânicos e químicas do vítreo para vitreodynamics research, que tem aplicações na medicina clínica, tais como a entrega de drogas, oxigenação intravítrea 8 e vitrectomia. Vitreodynamics farmacológicos, que utiliza agentes farmacológicos para manipular o vítreo, pode ser utilizada para melhorar os resultados de vitrectomia 9. As propriedades biomecânicas são utilizados para modelar o fluxo de fluido vítreo, que pode ser usado para melhorar as tecnologias de entrega de drogas intravítrea 10-12. Propriedades físicas de vários segmentos da vítreo são cruciais para a compreensão de transporte de oxigênio vítreo-retiniana 13. A técnica de dissecção do vítreo proposto pode ser utilizado para estudar diversas propriedades do humor vítreo intacta. Ele permite que os experimentos de bancada a ser feito em, corpos vítreos intactas inteiros com melhor visualização. Em resumo, os métodos actuais para o estudo do vítreo ou não são adequadamente descritos, ou resultar em um isolamento completo do núcleo vítreo e no córtex. Portanto, existe uma necessidade de executar experiments em um modelo de olho transparente, mantendo a anatomia do vítreo existente no olho cadáver.

<table><tbody><tr><td>0.3 pinças</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E1793</td><td></td></tr><tr><td>Westcott Tenotomia Tesoura Curvada</td><td>Direita Storz Opthalmics</td><td>E3320 R</td><td></td></tr><tr><td>Cabo de bisturi nº 3</td><td>VWR</td><td>25607-947</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina de bisturi, #11, para cabo #3 VWR</td><td></td><td>470174-844</td><td></td></tr></tbody></table>

whole humor vítreo dissecção de análise vitreodynamic

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Os autores propõem uma técnica eficaz para isolar o núcleo vítreo inteiro e intacto e o córtex de olhos suínos enucleados post mortem. Embora estudos anteriores tenham mostrado os resultados de tais dissecações, as etapas detalhadas não foram descritas, impedindo que pesquisadores de fora da área repliquem seus métodos. Outros estudos colhem o vítreo por aspiração, que não mantém a anatomia da estrutura vítrea, ou por dissecção parcial, que apenas isola o núcleo vítreo. O método proposto isola todo o corpo vítreo, com o núcleo vítreo e o córtex intactos, mantendo a anatomia vítrea e a integridade estrutural. Neste método, um retalho escleral de espessura total em um olho suíno enucleado é criado primeiro e, por meio dele, o tecido coróide pode ser separado da esclera. O retalho escleral é então expandido e a coroide é completamente separada da esclera. Finalmente, o tecido coróide-retina é retirado do vítreo para deixar um corpo vítreo intacto isolado. A técnica de dissecção vítrea proposta pode ser usada para estudar as propriedades físicas do humor vítreo. Em particular, este método tem importância para estudos experimentais envolvendo administração de medicamentos, transporte de oxigênio vítreo-retiniano e convecção intraocular.

Seguindo o protocolo irá levar a uma dissecção do vítreo bem sucedida com o núcleo e o córtex (Figura 3) intactos. Isto é evidente a partir dos pedaços residuais de retina aderiram ao córtex vítreo. Todo intacta humor vítreo pode ser usado de várias maneiras para experiências vitreodynamic específicos. No nosso caso, a taxa de difusão do oxigénio no humor vítreo intacto e é constante de tempo correspondente foi estudada (Figura 2). Vítreo que foi dissecado (núcleo e córtex), usando o no...

O objetivo deste protocolo é mostrar uma técnica eficaz para isolar o núcleo vítreo e o córtex vítreos inteiros e intactos de olhos suínos enucleados post mortem.

Whole humor vítreo Dissecção de Análise Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar uma técnica eficaz para isolar núcleos e córtices vitreos inteiros e intactos de olhos suínos postmortem e nucleados. Isso é realizado primeiramente removendo a conjuntiva perilimbar por dissecção e expondo a esclera. Na segunda etapa, cria-se uma aba escleral de espessura total, que é então expandida.A coroide é então separada da esclera e o tecido da coroide-retina é destacado do vítreo. Em última análise, toda a dissecção intacta do núcleo e córtex vítreo pode ser utilizada para estudar as propriedades físicas, biomecânicas e químicas do humor vítreo. A principal vantagem desta técnica em relação a outros métodos existentes, como dissecções parciais do vítreo, é que ela permite o isolamento completo do núcleo e córtex vítreos intactos, mantendo a estrutura anatômica do vítreo. Comece fixando o olho eviscerado através do tecido residual adjacente em uma placa de dissecção de isopor.Uma vez que o olho esteja fixado, utilize pin&ccedil;as finas e tesouras microcir&uacute;rgicas para incisar a conjuntiva na inser&ccedil;&atilde;o escleral e dissec&aacute;-la rombuda da esclera. Corte a conjuntiva ao longo da inser&ccedil;&atilde;o escleral &agrave; medida que a disseca&ccedil;&atilde;o rombuda progride, permitindo uma disseca&ccedil;&atilde;o adicional. Em seguida, remova toda a conjuntiva, exceto uma pequena quantidade, ao redor completo do olho, a fim de expor a maior &aacute;rea poss&iacute;vel da esclera.Em seguida, use o bisturi para fazer suavemente uma incisão escleral paralela a cerca de cinco milímetros e três milímetros posterior ao limbo, até que a coroide pigmentada escura fique visível, criando assim uma aba escleral. Em seguida, dissecar cuidadosamente com técnica romba o tecido ao longo do plano entre a esclera e a coroide, até que seja possível empurrar suavemente a coroide para dentro, ampliando o espaço entre os dois tecidos. Usando tesoura microcirúrgica afiada, faça outro corte escleral perpendicular ao primeiro, criando uma incisão em formato de T.Em seguida, continue a dissecar de forma romba e circunferencialmente para remover o tecido escleral da coroide subjacente e empurre suavemente a coroide para longe da esclera a fim de ampliar o retalho. Realize cuidadosamente uma dissecação romba, separando a coroide da esclera até que o corte feito perpendicularmente ao limbo alcance o nervo óptico e o corte feito paralelamente ao limbo corresponda a pelo menos 45 graus da circunferência do olho. Utilize este retalho para repetir a dissecação romba no outro lado do olho.Em seguida, corte ambos os retalhos esclerais para expor uma grande área da coroide. Agora, continue a incisão ao redor da circunferência do olho de forma romba. Disseque a coroide da esclera e remova o tecido restante de coroide e retina na região exposta.Faça uma incisão na coroide começando pelo nervo óptico. Em seguida, use uma pinça para remover suavemente o tecido do corpo vítreo subjacente. Continue dissecando e removendo a coroide com movimentos rombos até obter inteiramente o vítreo intacto.Em seguida, utilize a borda escleral anexada à córnea para posicionar todo o vítreo na localização desejada. Neste momento, o vítreo ainda deve estar preso à esclera anterior e ao cristalino. Por fim, realize uma dissecação romba do vítreo a partir da face interna da esclera e ao redor do cristalino.Para remover toda a esclera, use uma ferramenta romba para retirar a lente do vítreo conforme necessário. Seguir o protocolo conforme acabou de ser demonstrado resultará em uma dissecação bem-sucedida do vítreo, mantendo o núcleo e o córtex intactos, como evidenciado pelos fragmentos residuais da retina aderidos ao córtex do vítreo. Nesta imagem, o humor vítreo inteiro e intacto pode então ser utilizado de várias maneiras em experimentos víricos específicos.Por exemplo, aqui foi estudada a taxa de difusão de oxigênio em um humor vítreo intacto e sua constante de tempo correspondente na presença do córtex vítreo. A difusão do oxigênio ocorreu ao longo de um intervalo mais longo. Não se esqueça de que trabalhar com materiais cortantes pode ser perigoso, e precauções como o manuseio e descarte adequados devem sempre ser tomadas durante a realização deste procedimento.

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