Name: Encapsulation alginato de pluripotentes células estaminais utilizando um bocal Co-axial (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-02T10:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Aprenda a encapsular células-tronco pluripotentes em hidrogéis de alginato utilizando um bocal co-axial. Este método reduz o estresse de cisalhamento e a agregação celular, facilitando a produção em massa e pesquisas sobre nichos de células-tronco.

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Esta pesquisa foi apoiada pelo projeto S-Innovation da Agência Japonesa de Ciência e Tecnologia (JST), pelo Programa de Pós-Graduação para Líderes em Inovação da Vida (GPLLI) da Universidade de Tóquio e pela Bolsa de Pesquisa para Jovens Cientistas da Sociedade Japonesa para a Promoção da Ciência. Agradecemos à nac Image Technology Inc. por gravar filmes usando uma câmera de alta velocidade.

1. Materiais Preparando <ol><li> Preparar tampão HEPES 10 mM. Ajustar o pH para 7,0 à TA e adicionar NaCl a 0,9%. </li><li> Preparar a solução de alginato e 5% de solução de EDTA a 10 mM através da mistura de solução salina tamponada com HEPES preparado em 1.1. Ajustar o pH para 7,0 à temperatura ambiente. </li><li> Autoclave os reagentes (1.1, 1.2) durante 20 min a 121 ° C. </li><li> Preparar 60 milímetros pratos revestidos com gelatina em camadas com 1,2-2,0 x 10 6 de fibroblastos de rato embrionário (MEF) células, as quais são tratadas como células de alimentação por incubação dentro de DMEM contendo 10% de FBS ES-qualificados e 10 ug / ml de mitomicina C para 90 - 120 min. </li><li> Manter rato induzida estaminais pluripotentes (IPS) sobre o prato de células com as células de alimentação na presença de 5 ml de DMEM de alto teor de glucose contendo 20% de FBS ES-qualificado, 50 uM de 2-mercaptoetanol, aminoácidos não-essenciais, e antibióticos ( 100 unidades / ml de penicilina G sódio, 100 ug / ml de sulfato de estreptomicina, e 250 ng / ml de amphotericin B). </li><li> Semente 4 × 10 5 células iPS sobre uma placa de 60 mm revestidas com gelatina e incubar a 37 ° C e 5% de CO 2. Alterar o meio de cultura todos os dias durante a incubação. Após 3-4 dias de cultura, as células trypsinize durante 1 min com 500 ul de tripsina a 0,05% contendo EDTA a 0,02% a 37 ° C e 5% de CO 2. Depois disso, retire as células tocando no prato de cultura dez vezes. </li><li> Adicionar 2,5 ml de DMEM com 10% de FBS e antibióticos ES-qualificado (seguindo as células iPS dissociação do rato em células individuais por pipetagem com 1.000 mL micropipeta, três vezes) suspensão de células centrifugar a 160 × g por 3 min e remover o sobrenadante e contar as células . Seguindo a contagem das células, propagar novamente as células recolhidas num prato revestido com gelatina e incubar durante 30 min para isolar as células iPS a partir das células MEF. Após a contagem das células (geralmente 1-3 × 10 6 células / prato pode ser coletado), reseed 4 × 10 5 células iPS emo prato. </li></ol> 2. celular encapsulação em cápsulas de Hidrogel de Alginato <ol><li> Recolher as células por o mesmo procedimento descrito em 1.5 e 1.6. Após a centrifugação a 160 x g durante 3 minutos, lava-se a pelete de células iPS com solução salina tamponada com HEPES três vezes. Depois de re-suspender as células em solução salina tamponada com HEPES, filtrar a suspensão de células através de um filtro de 40 um da célula, a fim de remover grandes agregados, o que poderia de outro modo entupir o bocal. </li><li> Misturar 2 ml de suspensão de células numa solução salina tamponada com HEPES e 3 ml de solução a 5% Alg-Na. Finalmente 5 ml de suspensão de células numa solução de 3% Alg-Na é obtido. A densidade celular é desejavelmente superior a 10 6 células / ml. </li><li> Depois de recolher a suspensão de células para uma seringa de 5 ml, instalar um bocal co-axial (Figura 1A, B) na seringa e colocá-las sobre a bomba de seringa. Emit N2 fluxo de gás (inferior a 1 L / min) através da agulha exterior do bico de co-axial eexpelir a suspensão de células através do bocal interno. </li><li> Recolhe gotas em 250 ml de 0,5% de solução de CaCl2 e esperar 10-20 min para a gelificação enquanto se agitava a 60-90 rpm. </li></ol> 3. Tratamento de cápsulas de alginato (opcional) <ol><li> Incubar cápsulas Alg-Ca em 0,05% de poli-L-lisina (PLL) solução durante 5 min a 37 ° C e 5% (w / v) de CO 2. </li><li> Após lavagem das cápsulas com solução salina tamponada com HEPES, incubar em DMEM contendo FBS a 10% a fim de neutralizar a carga eléctrica na sua superfície. Utilizá-los na forma de cápsulas revestidas (Figura 1C). </li><li> Incubam-se as cápsulas em solução salina tamponada com HEPES contendo 10 mM de EDTA durante 5 minutos. As cápsulas tratado com EDTA são utilizados na forma de cápsulas ocas (Figura 1C). </li></ol> 4. Cultura e coletar células em alginato Cápsulas <ol><li> Incubar as células encapsuladas a 75 rpm com agitação a 37 ° C e 5% de CO 2durante 10 dias. </li><li> Recolha e incubar as cápsulas em EDTA 10 mM a 37 ° C e 5% de CO 2 durante 10 min. Recolher as células a partir das cápsulas de alginato PLL sem tratamento por centrifugação a 1000 × g durante 3 min. </li><li> Se as cápsulas de alginato são tratadas com PLL, romper a membrana Alg-PLL, pipetando para cima e para baixo em torno de dez vezes com uma agulha ligada a uma seringa e centrifuga-se que em 1000 - 5000 × g durante 5 min. Diâmetro da agulha deve ser menor do que o tamanho da cápsula e 25 g (260 ^ m) de agulhas são utilizadas nesta experiência (600 um) </li><li> Após a centrifugação, coletar sedimento celular estritamente a partir de membranas Alg-PDD quebrados se você quiser coletar amostras de mRNA a partir de células. Restantes membranas Alg-PLL possivelmente prevenir a purificação de ARNm. </li></ol>

<ol><li>Zweigerdt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+scale+production+of+stem+cells+and+their+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Biochem.+Eng.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Large scale production of stem cells and their derivatives.</a> Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. 114, 201-235 (2009).</li>
<li>Chen, A., Chen, X., Choo, A. B. H., Reuveny, S., Oh, S. K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+microcarrier+properties+affecting+the+expansion+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+Res%22%5BJournal%5D)">Critical microcarrier properties affecting the expansion of undifferentiated human embryonic stem cells.</a> Stem cell Res. 7 (2), 97-111 (2011).</li>
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<li>Dang, S. M., Gerecht-Nir, S., Chen, J., Itskovitz-Eldor, J., Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled%2C+scalable+embryonic+stem+cell+differentiation+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Controlled, scalable embryonic stem cell differentiation culture.</a> Stem Cells. 22 (3), 275-282 (2004).</li>
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<li>Horiguchi, I., Chowdhury, M. M., Sakai, Y., Tabata, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation%2C+morphology%2C+and+pluripotency+of+mouse+induced+pluripotent+stem+cells+in+three+different+types+of+alginate+beads+for+mass+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Prog%22%5BJournal%5D)">Proliferation, morphology, and pluripotency of mouse induced pluripotent stem cells in three different types of alginate beads for mass production.</a> Biotechnol. Prog. 30 (4), 896-904 (2014).</li>
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<li>Magyer, J. P., Nemir, M., Ehler, E., Suter, N., Perriard, J., Eppenberger, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+Production+of+Embryoid+Bodies+in+Microbeads%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.+Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Mass Production of Embryoid Bodies in Microbeads.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 944, 135-143 (2001).</li>
<li>Xu, J., Li, S., Tan, J., Luo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controllable+Preparation+of+Monodispersed+Calcium+Alginate+Microbeads+in+a+Novel+Microfluidic+System%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Eng.+Technol%22%5BJournal%5D)">Controllable Preparation of Monodispersed Calcium Alginate Microbeads in a Novel Microfluidic System.</a> Chem. Eng. Technol. 31 (8), 1223-1226 (2008).</li>
<li>Sakai, M. P., Y, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Bioactive+Hydrogel+Capsules+for+The+3D+Expansion+of+Pluripotent+Stem+Cells+in+Bioreactors%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater.+Sci%22%5BJournal%5D)">Development of Bioactive Hydrogel Capsules for The 3D Expansion of Pluripotent Stem Cells in Bioreactors.</a> Biomater. Sci. 2 (176), 176-183 (2014).</li>
<li>Chowdhury, M. M., Katsuda, T., Montagne, K., Kimura, H., Kojima, N., Akutsu, H., Ochiya, T., Fujii, T., Sakai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+effects+of+secreted+soluble+factor+preserve+better+pluripotent+state+of+embry-+onic+stem+cell+culture+in+a+membrane-based+compartmentalized+micro-bioreactor%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Enhanced effects of secreted soluble factor preserve better pluripotent state of embry- onic stem cell culture in a membrane-based compartmentalized micro-bioreactor.</a> Biomed. Microdevices. 12 (6), 1097-1105 (2010).</li>
<li>Chowdhury, M. M., Kimura, H., Fujii, T., Sakai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+alternative+fate+other+than+default+neuronal+fate+of+embryonic+stem+cells+in+a+membrane-based+two-chambered+micro-+bioreactor+by+cell-secreted+BMP4%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Induction of alternative fate other than default neuronal fate of embryonic stem cells in a membrane-based two-chambered micro- bioreactor by cell-secreted BMP4.</a> Biomicrofluidics. 6 (1), 14117-14117-13 (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

<html> A encapsulação pode ser cultura em comparação com as culturas em suspensão directos. Cultura em suspensão é um método mais simples para obter grandes quantidades de células estaminais pluripotentes que os métodos de encapsulamento. No entanto, controlando a agregação de células numa cultura em suspensão é ainda difícil. No método de encapsulamento, agregação celular é limitado em cápsulas e podem, portanto, ser bem controlada. A publicação anterior mostrou que células encapsuladas formado agregados de tamanho unif...

As células-tronco pluripotentes induzidas (células iPS) são atualmente fonte de intensa pesquisa devido ao seu papel na medicina regenerativa. No entanto, grandes quantidades de células são necessárias para a regeneração dos tecidos. Por exemplo, aproximadamente um bilhão de células pancreáticas necessárias para um paciente diabético tipo 11. No entanto, a cultura convencional de pratos só é capaz de obter 1 × 105 células/cm2, exigindo assim 1m2 de área de cultura para obter células pancreáticas derivadas de células-tronco suficientes para tratar um paciente diabético tipo 1. O desenvolvimento de um sistema para a cultura em massa de células-tronco pluripotentes, como microcarreador2 e cultura em suspensão, é, portanto, necessário para a medicina regenerativa. A cultura em suspensão representa um método promissor de cultura em massa, mas controlar a agregação de células é um desafio em culturas em suspensão direta de células iPS humanas3. De fato, as células suspensas são expostas à tensão de cisalhamento, o que causa dano celular3 ou diferenciação4.
A pesquisa em encapsulamento à base de hidrogel foi conduzida para resolver problemas associados à cultura em suspensão. Nas cápsulas de hidrogel, as células são protegidas do fluxo do meio. Relatórios anteriores documentaram o uso de vários tipos de hidrogel, incluindo agarose5, PEG6 e alginato (Alg), para encapsulamento celular. O hidrogel de Alg-Ca é um dos hidrogéis mais úteis para o encapsulamento celular porque o hidrogel de Alg-Ca é formado imediatamente após a queda da solução de alginato em uma solução de CaCl2 e também é prontamente digerido por enzimas ou reagentes quelantes. 
Aqui, estabelecemos um processo de encapsulamento de alginato estável para células iPS usando um bico coaxial. Ao usar o fluxo de gás N2 para formar gotículas, é possível encapsular células em cápsulas uniformes sem a necessidade de outros reagentes, como óleo. Neste método, a taxa de fluxo de N2 e a concentração de CaCl2 e alginato são as principais condições operacionais que afetam o tamanho, a forma e a uniformidade das cápsulas. Este relatório demonstra a otimização dessas condições operacionais por meio do uso de uma câmera de alta velocidade e um microscópio.

<table><tbody><tr><td>Embrião de camundongo</td><td>fibroblasto Cell Biolabs</td><td>SNL 76/7</td><td></td></tr><tr><td>Célula-tronco pluripotente induzida</td><td>por camundongo RIKEN Bio resorce center</td><td>iPS-MEF-Ng-20D-17</td><td></td></tr><tr><td>DMEM de alta glicose</td><td>GIBCO</td><td>11995</td><td></td></tr><tr><td>ES qualificado&nbsp; FBS</td><td>GIBCO</td><td>16141079</td><td></td></tr><tr><td>Antibióticos Antibacterianos</td><td>GIBCO</td><td>15240</td><td></td></tr><tr><td>Aminoácido Não Essencial</td><td>GIBCO</td><td>11140</td><td></td></tr><tr><td>2-mercaptoetanol</td><td>GIBCO</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>Fator Inibidor de Leucemia ESGRO</td><td>Merck Millipore</td><td>ESG1107</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina / EDTA</td><td>GIBCO</td><td>25300</td><td></td></tr><tr><td>Agulha 26 G/16 G</td><td>Seringa Hoshiseido</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 ml</td><td>TERUMO</td><td>SS-10ESZ</td><td></td></tr><tr><td>Sódio&nbsp; Cloreto</td><td>Wako</td><td>191-01665</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>SIGMA</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>Alginato de Sódio</td><td>Wako</td><td>194-09955</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Cálcio</td><td>Wako</td><td>039-00475</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-lisina (MW = 15.000 - 30.000)</td><td>SIGMA</td><td>P7890</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>DOJINDO</td><td>345-01865</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de silinge</td><td>COMO UM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Olympus</td><td>IX71</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Leica</td><td>DM IRB</td><td></td></tr><tr><td>Câmera Hispeed</td><td>nac tecnologia de imagem</td><td>Memrecam HX-3</td><td></td></tr></tbody></table>

encapsulation alginato de pluripotentes células estaminais utilizando um bocal co-axial

Alginate Encapsulation of Pluripotent Stem Cells Using a Co-axial Nozzle

As células-tronco pluripotentes (células PS) são o foco de intensa pesquisa devido ao seu papel na medicina regenerativa e na triagem de medicamentos. No entanto, o desenvolvimento de um sistema de cultura em massa seria necessário para o uso de células PS nessas aplicações. A cultura em suspensão é um método de cultura promissor para a produção em massa de células PS, embora algumas questões, como o controle da agregação e a limitação da tensão de cisalhamento do meio de cultura, ainda não tenham sido resolvidas. Para resolver esses problemas, desenvolvemos um método de encapsulamento de alginato de cálcio (Alg-Ca) usando um bico coaxial. Este método pode controlar o tamanho das cápsulas facilmente co-fluindo gás N2. O diâmetro da cápsula controlável deve ser maior que 500 μm, pois uma vazão muito alta de gás N2 causa a quebra de gotículas e, portanto, de cápsulas de tamanho heterogêneo. Além disso, uma baixa concentração de Alg-Na e CaCl2 causa cápsulas não esféricas. Embora uma cápsula de Alg-Ca sem revestimento de Alg-PLL se dissolva facilmente, permitindo a coleta de células, elas também podem vazar de cápsulas sem revestimento de Alg-PLL. De fato, um revestimento de alginato-PLL pode prevenir o vazamento celular, mas também é difícil de quebrar. Essa tecnologia pode ser usada para pesquisar o nicho de células-tronco, bem como a produção em massa de células PS, porque o encapsulamento pode modificar o microambiente ao redor das células, incluindo a matriz extracelular e a concentração de fatores secretados.

No protocolo de 2,5, a solução de alginato expelido forma uma forma esférica imediatamente após a expulsão (Figura 2A - H). Se a suspensão é expulso com uma taxa de fluxo de N2 inferior a 1 L / min, o tamanho das gotículas é uniforme (Figura 2I). No entanto, se o fluxo de N2 é superior a 1 L / min, a gotícula de quebra (Figura 2G, de setas brancas) e o tamanho das gotas se torna heterogéneo (Figura 2J). Sendo assim, é difícil prepa...

Estabelecemos um método de encapsulamento de células-tronco pluripotentes (células PS) em cápsulas de hidrogel de alginato usando um bico coaxial. Isso evita que as células se agreguem excessivamente e limita a tensão de cisalhamento experimentada pelas células em cultura em suspensão. A técnica é aplicável à produção em massa de células PS, bem como à pesquisa de nicho de células-tronco.

Encapsulation alginato de pluripotentes células estaminais utilizando um bocal Co-axial

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening.  However, the ...

O objetivo geral deste procedimento é incorporar células-tronco em cápsulas de hidrogel de alginato de forma segura e eficaz, e cultivá-las dentro das cápsulas para controlar a agregação e o microambiente. Isso é realizado primeiramente misturando uma suspensão filtrada de células-tronco com uma solução de alginato de sódio. A mistura é então transferida para uma seringa, e um bico coaxial é instalado na seringa antes de posicioná-la em uma bomba de seringa. Em seguida, as gotas são preparadas expelindo a suspensão celular com fluxo de gás nitrogênio, seguido pela coleta e adição de solução de cloreto de cálcio.As cápsulas são então tratadas com poli-L-lisina para prevenir vazamento celular e com EDTA para fluidificar o interior das cápsulas antes do cultivo das células encapsuladas em condições de agitação rotativa. Por fim, as células são coletadas das cápsulas mediante EDTA e destruição física da membrana. Em última instância, o encapsulamento em alginato de células-tronco pluripotentes evita que as células se agreguem em excesso e limita o estresse de cisalhamento a que as células são submetidas em cultivo em suspensão.Este método pode ajudar a responder perguntas-chave nas áreas biológica e biomédica, como a ampla expansão do transplante de células e a pesquisa sobre o nicho de células-tronco. Inicie a encapsulação celular coletando as células conforme descrito no protocolo textual, após centrifugação a 160 vezes G por três minutos. Lave o pellet de células-tronco pluripotentes induzidas ou células IPS com Resus, suspendendo-as em solução salina tamponada e realizando três centrifugações após o ressuspenso, suspendendo as células em solução salina tamponada.Filtre a suspensão celular através de um estrainer de células de 40 mícrons para remover agregados grandes, que poderiam entupir a agulha. Em seguida, misture dois mililitros da suspensão celular filtrada e três mililitros de solução de alginato de sódio a 5%. Para obter uma suspensão celular de cinco mililitros em alginato de sódio a 3%, a densidade celular deve ser DIR superior a um milhão de células por mililitro.Após coletar a suspensão celular em uma seringa de cinco mililitros, instale um bico coaxial na seringa e posicione-as em uma bomba de seringa; emita um fluxo de gás nitrogênio através da agulha externa do bico coaxial e expulse a suspensão celular através da cânula interna. Colete as gotículas em 250 mililitros de solução de cloreto de cálcio a 0,5% e aguarde de 10 a 20 minutos para a reticulação, sob agitação de 60 a 90 rpm. Após a lavagem com solução salina tamponada, as cápsulas coletadas são utilizadas como cápsulas nuas; trate as cápsulas incubando cápsulas de alginato de cálcio em 0,05% peso por volume.Solução de poli-L-lisina por cinco minutos a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono com agitação. Após coletar as cápsulas em um tubo e lavar com solução salina tamponada, incubar em DMEM contendo 10% de soro bovino fetal. Para neutralizar a carga elétrica em sua superfície, utilizar as cápsulas resultantes como cápsulas revestidas para gerar cápsulas ocas.Incube as cápsulas em pilhas de solução salina tamponada contendo EDTA 10 milimolar por cinco minutos. As cápsulas tratadas com EDTA são utilizadas como cápsulas ocas. Incube as células encapsuladas a 75 RPM com agitação a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 10 dias; após a incubação, colete e incube as cápsulas em EDTA 10 milimolar a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 10 minutos.Colete as células das cápsulas de alginato sem tratamento com poli-L-lisina por centrifugação a 1000 vezes G durante três minutos. Se as cápsulas de alginato forem tratadas com poli-L-lisina, rompa a membrana de alginato-poli-L-lisina pipetando para cima e para baixo cerca de 10 vezes com uma agulha acoplada a uma seringa. O diâmetro da agulha deve ser menor que o tamanho da cápsula, e agulhas de 25 graus são utilizadas neste experimento.Após centrifugação a 1000 a 5.000 × g durante cinco minutos, colete o pellet celular estritamente de membranas rompidas de alginato poli-L-lisina. Se amostras de mRNA forem coletadas de células, observe que as membranas remanescentes de alginato poli-L-lisina podem impedir a purificação de mRNA, conforme visualizado por uma câmera de alta velocidade. A solução de alginato expelida forma imediatamente uma forma esférica após a expulsão. Se a suspensão for expelida com uma vazão de nitrogênio inferior a um litro por minuto, o tamanho das gotículas é uniforme.No entanto, se o fluxo de nitrogênio for superior a um litro por minuto, a gota se rompe e o tamanho das gotas torna-se heterogêneo. Devido a isso, é difícil preparar gotas menores que 500 mícrons utilizando este método. No processo de gelificação, gotas de alginato de sódio formam cápsulas esféricas de alginato de cálcio em solução de cloreto de cálcio.No entanto, se a concentração de alginato de sódio for alta o suficiente, uma baixa concentração de alginato de sódio causa formas não esféricas e irregulares das cápsulas, o que apresenta um problema no processo de codificação. Mesmo que a concentração de alginato de sódio não seja suficiente, cápsulas esféricas podem ser formadas aumentando-se a concentração de cálcio. Entretanto, cerca de 50 milimolares de cloreto de cálcio é apropriado para encapsulação, pois uma concentração muito alta de cloreto de cálcio reduz o crescimento celular e a viabilidade.Células encapsuladas podem crescer dentro das cápsulas, mas pode ocorrer vazamento celular em cápsulas sem revestimento de alginato de poli-L-lisina. No caso de células iPS de camundongo, as células formam agregados com formato de disco em cada cápsula de alginato de cálcio, enquanto as células se agrupam e formam agregados esféricos únicos em cada cápsula oca. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como encapsular e cultivar células com controle de tamanho.O hidrogênio é capturado sem nenhum equipamento especial, sem absorbente orgânico.

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Técnica Automated Robotic dispensação de Orientação da superfície e bioprinting de Células

Este vídeo e manuscrito descrevem um método baseado em emulsão para encapsular células de mamífero em pérolas de alginato de 0,5% a 10% que podem ser produzidas em grandes lotes usando um vaso de agitação simples. As células encapsuladas podem ser cultivadas in vitro ou transplantadas para aplicações de terapia celular.

Encapsulamento de células de mamífero em grânulos de alginato usando um recipiente agitado simples

Apresentado aqui é um simples de usar, Core/Shell, tridimensional bioprinting set-up para uma etapa de fabricação de andaimes ocas, adequado para a engenharia de tecidos vasculares e outras estruturas tubulares.

Núcleo/Shell impressão scaffolds para engenharia de tecidos de estruturas tubulares

Apresentamos aqui um método que combina o uso de apagamento epigenético químico com pistas relacionadas à mecanosensagem para gerar eficientemente células pluripotentes de mamíferos, sem a necessidade de transfecção genética ou vetores retrovirais. Essa estratégia é, portanto, promissora para a medicina translacional e representa um notável avanço na tecnologia organoide de células-tronco.

Uma estratégia de duas etapas que combina modificação epigenética e sinais biomecânicos para gerar células pluripotentes mamíferas

Este artigo descreve o encapsulamento de células-tronco pluripotentes humanas (hPSCs) usando um dispositivo de foco de fluxo coaxial. Demonstramos que essa tecnologia de encapsulamento microfluido permite a formação eficiente de esferoides hPSC.

Fabricação microfluida de microcápsulas core-shell carregando esferoides de células-tronco pluripotentes humanas

O presente protocolo descreve uma técnica para produzir esferoides de tecido em larga escala de forma econômica usando um dispositivo semelhante a um selo impresso em 3D.

Geração de esferoides de tecido por meio de um dispositivo semelhante a um selo impresso em 3D

Este trabalho descreve um protocolo para a impressão 3D embutida em forma livre de células-tronco neurais dentro de compósitos de matriz extracelular com partículas revencíveis auto-reparáveis. O protocolo permite a padronização programável de construções de tecido neural humano interconectadas com alta fidelidade.

Suporte composto de matriz extracelular microgel para impressão 3D incorporada de construções neurais humanas

Aprenda a encapsular células-tronco pluripotentes em hidrogéis de alginato utilizando um bocal co-axial. Este método reduz o estresse de cisalhamento e a agregação celular, facilitando a produção em massa e pesquisas sobre nichos de células-tronco.

Encapsulation alginato de pluripotentes células estaminais utilizando um bocal Co-axial

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