Um Método para infligir Cabeça Fechada Lesão cerebral traumático em Drosophila

Aqui nós descrevemos um método para infligir a cabeça fechado traumatismo crânio-encefálico (TCE) em Drosophila. Este método oferece um portal para investigar os mecanismos celulares e moleculares que estão na base patologias TCE, utilizando a vasta gama de ferramentas experimentais e técnicas disponíveis para as moscas.

O objetivo geral deste procedimento é infligir lesão cerebral traumática da cabeça fechada. Em moscas. Isso é feito colocando primeiro as moscas em um frasco a uma polegada do fundo.

O segundo passo é conectar o frasco ao dispositivo HIIT. Em seguida, a mola é desviada para um ângulo específico e o frasco é liberado e deixado em repouso completo. Em última análise, uma variedade de ensaios morfológicos e moleculares comportamentais pode ser usada para caracterizar as consequências da lesão cerebral traumática resultante.

A principal vantagem deste método sobre os métodos existentes, como o método de redução de peso de roedores, é que muitos animais podem ser estudados em um curto período de tempo. Esse método pode ajudar a responder a perguntas-chave em um campo de lesão cerebral traumática, como por que as consequências da lesão cerebral traumática variam em diferentes indivíduos. Para começar, reúna as matérias-primas listadas na tabela um do protocolo de texto que o acompanha.

Dobre os grampos usando um alicate para que eles se encaixem firmemente sobre a mola. Em seguida, centralize os grampos em relação à largura da placa e coloque-os uns contra os outros com o grampo externo nivelado com a borda da placa. Ajuste a mola de forma que fique paralela ao comprimento da placa e, em seguida, prenda os grampos sobre a mola e na placa usando quatro parafusos.

Em seguida, enrole uma tira de fita adesiva de Velcro. Uma vez em torno da extremidade livre da mola, a borda externa do Velcro deve estar nivelada com a extremidade da mola. Coloque a tampa do balde de gelo de cabeça para baixo, centralizada e apertada contra a tábua de madeira.

Oriente a região elevada da tampa do balde de gelo de forma que a borda longa fique paralela à largura da placa. Deslize todo o dispositivo contra um objeto fixo, como uma parede, de modo que a tampa do balde de gelo fique presa entre a placa e o objeto e não se mova. Em seguida, cole o transferidor de papel no fundo de uma bandeja de papelão, voe e coloque-o na borda contra o comprimento da placa para que a marca de 90 graus fique alinhada com a mola.

Quando for puxado de volta para uma posição perfeitamente vertical, coloque entre uma e 60 moscas anestesiadas com dióxido de carbono em um frasco vazio e tampe o frasco com uma bola de algodão bem ajustada. Em seguida, desenhe uma linha no frasco a uma polegada de sua base, derrube as moscas das laterais do frasco e empurre a bola de algodão até que ela corresponda a uma linha recém-desenhada. Aguarde cinco minutos para que as moscas recuperem a mobilidade do dióxido de carbono.

Em seguida, insira a extremidade da mola no frasco para injetáveis até que a borda interna do Velcro esteja nivelada com a parte superior do frasco. Isso prende o frasco à mola, criando um encaixe de compressão apertado com a mola deitada. Certifique-se de que uma polegada do frasco se sobreponha à região elevada da tampa do balde de gelo neste momento.

Coloque proteção auditiva porque o impacto do frasco contra a tampa do balde de gelo produz um ruído alto. Em seguida, segure o frasco na região do Velcro usando o polegar e o indicador da mão esquerda com a mão direita, segure a placa firmemente na bancada. Em seguida, puxe a mola perfeitamente reta de volta ao ângulo desejado e, em seguida, solte a mola.

Aguarde até que a mola pare completamente e, em seguida, remova o frasco da mola. Coloque o frasco sobre a bancada e deixe as moscas recuperarem durante pelo menos cinco minutos. Durante esse período, as moscas recuperarão lentamente seu movimento normal.

Em seguida, transfira as moscas para um frasco com comida para moscas para análise posterior ou sujeite as moscas a outro ataque, os frascos podem ser reutilizados várias vezes. O objetivo do experimento foi determinar o efeito da gravidade da lesão sobre o índice de mortalidade em 24 horas. A gravidade do trauma foi determinada pelo ângulo de deflexão da mola de zero a 90 graus antes da liberação.

O experimento foi realizado em moscas de duas idades diferentes, moscas de zero a sete dias de idade e moscas de 20 a 27 dias de idade. Os resultados mostram que lesões mais graves causam maior índice de mortalidade. As moscas mais velhas tiveram um índice de mortalidade aumentado em comparação com as moscas mais jovens quando a deflexão da mola foi de 50 graus ou mais.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como infligir lesões cerebrais traumáticas usando moscas.