Projetado retalho do músculo vascularizada

O objetivo geral deste procedimento é criar um retalho de tecido bem vascularizado a ser explorado para reconstrução de defeitos da parede abdominal de espessura total. Isso é feito preparando primeiro um andaime de ácido polilático polilático-co-glicólico biodegradável. Em seguida, as células endoteliais, células musculares e fibroblastos são semeadas, e o enxerto é cultivado in vitro para permitir que as células se auto-montem.

Em seguida, o tecido modificado é implantado ao redor da artéria femoral e das veias do camundongo, onde sofre anastinose com os vasos hospedeiros e se torna altamente vascularizado. Finalmente, o tecido é transferido como retalho pediculado para um defeito da parede abdominal de espessura total. Em última análise, a vascularização do enxerto é comprovada por ultrassom, injeção de T dextrana e imunomarcação para CD31, e a rigidez do retalho é examinada usando um instrumento de teste biodinâmico.

As principais vantagens disso em relação aos métodos existentes são a menor mobilidade do local doador e a alta viabilidade do retalho projetado que pode ser usado para a construção de tecidos moles de espessura total. Este método pode ajudar em pacientes com defeitos da parede abdominal de espessura total. A demonstração do procedimento será feita pela Dra. Dana Egozi, cirurgiã plástica, trabalhando em colaboração com meu laboratório, e Anina Freimann a ajudará.

Depois de preparar os andaimes e incorporar as células de acordo com o protocolo de texto, autoclave as seguintes ferramentas cirúrgicas: uma pequena tesoura reta fina, uma tesoura de mola, uma pinça reta de ponta fina, uma pinça serrilhada, pinça Hudson, um porta-agulha e um bisturi de lâmina número 15. Prepare uma mistura de 425 microlitros de cetamina e 75 microlitros de silodsina em um tubo de microcentrífuga e transfira para uma seringa. Em seguida, dilua 0,3 miligramas por mililitro de buprenorfina um a 20 em solução salina estéril.

Depois de anestesiar o mouse de acordo com o protocolo de texto, coloque-o em um palco, aqueça-o a 37 graus Celsius, para manter a temperatura corporal normal e use um curativo adesivo para prendê-lo ao palco. Com pontas de algodão, use iodo seguido de etanol a 70% para limpar o local da incisão para estabelecer um campo de trabalho asséptico. Após verificar o nível de sedação, use um bisturi para fazer uma incisão através da pele do joelho ao ligamento inguinal paralelo aos vasos femorais até que a artéria femoral e os vasos venosos estejam expostos.

Use clipes ou agulhas para segurar a pele. Em seguida, usando tesoura de mola e fórceps, começando na VA femoral abaixo da AV profunda e acima da bifurcação até a VE tibial e fibular, isole cuidadosamente a artéria femoral e os vasos venosos do tecido circundante. Deixe a profundidade intocada para preservar o fluxo sanguíneo para a perna e evitar dischemia subsequente.

Em seguida, dobre o enxerto preparado anteriormente ao redor da AV femoral exposta abaixo da AV profunda e acima da bifurcação para a AV tibial e proneal e use 8-0 suturas de seda para unir suas extremidades. Para garantir a vascularização do implante apenas pelos capilares que brotam apenas dos vasos AV femorais, coloque um pedaço de látex esterilizado sob o enxerto e envolva-o ao redor do enxerto e da sutura, usando seda 6-0. Em seguida, use suturas de seda 4-0 para fechar a pele sobrejacente.

Injete bupreorfina por via subcutânea duas vezes por dia durante dois a três dias. Monitore o camundongo de perto até a recuperação da anestesia e todos os dias até que o enxerto seja transferido como um retalho. Uma a duas semanas após a implantação, após anestesiar o camundongo, coloque o animal no estágio aquecido e prenda-o.

Depois de limpar o local das incisões, conforme demonstrado anteriormente neste vídeo, use tesouras e pinças para abrir cuidadosamente as suturas na pele e, com um bisturi, faça uma incisão na pele perpendicular ao ligamento inguinal, continuando pela pele ventral. Usando um bisturi, faça uma incisão na parede abdominal ventral. Remova cuidadosamente a peça de látex e exponha o retalho vascularizado.

Em seguida, com tesoura e fórceps, disseque o retalho de tecido do tecido circundante. Com 8-0 sutura de seda, ligar a extremidade distal do AV femoral para evitar sangramento do AV. Em seguida, cauterizar o AV no joelho, distal ao tecido implantado dobrado e o 8-0 Suturas. Transfira suavemente o AV femoral envolto pelo enxerto em direção à parede abdominal ventral, evitando danos à artéria, para determinar a que distância o defeito de espessura total deve ser feito.

Com uma tesoura de mola, faça uma incisão no músculo reto abdominal e remova um segmento de cerca de um centímetro por 0,8 centímetro do músculo com a pele sobreposta. Transferir o AV femoral envolto pelo enxerto vascularizado como retalho axial para o defeito de espessura total na parede abdominal ventral, utilizando 8-0 suturas de seda para prevenir hérnias. Suturar o retalho no tecido muscular circundante.

Em seguida, com sedas 4-0, suture a pele da perna. Deixe a pele ventral exposta para imitar o efeito de um defeito completo da parede abdominal. Com gaze iodada e um curativo estéril, cubra a ferida na pele para evitar a contaminação da área exposta.

Administre buprenorfina conforme descrito anteriormente neste vídeo. Monitore o animal de perto até a recuperação da anestesia e todos os dias até a recuperação do retalho para estudos descritos no protocolo de texto. Com uma e duas semanas após o implante, a observação macroscópica da área do enxerto revelou enxertos de tecido viáveis e altamente vascularizados, conforme determinado pela imunomarcação positiva de CD31.

Os enxertos de tecido também foram altamente perfundidos, como visto pela injeção de veia caudal de dextrana FITC e medições de ultrassom. Este gráfico demonstra que muitos vasos já foram observados uma semana após o implante, um número que aumentou significativamente após uma semana adicional nas proximidades dos vasos AV. Como visto aqui, a permeabilidade e integridade pós-femoral após o implante do enxerto foram confirmadas por ultrassonografia no modo Doppler colorido.

O azul e o vermelho representam o fluxo sanguíneo no enxerto. Além disso, o exame gráfico ultrassônico revelou perfusão dentro da área do enxerto, que foi ligeiramente maior após o implante em comparação com uma semana. O exame macroscópico dos retalhos uma semana após a transferência revelou que eles estavam firmemente ligados ao ambiente.

Ao comparar os retalhos de células pré-vascularizadas embebidas, os enxertos acelulares não vascularizados de controle apresentaram propriedades mecânicas superiores, incluindo rigidez e resistência, o que também resultou em menor deiscência e hérnia. Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em cerca de 30 minutos se for executada corretamente. Após seu desenvolvimento, essa técnica abre caminho para os cirurgiões plásticos tratarem pacientes que sofrem de um defeito da parede abdominal de espessura total, bem como outros defeitos complicados e significativos dos tecidos moles.