Name: Modelos cirúrgicos de refluxo gastroesofágico com Ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-25T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: Aprenda a criar modelos cirúrgicos de refluxo gastroesofágico em ratos para estudar doenças esofágicas. Este método demonstra técnicas de anastomose e análise histológica para avaliar danos epiteliais.

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Somos apoiados por subsídios de pesquisa da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (NO. 81400590), Institutos Nacionais de Saúde (U54 CA156735) e Takeda Pharmaceutical Company Ltd. (MA-NC-D-156).

Todas as experiências com animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso do animal Institucional. 1. Preparação do rato <ol><li> Use camundongos mais ~ 20 g no peso corporal ou superiores a 6 semanas de idade para a cirurgia. </li><li> Antes da cirurgia, dar camundongos um laboratório de comida e água ad libitum e manter em um ciclo claro-escuro de 00:12 h. </li><li> Raspar a área cirúrgica com uma máquina de cortar cabelo. Anestesiar ratos por injecção intraperitoneal de 80 mg / kg de cetamina e 12 mg / kg de xilazina. Esta dose coloca ratos no sono em poucos minutos e fornece anestesia suficiente para os seguintes procedimentos cirúrgicos. </li><li> Confirme anesthetization adequada com base na ausência do reflexo corneal e retração membro quando a pata é comprimido. Aplicar lubrificante pomada oftálmica nos olhos para evitar o ressecamento. </li><li> Esterilizar a pele com solução de betadine. </li></ol> 2. Modelo refluxo gástrico (Figura 1B) <ol><li> Realizar uma superiorincisão na linha média de ~ 2 cm a partir da xifóide apontando para o ânus. </li><li> Abra-se a cavidade abdominal através da linha média. Remova o xifóide para aumentar a exposição com um par de tesouras. </li><li> Separa-se e cortar os tecidos conjuntivos entre o fígado e o estômago. Ligadura e cortar o feixe vascular entre o baço e do fundo, a fim de completamente livre até o fundo. </li><li> Ligue o fundo ligeiramente para a esquerda e expor o lado esquerdo da junção gastro-esofágico no campo. Adicione uma incisão longitudinal de 5 mm no músculo distai ao longo do esófago utilizando um par de tesouras para expor o epitélio. </li><li> Corte aberto do epitélio ao longo da mesma direcção (incisão 1, Figura 1B). Adicione três incisões na pança de incisão (2, 3 e 4, Figura 1B) para eliminar a maioria da pança com uma tesoura afiada operacionais. Se o estômago não está vazio, remova cuidadosamente o conteúdo gástrico. </li><li> Coloque um Sutu prolene 8-0re (com um ponto de afunilamento agulha) através de um ponto (no esôfago) e ponto A &#39;(na pança) com uma precisão de mucosa da mucosa oposição. De igual modo lugar suturas através do ponto b e Ponto b &#39;, e outros pares de pontos, respectivamente. Uniformemente espaço estas suturas 3-4 mm uns dos outros. </li><li> Lava-se a cavidade abdominal com solução salina normal para limpar o sangue e o conteúdo gástrico. Feche a parede abdominal com fio de seda e pele com grampos metálicos. </li></ol> 3. Modelo de Refluxo mistos (Figura 1C) <ol><li> Siga os passos 2.1 a 2.4 para expor a junção gastroesofágico. </li><li> Suavemente separar o lado dorsal do esófago a partir dos vasos sanguíneos por trás do esófago. Passe uma ponta de algodão pequena entre os vasos sanguíneos e esôfago. Nota: O algodão pode ser parcialmente removida a partir da ponta para reduzir o seu tamanho. Esta dica de algodão serve a dois propósitos, levantando o esôfago e proteger os vasos sanguíneos. </li><li> Faça inc dois cinco milímetros longitudinalisions cada na junção gastro-esofágico e a extremidade proximal do duodeno adjacente ao piloro com uma tesoura afiada operacionais. Para a incisão no duodeno, evitar vasos sanguíneos e coloque na fronteira anti-mesentérica. </li><li> Anastomosar as incisões com mucosa com precisão de mucosas oposição interrompidas 8-0 suturas de Prolene. Normalmente coloque 3-4 suturas na face dorsal e 2-3 suturas na parte da frente. </li><li> Retire a ponta de algodão. Lava-se a cavidade abdominal com solução salina normal e fechar a parede abdominal e a pele. </li></ol> 4. Modelo Duodenal refluxo (Figura 1D) <ol><li> Siga o passo 3.1 a 3.4 para gerar misto de refluxo. </li><li> Com cuidado, levante o estômago para expor a sua parte de trás. Um lobo do fígado podem ser abrangidos pelo tecido conjuntivo entre o fígado e parte de trás do estômago. Corte cuidadosamente os tecidos conjuntivos, corretamente proteger o fígado, e expor os vasos sanguíneos no lado dorsal do esôfago. </li><li> Ligadura ecortar os vasos sanguíneos. Ligadura e cortado o esófago na junção gastroesofágico. </li><li> Ligar o duodeno no piloro. Ligadura e cortar o mesentério. Remover todo o estômago. </li><li> Lava-se a cavidade abdominal com solução salina normal. Fechar a parede abdominal e a pele. </li></ol> 5. O tratamento pós-cirúrgico <ol><li> Após a cirurgia manter a temperatura corporal com uma almofada de aquecimento. Só depois de recuperar decúbito esternal, coloque os ratos de volta com outros animais. </li><li> Dar antibióticos e analgésicos para prevenir a infecção e aliviar a dor. Injectar Baytril (10 mg / kg, ip, qd, durante 3 dias) para prevenir a infecção, e cloridrato de buprenorfina (0,05 mg / kg, sc, bid. Dois dias) como analgésico. O jejum não é necessário após a cirurgia. A dieta líquida ou mole pode ser dada. </li><li> Avaliar o estado de saúde geral sobre basis.If diários os ratos mostram os seguintes sinais (dramática perda de peso&gt; 15%, a falta de appetite, vocalização, descarregar a partir da boca, nariz ou olhos, gesto curvado, inatividade, atividade aliciamento anormal), sacrificar os ratos. </li></ol>

<ol><li>Kandulski, A., Malfertheiner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastroesophageal+reflux+disease--from+reflux+episodes+to+mucosal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Gastroesophageal reflux disease--from reflux episodes to mucosal inflammation.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 9 (1), 15-22 (2012).</li>
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<li>Fang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastroesophageal+reflux+activates+the+NF-kappaB+pathway+and+impairs+esophageal+barrier+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gastroesophageal reflux activates the NF-kappaB pathway and impairs esophageal barrier function in mice.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305 (1), G58-G65 (2013).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nrf2+deficiency+impairs+the+barrier+function+of+mouse+oesophageal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Nrf2 deficiency impairs the barrier function of mouse oesophageal epithelium.</a> Gut. 63 (5), 711-719 (2014).</li>
</ol>

Um dos autores (XC) recebeu financiamento fornecido pela Takeda Pharmaceutical Company Ltd, que apoia pesquisas básicas associadas à doença do refluxo gastroesofágico. Nenhum dos reagentes ou instrumentos utilizados neste artigo é produzido por esta empresa.

Vários modelos cirúrgicos foram criados para imitar gástrica, duodenal e misto de refluxo em roedores. Estes três procedimentos aqui descritos são adequados para experimentos de longo prazo com taxas razoáveis ​​de sobrevivência pós-operatória. Um pesquisador com experiência cirúrgica deve ser capaz de compreender a técnica, após um curto período de prática. A hemorragia pode resultar de injecção intraperitoneal de anestésicos antes da cirurgia, laceração do fígado durante a separação dos te...

A doença do refluxo gastroesofágico (DRGE) é uma doença crônica causada pela exposição prolongada do esôfago distal a conteúdo gástrico ou gastroduodenal1. A exposição prolongada a esses refluxos nocivos prejudica as defesas intrínsecas dentro do epitélio esofágico e, portanto, resulta em esofagite2. O esôfago de Barrett surge no contexto do refluxo crônico e é uma lesão pré-maligna com risco aumentado de adenocarcinoma esofágico3,4. Apesar da importância clínica, os mecanismos da DRGE, do esôfago de Barrett e do adenocarcinoma não foram bem compreendidos.
Modelos animais são essenciais para a pesquisa sobre etiologia, patologia, mecanismos moleculares, prevenção e tratamento de doenças humanas. Até o momento, vários modelos animais de DRGE, esôfago de Barrett e adenocarcinoma foram desenvolvidos usando animais modelo5,6. O esôfago do camundongo é revestido com epitélio escamoso estratificado que é histologicamente semelhante ao do esôfago humano. Embora o esôfago do camundongo seja diferente do esôfago humano em termos de queratinização e ausência de glândulas submucosas, o camundongo ainda é um modelo animal atraente devido ao seu custo relativamente baixo de manutenção e seu potencial de modificações genéticas sofisticadas. Duas abordagens são comumente usadas para modelar DRGE, esôfago de Barrett e adenocarcinoma em camundongos: cirurgia de refluxo e modificação genética. A cirurgia de refluxo é a melhor maneira de induzir refluxo e as modificações genéticas imitam alterações moleculares5,7. A cirurgia de refluxo pode ser combinada com modificações genéticas para entender melhor os mecanismos da doença8.
Muitos procedimentos cirúrgicos foram relatados por nós e outros6,9: (1) refluxo gástrico: ligadura pilórica, constrição pilórica com ligadura do estômago anterior, cardioplastia Wendel e anastomose esofagogástrica; (2) refluxo misto: anastomose esofagogastroduodenal, esofagoduodenostomia (ou esofageojejunostomia); (3) refluxo duodenal: anastomose esofagogastroduodenal mais gastrectomia; (4) refluxo de componentes químicos: refluxo biliar, refluxo pancreático, perfusão esofágica; e (5) transplante esofágico5. Recentemente, um modelo microcirúrgico em camundongos foi relatado para produzir refluxo jejunal via esofageojejunostomia com ímãs10. Esses modelos cirúrgicos têm vantagens sobre modelos de cultura celular in vitro ou modelos de cultura organóide. In vitro, as células esofágicas não toleram um meio com alta acidez ou altas concentrações de ácidos biliares. Ácidos biliares não conjugados, comumente usados para produzir mudanças nas células epiteliais esofágicas in vitro não estão geralmente presentes no refluxo duodenal in vivo. Assim, as conclusões tiradas de tais estudos in vitro devem ser tomadas com cautela.
A cirurgia no esôfago do camundongo continua sendo um desafio técnico devido ao seu tamanho pequeno. Uma baixa taxa de sobrevivência pós-operatória não permite experimentos que requerem certo tamanho de amostra para chegar a conclusões estatisticamente sólidas. No passado, desenvolvemos e caracterizamos com sucesso modelos cirúrgicos de refluxo gástrico, refluxo misto, refluxo duodenal com camundongos em experimentos de longo prazo9,11,12. Também fornecemos consultoria a vários outros grupos em sua cirurgia em camundongos. Aqui, descrevemos três procedimentos cirúrgicos em camundongos para ajudar a comunidade a estabelecer esses modelos em seus laboratórios.

<table><tbody><tr><td>Dumont #1 Forceps Dumostar Tip&nbsp;</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro Clip Applying Forceps 5.5"</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bonn Scissors 3.5" Straight 15 mm Sharp/Sharp Tungsten Carbide Blades</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Operating Scissors 5.5" Straight Sharp/Sharp SureCut</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4-0 Silk Black Braid 100 Yard Spool</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgeon's Needle 1/2 Circle Cutting Edge Size 12 (25 mm Chord Length) Pack 12</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Halsey Needle Holder 5" Smooth</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro Needle Holder 5.125" Curved Lock.6 mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Reflex 9 mm Wound Clip Applier</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Reflex 9 mm Wound Clips Box Of 100</td><td>Roboz Surgical Instrument Co. (Gaithersburg, MD)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PRONOVA Poly (hexafluoropropylene-VDF) Suture 8-0</td><td>Ethicon US, LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ringer's solution</td><td>Henry Schein, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamine</td><td>Henry Schein, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>xylazine</td><td>Henry Schein, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

modelos cirúrgicos de refluxo gastroesofágico com ratos

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Vários procedimentos cirúrgicos têm sido relatados como indutores de refluxo gastroesofágico em animais. Aqui, relatamos três modelos cirúrgicos com camundongos visando induzir refluxo de conteúdo gástrico, conteúdo duodenal ou conteúdos mistos. Procedimentos cirúrgicos e princípios gerais foram descritos em detalhes. Um pesquisador com experiência cirúrgica deve ser capaz de dominar a técnica após um curto período de prática. Após a cirurgia, a maioria dos camundongos pode sobreviver e desenvolver esofagite por refluxo semelhante à dos humanos. No entanto, deve-se notar que as diferenças histológicas entre o esôfago de camundongo e humano são as limitações inerentes desses modelos cirúrgicos. Se usados para pesquisa sobre esôfago de Barrett e adenocarcinoma, esses procedimentos podem precisar ser combinados com modificações genéticas.

A maioria dos ratinhos (&gt; 95%) pode sobreviver à cirurgia. Durante o período perioperatório, as principais causas de morte incluem overdose de anestésicos, sangramento e razões desconhecidas. Quatro semanas após a cirurgia,&gt; 90% de ratinhos com refluxo gástrico ou misto de refluxo e&gt; 80% de ratinhos com refluxo duodenal podem sobreviver. Durante este período, os ratos morrem principalmente de estenose esofágica e incapacidade para comer. Estes ratos mostram sinais de estresse grave ...

Este artigo demonstra procedimentos cirúrgicos de refluxo gastroesofágico com camundongos. Esses modelos são ferramentas úteis para pesquisa sobre mecanismos e tratamento da doença do refluxo gastroesofágico e potencialmente esôfago de Barrett e adenocarcinoma esofágico.

Modelos cirúrgicos de refluxo gastroesofágico com Ratos

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

O objetivo geral deste procedimento é criar modelos de refluxo gastroesofágico em camundongos. Primeiro, é mostrado o preparo de um modelo de refluxo gástrico, em seguida, é apresentado o estabelecimento de um modelo de refluxo misto, seguido pela demonstração do preparo de um modelo de refluxo duodenal. Por fim, o grau de dano esofágico induzido pelos diferentes modelos de refluxo pode ser avaliado por análise histológica.Geralmente, indivíduos novos nessa medicina terão dificuldades devido ao tamanho reduzido do esôfago do camundongo. Para montar o modelo de refluxo gástrico. Após confirmar o nível adequado de anestesia com pinça nos dedos, use um aparador de cabelos para raspar a área cirúrgica e aplique pomada nos olhos do animal. Usando solução de Betadine, esterilize a pele exposta.Em seguida, faça uma incisão média de dois centímetros começando do processo xifóide até o ânus. Em seguida, abra a cavidade abdominal através da linha média e use uma tesoura para remover o xifóide. Separe e corte os tecidos conjuntivos entre o fígado e o estômago.Em seguida, ligue e corte o feixe vascular entre o baço e o fundo. Quando o fundo estiver completamente liberado, vire o tecido ligeira

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Neste vídeo, um procedimento de gastrectomia vertical vertical é realizado em um modelo experimental de camundongo. Este procedimento ajuda a remover uma parte significativa do estômago ao longo de sua maior curvatura.

Gastrectomia vertical murina: um procedimento cirúrgico para reduzir o tamanho do estômago em modelos experimentais de camundongos

Este vídeo demonstra a geração de um modelo de alça ileal para estudar a permeabilidade intestinal em um modelo de camundongo. Este método fornece um modelo vivo para entender a função da barreira epitelial e a consequente resposta imune.

Modelo de alça ileal de camundongo: um modelo cirúrgico para estudar a permeabilidade intestinal no camundongo

A cirurgia bariátrica é a maneira mais eficiente de reduzir o peso corporal e as complicações metabólicas mortais (diabetes, obesidade e dislipidemia) frequentemente associadas à obesidade mórbida. Modelos de camundongos de cirurgia bariátrica representam um recurso único para decifrar os mecanismos moleculares por trás dos efeitos benéficos dessas cirurgias sobre diabetes, hipertensão e dislipidemia.

Técnicas de gastrectomia vertical e modificado Roux-en-Y bypass gástrico em ratos

A seguir descreve o desempenho de gastrectomia de manga vertical em camundongos. Este é um tipo de cirurgia de perda de peso que envolve a remoção de aproximadamente 70% do estômago.

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Modelos de mouse da infecção por Helicobacter e patologias gástricas

Obstruções intestinais são um bloqueio parcial ou total do intestino que pode causar dor abdominal, náuseas, vômitos e impedindo a passagem das fezes. Este procedimento para criar obsructions parcial intestinal em camundongos é confiável em estudar os mecanismos subjacentes do crescimento celular patológica e morte no intestino.

Um modelo do rato de obstrução Intestinal parcial

Fuga anastomótica ou avaria após a cirurgia é das principais causas de mortalidade e morbidade pós-operatória. A cirurgia para a criação de uma anastomose colônica é um método confiável e reprodutível para estudar os mecanismos de cicatrização de anastomoses.

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A prevalência de diabetes e obesidade está aumentando continuamente em todo o mundo. Os mecanismos entre diabetes, obesidade e sua mortalidade associada e co-morbidades precisam ser mais aprofundados. Aqui, apresentamos um protocolo para gastrectomia de manga (SG) em animais como um modelo pré-clínico descomplicado da cirurgia bariátrica.

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Tratamento cirúrgico da estenose meatal com meatoplastia

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