Name: Hemodinâmica Caracterização de roedores modelos de Hipertensão Arterial Pulmonar (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 40 s
Description: Aprenda a caracterizar hemodinamicamente modelos de roedores com hipertensão arterial pulmonar usando ecocardiografia e cateterização cardíaca direita. Este método permite analisar a função ventricular direita em doenças cardiopulmonares.

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SR é apoiado pelo NIH K08HL114643, Gilead Research Scholars in Pulmonary Arterial Hypertension e Burroughs Wellcome Fund Career Award for Medical Scientists.

Todos os procedimentos descritos seguir as orientações de cuidados de animais de Duke University School of Medicine. 1. Antes de iniciar o procedimento Nota: Antes de quaisquer procedimentos com animais, garantir que a permissão institucional adequado foi obtido. Tal como acontece com todos os procedimentos, usar medicação para a dor adequado para garantir que não há sofrimento animal. <ol><li> cateteres nivelada com solução salina estéril heparinizado (100 U / ml) para assegurar a desobstrução. Marca um ponto a partir da ponta do cateter equivalente ao comprimento do coração para o meio do gargalo (aproximadamente 4 cm para ratos e 2 cm de ratos). </li><li> Anestesiar o mouse ou rato. As escolhas do anestésico incluem isoflurano (3-4% de indução, manutenção 1,5% misturado com 100% de oxigénio), a cetamina / xilazina (80-120 / 10 mg / kg) e pentobarbital (40-80 mg / kg) 6. <ol><li> Por exemplo, com cetamina: xilazina (80-120 mg / kg: 10-16 mg / kg IP para ratinhos e 80-100 mg / kg: 5-10 mg / kg IP para ratos), uma dose única dura 20-50 minutos de anestesia. Para ecocardiografia, anestesiar ratinho ou um rato com isoflurano (3-4% para a indução e 1,5% para manutenção). Avaliar a profundidade da anestesia por beliscar o roedor na área cirúrgica para confirmar que os reflexos de retirada estão ausentes. Use pomada veterinária nos olhos para evitar a secura e sob anestesia. Nota: agentes anestésicos diferentes podem ser usados ​​para obter resultados confiáveis ​​com o uso adequado e otimização (revisto em outros lugares 6). Nossa preferência por cateterismo é usar a cetamina: xilazina. Overdose com cetamina / xilazina pode profundamente diminuir a frequência cardíaca e da função cardíaca, por isso é fundamental para manter a temperatura adequada e controle respiratório. Para manter a frequência cardíaca (&gt; 400 / min) em camundongos, que rotineiramente vagotomia bilateral. A quantidade de cetamina / xilazina aqui vai geralmente duram de 20-30 min, que é suficiente para executar qualquer aberto ou com tórax fechado coração cateterismo seguido deeutanásia do animal. </li></ol></li><li> Prepare o rat / mouse para o procedimento cirúrgico (Figura 1). <ol><li> Raspar a pele do peito (para permitir a ecocardiografia) e da região cirúrgica, no pescoço direita. </li><li> Esfregue as regiões cirúrgicos raspadas com um movimento circular do centro para fora usando betadine, seguido por limpeza com um algodão embebido em álcool 70%. </li><li> Colocar o animal em uma plataforma cirúrgica com uma almofada de aquecimento por baixo. Definir o nível de aquecimento para manter uma temperatura corporal de 37-37,5 ° C. Monitorar a temperatura do corpo com uma sonda retal. A hipotermia pode resultar em bradicardia e hipertermia significativos resulta em taquicardia significativa. </li></ol></li></ol> 2. Ecocardiografia Nota: A descrição completa da ecocardiografia roedor é descrito em outros lugares 7. Para o mouse, antes da anestesia, as imagens podem ser obtidas na, animal contido manualmente acordado. Para o rato,anestesia antes da ecocardiografia é preferido como ratos são grandes demais para ser contido manualmente enquanto acordado). <ol><li> Paraesternal eixo longo (PLAX) View. <ol><li> Colocar o animal em decúbito dorsal sobre a plataforma ou restringi-lo manualmente. </li><li> Selecione Modo B para projetar uma imagem ao vivo 2D. </li><li> Alinhar o transdutor de ultra-som com uma frequência de 40 MHz para mouse ou 25 MHz para ratos para a linha paraesternal esquerda e gire o transdutor sentido anti-horário de 30 ° com o indicador de sonda apontando na direção caudal (5 a 11 horas posição de linha) . Ângulo do transdutor ligeiramente (de balanço ao longo do eixo curto do transdutor no mesmo plano tomográfico) para se obter uma vista completa da câmara LV no centro da tela. </li><li> Localizar e visualizar estas estruturas anatômicas (Figura 2A): o lúmen do ventrículo esquerdo (VE); septo interventricular (IVS); o lúmen do ventrículo direito (RV); aorta ascendente (AO); e átrio esquerdo (LA). </li> &lt;li&gt; Mudar para o modo M, uma vez que estas estruturas acima são claramente visualizados. Coloque a linha do indicador através da parte mais larga do lúmen do VE usando AO como ponto de referência e também fazer a mentira profundidade de foco no centro da LV Câmara (Figura 2B). Fazer medições similares da RV, alterando angulação do transdutor e obtenção de medidas do modo M. </li><li> Use loja de cine para criar um loop de vídeo para gravar os dados de medição off-line (dimensão câmara de LV, FS e espessura da parede). </li><li> Obter um traçado Doppler do fluxo de saída aórtico em PW modo de Doppler, colocando o cursor PW na aorta e a gravação (Figura 2C). </li></ol></li><li> -Esternal curto eixo Vista (PSAX) no nível da aorta. <ol><li> Alternar para o modo B. </li><li> Gire o transdutor de 90 ° no sentido horário a partir da vista eixo longo paraesternal para obter o ponto de vista paraesternal eixo menor (Figura 3). Mover e ângulo do transdutor em direção ao crânio para identify da válvula aórtica corte transversal. </li><li> Identificar a via de saída do ventrículo direito (VSVD) como uma estrutura em forma de meia-lua localizada no canto superior direito para a aorta, continuou com folhetos da válvula pulmonar e artéria pulmonar. </li><li> Manter estável na mesma posição manualmente. Mudar para PW modo Doppler. Nota: uma plataforma da estação para a realização do roedor e a sonda pode ser utilizado para minimizar a movimentação e variação na posição do transdutor. </li><li> Colocar o volume de amostra proximal ao nível da válvula pulmonar no centro da via de saída do ventrículo direito e, em seguida, posicionar o cursor paralelo à direcção do fluxo sanguíneo através do vaso (Figura 3B). Nota: É importante ajustar o ângulo de amostragem para a direcção do fluxo de sangue ou usar o software de ultra-som para corrigir uma alteração no ângulo. Sem correcção, o ângulo máximo para o recipiente é de 30 °, o que corresponde a ~ 15% subestimativa da velocidade. </li><li> AdjUst a escala (a velocidade do fluxo sanguíneo) conforme necessário para obter um &quot;bom&quot; envelope Doppler, que tem bordas brancas e um interior que indica o fluxo sanguíneo laminar oco escuro (Figura 3C). Grave o traçado Doppler. Nota: A &quot;má&quot; envelope Doppler não acomoda bordas brancas suficientes e um buraco escuro. </li><li> Se cateterismo não é realizada neste momento, permitir que o roedor a recuperar se foi utilizada anestesia. Não deixe o roedor autônoma até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter decúbito esternal e não devolvê-lo para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado. Se cateterismo é realizado, prossiga para a Secção 3. </li></ol></li></ol> 3. Direito cateterismo cardíaco <ol><li> abordagem fechado no peito para medição de pressão RV <ol><li> Configuração: <ol><li> Ligue o transdutor de pressão para o canal de entrada 1. No software, defina o canal 1 para pressão e eláel 2 para a frequência cardíaca. </li><li> Para converter unidades para mmHg, gravar o traço da linha de base, efectuar uma calibração de pressão manualmente utilizando um medidor de pressão (se estiver usando um transdutor de pressão arterial e tubos PE). Em seguida, executar a conversão de unidades sob o canal 1. </li><li> Para definir a frequência cardíaca, desligue a entrada do canal 2. Selecione medições cíclicas sob o canal 2 e escolha o canal 1 para fonte e taxa para a medição. </li></ol></li><li> Posicione o mouse / rato debaixo de um microscópio de dissecação com o foco em profundidade e uma ampliação de 5x. </li><li> Faça uma incisão na pele a partir da mandíbula para o esterno (Figura 1). Coloque um par de afastadores de cada lado da incisão para expor totalmente a área do colo do útero. </li><li> Bluntly dissecar para separar as glândulas salivares para expor a veia jugular externa direita usando uma pinça fina ponta romba (Figura 4A, B). </li><li> Cuidadosamente isolar a veia jugular externa direita a partir do tecido conjuntivo circundante. </li> &lt;li&gt; Coloque dois pedaços de fio de seda (4-0 para os ratos; 6-0 para ratos) por baixo da veia jugular externa direita, ligadura da veia para distal (mais próximo à mandíbula quanto possível), e depois amarrar um nó frouxo proximal ( A Figura 4C). </li><li> Use íris tesoura para fazer um pequeno (corte) proximal &quot;nick&quot; ao nó amarrado distal. </li><li> Segure o cateter com uma pinça e inserir o cateter na corte da veia, e depois apertar o nó proximal. Nota: normalmente Usamos polietileno (PE) -10 tubagem (~ 2 Pe tamanho) para ratinhos e PE-50 (~ 3 Pe tamanho) para ratos, o qual está ligado ao transdutor de pressão regular, através de uma agulha G 31, G ou 21 e calibrado. Marcar o cateter com um marcador em um comprimento que corresponde aproximadamente à colocação da ponta do ventrículo direito. Como uma alternativa ao tubo de PE, um cateter de micromanómetro pode ser usado. Puxando o nó distal pode ajudar a introduzir o cateter. </li><li> Empurre cuidadosamente o cateter no coração e o monitor direitoa profundidade de avanço de acordo com a marca. Monitorar o traçado da pressão no software para verificar a localização de cateter e identificar a pressão RV (Figura 5). </li><li> Mantenha o cateter imóvel e recolher os dados (dados de alternância de gravação ao lado do botão Iniciar) por 2 min. </li><li> Proceda da coleta da amostra (Seção 4). </li></ol></li><li> Abordagem Open-peito por RV PV Análise Loop. Nota: análise do lacete PV do ventrículo direito não pode ser realizada com uma abordagem de tórax fechado, devido à rigidez do cateter de condutância, que não passe a partir do VPC para a RA. Comercialmente cateteres condutância disponíveis são projetados para análise do lacete LV PV. <ol><li> No software definir o canal 1 para a condutância; Canal 2 da pressão; e Canal 3 para a frequência cardíaca. </li><li> Entubar os ratos com um tubo de 16 G Teflon e ligar o tubo de um ventilador mecânico. Calcular e definir os parâmetros de ventilação para camundongos ou ratos usando o following fórmulas 6: volume corrente (V t, ml) = 6,2 x M 1,01 (massa M = animal, kg); taxa de respiração (RR, min -1) = 53,5 x M -0.26 (Figura 6A). </li><li> Espalhe álcool a 70% para a pele para reduzir a propagação da pele para o campo cirúrgico. </li><li> Faça uma incisão abaixo do processo xifóide e bilateralmente dissecar a pele com uma tesoura em direção ao flanco. </li><li> Cortar através da parede abdominal e abrir a cavidade abdominal por dissecação bilateral ao longo do diafragma. </li><li> Abra o diafragma para expor a ponta do coração e bilateralmente cortar a caixa torácica (Figura 6A). Evitar a evaporação e secagem por pulverização salina tecido dentro das cavidades torácica e peritoneais utilizando uma seringa. Nota: Normalmente, usamos uma tesoura de dissecção para abrir a cavidade e costela abdominal gaiola. O sangramento geralmente não é significativa, mas se houver sangramento, eletrocautério pode ser usado. </li><li> th cuidadosamente isoladoe veia cava inferior (IVC) a partir do tecido conjuntivo circundante. </li><li> Coloque um pedaço de fio de seda (4-0 para os ratos; 6-0 para ratos) em torno do IVC, e depois amarrar um nó frouxo (ou passe a sutura através de um tubo 16 G Teflon) (Figura 6B). </li><li> Perfurar a parede livre do VD apical com uma agulha de calibre 27-30 paralela à parede livre do VD e remover a agulha. Tenha cuidado para não empurrar a agulha em mais de 4 mm. Nota: Em alternativa, uma pequena peça de tubagem PE-60 pode ser utilizado para guiar a punção do cateter de condutância para o ápice do VD. </li><li> Insira a ponta da condutância cateter através da facada ferida na parede livre do VD apical até que todos os eletrodos estão dentro do ventrículo (Figura 6C). </li><li> Monitorar o ciclo de volume pressão no software e, em seguida, ajuste a posição do cateter para obter alças em forma consistente que não demonstram a variação respiratória significativa (Figura 7B, C). </li><li> Registrobaseline PV laços (dados de alternância de gravação ao lado do botão Iniciar) durante pelo menos 10 segundos para obter um número de PV laços. </li><li> Puxe a sutura colocada ao redor do IVC para alterar as pré-cargas e gravar os loops PV. Analisar os dados off-line e obter vários parâmetros de função sistólica do VD (Figura 7D). Esta análise foi previamente descrita 8. Nota: IVC pode, alternativamente, ser obstruída por fórceps. Monitorar o traçado da pressão RV para confirmar a redução da pré-carga. </li><li> Realizar salina e cuvete calibrações como anteriormente descrito para permitir a conversão de unidades de condutância em unidades de volume 6. </li><li> Depois de gravar os dados, puxe o cateter para fora e coloque a ponta do cateter imediatamente em um banho de água com solução salina. Ao terminar, limpe o cateter de acordo com as instruções do fabricante. </li></ol></li></ol> 4. Recolha de coração e pulmão Amostras Observação: Como os procedimentos aqui umre descrito como terminal, o animal deve ser sacrificado após uma fechada ou de tórax aberto coração direito cateterismo. <ol><li> Eutanásia os ratos, abrindo o tórax (toracotomia bilateral) se foi utilizada uma abordagem de tórax fechado, Exsanguinação, ou desligando o ventilador após a overdose do anestésico. Nota: Deslocação cervical não é recomendado. </li><li> Para realizar perfusão inflação do pulmão, ligar o tubo de inflação para um ringstand definido para inflar os pulmões a uma pressão de 20 cm H 2 O (mas não abra a válvula ainda para inflar os pulmões). </li><li> Sem rodeios dissecar a traqueia de circundante músculo e tecido conjuntivo. </li><li> Coloque um pedaço de fio de seda (4-0 para os ratos; 6-0 para ratos) em torno da traqueia, e depois amarrar um nó frouxo. </li><li> Delicadamente esticar a traqueia, pressionando a cabeça e fazer um corte (70% da circunferência) perto da mandíbula. </li><li> Mantenha o alongamento suave e inserir a cânula traqueal (20 G para ratos ou 16 G para ratos).Segurar a cânula usando o fio de sutura. Conectar-se a cânula no tubo de inflação e amarrar a sutura ao redor da cânula para impedir o refluxo de fixadores. </li><li> Lave os pulmões com PBS usando uma seringa de 10 ml para apunhalar parede livre do VD e injetar em direção à artéria pulmonar. Nick átrio esquerdo uma vez que os pulmões começam a branquear. </li><li> Colher o coração, cortando na raiz da aorta. </li><li> Prender o lobo inferior direito do pulmão usando uma pinça hemostática mosquito e cortar o lobo inferior direito. Coloque os pedaços em microtubos e encaixe congelamento em nitrogênio líquido. </li><li> Inflar o pulmão com 10% de formalina tamponada neutra por 5 min e remover a cânula de traqueia seguida por ligação da traqueia. </li><li> Dissecar o pulmão para fora do tórax e corrigir com 10% de formalina tamponada neutra. Nota: Em alternativa, inflar o pulmão com os meios de corte óptima (OCT, diluída 1: 1 com PBS) e congelar em OCT não diluída para uma preparação mais tarde de secções congeladas. </li><li> Cuidadosamenteseparar os átrios dos ventrículos e isolar a parede livre do ventrículo direito dissecando ao lado do septo interventricular. </li><li> Pesar a RV e LV + septo (LV + S) para calcular um índice de Fulton (RV / LV + S) 9, que quantifica o grau de hipertrofia do VD. Nota: TheFulton índice varia em diferentes modelos de PH. Rat 10: controle, 0,28 ± 0,01; induzida por hipoxia, 0,57 ± 0,02; tratados com MCT, 0,51 ± 0,03. Rato C57BL6 / J 11: controle, 0,26 ± 0,01; SuHx (14 dias), 0,40 ± 0,02; SuHx (21 dias), 0,43 ± 0,01; SuHx (28 dias), 0,44 ± 0,03. </li><li> Snap congelar a RV e LV + S em nitrogênio líquido ou fixar em 10% de formalina tamponada neutra. </li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Os protocolos descritos aqui descrevem uma caracterização abrangente da hemodinâmica e da função ventricular direita em modelos de hipertensão pulmonar em roedores. Embora o cateterismo cardíaco direito, conforme descrito aqui, seja um procedimento terminal, a mortalidade associada à ecocardiografia é mínima, o que permite a triagem e o acompanhamento da progressão da doença. No entanto, semelhante aos pacientes com HP que aumentaram acentuadamente a mortalidade com anestesia17, em nossa experiência, ratos com...

A hipertensão arterial pulmonar (HAP) é uma doença da vasculatura pulmonar associada a infiltração de células inflamatórias, a proliferação do músculo liso e a apoptose de células endoteliais. Estas alterações resultam em obliteração das arteríolas pulmonares, posteriormente, levando à ventrículo direito (RV) disfunção e insuficiência cardíaca. A fim de compreender a fisiopatologia subjacente PAH e falência do VD na HAP, um número de diferentes modelos, incluindo modelos genéticos e farmacológicos, para estudar esta doença têm sido desenvolvidos (revisto em outros lugares 1,2). Destes modelos, os mais populares são (Hx) HAP induzida por hipoxia no mouse ea monocrotalina (MCT) e modelos SU5416-hipoxia (SuHx) no rato. No modelo de rato Hx, os ratinhos são expostos a 4 semanas de hipóxia (quer normobáricas ou hipobárica, o que corresponde a uma altitude de 18.000 pés com uma FiO2 de 0,10), com o desenvolvimento resultante de proliferação medial, o aumento da RV Systpressões Olic e o desenvolvimento de hipertrofia do VD 3. MCT numa dose única de 60 mg / kg resulta em lesão para as células endoteliais pulmonares através de um mecanismo claro que, em seguida, resulta no desenvolvimento de HAP 4. SU5416 é um inibidor dos receptores vasculares factor de crescimento endotelial (VEGFR) 1 e 2 bloqueador, e o tratamento com uma única injecção subcutânea de 60 mg / kg, seguida de exposição a hipoxia crónica durante 3 semanas resulta em hipertensão pulmonar permanente com alterações patológicas similares à observada na doença humana, com a formação de lesões vasculares obliterante 5. Nos últimos anos, diversos modelos de ratinho transgénicos para a hipertensão pulmonar tem sido desenvolvido. Estes incluem nocaute e mutações do receptor de proteína morfogenética óssea 2 (BMPR2), como mutações genéticas BMPR2 são encontrados em ambas as formas familiares e idiopática da HAP, heme oxigenase-1 nocaute e IL-6 superexpressão (revisto em outros lugares 1,2). Estes modelos de roedores diferentes de PH têm diferentes níveis de hipertensão pulmonar, hipertrofia RV e falência do VD. Enquanto a hipóxia e vários modelos de camundongos transgênicos resultar em PAH muito mais suave do que a qualquer modelo de rato 1, permite que testes de diferentes mutações genéticas e suas vias de sinalização molecular associados. O modelo MCT não resultar na HAP grave, embora MCT parece ser tóxico para as células endoteliais em diversos tecidos 4. O modelo SuHx é caracterizada por alterações vasculares mais semelhante ao observado em HAP idiopática em seres humanos, embora tanto a exposição requer manipulação e hipóxia farmacológico. Além disso, em todos estes modelos, pode haver uma separação entre as alterações histopatológicas, as pressões pulmonares e função do VD associados com o desenvolvimento de hipertensão arterial pulmonar. Isto está em contraste com a doença humana, onde há normalmente uma relação proporcional entre as alterações histopatológicas, a gravidade da pulmonhipertensão ary e do grau de falência do VD. Assim, uma caracterização detalhada destes modelos de roedores de PH é necessária, e envolve avaliações da função RV (tipicamente por ecocardiografia), hemodinâmica (por cateterismo cardíaco) e histopatologia do coração e pulmões (de colheita de tecidos). Neste protocolo, descrevemos as técnicas básicas usadas para a caracterização hemodinâmica de modelos de HAP no rato e do rato. Estas técnicas gerais pode ser aplicado a qualquer estudo do ventrículo direito e vasculatura pulmonar e não está limitado aos modelos de HAP. Visualizando o RV por ecocardiografia é relativamente simples em ratos, mas é mais desafiador em camundongos devido ao seu tamanho e da geometria complexa da RV. Além disso, alguns substitutos utilizados para quantificar a função do VD, como TAPSE, artéria pulmonar (AP) tempo de aceleração e PA Doppler onda chan, não são bem validadas em humanos e correlacionar apenas fracamente com a avaliação de puhipertensão lmonary e função RV por hemodinâmica invasiva. Determinação dos hemodinâmica RV é o melhor feito com um de tórax fechado, para manter os efeitos de uma pressão negativa intratorácica com a inspiração, embora cateterismo peito aberto com um cateter de impedância permite a determinação da pressão-volume (PV) loops e uma caracterização hemodinâmica mais detalhada . Como com qualquer procedimento, desenvolver a experiência com os procedimentos é fundamental para o sucesso experimental.

<table><tbody><tr><td>Sistema de Imagem Vevo 2100 (120V)&nbsp;</td><td>VisualSonics, inc.&nbsp;</td><td>Estação de Imagem VS-11945</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100</td><td>VisualSonics, inc.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transdutores Mecânicos de Alta Frequência</td><td>VisualSonics, inc.&nbsp;</td><td>MS250, MS550D, MS400</td><td></td></tr><tr><td>Gel de Ultrassom Parker&nbsp;</td><td>Laboratories Inc.&nbsp;</td><td>01-08</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 4/35</td><td>ADInstruments</td><td>ML765</td><td></td></tr><tr><td>Labchart 8</td><td>ADInstruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BP transdutor com torneira e cabo</td><td>ADInstruments</td><td>MLT1199</td><td></td></tr><tr><td>kit de calibração de transdutor BP</td><td>ADInstruments</td><td>MLA1052</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Tip Pressure Catheter para mouse</td><td>Millar</td><td>SPR-1000</td><td>Cateter alternativo disponível na Scisense FT111B (camundongo) e FT211B (rato)</td></tr><tr><td>Cateter de pressão Mikro-Tip para rato</td><td>Millar</td><td>SPR-513</td><td>Cateter alternativo disponível na Scisense FT111B (camundongo) e FT211B (rato)</td></tr><tr><td>Millar Mikro-Tip&nbsp; cateter de loop PV ultra-miniatura para camundongos</td><td>Millar</td><td>PVR-1035</td><td>Cateter alternativo disponível na Scisense FT112 (mouse)</td></tr><tr><td>Cateter de loop PV ultra miniatura Millar Mikro-Tip para ratos</td><td>Millar</td><td>SPR-869</td><td>Cateter alternativo disponível na Scisense FT112 (mouse)</td></tr><tr><td>Sistema PV Millar MPVS-300&nbsp;</td><td>Millar</td><td>MPVS-300</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Trança de Seda Preta Carretel de 100 Jardas</td><td>Roboz Surgical</td><td>SUT-15-2</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Trança de Seda Preta Carretel de 100 Jardas</td><td>Roboz Surgical</td><td>SUT-14-1</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Iris, Delicada, Integra Miltex</td><td>VWR</td><td>21909-248</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Dissecação VWR, Ponta Afiada/Romba</td><td>VWR</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>VWR Tesoura Delicada, 4 1/2"</td><td>VWR</td><td>82027-582</td><td></td></tr><tr><td>Hemostatos de duas estrelas, Excelta</td><td>VWR</td><td>63042-090</td><td></td></tr><tr><td>Formalina tamponada neutra</td><td>VWR</td><td>89370-094</td><td></td></tr><tr><td>Crotaline</td><td>Sigma</td><td>C2401</td><td></td></tr><tr><td>SU5416</td><td>Tocris Biosciences</td><td>3037</td><td></td></tr><tr><td>3.5X-45X Boom Stand Trinocular Zoom Stereo Microscope&nbsp;</td><td>AmScope</td><td>SM-3BX</td><td></td></tr><tr><td>PE (Tubo de Polietileno)-10</td><td>Braintree Scientific Inc</td><td>PE10 36 FT</td><td></td></tr><tr><td>PE (Tubo de Polietileno)-50</td><td>Braintree Scientific Inc</td><td>PE50 36 FT</td><td></td></tr><tr><td>PE (Tubo de Polietileno)-60</td><td>Braintree Scientific Inc</td><td>PE60 36 FT</td><td></td></tr><tr><td>Unidade de Anestesia de Isoflurano de Mesa</td><td>Kent Scientific</td><td>ACV-1205S</td><td></td></tr><tr><td>Plataforma cirúrgica multifuncional Surgisuite</td><td>Kent Scientific</td><td>Surgisuite</td><td></td></tr><tr><td>Retractor set</td><td>Kent Scientific</td><td>SURGI-5002</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de indução de anestesia</td><td>VetEquip</td><td>941443</td><td></td></tr><tr><td>Anestesia Recipiente do filtro de gás</td><td>Kent Scientific</td><td>ACV-2001</td><td></td></tr><tr><td>Cone de nariz de roedor</td><td>VetEquip</td><td>921431</td><td></td></tr></tbody></table>

hemodinâmica caracterização de roedores modelos de hipertensão arterial pulmonar

Hemodynamic Characterization of Rodent Models of Pulmonary Arterial Hypertension

A hipertensão arterial pulmonar (HAP) é uma doença rara da vasculatura pulmonar caracterizada por apoptose de células endoteliais, proliferação de músculo liso e obliteração das arteríolas pulmonares. Isso, por sua vez, resulta em insuficiência ventricular direita (VD), com morbidade e mortalidade significativas. Modelos de HAP em roedores, no camundongo e no rato, são importantes para a compreensão da fisiopatologia subjacente a essa doença rara. Notavelmente, diferentes modelos de HAP podem estar associados a diferentes graus de hipertensão pulmonar, hipertrofia do VD e insuficiência do VD. Portanto, uma caracterização hemodinâmica completa de camundongos e ratos com HAP é fundamental para determinar os efeitos de drogas ou modificações genéticas sobre a doença. 
Aqui demonstramos procedimentos padrão para avaliação da função ventricular direita e hemodinâmica em modelos de HAP em ratos e camundongos. A ecocardiografia é útil para determinar a função do VD em ratos, embora a obtenção de visualizações padrão do ventrículo direito seja um desafio no camundongo acordado. O acesso para cateterismo cardíaco direito é obtido pela veia jugular interna em camundongos e ratos de tórax fechado. As pressões podem ser medidas usando tubos de polietileno com um transdutor de pressão de fluido ou um cateter de pressão de micromanômetro em miniatura. A análise do loop pressão-volume pode ser realizada no tórax aberto. Após a obtenção da hemodinâmica, o roedor é sacrificado. O coração pode ser dissecado para separar a parede livre do VD do ventrículo esquerdo (VE) e do septo, permitindo uma avaliação da hipertrofia do VD pelo índice de Fulton (VD/(VE+S)). Em seguida, as amostras podem ser colhidas do coração, pulmões e outros tecidos, conforme necessário.

Como cateterismo cardíaco direito em roedores é tipicamente um procedimento terminal que não é aplicável ao acompanhamento longitudinal, a ecocardiografia é uma excelente alternativa não invasiva para o rastreio e seguimento 12. Enquanto a pressão sistólica da artéria pulmonar em PAH humana no ecocardiograma geralmente é derivada de insuficiência tricúspide que normalmente é fácil de ser obtido na vista apical, tal visão não é obtido de forma confiável em roedores, impedindo que a estimativa da pressão sistól...

A hipertensão arterial pulmonar (HAP) é uma doença das arteríolas pulmonares que leva à sua obliteração e ao desenvolvimento de insuficiência ventricular direita. Modelos de HAP em roedores são essenciais para a compreensão da fisiopatologia da HAP. Aqui demonstramos a caracterização hemodinâmica, com cateterismo cardíaco direito e ecocardiografia, em camundongos e ratos.

Hemodinâmica Caracterização de roedores modelos de Hipertensão Arterial Pulmonar

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a rare disease of the pulmonary vasculature characterized by endothelial cell apoptosis, smooth muscle ...

O objetivo geral da ecocardiografia e da cateterização do lado direito do coração em roedores é determinar a função do coração direito em diversos modelos de doenças cardíacas e pulmonares. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na pesquisa de fisiologia cardiovascular, como, quais são os efeitos de manipulações genéticas ou de drogas sobre o desenvolvimento da hipertensão pulmonar? A principal vantagem desta técnica é que ela fornece uma análise abrangente da função do coração direito nesses modelos de doenças cardíacas e pulmonares.Para visualizar o eixo longo parasternal do coração de um roedor, comece posicionando um roedor anestesiado em posição supina. Confirme o nível apropriado de sedação mediante compressão dos dedos dos pés e aplique pomada veterinária nos olhos do animal. Em seguida, depile o tórax e aplique gel ultrassonográfico.Selecione o Modo B para projetar uma imagem viva 2D. Em seguida, alinhe um transdutor de ultrassom com a frequência apropriada à linha paraesternal esquerda. Gire o transdutor no sentido anti-horário em 30 graus, com o indicador da sonda apontando na direção caudal.Em seguida, incline levemente o transdutor, movendo o instrum

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Um protocolo específico e rápido para pesquisar, simultaneamente, a função cardíaca direita, inflamação pulmonar, e da resposta imunológica é descrito como uma ferramenta de aprendizagem. Vídeo e figuras descrevem fisiologia e técnicas de microdissecção em um grupo organizado abordagem, que é adaptável a ser utilizado para as pequenas e grandes estudos porte.

Sistólica do ventrículo direito Medição de Pressão em combinação com colheita de amostras de tecido pulmonar e imunológica em ratos

Este artigo fornece um protocolo para a avaliação ecocardiográfica do tamanho do ventrículo direito e hipertensão pulmonar em camundongos. As aplicações incluem a determinação do fenótipo e avaliação de série em modelos de ratos transgênicos e induzida por toxinas de miocardiopatia e doença vascular pulmonar.

Avaliação ecocardiográfica do coração direito em Ratos

Este protocolo descreve um procedimento cirúrgico para criar um modelo de hipertensão arterial pulmonar (HAP) induzida por fluxo em ratos e os procedimentos para analisar os principais desfechos hemodinâmicos e histológicos neste modelo.

A cirurgia de derivação, coração direito Cateterismo e Vascular morfometria em um modelo de rato para induzida Fluxo de Hipertensão Arterial Pulmonar

Aqui descrevemos um protocolo detalhado para medição invasiva dos parâmetros hemodinâmicos, incluindo pressão portal, fluxo sanguíneo esplâncnico e hemodinâmica sistêmica para caracterizar a síndrome de hipertensão portal em ratos.

Caracterização hemodinâmica invasiva da síndrome hipertensiva-Portal em ratos cirrose

Este protocolo descreve a indução da hipertensão pulmonar (PH) em camundongos com base na exposição à hipóxia e na injeção de um antagonista receptor VEGF. Os animais desenvolvem hipertrofia ph e ventricular direita (RV) 3 semanas após o início do protocolo. A caracterização funcional e morfométrica do modelo também é apresentada.

Indução e Caracterização da Hipertensão Pulmonar em Camundongos usando o Modelo De Hypoxia/SU5416

Aqui, apresentamos um protocolo para realizar uma avaliação hemodinâmica invasiva do ventrículo direito e artéria pulmonar em camundongos usando uma abordagem de cirurgia de caixa aberta.

Avaliação Hemodinâmica Invasiva para o Sistema Ventricular Direito e hipertensão arterial pulmonar induzida por hipóxia em camundongos

O presente protocolo descreve a caracterização ecocardiográfica da morfologia e função do ventrículo direito em um modelo de hipertensão arterial pulmonar em ratos.

Avaliação Ecocardiográfica Abrangente da Função do Ventrículo Direito em Modelo de Hipertensão Arterial Pulmonar em Rato

Este protocolo fornece um procedimento passo-a-passo para a execução da administração de múltiplas doses intravenosas em bolus e monitorização hemodinâmica invasiva em camundongos. Os investigadores podem usar esse protocolo para futura triagem terapêutica de compostos para hipertensão arterial pulmonar.

Dosagem Múltipla em Bolus Intravenoso e Avaliação Hemodinâmica Invasiva em Modelo de Hipertensão Arterial Pulmonar em Camundongos Induzida por Hipóxia

Descrevemos um modelo murino de sobrecarga de pressão do ventrículo direito induzida por bandagem do tronco pulmonar. Protocolos detalhados para intubação, cirurgia e fenotipagem por ecocardiografia estão incluídos no artigo. Instrumentos feitos sob medida são usados para intubação e cirurgia, permitindo uma reprodução rápida e barata do modelo.

Um modelo murino de hipertrofia ventricular direita induzida por sobrecarga de pressão e falha por bandagem do tronco pulmonar

Aqui, é introduzido o método de indução de hipertensão arterial pulmonar associada à fibrose pulmonar (FP-HP) modelo de rato por meio da injeção de bleomicina nas vias aéreas. Também fornecemos uma abordagem passo a passo para validar esse modelo animal.

Estabelecimento e Validação de um Modelo de Rato de Hipertensão Arterial Pulmonar Associada à Fibrose Pulmonar

A apresentação de métodos detalhados para a avaliação da função do ventrículo direito aumentará a qualidade e a confiabilidade da pesquisa sobre hipertensão pulmonar, oferecendo uma estrutura robusta para estudos futuros e aumentando a reprodutibilidade em diferentes laboratórios.

Avaliação da Função Ventricular Direita em Modelos Experimentais de Hipertensão Arterial Pulmonar

Aprenda a caracterizar hemodinamicamente modelos de roedores com hipertensão arterial pulmonar usando ecocardiografia e cateterização cardíaca direita. Este método permite analisar a função ventricular direita em doenças cardiopulmonares.

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