Name: Férrico Thrombosis Modelo rato na artéria carótida e Mesentery Vessel induzida por Chloride (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Aprenda a induzir e monitorar trombose em camundongos usando FeCl₃ em artéria carótida e vasos mesentéricos. Este método de microscopia intravital permite avaliar a formação do trombo em tempo real e testar eficácia de fármacos antitrombóticos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Os autores gostariam de agradecer o apoio técnico da Alegria Yao e Dr. Karen Alt, bem como o financiamento do NHMRC e NHF.

Todos os experimentos envolvendo animais foram aprovados pelo Alfred Pesquisa Médica e da Educação Comissão de Ética Animal Precinct (E / 1534/2015 / B). Todas as manipulações cirúrgicas foram realizadas sob anestesia geral e os animais não apresentaram dor em qualquer fase. Todas as experiências descritas são não-recuperação. 1. Preparação <ol><li> Cortar bandas finas de papel de filtro (1 mm x 2 mm). </li><li> Recentemente preparar duas soluções de cloreto férrico, de 4% (w / v) e 6% (w / v) diluída em água desionizada. Preparar a solução de rodamina 6G 0,3% em PBS, filtrou-se através de 0,22 um. </li><li> Corte um pequeno pedaço (5 mm x 1 cm) a partir da seringa de plástico branco de embalagem. </li></ol> 2. Mesentery arteríola formação de trombos Observado por Microscopia intravital <ol><li> Pesar de 10-12 semanas de idade C57BL / 6 de tipo selvagem do rato e anestesiar em conformidade com uma mistura de cetamina (100 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg), embora a injecção intraperitoneal. Monitore a profundidade da anestesia com a resposta aos pés, cauda e / ou pitada pele, reatividade de pitada córnea e da pálpebra, e ausência de movimento bigodes. Se necessário, injectar uma segunda dose de cetamina (50 mg / kg) para manter a anestesia do animal. Aplicar pomada veterinário sobre os olhos para evitar a secura sob anestesia. Colocar o rato numa pequena placa de petri colocado sobre uma almofada de aquecimento ajustada a 37 ° C. Nota: Embora a injecção IP pode resultar em dor para os animais, a duração deste desconforto será mínimo (menos de 3 segundos). Dor e desconforto associado com injecções irá ser minimizado através da utilização de pessoal experiente e competentes e tamanho da agulha adequada (25 L). Após todos os procedimentos, todos os animais a eutanásia, usando uma overdose de cetamina e xilazina, seguido por deslocação cervical. </li><li> Executar uma incisão na linha média abdominal de cerca de 3 cm na pele e corte cuidadosamente o peritônio. </li><li> Colocar o rato no lado do animal de estimaçãori prato, exteriorizar suavemente seus intestinos e espalhar cuidadosamente o mesentério com 2 cotonetes para trazer um recipiente adequado para a superfície da placa de Petri. Secar bem com um limpador delicado. NOTA: Para limitar o movimento dos vasos mesentéricos, a papaverina pode ser utilizado para inibir o peristaltismo intestinal. </li><li> Embeber a cauda do rato em água morna para dilatar os vasos e injectar 30 jil de Rodamina 6G (0,3%) na veia da cauda do rato com uma seringa 29 G para marcar leucócitos e plaquetas. </li><li> Coloque a placa de Petri sob um microscópio invertido e foco no arteriole escolhido utilizando o canal de campo claro. </li><li> Embebe-se um papel de filtro de banda com 6% (w / v) de ferro (III) e cloreto de aplicar o papel de filtro sobre a arteríola com duas pinças; a primeira a realizar o papel de filtro, o segundo ao pressioná-lo suavemente sobre a área de interesse. Observar a formação de trombos nos primeiros 10 segundos após a deposição do papel de filtro. NOTA: É muito commpara ferir a microvasculatura rodeado e a precisão da deposição do papel de filtro e a pressão é, por conseguinte, importante suavemente para limitar este problema. </li><li> Observe a formação de trombos por microscopia de fluorescência (TRITC canal: excitação de pico 557 nm, 576 nm pico de emissão), por meio do papel de filtro. Observe os leucócitos circulantes e plaquetas, que têm tido até o Rodamina 6G ea sua agregação para o trombo é, portanto, fácil de identificar. </li><li> Aqui o papel de filtração após 1 min de exposição a ferro (III) e cloreto de continuar a monitorizar a formação do trombo. Lavar o recipiente com PBS. </li><li> Observar e registar a formação dinâmica do trombo em destaque com a rotulagem de plaquetas e leucócitos com a Rodamina 6G. Capturar as imagens e medir o tamanho do trombo. As imagens aqui apresentados foram obtidos com um microscópio intravital invertido, embora uma objectiva de 4X, no canal de fluorescência TRITC. </li><li> Fepois todos os procedimentos, a eutanásia dos animais usando uma overdose de cetamina e xilazina, seguido por deslocação cervical. </li></ol> 3. Formação Carótida Artéria Thrombus avaliada pela medição do fluxo de sangue Velocity <ol><li> Pesar de 10-12 semanas de idade C57BL / 6 mouse e anestesiar em conformidade com uma mistura de cetamina (100 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg), embora a injecção intraperitoneal. Aplicar pomada veterinário sobre os olhos para evitar a secura sob anestesia. </li><li> Corrigir o mouse sob um microscópio cirúrgico usando fita adesiva nas pernas, em uma almofada de aquecimento ajustado para 37 ° C. </li><li> Faça um pequeno travesseiro para fora de um limpador e gravá-lo sob a cabeça do rato para elevar a cabeça ligeiramente. Use um loop fio com pinças para puxar o focinho para baixo (use dentes superiores). Isto irá expor a região da artéria carótida para fácil acesso. </li><li> Realize uma pequena 5 mm de profundidade da incisão da pele logo abaixo da mandíbula, até o esterno. </li><li> Dissecar a fascia e isolar um fragmento de qualquer artéria carótida comum esquerda ou para a direita acima da bifurcação. </li><li> Introduzir cuidadosamente pinças em-entre a artéria eo nervo para separá-los. Não perturbe o nervo que perto da artéria e evitar tocar muito da artéria carótida, uma vez que pode causar danos ao navio. Isolar uma secção de pelo menos 5 mm da artéria. </li><li> Seca-se a área da artéria adequadamente com escovas para evitar que qualquer líquido que interfere com o FeCl 3. </li><li> Coloque o pequeno pedaço de plástico branco sob a parte isolada da carótida comum, de modo a FeCl3 não mergulhe nos tecidos circundantes. Para esta finalidade, utilizar um segundo uma pinça para trazer a peça para o primeiro, em seguida, lentamente deslizar o papel plástico sob a artéria. </li><li> Embebe-se um pedaço de papel de filtro com 4% (w / v) ou 6% (w / v) de cloreto férrico e colocá-lo em redor da artéria. </li><li> Após 3 min de exposição, retirar o papel de filtro, lavar com PBS e secar a área wlimpadores de pára-om. </li><li> Coloque a sonda de fluxo Doppler em torno do navio no local da lesão e começar a gravar as mudanças no fluxo. Na carótida comum saudável de ratos adultos, o fluxo é normalmente cerca de 1 mL / min. Cuidado! contacto da sonda com cloreto férrico vai danificar a sonda de modo que qualquer contacto deve ser evitado. Os dados aqui apresentados foram obtidos com um medidor de fluxo Transonic System Inc., perivascular TS420 módulo equipado com uma sonda de fluxo Doppler Nano 0,5 PBS. NOTA: A concentração de cloreto férrico pode modificar as cinéticas de formação de trombo, resultando em diferentes tempos de oclusão. Assim, uma exposição a 6% (w / v) de cloreto férrico dá uma oclusão mais rápido do que a exposição a 4% (w / v) de cloreto férrico. </li><li> Seguindo todos os procedimentos, eutanásia todos os animais usando uma overdose de cetamina e xilazina seguido por deslocamento cervical e limpar cuidadosamente a sonda Doppler. </li></ol>

<ol><li>Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+in+vivo+models+of+thrombosis+to+the+discovery+and+development+of+novel+antithrombotic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).</li>
<li>Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+animal+models+in+the+preclinical+study+of+interventions+to+prevent+human+coronary+artery+restenosis%3A+analysis+and+recommendations.+On+behalf+of+the+Subcommittee+on+Animal%2C+Cellular+and+Molecular+Models+of+Thrombosis+and+Haemostasis+of+the+Scientific+and+Standardization+Committee+of+the+International+Society+on+Thrombosis+and+Haemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis.</a> Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).</li>
<li>Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+thrombosis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Murine thrombosis models.</a> Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).</li>
<li>Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+thrombus+formation+in+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo thrombus formation in murine models.</a> Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).</li>
<li>Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of thrombus formation.</a> N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+thrombosis+in+a+mouse+model+by+IgG%2C+IgM+and+IgA+immunoglobulins+from+patients+with+the+antiphospholipid+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome.</a> Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).</li>
<li>Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+endothelial+injury+in+the+mouse+as+a+screening+model+for+inhibitors+of+vascular+intimal+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).</li>
<li>Rosen, E. D., Raymond, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+noninvasive+vascular+injury+models+in+mice+generate+platelet-+and+coagulation-dependent+thrombi%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi.</a> Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).</li>
<li>Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+arterial+thrombosis+induced+by+ferric+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride.</a> Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).</li>
<li>Eckly, A., Hechler, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+FeCl3-induced+arterial+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).</li>
<li>Darbousset, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+neutrophils+in+thrombus+formation+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol+Biol+%28Paris%29%22%5BJournal%5D)">Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice.</a> Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).</li>
<li>Denis, C., Methia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+severe+von+Willebrand+disease%3A+defects+in+hemostasis+and+thrombosis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis).</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).</li>
<li>Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+single-chain+antibody-targeted+microbubbles+for+molecular+ultrasound+imaging+of+thrombosis%3A+validation+of+a+unique+noninvasive+method+for+rapid+and+sensitive+detection+of+thrombi+and+monitoring+of+success+or+failure+of+thrombolysis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice.</a> Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).</li>
<li>Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+ferric+chloride-induced+vena+cava+thrombosis%3A+evidence+for+effect+of+potato+carboxypeptidase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor.</a> J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).</li>
<li>Karatas, H., Erdener, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombotic+distal+middle+cerebral+artery+occlusion+produced+by+topical+FeCl%283%29+application%3A+a+novel+model+suitable+for+intravital+microscopy+and+thrombolysis+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).</li>
<li>Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+blockade+or+mutation+of+the+fibrinogen+gamma-chain+C-terminus+is+more+effective+in+inhibiting+murine+arterial+thrombus+formation+than+complete+absence+of+fibrinogen%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen.</a> Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).</li>
<li>Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoprotein+VI-dependent+and+-independent+pathways+of+thrombus+formation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo.</a> Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).</li>
<li>Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+to+characterize+the+antithrombotic+effect+of+molecules+targeting+human+von+Willebrand+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor.</a> Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).</li>
<li>Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutation+and+ADAMTS13-dependent+modulation+of+disease+severity+in+a+mouse+model+for+von+Willebrand+disease+type+2B%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B.</a> Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).</li>
<li>Lamrani, L., Lacout, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemostatic+disorders+in+a+JAK2V617F-driven+mouse+model+of+myeloproliferative+neoplasm%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm.</a> Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., Ye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+platelet+activation+and+thrombosis+in+transgenic+mice+expressing+constitutively+active+P2Y12%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12.</a> J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).</li>
<li>Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+mechanisms+of+increased+luminal+stenosis+after+arterial+injury+in+mice+deficient+for+urokinase-+or+tissue-type+plasminogen+activator%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator.</a> Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).</li>
<li>Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+effective+and+safe+thrombolysis+and+thromboprophylaxis%3A+preclinical+testing+of+a+novel+antibody-targeted+recombinant+plasminogen+activator+directed+against+activated+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets.</a> Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).</li>
<li>Decrem, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ir-CPI%2C+a+coagulation+contact+phase+inhibitor+from+the+tick+Ixodes+ricinus%2C+inhibits+thrombus+formation+without+impairing+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis.</a> J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).</li>
<li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desmolaris%2C+a+novel+factor+XIa+anticoagulant+from+the+salivary+gland+of+the+vampire+bat+%28Desmodus+rotundus%29+inhibits+inflammation+and+thrombosis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo.</a> Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).</li>
<li>Lei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anfibatide%2C+a+novel+GPIb+complex+antagonist%2C+inhibits+platelet+adhesion+and+thrombus+formation+in+vitro+and+in+vivo+in+murine+models+of+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis.</a> Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).</li>
<li>Waisberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+infection+induces+expression+of+a+mosquito+salivary+protein+%28Agaphelin%29+that+targets+neutrophil+function+and+inhibits+thrombosis+without+impairing+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis.</a> PLoS Pathog. 10 (9), e1004338(2014).</li>
<li>Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+standardization+of+the+murine+ferric+chloride-induced+carotid+arterial+thrombosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model.</a> J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).</li>
<li>Wang, X., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+murine+model+of+ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+for+thrombosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research.</a> Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).</li>
<li>Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transendothelial+migration+of+ferric+ion+in+FeCl3+injured+murine+common+carotid+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery.</a> Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).</li>
<li>Bonnard, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+mimetic+polysaccharide+microparticles+tracked+in+vivo+on+activated+endothelium+and+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm.</a> Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).</li>
<li>Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+dorsal+skinfold+chamber+as+a+model+for+the+study+of+thrombolysis+by+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy.</a> Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).</li>
<li>Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasminogen+activator+inhibitor-1+and+its+cofactor+vitronectin+stabilize+arterial+thrombi+after+vascular+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice.</a> Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).</li>
<li>Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+murine+carotid+arterial+injury%3A+A+model+of+redox+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology.</a> Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

O modelo de trombose cloreto férrico induzida é uma excelente ferramenta de pesquisa. Como se mostra neste estudo, é extremamente fácil de implementar e, quando utilizado em combinação com a microscopia intravital ou medidor de fluxo de Doppler, que fornece uma boa monitorização em tempo real de formação de trombos. Ajustando o tempo de exposição e a concentração do FeCl 3, como também oferece a possibilidade de produzir ou trombos oclusivos ou não-oclusivos. No entanto, este méto...

O estudo dos mecanismos envolvidos no desenvolvimento de trombose e a avaliação da eficácia de fármacos anti-trombóticos bem estabelecida requer modelos animais experimentais. Grandes modelos animais foram os primeiros a ser utilizado uma vez que proporcionam grandes vasos mais semelhantes aos seres humanos do que roedores 1. No entanto, de alto custo, as instalações maiores necessários e da dificuldade em manipulá-las geneticamente são os principais inconvenientes para a sua utilização e animais de grande porte são agora limitados a estudos pré-clínicos final uma vez ensaios preliminares em roedores têm dado resultados conclusivos 2. Com a disponibilidade de largura de estirpes transgénicas e knockout e seu pequeno tamanho que minimiza a quantidade de drogas antitrombóticas necessárias para os ensaios in vivo, os ratinhos são utilizados principalmente para a investigação trombose. Portanto, vários modelos de doenças trombóticas tem sido desenvolvido em murganhos 3. Muitos modelos de trombose estabelecidos perturbar os intimuma camada da parede do vaso, seguido pela exposição da matriz extracelular sub-endotelial para o fluxo sanguíneo induzindo a formação de coágulos sanguíneos 4. Os trombos podem resultar da exposição de colagénio, que provoca activação de plaquetas e / ou a partir da exposição do factor tecidual que activa a cascata de coagulação 5. Várias técnicas são então utilizados para realizar a lesão inicial navio. Pierangeli et ai. Desenvolveram um modelo de ruptura mecânica com uma ferramenta de microcirurgia na veia femoral 6. Kikushi et ai. Descreveu um modelo que consiste na administração de um composto reactivo foto (Rosa de Bengala) que se acumula na bicamada lipídica de células endoteliais, seguido por excitação específica da parede do vaso de interesse com luz verde (540 nm) 7. A lesão, também pode ser induzida por uma alta intensidade de iluminação curto pulso de laser 8. Outra técnica, em primeiro lugar estabelecido na artéria carótida de ratosconsiste na aplicação tópica de cloreto férrico (FeCl3) 9. Neste caso, os resultados denudação vaso de radicais livres gerados por FeCl 3, que faz com que a peroxidação lipídica e destruição de células endoteliais 10. A lesão induz a expressão de várias moléculas de adesão que desencadeiam a adesão e agregação de plaquetas, bem como o recrutamento de leucócitos. Demonstrou-se que os leucócitos, principalmente os neutrófilos, desempenham um papel crucial na activação da cascata de coagulação do sangue levando a trombose 11. Este método está bem adaptado para reproduzir a cascata de coagulação; os investigadores devem ter em mente que, neste modelo de ratinho, a trombose é tipicamente induzido em vasos saudáveis ​​enquanto a trombose em seres humanos está ocorrendo principalmente na ex doente. vasos ateroscleróticos. Como este modelo é muito simples de implementar e é também eficaz em camundongos, é agora o modo de trombose usado na maior partel para pequenos animais em estudos in vivo. Além disso, esta técnica oferece a possibilidade de induzir a formação de trombos numa variedade de vasos. Navios-alvo pode ser artérias ou veias de grande diâmetro (carótida, femoral, veia cava) ou de pequeno diâmetro (mesentério, cremaster) 12-14. Mais recentemente, foi também utilizado na artéria cerebral média proximal para desenvolver um modelo de acidente vascular cerebral 15. A formação da trombose pode ser directamente observada por meio de microscopia intravital após marcação fluorescente de plaquetas e leucócitos ou monitorizada medindo a diminuição do fluxo sanguíneo com uma sonda de temperatura ou uma sonda Doppler 12,16,17. Vários parâmetros, tais como tempo de oclusão, o tempo de formação de trombos ou tamanho do trombo pode então ser investigados. As diferenças fisiológicas entre os vasos investigado resultado em variações significativas na trombos obtido. Portanto, os pesquisadores geralmente selecionar o vaso-alvo de acordo com os parâmetros que eles querem measure e / ou a configuração que deseja investigar a doença. Normalmente, o modelo na artéria carótida é mais relevante para a pesquisa sobre aterotrombose relacionada ao infarto do miocárdio ou acidente vascular cerebral enquanto que estudos sobre a veia cava são mais relevantes para a pesquisa sobre trombose venosa profunda. A acessibilidade dos diferentes vasos também determina o método utilizado para medir o crescimento do trombo. Por exemplo, os vasos mesentéricos são de fácil acesso tornando este modelo adequado para observação microscópica intravital e o estudo da dinâmica de formação de trombos. A artéria carótida é menos acessível, mas maior, permitindo medições de fluxo de sangue e fornecer um excelente modelo para estudar a trombose oclusiva. O modelo de trombose induzida cloreto férrico tem prestado um enorme progresso na compreensão desta patologia. Ele tem sido usado em muitos estudos que incidem sobre o papel do factor de von Willebrand na formação da trombose 18,19. Combinado com modi genéticatécnicas ficação, permitiu a identificação de muitos genes específicos envolvidos em doenças trombóticas. Lamrani et ai. por exemplo, demonstraram que um knock-in do gene JAK2 V617F está associada com uma formação acelerada de coágulo instável 20. Zhang et ai. Investigaram a implicação fisiológica do receptor P2Y12 de plaquetas e demonstraram que os ratinhos transgénicos que sobre-expressam este receptor especificamente em plaquetas somente, apresentou uma formação de trombo mais rápida e estável na artéria mesentérica feridos com FeCl 3 21. O papel crucial de activador do plasminogénio tipo tecido (tPA) e uroquinase-tipo do activador de plasminogénio (uPA) no processo de degradação de fibrina, também tem sido investigada neste método 22. Além disso, este modelo também fornece um modo simples e preciso de testar as capacidades fibrinolíticas de muitas drogas novas in vivo. Por exemplo, Wang et al. Usaram este modelo de the validação pré-clínica de um romance ativador do plasminogênio recombinante dirigido contra plaquetas ativadas 23. Este método também permitiu a validação de proteínas terapêuticas isoladas a partir da saliva de morcegos vampiros, carrapatos e mosquitos, ou a partir do veneno de serpentes de identificação específico do alvo 24-27. Estes exemplos demonstram a versatilidade do modelo de cloreto férrico. Neste artigo, vamos nos concentrar em dois métodos e estudar cloreto férrico trombose induzida em dois tipo de navio diferente; vaso mesentérico e artéria carótida.

<table><tbody><tr><td>Papel para cromatografia Whatman</td><td>GE Healthcare</td><td>3030917</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de ferro (III) 40% (w/v)</td><td>VWR</td><td>24212.298</td><td></td></tr><tr><td>Rodamina 6G</td><td>Sigma</td><td>R4127</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio invertido&nbsp;</td><td>Câmera</td> digital em preto e branco Olympus <td>IX81</td><td></td></tr><tr><td></td>Medidor de fluxo Doppler <td>Olympus</td><td>XM10</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Transonic</td><td>TS420</td><td></td></tr><tr><td>Sonda de fluxo Nano-doppler</td><td>Transônico</td><td>0.5 PBS</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Hospira&nbsp;</td><td>0409-2051-05</td><td></td></tr><tr><td>xilazina (Rampun)</td> <td>Bayer</td><td>75313</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Sarstedt</td><td>82.1472</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de insulina (29 G)</td><td>BD Ultra-Fine</td><td>326103</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores com ponta de algodão</td><td>BSN medical</td><td>211827A</td><td></td></tr><tr><td>Suturas Dynek dysilk</td><td>Dynek Pty Ltd</td><td>CS30100</td><td></td></tr><tr><td>tampão fosfato salino Dulbecco (PBS)</td><td>Gibco life technologies</td><td>21600-069</td><td></td></tr><tr><td>Almofada térmica</td><td>Kirchner</td><td>T60</td><td></td></tr></tbody></table>

férrico thrombosis modelo rato na artéria carótida e mesentery vessel induzida por chloride

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

A trombose grave e suas consequências isquêmicas, como infarto do miocárdio, embolia pulmonar e acidente vascular cerebral, são os principais problemas de saúde em todo o mundo. A lesão por cloreto férrico é agora uma técnica bem estabelecida para induzir com rapidez e precisão a formação de trombos em veias ou artérias expostas de pequeno e grande diâmetro. Esse modelo tem desempenhado um papel fundamental no estudo da fisiopatologia da trombose, na descoberta e validação de novos fármacos antitrombóticos e na compreensão do mecanismo de ação desses novos agentes. Aqui, é apresentada a implementação desta técnica em um vaso mesentérico e artéria carótida em camundongos. O método descreve como marcar leucócitos e plaquetas circulantes com um corante fluorescente e observar, por microscopia intravital no mesentério exposto, seu acúmulo na parede do vaso lesado, o que leva à formação de um trombo. Na artéria carótida, a oclusão causada pela formação do coágulo é medida pelo monitoramento do fluxo sanguíneo com uma sonda Doppler.

A observação de microscopia intravital fluorescente do mesentério irá revelar a acumulação de Rodamina 6G marcado plaquetas e leucócitos ao longo da parede do vaso lesionado por FeCl 3. A formação progressiva de um trombo é monitorizado parcial num recipiente de 200 um mesentério (Figura 1). Um trombo aparece lentamente e é claramente identificável após o primeiro minuto de exposição à FeCl 3 (Figura 1, t = 60 segundos). 40 segundos após a remoção do papel de filtr...

O modelo de trombose induzida por FeCl3 em camundongos é descrito aqui. Um método para monitorar o crescimento do trombo por observação de microscopia intravital em um vaso mesentérico e por medição do fluxo sanguíneo na artéria carótida é apresentado.

Férrico Thrombosis Modelo rato na artéria carótida e Mesentery Vessel induzida por Chloride

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

O objetivo geral deste procedimento é monitorar a formação de uma trombose induzida em um vaso exposto de camundongo. Isso é realizado primeiramente expondo o vaso de interesse. Em seguida, um pequeno pedaço de papel-filtro embebido em cloreto férrico é colocado sobre o vaso para induzir o trombo no vaso mesentérico.A agregação das células formadoras de trombo é monitorada por microscopia em frasco na artéria carótida. As alterações no fluxo sanguíneo induzidas pelo trombo são medidas com um medidor de fluxo Doppler. O uso de cloreto para induzir uma trombose na artéria CED de peixes foi inicialmente estabelecido em 1990 pelo Professor Coz e colegas.Desde então, foi adaptado para camundongos e tem sido usado para estudar muitos vasos diferentes. Este método é agora o modelo de trombose mais comumente utilizado em nossa área de pesquisa, e tem ajudado a responder questões fundamentais, como a parede do fator vulnerável e a aplicação do receptor plaquetário P dois Y 12 na trombodisformação. Antes de iniciar o procedimento, corte tiras de papel filtro de um por dois milímetros e um pequeno pedaço branco de plástico de três por cinco milímetros proveniente de uma embalagem de seringa.E

ferric-chloride-induced-thrombosis-mouse-model-on-carotid-artery

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Nós relatamos um procedimento refinada do cloreto férrico (FeCl3) modelos de trombose induzidas na carótida e mesentérica artéria, bem como veia, caracterizado de forma eficiente através de microscopia intravital para monitorar tempo para oclusiva formação de trombos.

Férricos induzida pelo cloreto modelos murinos Trombose

Aqui, apresentamos as modificações necessárias para um bem caracterizado e comumente usado pequenos induzida por cloreto férrico (FeCl3) artéria carótida lesão modelo animal para uso em um modelo de grandes animais de lesão vascular. O modelo resultante pode ser utilizado para avaliação experimental pré-clínicos profilática e trombolítica intervenções farmacológicas e mecânica.

Trombose da artéria carótida canino induzida por cloreto férrico: Um modelo Animal grande de lesão Vascular

O presente protocolo descreve como usar uma lesão mediada por FeCl3 para induzir trombose arterial e como coletar e preparar amostras de lesão arterial em vários estágios da trombose para análise por microscopia eletrônica.

Trombose Arterial Induzida por Cloreto Férrico e Coleta de Amostras para Análise de Microscopia Eletrônica 3D

Esta descreve uma cirurgia de ligadura parcial da carótida, o que causa as condições de fluxo perturbado e desenvolvimento da aterosclerose subsequente (em duas semanas) com intraplaca neo-vascularização (em quatro semanas) em ratos artéria carótida comum. Descrevemos também um novo método de isolamento de RNA a íntima carótida, proporcionando RNA de alta pureza endoteliais.

Um modelo de Disturbed Aterosclerose Flow-induzido em rato artéria carótida pela ligadura parcial e um método simples de isolamento de RNA a partir do endotélio Carótidas

O rato modelo estase completa de veia cava inferior trombose produz quantidades mensuráveis ​​de tecido veia parede e trombo. Ele tem se mostrado útil para avaliar as interações entre a parede da veia eo trombo oclusivo e na avaliação da progressão de aguda a inflamação crônica.

Modelo do mouse completa de Stasis Inferior Trombose da veia cava

Demonstramos no vídeo um método para produzir uma oclusão da artéria cerebral média em ratos adultos utilizando um monofilamento intraluminal. Também mostramos como avaliar a extensão do infarto cerebral por 2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto de coloração (TTC).

Modelo do rato de Oclusão da Artéria Cerebral Média

Um modelo de implante de stent na artéria carótida do rato é descrito. Comparado com outros métodos similares, este procedimento é muito rápido, simples e acessível, oferecendo a possibilidade de estudar em uma forma conveniente a reação da parede vascular para diferentes stents farmacológicos e os mecanismos moleculares de reestenose.

Um modelo murino de implante de stent na artéria carótida para o Estudo da reestenose

Descreve-se um método para a criação de um modelo de confiança de hipertensão venosa cerebral no rato adulto. Este modelo tem sido amplamente descrita e testada em ratos. Este novo homólogo nos ratinhos abre a possibilidade de utilização de animais geneticamente modificados e, assim, alarga a aplicação do modelo.

Adulto Rato venoso Hipertensão Modelo: artéria carótida comum para External Jugular Vein anastomose.

Este método foi desenvolvido com o objectivo de proporcionar uma solução de fármaco estável através da artéria carótida, para avaliar a farmacocinética de drogas novas em modelos de rato.

Infusões artéria carótida para farmacocinéticas e farmacodinâmicas Análise de taxanos em Ratos

Este protocolo utiliza um cateter balão para causar uma lesão intraluminal na artéria carótida de rato e, doravante, provocar hiperplasia neointimal. Este é um modelo bem estabelecido para o estudo dos mecanismos de remodelação vascular em resposta a lesão. É também amplamente utilizada para determinar a validade de potenciais abordagens terapêuticas.

Lesão Balloon Vascular e Administração Intraluminal em Rat Carótida

Aprenda a induzir e monitorar trombose em camundongos usando FeCl₃ em artéria carótida e vasos mesentéricos. Este método de microscopia intravital permite avaliar a formação do trombo em tempo real e testar eficácia de fármacos antitrombóticos.

Férrico Thrombosis Modelo rato na artéria carótida e Mesentery Vessel induzida por Chloride

Explorar mais vídeos