Name: Um método para avaliar as propriedades de reforço de etanol em ratos sem água Privação, Sacarina desvanecimento ou treinamento de Acesso Ampliado (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Aprenda um método inovador para iniciar resposta operante por etanol em ratos sem privação hídrica ou desvanecimento de sacarina. Esta técnica simplifica o estudo da neurobiologia da recompensa alcoólica em modelos animais.

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Este trabalho foi financiado pelo Conselho de Pesquisa sueco.

Todos os procedimentos são realizados de acordo com o Guia NIH para Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. 1. Animal Care e Habitação <ol><li> Após a chegada na colônia, os ratos casa machos Wistar pesando 200-225 g à chegada em pares em uma temperatura (21 ° C) e meio ambiente com humidade controlada, com um ciclo claro-escuro de 12 h revertida. Nota: Dependendo da lógica dos experimentos, os ratos podem ser alojados individualmente. </li><li> Permitir que os ratos para se aclimatar ao biotério e o ciclo de luz por pelo menos uma semana antes de iniciar uma experiência e lidar com eles diariamente. Pesar os animais uma vez por semana. </li><li> Dê ratos livre acesso à comida e água da torneira para a duração do experimento (privação de água não é necessário iniciar responder 12). Realizar todos os testes de comportamento durante a fase escura do ciclo claro-escuro de uma sala de testes escuro. Nota: Embora nós usam rotineiramente jovens ratos Wistar machos adultos (dias pós-natal 62 - 65), este protocolo pode, teoricamente, ser adequado para investigar outras estirpes de ratos, assim como as diferenças de sexo e / ou idade. </li></ol> 2. Formação Operant <ol><li> Realizar todo o treinamento comportamental e testes em câmaras operantes idênticos medindo 30,5 × 29,2 × 24,1 cm e contendo pisos de arame e panelas de resíduos alinhados com roupa de cama (trocadas entre animais para reduzir marcas olfactivas), alojados em cubículos de atenuação de som equipados com exaustores para ventilação . Nota: Os ratos são treinados por operante condicionado a partir de um dia de formação (uma resposta numa alavanca é necessária para obter um reforçador) entre + + 1 h e 8 h de escuro no ciclo. Não há pré-exposição ao álcool, nem comida ou a elaboração de líquidos antes do treino álcool. </li><li> Equipar cada câmara operante com luzes de estímulo, bombas de seringa e duas alavancas retrácteis posicionado lateralmente para um receptáculo copo de líquido. câmaras de interface e controle de um computador utilizando o software apropriado. Nota:A maioria dos fornecedores irá fornecer pacotes de auto-administração que contêm todos os componentes necessários, bem como software e interfaces necessárias para controlar as câmaras. </li><li> Escrever um programa operante condicionado que inicia o esquema de razão fixa (FR) de reforço 20% de etanol (a programação operante no qual uma resposta é reforçada só depois de um determinado número de respostas) de acordo com as instruções do fabricante. Por exemplo, em uma proporção fixa 1, os ratos têm uma resposta para produzir obter um reforçador (ver a secção suplementar arquivos de código para um exemplo de um programa de FR1). Execute os seguintes comandos. <ol><li> Estender duas alavancas para marcar o início da sessão e para sinalizar a disponibilidade do álcool. Nota: Uma pressão da alavanca sobre a alavanca associada com etanol (activa) é recompensado através da entrega de um volume de 100 uL de 20% de etanol em água no adjacente beber bem e inicia a 5 s período de tempo limite concomitante assinalado pela iluminação docue-luz acima da alavanca. O cue-luz é introduzido no dia 1 do treinamento. </li><li> Durante o período de tempo limite, ficha responder ainda que não tem consequências programadas. Registre as respostas na outra alavanca (inativo), embora eles nunca ter consequências comportamentais. Nota: A alavanca inactiva serve como um controlo para avaliar o comportamento não-específica. </li><li> Grave o número de respostas na alavanca ativa (taxas de resposta) e o número de 20% de etanol recompensas ganhos. </li><li> Após 30 minutos terem decorrido, retrair as duas alavancas para sinalizar o fim da sessão e para sinalizar o fim da disponibilidade de álcool. </li><li> Salvar e arquivar todos os dados. </li></ol></li><li> Antes de iniciar a sessão de treinamento, verificar o bom funcionamento de todos os dispositivos em cada câmara operante (alavancas retrácteis, distribuidor de fluidos). </li><li> Preparar a solução de etanol v / v de 20% a partir de 190 de prova (95%) de etanol diluído em água da torneira. Nota: Etanol solução pode ser guardada à temperatura ambiente. dependendosobre o fabricante, as soluções estoque de etanol pode ser de até 99,98%. Note também que, enquanto em manuscritos mais publicados, as concentrações de etanol são geralmente apresentados como volume / volume, alguns podem apresentá-los como peso / volume. </li><li> Encha a seringa com a solução de etanol a 20% e se certificar de que não há vazamentos ou bolhas de ar nas linhas de infusão. empurrar manualmente um pequeno volume de etanol por meio das linhas de infusão para se certificar de que o etanol será correctamente entregue no receptáculo a partir da primeira resposta reforçada. Secar o recipiente com uma toalha de papel e certifique-se de que ele está vazio antes de iniciar a sessão. </li><li> Carregar o software que controla a programação FR de reforço de etanol a 20% </li><li> Train operant- e ratos virgens de tratamento sob um cronograma FR1 para auto-administrar 20% de etanol sem privação de água durante 30 sessões min. <ol><li> Transportar os ratos provenientes do biotério para a sala de ensaios utilizando uma jaula de transporte. </li><li> Atribuir cada rato para uma câmara.Tome cada rato individual da jaula de transporte e colocá-lo na câmara de auto-administração atribuído. </li><li> Tente manter as condições da experiência consistente cada dia. Portanto, sempre testar ratos na mesma câmara auto-administração ou menos na mesma hora todos os dias. </li><li> Inicie o software que inicia a programação FR1 de reforço de etanol a 20%. </li><li> No final da sessão, remover os ratos das câmaras de auto-administração e devolvê-las para o viveiro. </li><li> A fim de confirmar que manualmente a solução de álcool é consumido pelos animais, usar uma toalha de papel e verificar se o recipiente é seco. Em alternativa, usar um 1 ou 2 ml da seringa e recolher o fluido remanescente no receptáculo para estimar o volume que não é consumido. Nota: Para uma medição mais precisa (mas também mais caro), é possível equipar cada uma das câmaras com um sistema lickometer ligado ao receptáculo copo de líquido que permite uma contagem precisa do pingos produzidos por os ratos durante a sessão de auto-administração. </li><li> Limpar as paredes e o piso de grade de cada câmara, com um desinfectante de superfície. </li><li> Após a utilização, manter as linhas de infusão limpando-os com uma solução de etanol a 70%. Quando não estiver em uso, coloque a tampa para evitar mofo e poeira. </li></ol></li><li> Após cada sessão, coletar e analisar os dados gerados. Mais particularmente, calcular o número médio de prensas alavanca activa, o número médio de frutos obtidos de álcool, bem como o número médio de prensas alavanca inactiva. Nota: Na maioria dos papéis, o consumo de álcool também é apresentado como o consumo de etanol em g / kg (peso corporal). A ingestão de etanol pode ser calculada usando a seguinte fórmula: <img alt="equação1" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation1.jpg" /> Com volume consumido (mL) - número de recompensas ganhas ± unitária de volume / recompensa e densidade de etanol à temperatura ambiente - 0,789 g / mL. Por exemplo, se um rato pesa 400 g ganhou 20 rewaRDS de solução a 20% v / v etanol: <img alt="Equation2" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation2.jpg" /></li><li> Realizar sessões de 5/6 dias por semana, até a estabilização do desempenho (definido como um mínimo de 15 sessões e nenhuma alteração superior a 15% do número total de recompensas ganhas durante as últimas 3 sessões). Observação: Uma vez que os ratos tenham atingido uma linha de base estável em FR1, o programa de condicionamento operante pode ser modificado de acordo com as instruções do fabricante para aumentar o número de respostas necessárias para obter uma recompensa de álcool. A proporção fixa pode por exemplo ser aumentado para FR2 ou FR3, a fim de minimizar o reforço acidental. </li><li> Medir as concentrações de etanol no sangue: <ol><li> Para confirmar que os frutos obtidos de uma sessão de auto-administração são consumidos pelos ratos, medir as concentrações de etanol no sangue a seguir a auto-administração. Uma vez que os ratos tenham atingido uma linha de base estável, recolha de sangue a partir da veia lateral da cauda imediatamente depoisa sessão. Inserir uma agulha G 23, para dentro do vaso sanguíneo e recolher amostras de sangue de 50 uL utilizando um tubo capilar. </li><li> Transferir as amostras de sangue de 50 ul e 10 frascos de headspace ml e adicionar 50 uL de 1: 1000 de álcool isopropílico como padrão interno. Prepara-se uma curva padrão de 10 a 300 mg / dL a partir de padrões de etanol. Amostras de processo com um amostrador headspace com uma coluna de cromatografia 13 de acordo com as definições do fabricante. </li></ol></li><li> razão progressiva <ol><li> Use cronogramas progressivos relação (PR) para avaliar a motivação dos animais para consumir uma recompensa de 14. PR é uma programação operante em que o número de respostas para obter um reforçador é aumentada gradualmente (em outros termos, os ratos têm de trabalhar mais para cada recompensa sucessiva). Nota: Ao contrário do FR sessões, uma sessão PR não é cronometrado e só vai ser encerrado, uma vez 30 min tenha decorrido sem um rácio concluída. <ol><li> Coloque ratos em suas caixas operantes atribuídos e permitir-lhes responder por 20% de etanol sob uma programação PR de reforço: Mantenha todas as condições experimentais idênticas às utilizadas no cronograma FR (ver passo 2.3), excepto aumentar o requisito de resposta ou de custos dentro de sessões (isto é, o número de pressões da alavanca necessária sobre a alavanca activa para receber uma única recompensa etanol) de acordo com a fórmula seguinte: 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24, 28, 32 ... Nota: um exemplo do programa de RP é fornecido na seção Supplemental arquivos de código. </li><li> Encerrar a sessão PR uma vez 30 min tiver decorrido sem uma recompensa. Nota: O ponto de ruptura é definida como a última exigência resposta completado durante a sessão de PR. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Teste a validade preditiva de um modelo operante de álcool auto-administração Nota: Uma vez que os ratos adquiriram uma linha de base auto-administração estável (ver passo 2), é possível avaliar a validade preditiva do modelo detestar a eficácia de naltrexona, um fármaco actualmente aprovado pela FDA para a dependência de álcool na redução de 20% de etanol a auto-administração. Recomendamos fazer este teste no mais alto FR alcançado durante o treinamento (FR2), quando as respostas são seguramente alta. Uma vez validade preditiva é estabelecida, o modelo pode ser usado para avaliar os novos candidatos a fármacos. <ol><li> Antes do dia de teste, dar ratos injecções de solução salina subcutânea 30 minutos antes das sessões de auto-administração de habituar-los para a injecção durante um mínimo de duas sessões de auto-administração consecutiva ou até responder por etanol não é afectada pelas injecções de solução salina (definida como qualquer alteração superior a 15% do número total de recompensas ganhas durante os últimos 2 sessões). </li><li> Dissolver naltrexona em solução salina e ajustar o pH a atingir a neutralidade para facilitar as injecções aos animais. Injectar a droga a um volume de 1,0 ml / kg 30 minutos antes da sessão, utilizando a via de administração subcutânea. Nota: O litrotura proporciona uma boa evidência de uma escolha de dose entre os intervalos de 0,1 - 1 mg / kg, de modo que 0,1, 0,3 e 1 mg / kg são utilizados no presente protocolo. Nota: A pesquisa indica o uso de ambas as vias subcutânea e intraperitoneal de administração para a naltrexona, embora a sua potência pode diferir com a injecção subcutânea sendo 30 vezes mais potente do que 15 injecções intraperitoneais. Por esta razão, recomenda-se utilizar a via subcutânea como a utilização desta via para a injecção de naltrexona foi validado e replicado por vários laboratórios, a um intervalo de concentrações entre 0,1 e 1 mg / kg 12,15,16. </li><li> Durante o dia do teste, ratos injectar numa ordem equilibrada / aleatório num desenho entre sujeitos através de um dos quatro ciclos de naltrexona dosagem (0, 0,1, 0,3 e 1 mg / kg) 30 minutos antes da sessão de auto-administração. </li><li> Entre cada ciclo de dosagem, permite ratos à lavagem do fármaco com um mínimo de duas sessões de auto-administração consecutiva ou até para responderetanol está de volta à linha de base. Observação: Como resultado, no final do ensaio, todos os ratos foram injectados com cada uma das quatro doses. </li><li> Após esta fase, seleccionar a dose mais eficaz (1 mg / kg) e testar o efeito da naltrexona na motivação dos animais de consumir álcool, usando um programa de razão progressiva (ver passo 2.12). </li></ol>

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<li>Lenoir, M., Cantin, L., Vanhille, N., Serre, F., Ahmed, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extended+heroin+access+increases+heroin+choices+over+a+potent+nondrug+alternative%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology+%3A+official+publication+of+the+American+College+of+Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Extended heroin access increases heroin choices over a potent nondrug alternative.</a> Neuropsychopharmacology : official publication of the American College of Neuropsychopharmacology. 38, 1209-1220 (2013).</li>
<li>Augier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mGluR2+Positive+Allosteric+Modulator%2C+AZD8529%2C+and+Cue-Induced+Relapse+to+Alcohol+Seeking+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology+%3A+official+publication+of+the+American+College+of+Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">The mGluR2 Positive Allosteric Modulator, AZD8529, and Cue-Induced Relapse to Alcohol Seeking in Rats.</a> Neuropsychopharmacology : official publication of the American College of Neuropsychopharmacology. 41, 2932-2940 (2016).</li>
<li>Bice, P. J., Kiefer, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taste+reactivity+in+alcohol+preferring+and+nonpreferring+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Alcoholism%2C+clinical+and+experimental+research%22%5BJournal%5D)">Taste reactivity in alcohol preferring and nonpreferring rats.</a> Alcoholism, clinical and experimental research. 14, 721-727 (1990).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para revelar.

Com este protocolo, estamos apresentando um novo método para adquirir e manter a auto-administração oral estável de 20% de etanol em ratos que, contrariamente aos modelos clássicos de etanol auto-administração, não requerem o uso de privação de água, formação de acesso estendida, ou sacarina / sacarose 12 desvanecimento. Além disso, a naltrexona, um medicamento atualmente aprovado pelo FDA para dependência de álcool, diminui com sucesso álcool auto-administração e a motivação para consumir álcool de ratos Wis...

O desenvolvimento de modelos animais para estudar os efeitos reforçadores da droga provou uma ferramenta importante para estudar a toxicodependência humano. Mais especificamente, a auto-administração operante é um modelo comportamental amplamente utilizado que é um dos meios mais eficazes para a avaliação dos efeitos de reforço positivo de uma solução de etanol consumida por via oral. Um problema inicial com o desenvolvimento de um modelo desse tipo era o gosto aversivo primário de altas concentrações de etanol para a maioria dos roedores, um fenómeno que também é compartilhada em seres humanos com pouca ou nenhuma experiência com o álcool 1. Um protocolo padrão para superar essa barreira exige a privação de água e / ou a sacarina ou sacarose desbotamento durante a aquisição e manutenção de auto-administração. No entanto, estas duas abordagens não são vantajosas. Eles exigem longos períodos de treinamento para iniciar simplesmente respondendo para o etanol e obter uma taxa de sucesso relativo de aquisição. A utilização de adoçantes também introduz uma polarização potencial ema interpretação dos dados auto-administração. Essas limitações não se aplicam com o protocolo seguinte. Resumidamente, Sansão e colegas 2 mostraram que a dissolução de etanol em uma solução doce de 20% de sacarose e, em seguida, desaparecendo a doçura ao longo de 4 semanas de treinamento é necessário para iniciar a responder por 10% de etanol em água. Além disso, a ingestão de etanol fiável é geralmente conseguido em 6 a 8 semanas 1-3. Esta abordagem é altamente problemática. Primeiro, exige longos períodos de treinamento antes de os investigadores podem começar a medir o etanol auto-administração. Em contraste, intravenosa auto-administração de cocaína ou heroína requer 0 - 1 dias de treinamento pré-droga em uma alavanca de entrega de alimentos em animais de produção restrita, e estável de responder por droga é muitas vezes conseguida em 10 - 12 dias 4,5. Uma outra limitação deste método é o facto de a sacarina e sacarose são altamente compensador para ratos e induzir padrões de activação cerebral similar para drogas de abuso, introduzindo assim o potencial para confunde em etanol auto-administração estuda 6-9. Finalmente, os ratos adquirem auto-administração de uma solução de etanol usando este método mostra variabilidade na aquisição e resposta taxa de 1,10, com uma proporção substancial de ratos consistentemente excluídas experimentos devido a aquisição bem sucedida e / ou taxa de resposta insuficiente. Por outro lado, com este protocolo, apresentamos um método simples mas eficaz para a aquisição e manutenção de auto-administração oral de uma de etanol a 20% em solução de água que não necessitam de privação de água, sacarose / desvanecimento sacarina ou formação de acesso estendida. Um estudo recente constatou que a auto-administração por via oral de etanol exibe uma curva de resposta à dose em forma de U invertido com maior ingestão de etanol durante a auto-administração, a uma concentração de etanol a 20%, proporcionando assim uma base lógica para a selecção de uma solução de etanol 20% no nosso experimenprojeto ental 11.

<table><tbody><tr><td>Cubículo de atenuação de som MDF extra alto, interior: 22"W x 22"H x 16"D</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-018MD</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de Teste Modular Extra Alta com Parte Superior modificada, Bandeja de Resíduos e Feixe de Fotos</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-007CT-PH</td><td></td></tr><tr><td>Piso de grade de aço inoxidável para rato ou pequeno primata</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-005</td><td></td></tr><tr><td>Alavanca Retrátil</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-112CM</td><td>2 por SA chambers</td></tr><tr><td>Stimulus Light, lente branca de 1", montada em painel modular</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-221M</td><td>2 por SA chambers</td></tr><tr><td>Recipiente Líquido de Copo Duplo com Tubos de Aço Inoxidável de 18 ga</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-200R3AM</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de Seringa de Velocidade Única, 3,33 rpm</td><td>Med Associates Inc.</td><td>PHM-100</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Entrega de Líquidos</td><td>Med Associates Inc.</td><td>PHM-122-18</td><td></td></tr><tr><td>SmartCtrl 8 Entrada / 16 Saída Pacote</td><td>Med Associates Inc.</td><td>DIG-716P2</td><td></td></tr><tr><td>Software MED-PC</td><td>Med Associates Inc.</td><td>SOF-735</td><td></td></tr><tr><td>http://www.mednr.com/</td> <td>Med Associates Inc.</td><td></td><td>Um site de código aberto que foi criado para oferecer aos pesquisadores um local para trocar o código de notação MEDState</td></tr><tr><td>Kendall Monoject 20 cc Seringas, Ponta Luer Regular</td><td>VWR International</td><td>MJ8881-520657</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, Puro, 190 Prova (95%), USP, KOPTEC</td><td>Decon Labs</td><td>2801</td><td></td></tr><tr><td>Injeção de cloreto de sódio a 0,9%, USP</td><td>Hospira</td><td>0409-4888-50</td><td></td></tr><tr><td>Naltrexona cloridrato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N3136-1G</td><td></td></tr><tr><td>23 G BD Agulhas PrecisionGlide</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>Minivette POCT 50 &micro; L, K3EDTA</td><td>Sarstedt</td><td>17.2113.150</td><td>Para colheita de sangue capilar</td></tr></tbody></table>

um método para avaliar as propriedades de reforço de etanol em ratos sem água privação, sacarina desvanecimento ou treinamento de acesso ampliado

A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

métodos de auto-administração oral operantes são comumente usados ​​para estudar as propriedades de reforço de etanol em animais. No entanto, os métodos convencionais exigem a sacarina / desvanecimento sacarose, privação de água e / ou formação estendida para iniciar responder operante em ratos. Este artigo descreve um método novo e eficiente para iniciar rapidamente responder operante para o etanol que seja conveniente para experimentadores e não necessita de privação de água ou sacarina / desvanecimento sacarose, eliminando assim a confundem potencial do uso de adoçantes em etanol estudos de auto-administração operante. Com este método, ratos Wistar tipicamente adquirir e manter a auto-administração de uma solução de etanol a 20% em menos de duas semanas de formação. Além disso, as concentrações de etanol no sangue e recompensas são correlacionados positivamente para uma sessão de auto-administração 30 min. Além disso, a naltrexona, um medicamento aprovado pela FDA para a dependência do álcool que tem sido mostrado para suprimir a auto-administração de etanolem roedores, dependente da dose, diminui o consumo de álcool e a motivação para consumir álcool em ratos auto-administração de 20% de etanol, validando assim a utilização deste novo método para estudar as propriedades de reforço de álcool em ratos.

A Figura 1 mostra o comportamento auto-administração representante de ratos Wistar operant- e virgens de tratamento (oito coortes diferentes perfazendo um total de 239 ratos) treinados em uma programação FR1 para auto-administrar 20% de etanol, sem privação de água ou sacarina / desvanecimento sacarose durante sessões de 30 minutos. Com este protocolo, os ratos iniciar alavanca pressionando para obter uma recompensa de etanol muito rapidamente, já a obtenção de mais de 1...

Este protocolo descreve um método novo e eficiente para iniciar rapidamente operante de responder por etanol em ratos, que, contrariamente aos métodos convencionais, não necessitam de privação de água ou sacarina / sacarose desvanecimento para iniciar a responder.

Um método para avaliar as propriedades de reforço de etanol em ratos sem água Privação, Sacarina desvanecimento ou treinamento de Acesso Ampliado

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods ...

O objetivo geral deste protocolo é iniciar rapidamente a resposta operante ao álcool em ratos com um método que é conveniente para os experimentadores e, ao contrário dos métodos padrão, não exige privação de água nem a substituição gradual de sacarina/sacarose. Assim, este método é uma ferramenta muito útil para responder perguntas fundamentais sobre a neurobiologia e a neurofarmacologia da recompensa pelo álcool na busca por álcool em ratos. A principal vantagem desta técnica é que ela não requer a substituição gradual de sacarina/sacarose para iniciar a resposta ao álcool em ratos.Primeiro, elimine o potencial inconveniente do uso de edulcorantes no procedimento de administração autoadministrada de etanol. Para este experimento, obtenha ratos com peso entre 200 e 225 gramas. Machos Wistar são usados aqui.Mantenha-os em pares ou individualmente, dependendo da justificativa do experimento. Mantenha a colônia em um ciclo claro-escuro invertido de 12-12 horas, com temperatura e umidade controladas, e realize os experimentos durante a fase escura. Pese os animais semanalmente e permita que eles se aclimatizem por pelo menos uma semana antes de iniciar o experimento.Não restrinja o acesso do rato à comida e à água. Isso não é necessário para o condicionamento. Realize todo o treinamento comportamental na mesma câmara operante com grade plana e bandeja coletora de resíduos.A câmara deve ser instalada em um cubículo ventilado e com atenuação de som. Cada câmara deve possuir luzes de estímulo, bombas de seringa e duas alavancas retráteis. Os níveis devem ser posicionados lateralmente em relação a um recipiente para copo de líquido.Cada câmara deve estar sob controle automatizado com uma interface de computador. Utilize este software para preparar o programa de condicionamento operante conforme necessário. Por exemplo, execute os seguintes comandos.Estenda duas alavancas para marcar o início da sessão e sinalizar a disponibilidade de álcool. Quando pressionada, a alavanca de etanol deve liberar 100 microlitros de etanol a 20% no poço adjacente para bebida, e permanecer em tempo de espera por cinco segundos. Sinalize o tempo de espera iluminando uma luz indicadora acima da alavanca.A outra alavanca, quando pressionada, não tem consequência programada e serve como controle para comportamentos inespecíficos. Mesmo durante os intervalos, registre como as ratas utilizam as alavancas, embora não haja consequência para a rata. Após 30 minutos, recolha as duas alavancas para sinalizar o fim da sessão.Carregue uma solução de etanol, feita a partir de etanol 95% e água da torneira, em uma seringa. Ejetar a solução sem introduzir bolhas de ar nas linhas da torneira. Confirme manualmente o fluxo da solução.Teste sempre manualmente os dispositivos. Além disso, seque sempre o recipiente da solução antes de iniciar qualquer sessão. Antes de começar uma sessão, carregue os controles de software e certifique-se de que tudo está funcionando corretamente.Transfira as ratas para a sala de testes em uma gaiola de transporte e atribua uma rata a cada câmara. Mantenha a sala de testes na mesma temperatura e umidade do biotério. Carregue as ratas em suas câmaras de maneira consistente e no mesmo horário do dia para cada sessão.Em seguida, inicie o software para iniciar a sessão. Após o término da sessão, devolva as ratas ao biotério e utilize um desinfetante para limpar as gaiolas de condicionamento operante. Realize as sessões diariamente, de cinco a seis vezes por semana.Após cada sessão, calcule a média do número de pressões na alavanca ativa, pressões na alavanca inativa e recompensas alcoólicas. O desempenho será considerado estabilizado quando, em mais de três sessões consecutivas, as recompensas não variarem em mais de 15%. Ratos com linha de base estável podem então ser submetidos a manipulações. Uma possível manipulação para ratos na linha de base estabilizada é avaliar sua motivação pelas recompensas de etanol.Para fazer isso, submeta-os a um programa de razão progressiva. Programe as câmaras para, inicialmente, liberar um único volume de álcool com uma pressão na alavanca, mas aumente o número de pressões necessárias após cada reforço com álcool. Cada animal alcançará um ponto de interrupção, correspondente ao número de pressões realizadas para o último reforço obtido.Este modelo foi avaliado quanto à sua validade preditiva utilizando o medicamento aprovado para alcoólatras, a naltrexona. De fato, a validade preditiva foi estabelecida e, portanto, o modelo pode ser usado para avaliar novos candidatos a fármacos. Inicialmente, injete os ratos com solução salina 30 minutos antes de cada sessão para habituá-los à injeção.Analise os resultados das sessões e prossiga quando o número de recompensas entre as duas últimas sessões variar em 15% ou menos. Em seguida, administre a naltrexona em solução salina com pH ajustado para neutro. Randomize a ordem dos testes entre os diferentes grupos de tratamento e os controles não tratados.Entre as administrações do fármaco, permita que cada rato passe por duas sessões normais sem tratamento, exposto apenas ao soro fisiológico. Isso funciona como período de lavagem e reajusta o rato. Repita os testes até que, no final, cada rato condicionado receba cada nível de tratamento uma vez, e o tratamento controle uma vez.Após analisar os dados, a dose mais eficaz pode ser selecionada para uso nos animais durante os testes de razão progressiva. Utilizando o protocolo descrito, 239 ratos de oito coortes diferentes foram treinados para autoadministrar a recompensa alcoólica sem privação de água ou redução gradual de sacarina e sacarose. Os ratos iniciaram a pressão da alavanca rapidamente, obtendo mais de 10 recompensas na primeira sessão.Eventualmente, as taxas de resposta das ratas estabilizaram, obtendo cerca de 24 recompensas em cada sessão de meia hora. Um medicamento aprovado pela FDA, a naltrexona, foi testado em três concentrações. Como esperado, o tratamento com naltrexona produziu uma redução dependente da dose na automadministração de álcool, fornecendo uma importante validação farmacológica para este protocolo.Como esperado, a naltrexona reduziu a motivação do rato pelo álcool em um esquema de razão progressiva, conforme demonstrado pela diminuição na medida do ponto de interrupção. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como iniciar rapidamente a resposta operante ao etanol em ratos sem utilizar a privação de água ou o procedimento de atenuação de sacarina/sacarose. Com este protocolo, os ratos adquirem taxas estáveis de autoministração em cerca de duas semanas, resultando em concentrações sanguíneas de álcool farmacologicamente relevantes.Ao realizar este procedimento, é importante manter as condições diárias tão consistentes quanto possível. Também é fundamental que o etanol seja corretamente administrado no recipiente a partir da primeira resposta reforçada, pois qualquer mau funcionamento pode alterar ou atrasar a aquisição da automedicação com etanol. Após este procedimento, outros experimentos podem ser realizados para estudar a base neural da busca e consumo de álcool.

a-method-for-evaluating-reinforcing-properties-ethanol-rats-without

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Um ensaio simples para medir os efeitos sedativos do etanol...

Uma maneira simples para medir a sensibilidade de etanol no Flies

Responder por sinais de alimentos ou drogas emparelhados aumenta ao longo de um período de abstinência e esta pode estar relacionada com uma susceptibilidade aumentada a comportamentos recaída. Aqui detalhamos um procedimento para avaliar este "incubação de desejo" em ratos que têm auto-administrado de sacarose.

Um método geral para a avaliação de Incubação de Craving Sacarose em Ratos

Um método para determinar o curso de tempo da concentração de etanol no cérebro de ratos durante etanol operante a auto-administração é descrita. Cromatografia em fase gasosa com detecção por ionização de chama é utilizado para quantificar o etanol nas amostras de dialisato, porque não tem a sensibilidade necessária para os pequenos volumes que são gerados.

Microdiálise de etanol durante a operante determinação auto-administração de etanol e etanol por cromatografia gasosa

O presente estudo avalia um novo procedimento para avaliar os efeitos de reforço de soluções palatáveis ​​em ratos de laboratório: a auto-administração intra-oral. Para este fim, respondendo operante (isto é, a pressão da alavanca) para infusões intra-orais de soluções doces em diferentes concentrações foi medido em rácios contínuos e progressivos esquemas de reforço.

Um novo procedimento para avaliar as propriedades de reforço de Tastants em laboratório ratos: Intraoral auto-administração operante

Um procedimento para o estudo da capacidade de um álcool associado contexto ambiental para desencadear a renovação do comportamento de procura de álcool em ratos, está descrito.

Um procedimento para Observar Renovação induzida por Contexto de pavloviano condicionado Comportamento Álcool-seeking em Ratos

O objetivo do protocolo aqui apresentado é descrever procedimentos para expor ratos a níveis moderados de álcool durante o desenvolvimento cerebral pré-natal e quantificar as alterações resultantes no comportamento social durante a idade adulta.

Moderado pré-natal álcool Exposição e quantificação do comportamento social em ratos adultos

Ensaios simples para medir a sensibilidade ao etanol e a tolerância rápida em Drosophila facilitam o uso deste organismo modelo para investigar esses importantes comportamentos relacionados ao etanol. Aqui, um ensaio relativamente simples e escalável para medir a sensibilidade ao etanol e a tolerância rápida em moscas é descrito.

Um Ensaio Behavioral Barato, escalável para medição Ethanol Sedação sensibilidade e tolerância rápida em<em&gt; Drosophila</em

O objetivo deste estudo é identificar redes cerebrais distribuídos relacionadas com a recompensa por delinear uma técnica de imuno confiável usando a ativação de c-fos celular para medir as mudanças simultâneas nos caminhos da dopamina e locais de terminal após a novela ingestão de gordura e açúcar em ratos.

Detecção simultânea de c-Fos Ativação de mesolímbico e mesocortical dopamina Sites Recompensa Após Naive açúcar e gordura ingestão em ratos

Nós descrevemos um protocolo para induzir gratificante e nonrewarding experiências em moscas da fruta (Drosophila melanogaster), utilizando o consumo de etanol voluntária como uma medida de mudanças nos estados de recompensa.

Uma maneira simples para medir alterações na Recompensa comportamento de busca Usando<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Apresentado aqui é um protocolo para estudar o comportamento anedônico e depressão em ratos. Combina dois métodos comportamentais bem estabelecidos, a preferência por sacarose e testes de hipofagia induzidos por novidades, com um sistema automatizado de monitoramento de consumo alimentar e líquido, para investigar indiretamente o comportamento dos roedores usando parâmetros substitutos.

Preferência por sacarose e testes de hipofagia induzidos por novidades em ratos usando um sistema automatizado de monitoramento da ingestão de alimentos

Aprenda um método inovador para iniciar resposta operante por etanol em ratos sem privação hídrica ou desvanecimento de sacarina. Esta técnica simplifica o estudo da neurobiologia da recompensa alcoólica em modelos animais.

Um método para avaliar as propriedades de reforço de etanol em ratos sem água Privação, Sacarina desvanecimento ou treinamento de Acesso Ampliado (Vídeo) | JoVE Journal

Um método para avaliar as propriedades de reforço de etanol em ratos sem água Privação, Sacarina desvanecimento ou treinamento de Acesso Ampliado

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