Name: Bacteriana Folha Infiltração Ensaio para Belas Caracterização das respostas de defesa da planta usando o Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Patossistema (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 50 s
Description: Aprenda a caracterizar respostas imunes em Arabidopsis thaliana usando o ensaio de infiltração foliar com Pseudomonas syringae. Este método otimizado permite quantificar com precisão o crescimento bacteriano e avaliar mecanismos de defesa vegetal.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos ao Dr. Shahid Mukhtar por criticar o manuscrito e ao Dr. Xinnian Dong pelo arquivo de análise de dados de amostra. Este trabalho é apoiado por um prêmio NSF-CAREER (IOS-1350244) para a KPM e o Departamento de Biologia da UAB.

<ol><li>Glazebrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+mechanisms+of+defense+against+biotrophic+and+necrotrophic+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Phytopathol%22%5BJournal%5D)">Contrasting mechanisms of defense against biotrophic and necrotrophic pathogens.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 43, 205-227 (2005).</li>
<li>Hammond-Kosack, K. E., Jones, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+disease+resistance+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Plant disease resistance genes.</a> Annual review of plant biolog. 48, 575-607 (1997).</li>
<li>Pontier, D., Balague, C., Roby, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypersensitive+response.+A+programmed+cell+death+associated+with+plant+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+II%22%5BJournal%5D)">The hypersensitive response. A programmed cell death associated with plant resistance.</a> C R Acad Sci II. 321, 721-734 (1998).</li>
<li>Ryals, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Acquired+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Systemic Acquired Resistance.</a> Plant Cel. 8, 1809-1819 (1996).</li>
<li>Jones, J. D., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">The plant immune system.</a> Natur. 444, 323-329 (2006).</li>
<li>Newman, M. A., Sundelin, T., Nielsen, J. T., Erbs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAMP+%28microbe-associated+molecular+pattern%29+triggered+immunity+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sc%22%5BJournal%5D)">MAMP (microbe-associated molecular pattern) triggered immunity in plants.</a> Front Plant Sc. 4, 139(2013).</li>
<li>Fritig, B., Heitz, T., Legrand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+proteins+in+induced+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial proteins in induced plant defense.</a> Curr Opin Immuno. 10, 16-22 (1998).</li>
<li>Nicaise, V., Roux, M., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+PAMP-triggered+immunity+against+bacteria%3A+pattern+recognition+receptors+watch+over+and+raise+the+alarm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physio%22%5BJournal%5D)">Recent advances in PAMP-triggered immunity against bacteria: pattern recognition receptors watch over and raise the alarm.</a> Plant Physio. 150, 1638-1647 (2009).</li>
<li>Zipfel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+disease+resistance+in+Arabidopsis+through+flagellin+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Bacterial disease resistance in Arabidopsis through flagellin perception.</a> Natur. 428, 764-767 (2004).</li>
<li>Kunze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+N+terminus+of+bacterial+elongation+factor+Tu+elicits+innate+immunity+in+Arabidopsis+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">The N terminus of bacterial elongation factor Tu elicits innate immunity in Arabidopsis plants.</a> Plant Cel. 16, 3496-3507 (2004).</li>
<li>Gust, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria-derived+peptidoglycans+constitute+pathogen-associated+molecular+patterns+triggering+innate+immunity+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Che%22%5BJournal%5D)">Bacteria-derived peptidoglycans constitute pathogen-associated molecular patterns triggering innate immunity in Arabidopsis.</a> J Biol Che. 282, 32338-32348 (2007).</li>
<li>Alfano, J. R., Collmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+III+secretion+system+effector+proteins%3A+double+agents+in+bacterial+disease+and+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Type III secretion system effector proteins: double agents in bacterial disease and plant defense.</a> Annu Rev Phytopatho. 42, 385-414 (2004).</li>
<li>Tyler, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entering+and+breaking%3A+virulence+effector+proteins+of+oomycete+plant+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbio%22%5BJournal%5D)">Entering and breaking: virulence effector proteins of oomycete plant pathogens.</a> Cell Microbio. 11, 13-20 (2009).</li>
<li>He, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+bacterial+suppressors+of+MAMP+signaling+upstream+of+MAPKKK+in+Arabidopsis+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Specific bacterial suppressors of MAMP signaling upstream of MAPKKK in Arabidopsis innate immunity.</a> Cel. 125, 563-575 (2006).</li>
<li>Gimenez-Ibanez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AvrPtoB+targets+the+LysM+receptor+kinase+CERK1+to+promote+bacterial+virulence+on+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">AvrPtoB targets the LysM receptor kinase CERK1 to promote bacterial virulence on plants.</a> Curr Bio. 19, 423-429 (2009).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+PAMP-induced+MAP+kinase+cascade+by+a+Pseudomonas+syringae+effector+activates+plant+immunity+mediated+by+the+NB-LRR+protein+SUMM2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Disruption of PAMP-induced MAP kinase cascade by a Pseudomonas syringae effector activates plant immunity mediated by the NB-LRR protein SUMM2.</a> Cell Host Microb. 11, 253-263 (2012).</li>
<li>Chisholm, S. T., Coaker, G., Day, B., Staskawicz, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions%3A+shaping+the+evolution+of+the+plant+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions: shaping the evolution of the plant immune response.</a> Cel. 124, 803-814 (2006).</li>
<li>Jones, D. A., Takemoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+innate+immunity+-+direct+and+indirect+recognition+of+general+and+specific+pathogen-associated+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Plant innate immunity - direct and indirect recognition of general and specific pathogen-associated molecules.</a> Curr Opin Immuno. 16, 48-62 (2004).</li>
<li>Elmore, J. M., Lin, Z. J., Coaker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+NB-LRR+signaling%3A+upstreams+and+downstreams%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Plant NB-LRR signaling: upstreams and downstreams.</a> Curr Opin Plant Bio. 14, 365-371 (2011).</li>
<li>Gassmann, W., Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector-triggered+immunity+signaling%3A+from+gene-for-gene+pathways+to+protein-protein+interaction+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Microbe+Interac%22%5BJournal%5D)">Effector-triggered immunity signaling: from gene-for-gene pathways to protein-protein interaction networks.</a> Mol Plant Microbe Interac. 25, 862-868 (2012).</li>
<li>Wang, D., Weaver, N. D., Kesarwani, M., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+protein+secretory+pathway+is+required+for+systemic+acquired+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">Induction of protein secretory pathway is required for systemic acquired resistance.</a> Scienc. 308, 1036-1040 (2005).</li>
<li>Bednarek, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+warfare+or+modulators+of+defence+responses+-+the+function+of+secondary+metabolites+in+plant+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Chemical warfare or modulators of defence responses - the function of secondary metabolites in plant immunity.</a> Curr Opin Plant Bio. 15, 407-414 (2012).</li>
<li>Heath, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypersensitive+response-related+death%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol+Bio%22%5BJournal%5D)">Hypersensitive response-related death.</a> Plant Mol Bio. 44, 321-334 (2000).</li>
<li>Fu, Z. Q., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+acquired+resistance%3A+turning+local+infection+into+global+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Systemic acquired resistance: turning local infection into global defense.</a> Annu Rev Plant Bio. 64, 839-863 (2013).</li>
<li>Cao, H., Glazebrook, J., Clarke, J. D., Volko, S., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+gene+that+controls+systemic+acquired+resistance+encodes+a+novel+protein+containing+ankyrin+repeats%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 gene that controls systemic acquired resistance encodes a novel protein containing ankyrin repeats.</a> Cel. 88, 57-63 (1997).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+protein+is+a+receptor+for+the+plant+defense+hormone+salicylic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Re%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 protein is a receptor for the plant defense hormone salicylic acid.</a> Cell Re. 1, 639-647 (2012).</li>
<li>Smith, J. M., Heese, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+bioassay+to+measure+early+reactive+oxygen+species+production+in+Arabidopsis+leave+tissue+in+response+to+living+Pseudomonas+syringae%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Rapid bioassay to measure early reactive oxygen species production in Arabidopsis leave tissue in response to living Pseudomonas syringae.</a> Plant Method. 10, 6(2014).</li>
<li>Nomura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bacterial+virulence+protein+suppresses+host+innate+immunity+to+cause+plant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">A bacterial virulence protein suppresses host innate immunity to cause plant disease.</a> Scienc. 313, 220-223 (2006).</li>
<li>Katagiri, F., Thilmony, R., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+thaliana-Pseudomonas+syringae+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22The+Arabidopsis+book%2FAmerican+Society+of+Plant+Biologist%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae interaction.</a> The Arabidopsis book/American Society of Plant Biologist. 1, (2002).</li>
<li>Sawada, H., Suzuki, F., Matsuda, I., Saitou, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+analysis+of+Pseudomonas+syringae+pathovars+suggests+the+horizontal+gene+transfer+of+argK+and+the+evolutionary+stability+of+hrp+gene+cluster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Evo%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic analysis of Pseudomonas syringae pathovars suggests the horizontal gene transfer of argK and the evolutionary stability of hrp gene cluster.</a> J Mol Evo. 49, 627-644 (1999).</li>
<li>Xin, X. F., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+DC3000%3A+a+model+pathogen+for+probing+disease+susceptibility+and+hormone+signaling+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000: a model pathogen for probing disease susceptibility and hormone signaling in plants.</a> Annu Rev Phytopatho. 51, 473-498 (2013).</li>
<li>Dong, X., Mindrinos, M., Davis, K. R., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Arabidopsis+defense+genes+by+virulent+and+avirulent+Pseudomonas+syringae+strains+and+by+a+cloned+avirulence+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Induction of Arabidopsis defense genes by virulent and avirulent Pseudomonas syringae strains and by a cloned avirulence gene.</a> Plant Cel. 3, 61-72 (1991).</li>
<li>Mackey, D., Holt 3rd, B. F., Wiig, A., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RIN4+interacts+with+Pseudomonas+syringae+type+III+effector+molecules+and+is+required+for+RPM1-mediated+resistance+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">RIN4 interacts with Pseudomonas syringae type III effector molecules and is required for RPM1-mediated resistance in Arabidopsis.</a> Cel. 108, 743-754 (2002).</li>
<li>Tornero, P., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high%E2%80%90throughput+method+for+quantifying+growth+of+phytopathogenic+bacteria+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journa%22%5BJournal%5D)">A high‐throughput method for quantifying growth of phytopathogenic bacteria in Arabidopsis thaliana.</a> The Plant Journa. 28, 475-481 (2001).</li>
<li>Ishiga, Y., Ishiga, T., Uppalapati, S. R., Mysore, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+seedling+flood-inoculation+technique%3A+a+rapid+and+reliable+assay+for+studying+plant-bacterial+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis seedling flood-inoculation technique: a rapid and reliable assay for studying plant-bacterial interactions.</a> Plant Method. 7, 32(2011).</li>
<li>Zheng, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronatine+promotes+Pseudomonas+syringae+virulence+in+plants+by+activating+a+signaling+cascade+that+inhibits+salicylic+acid+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Coronatine promotes Pseudomonas syringae virulence in plants by activating a signaling cascade that inhibits salicylic acid accumulation.</a> Cell Host Microb. 11, 587-596 (2012).</li>
<li>Pajerowska-Mukhtar, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HSF-like+transcription+factor+TBF1+is+a+major+molecular+switch+for+plant+growth-to-defense+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">The HSF-like transcription factor TBF1 is a major molecular switch for plant growth-to-defense transition.</a> Curr Bio. 22, 103-112 (2012).</li>
<li>Rusterucci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+resistance+to+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+is+associated+with+the+transition+to+flowering+in+Arabidopsis+and+is+effective+against+Peronospora+parasitica%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+and+molecular+plant+patholog%22%5BJournal%5D)">Age-related resistance to Pseudomonas syringae pv. tomato is associated with the transition to flowering in Arabidopsis and is effective against Peronospora parasitica.</a> Physiological and molecular plant patholog. 66, 222-231 (2005).</li>
<li>Boyes, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+stage%E2%80%93based+phenotypic+analysis+of+Arabidopsis+a+model+for+high+throughput+functional+genomics+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Growth stage–based phenotypic analysis of Arabidopsis a model for high throughput functional genomics in plants.</a> The Plant Cell Onlin. 13, 1499-1510 (2001).</li>
<li>Regna, P. P., Wasselle, L. A., Solomons, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stability+of+streptomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistr%22%5BJournal%5D)">The stability of streptomycin.</a> Journal of Biological Chemistr. 165, 631-638 (1946).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+plant+immune+responses+by+a+central+circadian+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Timing of plant immune responses by a central circadian regulator.</a> Natur. 470, 110-114 (2011).</li>
<li>Hua, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+plant+immunity+by+light%2C+circadian+rhythm%2C+and+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Modulation of plant immunity by light, circadian rhythm, and temperature.</a> Current opinion in plant biolog. 16, 406-413 (2013).</li>
<li>Cuppels, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+by+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbio%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis by Pseudomonas syringae pv. tomato.</a> Appl Environ Microbio. 54, 629-632 (1988).</li>
<li>Qutob, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytotoxicity+and+innate+immune+responses+induced+by+Nep1-like+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Phytotoxicity and innate immune responses induced by Nep1-like proteins.</a> The Plant Cell Onlin. 18, 3721-3744 (2006).</li>
<li>Pimentel, D., Lach, L., Zuniga, R., Morrison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+economic+costs+of+nonindigenous+species+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22BioScienc%22%5BJournal%5D)">Environmental and economic costs of nonindigenous species in the United States.</a> BioScienc. 50, 53-65 (2000).</li>
<li>Zeng, W., Melotto, M., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+stomata%3A+a+checkpoint+of+host+immunity+and+pathogen+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+biotechnolog%22%5BJournal%5D)">Plant stomata: a checkpoint of host immunity and pathogen virulence.</a> Current opinion in biotechnolog. 21, 599-603 (2010).</li>
<li>Ton, J., Flors, V., Mauch-Mani, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifaceted+role+of+ABA+in+disease+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+plant+scienc%22%5BJournal%5D)">The multifaceted role of ABA in disease resistance.</a> Trends in plant scienc. 14, 310-317 (2009).</li>
<li>Mahajan, S., Tuteja, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cold+salinity+and+drought+stresses%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+biochemistry+and+biophysic%22%5BJournal%5D)">Cold salinity and drought stresses: an overview.</a> Archives of biochemistry and biophysic. 444, 139-158 (2005).</li>
<li>León, J., Rojo, E., Sánchez‐Serrano, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+signalling+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botan%22%5BJournal%5D)">Wound signalling in plants.</a> Journal of Experimental Botan. 52, 1-9 (2001).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Com a diminuição da terra disponível e aumento da população, os investigadores de todo o mundo são desafiados com as necessidades prementes para melhoramento de culturas. O rendimento pode ser muito influenciado por vários estresses bióticos e abióticos. Entre eles, a infecção por patógeno é uma das principais causas de redução do rendimento das culturas, responsável por aproximadamente 12% as perdas em os EUA sozinhos 45. Para resolver este problema, a pesquisa maciça tem sido conduzida no modelo Arabidopsis...

Devido à sua natureza sessile, as plantas são constantemente ameaçados por uma infinidade de agentes patogénicos que apresentam vários estilos de vida e estratégias nutricionais 1. Para uma primeira aproximação, patógenos biotróficos manter seu hospedeiro vivo para recuperar nutrientes, enquanto patógenos necrotróficos toxinas e enzimas ativamente secretas para matar o tecido hospedeiro e se alimentam de células mortas 1. Outro grupo de patógenos, denominados hemibiotrophs, começa seu curso de infecção com o estágio biotrófica e mudanças para o palco necrotrophic ao atingir um determinado limiar de acumulação patógeno 2. A fim de defender-se eficazmente contra esses microorganismos, plantas desenvolveram um sistema imunológico inato complicado equipado com múltiplos mecanismos de vigilância para detectar o ataque de patógenos e desencadear localizada a morte celular programada 3, bem como a resistência adquirida sistémica (SAR) 4. A pesquisa atual está focada em caracterizando o sig essencialnaling componentes e transversais conversações dentro do sistema imunológico da planta 5. Tal como proposto no modelo de &quot;ziguezague&quot; 5, a primeira camada da resposta imune inata planta requer a presença de plasma-membrana localizada Reconhecimento de Padrões Receptores (SRRS) para detectar a invasão de um micróbio. PRRs são capazes de reconhecer padrões Microbe-Associated Molecular (mAmps) e estabelecer Imunidade MAMP-Provocado (MTI) 6. Além de induzir uma regulação positiva da transcrição de genes que codificam proteínas PR antimicrobianos 7, MTI leva a uma variedade de eventos que parar o crescimento de agentes patogénicos, incluindo a produção de espécies de oxigénio reactivos (ROS) e reactiva de azoto Espécie (RNS), deposição de calose à parede celular , bem como a activação de múltiplas vias de sinalização da cinase 8. Até agora, vários mAmps foram identificados para desencadear MTI em Arabidopsis, incluindo flg22 bacteriana 9 </sup&gt; (Um fragmento de 22 aminoácidos derivado de flagelina), 10 (18 elf18 aminoácidos do factor de tradução bacteriana alongamento Tu) e um componente da parede celular estrutural 11 peptidoglicanos. Para estabelecer uma infecção bem sucedida, alguns patógenos especializados têm evoluído a capacidade de proteínas efetoras secretos virulência para os espaços intracelulares ou intercelulares e, consequentemente, reprimir MTI e desencadear Suscetibilidade Effector-Provocado (ETS) 12,13. Por exemplo, efectores de virulência pode inactivar Mitogen-Activated Protein Kinase cascatas (MAPK) de fosforilação de MTI para induzir o desenvolvimento da doença no tecido infectado 14-16. Durante a co-evolução dinâmica entre hospedeiros e patógenos, as plantas também desenvolveu a estratégia de contra-ataque para reconhecer as proteínas efetoras e atenuar a virulência de patógenos moléculas 17. Este reconhecimento direto ou indireto efetora é mediada por proteínas de resistência a doenças (R) 18. Mais de them são membros do NB-LRR (Nucleotide Binding e leucina-ricos repetições) da família 19. A percepção de um efetor avirulent por uma proteína R provoca uma resposta imune mais forte e mais amplo caracterizada como Imunidade Effector-Provocado (ETI) 20. Além de induzir a expressão de genes de defesa 21 e a produção de metabolitos de defesa 22, ETI muitas vezes leva a uma rápida morte celular programada localizada conhecida como resposta hipersensível (HR) para restringir o agente patogénico a partir de espalhamento para o tecido adjacente 3. Além da morte celular programada localizada 23, as plantas são capazes de iniciar um a longo prazo e a resposta imunitária global do sistema denominado a resistência adquirida sistémica (SAR) 4. Após o desafio com um agente patogénico biotrofica, células vegetais desencadear a biossíntese e acumulação de um ácido salicílico fitohormônio endógena (SA) e proteínas PR em ambos os tecidos locais e sistémicos 24. Através de tseu processo, um elevado estado de prontidão é alcançado nas folhas não infectados que permite a montagem respostas de defesa mais rápidos durante uma infecção subsequente por um amplo espectro de agentes patogénicos 24. SA e os seus análogos sintéticos, tais como o benzo (1,2,3) -tiadiazol-7-carbotióico éster do ácido S-metil (BTH) e ácido 2,6-dicloroisonicotínico (INA) são capazes de induzir quimicamente ácido salicílico (AS) Imunidade Triggered (STI) mediante aplicação externa 24. Nonexpressor de genes relacionados-Patogênese 1 (NPR1) se propõe a ser um dos receptores e funções SA como principal regulador da transcrição durante a resposta de defesa SA-mediada em ambos os tecidos locais e sistêmicos 21,25,26. Tem sido demonstrado de forma conclusiva que NPR1 é necessária para a criação de SAR e a perda de NPR1 conduz a susceptibilidade dramática no sentido 25 de Pseudomonas syringae. Para caracterizar a contribuição extensivamente molecular de plantacomponentes nas interacções planta-patógeno, vários bioensaios foram desenvolvidos para medir a eventos específicos de defesa, incluindo a explosão de ROS 27, 28 deposição de calose, expressão dos genes de defesa e acumulação de produtos de proteína de 21 suas. Embora estes ensaios individuais pode fornecer informações para uma forma específica da resposta imune da planta, nenhum deles, no entanto, são capazes de representar a resposta de defesa completa em toda a nível da planta. Por outro lado, a quantificação do crescimento do patógeno após a infecção fornece uma estimativa global da resposta imunitária ao nível do organismo. Portanto, o desenvolvimento e otimização de um ensaio de inoculação do patógeno preciso e altamente padronizada é fundamental para abastecer-se a pesquisa e descobertas sobre as respostas imunes de Arabidopsis. Pseudomonas syringae, uma bactéria Gram-negativa, foi identificado como um fitopatógeno capaz de causar doença em uma gama de espécies de plantas, incluindo Arabidopsé 29. Como o modelo do sistema planta-patógeno, a Arabidopsis - P. interação syringae tem sido amplamente aplicada para compreender os mecanismos moleculares subjacentes respostas de defesa da planta 29. Até agora, mais de 50 P. patovares syringae foram identificadas com base em sua capacidade de infectar diferentes espécies de plantas 30 . P. syringae pv. DC3000 tomate (Pst DC3000) 31 e P. syringae pv. maculicola ES4326 (ES4326 Psm) 32 são as duas estirpes virulentas mais utilizados e extensivamente caracterizados. Além de ser reconhecido pela planta e desencadeamento da resposta MTI, Pst DC3000 e Psm ES4326 são capazes de segregar proteínas efetoras virulentos para suprimir MTI e desencadear ETS para favorecer o crescimento de patógenos 31,33. Para dissecar funcionalmente a interação entre Arabidopsis e P. syringae, múltiplos0; infecção patogénica métodos foram desenvolvidos com base na abordagem de entrega de agente patogénico. Para as plantas cultivadas no solo, patógeno pode ser entregue por infiltração seringa, infiltração de vácuo, a inoculação mergulho e inoculação de pulverização 29,34. Recentemente, ensaio inundação-inoculação de mudas foi desenvolvido para executar telas em grande escala em placas de cultura de tecidos cultivados jovens plantas de Arabidopsis 35. Seringa de infiltração, como um dos abordagem mais utilizada, proporciona manualmente o agente patogénico para o apoplasto através das aberturas de folhas naturais chamados estomas 29. Através desta abordagem, quantidades iguais de P. syringae pode ser infiltrada na folha infectada e a força da resposta imune da planta está inversamente correlacionada com os níveis de crescimento do patógeno. Portanto, a quantificação do crescimento do patógeno serve como uma melhor abordagem para avaliar a função imune a todo o nível da planta. Além disso, a seringa pode distinguir a infiltração do tecido local e sistémica, a qual pode be aplicável em caracterizar os mecanismos moleculares subjacentes SAR 36. No seguinte protocolo, descrevemos um ensaio infiltração seringa otimizado com Psm ES4326 para rastrear mutantes de Arabidopsis para maior susceptibilidade à doença (EDS). Este protocolo irá empregar dois genótipos de Arabidopsis: a de tipo selvagem ecótipo Columbia-0 (Col-0) plantas (controle) e npr1-1 mutantes de perda de função (hypersusceptible) que será infectada com a cepa bacteriana virulenta Psm ES4326 37. O mutante npr1-1 transporta uma mutação pontual no interior da sequência de consenso de anquirina-repetição da molécula NPR1, o que altera a histidina altamente conservado e a tirosina torna a proteína não funcional 25. Além disso, um certo número de modificações do ensaio de seringa infiltração estão descritos que permitem a quantificação de defeitos nas camadas específicas da resposta imunitária, incluindo MTI e STI.

<table><tbody><tr><td>MetroMix 360</td><td>Grosouth</td><td>SNGMM360</td><td></td></tr><tr><td>Vasos grandes</td><td>Grosouth</td><td>TEKUVCC10TC</td><td></td></tr><tr><td>12 x 6 Insertos</td><td>Grosouth</td><td>LM1206</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 Planos sem furos</td><td>Grosouth</td><td>LM1020</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 Planos com furos</td><td>Grosouth</td><td>LM1020H</td><td></td></tr><tr><td>Cúpulas de propagação de vinil</td><td>Grosouth</td><td>CW-221</td><td></td></tr><tr><td>Proteose Peptone</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0122-17-4</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de Potássio Dibásico Trihidratado&nbsp;</td><td>MP Biomedicals</td><td>151946</td><td></td></tr><tr><td>Agar&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A360-500</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycin sulfato</td><td>Bio Basic Inc</td><td>SB0494</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri de 100 x 15 mm Placas de Petri</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>150 x 15 mm</td><td>Placa retangular Fisher Scientific</td><td>R80150</td><td></td></tr><tr><td>Fisher</td><td>Scientific</td><td>12-565-450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 Hexahidrato</td><td>Bio Basic Inc</td><td>MB0328</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Bio Basic Inc</td><td>GB0232</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp; </td><td>Bio Basic Inc</td><td>MN1988</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 1 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9992493&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666-A</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de moagem&nbsp;</td><td>Tampas Denville Scientific</td><td>B1257</td><td></td></tr><tr><td>para tubos de moagem</td><td>Denville Scientific</td><td>B1254</td><td></td></tr><tr><td>Bola de moagem de aço inoxidável</td><td>Fisher Scientific</td><td>2150</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 poços&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-556-008</td><td></td></tr><tr><td>Salicilato de Sódio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>s3007-1kg</td><td></td></tr><tr><td>flg22 (QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA)</td><td>Genescript</td><td>Feito sob encomenda</td><td></td></tr><tr><td>elf18 (Ac-SKEKFERTKPHVNVGTIG)</td><td>Genescript</td><td>Feito sob encomenda</td><td></td></tr><tr><td>Perfurador</td><td>de furos Grampos</td><td>146308</td><td></td></tr><tr><td>Biofotômetro mais</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td>952000006</tr><tr><td>Homogeneizador de Alto Rendimento PowerGen</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-215-503</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga micro spin Accu</td><td>Pipeta multicanal Fisher Scientific</td><td>13-100-675</td><td></td></tr><tr><td>(10-100 &micro; l)</td> <td>Eppendorf</td><td>3122 000.043</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta multicanal (30-300 &micro; l)</td> <td>Eppendorf</td><td>3122 000.060</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta (20&micro; l)</td> <td>Eppendorf</td><td>3120 000.038</td><td></td></tr><tr><td>Ponteiras de pipeta</td><td>Fisher Scientific</td><td>3552-HR</td><td></td></tr><tr><td>Marcador permanente Sharpie</td><td>Staples</td><td>507130</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de 1,5 ml</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-890</td><td></td></tr></tbody></table>

bacteriana folha infiltração ensaio para belas caracterização das respostas de defesa da planta usando o<em&gt; arabidopsis thaliana-pseudomonas syringae</em&gt; patossistema

Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem

Na ausência de células imunes celulares especializadas, as plantas utilizam sua localizada morte celular programada e sistêmica a resistência adquirida para se defender contra o ataque de patógenos. A contribuição de um gene Arabidopsis específico para a resposta imunitária geral da planta podem ser especificamente e quantitativamente avaliado por análise do crescimento do patógeno no tecido infectado. Por mais de três décadas, a bactéria Pseudomonas syringae pv hemibiotrophic. Maculicola ES4326 (ES4326 Psm) tem sido amplamente aplicada como modelo patógeno para investigar os mecanismos moleculares subjacentes a resposta imune Arabidopsis. Para entregar patógenos para o tecido foliar, foram estabelecidos vários métodos de inoculação, por exemplo, a infiltração seringa, inoculação mergulho, spray, infiltração a vácuo, e inoculação de inundação. O protocolo a seguir descreve um método de seringa infiltração otimizada para oferecer virulenta Psm ES4326 em folhas de adultosolo-grown plantas de Arabidopsis e rastrear com precisão para maior susceptibilidade à doença (EDS) em direção a este patógeno. Além disso, este protocolo pode ser complementado com vários pré-tratamentos para dissecar ainda mais defeitos imunes específicos dentro de diferentes camadas de defesa vegetal, incluindo ácido salicílico (SA) Imunidade Triggered (STI) e Imunidade MAMP-Provocado (MTI).

O protocolo aqui descrito representa um P. otimizado syringae ensaio seringa infiltração para avaliar quantitativamente a resposta imune em plantas de Arabidopsis. Tal como ilustrado na Figura 1, a seringa infiltração do PSM ES4326 é seguido por extracção e quantificação patogénio através de diluições em série e as colónias enumeração. Tal como descrito no Passo 3 dentro do texto do protocolo, susceptibilidade aumentada da...

A quantificação do crescimento de patógenos é uma ferramenta poderosa para caracterizar várias respostas imunes de Arabidopsis thaliana (doravante: Arabidopsis). O método descrito aqui apresenta um ensaio otimizado de infiltração de seringa para quantificar a Pseudomonas syringae pv. maculicola ES4326 crescimento em folhas adultas de Arabidopsis.

Bacteriana Folha Infiltração Ensaio para Belas Caracterização das respostas de defesa da planta usando o<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Patossistema

In the absence of specialized mobile immune cells, plants utilize their localized programmed cell death and Systemic Acquired Resistance to defend ...

O objetivo geral deste procedimento é caracterizar quantitativamente a resposta imune de Arabidopsis diliana por meio de um ensaio otimizado de infiltração com seringa. Isso é realizado primeiramente utilizando a infiltração com seringa para entregar manualmente bactérias na folha através das aberturas naturais chamadas sada. O segundo passo é obter discos de tecido foliar infectado após o desenvolvimento dos sintomas da doença.Em seguida, as bactérias são extraídas dos discos foliares por meio de homogeneização de alto rendimento. O passo final é a diluição em série e semeadura em placas de contagem bacteriana para enumeração de colônias. Em última análise, o crescimento bacteriano em cada disco foliar pode ser correlacionado à intensidade relativa da resposta imune da planta.Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da imunidade vegetal, como a identificação de genes que contribuem para as respostas de defesa contra estresses bióticos. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes é que ela permite a quantificação precisa do crescimento do patógeno no tecido vegetal infectado e ajuda a evitar erros experimentais causados pela amostragem de folhas com estados de desenvolvimento variados. Este método pode fornecer informações sobre a resposta imunológica da planta a uma infecção por um patógeno bacteriano virulento, e também pode ser aplicado a outros sistemas, como respostas imunológicas induzidas por ácido salicílico ou por padrões moleculares associados a micróbios.De modo geral, indivíduos novos neste método terão dificuldade em introduzir as bactérias na folha sem causar danos ao tecido. O procedimento a seguir será demonstrado pela pesquisadora pós-doutoranda Hindu e pelas estudantes de pós-graduação Shalu e Yali. Em breve, do meu laboratório, o ensaio para susceptibilidade aumentada a doenças será demonstrado neste vídeo.Antes do experimento, prepare placas de meio King's B ou KB; faça um litro do meio sólido KB conforme descrito no texto do protocolo e deixe esfriar em uma placa de agitação magnética. Quando o meio estiver frio ao toque, adicione glicerol a 80%, sulfato de magnésio um molar e estreptomicina ao meio e despeje em dois tamanhos diferentes de placas de meio KB. O recipiente de Petri menor serve como placa primária de cultura bacteriana e o recipiente de Petri maior serve como placa de contagem bacteriana.Armazene as placas a quatro graus Celsius dois dias antes do streak do ensaio. PSM ES 43 26. Bactérias de um estoque glicerinado a menos 80 graus Celsius em uma placa de cultura bacteriana KB com estreptomicina e incube a 28 graus Celsius por 24 a 48 horas no dia seguinte.Inicie o cultivo líquido em um tubo de ensaio estéril com quatro mililitros de meio líquido KB contendo 50 microgramas por mililitro de estreptomicina. Agite a 250 RPM a 28 graus Celsius durante a noite. As plantas de Arabidopsis para o experimento são cultivadas em condições detalhadas no texto do protocolo no mesmo dia em que o cultivo bacteriano líquido é iniciado.Marque as pétalas das folhas número cinco e seis com uma caneta impermeável e ponta grossa para facilitar a identificação do tecido infectado durante a coleta. Para melhorar a abertura de STA e facilitar a entrada da solução do patógeno na água da folha. Umedeça bem as plantas mergulhando a bandeja pela parte inferior por 20 minutos.Após 20 minutos, drenar a água em excesso. A infecção das plantas de arábide é realizada no dia seguinte ao início do cultivo líquido.Transfira a cultura bacteriana para um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro e centrifugue a 9.600 ×g por dois minutos. À temperatura ambiente, descarte o sobrenatante e ressuspenda o pellet bacteriano com um mililitro de cloreto de magnésio estéril 10 milimolar; dilua a suspensão bacteriana com nove mililitros de cloreto de magnésio 10 milimolar em um tubo de centrífuga de 50 mililitros. Após medir a densidade óptica das bactérias, dilua-as com cloreto de magnésio 10 milimolar até uma densidade óptica final (OD 600) de 0,0002.Para o ensaio de infecção por EDS. Uma seringa de um mililitro com ponta romba e sem agulha, comumente conhecida como seringa de insulina, é usada para a infiltração. Encha a seringa com 0,5 a 0,6 mililitros da solução bacteriana diluída para um controle muito melhor durante o processo de infiltração; não encha a seringa até sua capacidade total.Exponha a superfície inferior da folha sobre a parte superior do dedo indicador e, com a ajuda do polegar, ajuste suavemente a posição da folha. Posicione a seringa verticalmente contra a superfície da folha para garantir uma distribuição uniforme da pressão e reduzir danos à folha. Tente evitar a região da nervura central durante a infiltração.Empurre lentamente o êmbolo para infiltrar a solução bacteriana. A entrada do líquido no mesófilo da folha será visualizada por meio da coloração mais escura da folha; infiltre toda a superfície da folha, mesmo que sejam necessativas várias tentativas. Após a conclusão da infiltração, seque suavemente a folha com papel absorvente para remover a solução excedente do patógeno.Inspecione visualmente o tecido foliar infectado em busca de danos. Deixe as plantas infiltradas secarem por uma a duas horas e retorne as plantas às suas condições originais de crescimento. Pulverize com água uma cúpula transparente e cubra as plantas infectadas por duas horas.Em seguida, quebre a tampa para gerar uma abertura de dois a três centímetros e mantenha-a aberta durante o restante do experimento de infecção, que geralmente dura três dias. Um dia antes de quantificar o crescimento do patógeno, pré-seque as placas de meio KB de 150 milímetros por 15 milímetros.Seque as placas mantendo-as à temperatura ambiente por cerca de 24 horas. Processe o tecido infectado após o surgimento de esclerose, indicado pelo amarelecimento do tecido infectado nos genótipos suscetíveis, mas antes do desenvolvimento de lesões necróticas. Para cada genótipo, prepare seis tubos de moagem.Coloque uma esfera de moagem de aço inoxidável e adicione 500 microlitros de cloreto de magnésio estéril 10 milimolar em cada tubo. Em seguida, retire a folha infectada da planta e retire um disco foliar com um furador de papel de um furo usando pinça de forma aleatória, colocando dois discos foliares de duas plantas diferentes em cada tubo de moagem. Feche os tubos e homogeneíze o tecido com um homogeneizador de alto rendimento na velocidade máxima por 10 minutos.Repita este processo, se necessário, até que o tecido esteja bem homogeneizado e as soluções fiquem verdes devido à liberação de clorofila das folhas infectadas durante a espera. Para a homogeneização, preencha cada poço nas primeiras seis linhas de uma placa de cultura de 96 poços com 180 microlitros de cloreto de magnésio 10 milimolar. Transfira 20 microlitros da suspensão de tecido moído para cada poço da primeira linha da placa de 96 poços e misture pipetando o líquido para cima e para baixo repetidamente.Se pequenos fragmentos de tecido entupirem a ponta, corte-a em dois a três milímetros para ajudar a adquirir o volume correto da solução, fornecendo espaço suficiente para a gota na parte superior da placa; posicione o tecido de genótipos diferentes em fileiras alternadas. Para preparar uma diluição seriada de dez vezes, transfira 20 microlitros da suspensão de tecido para a segunda fileira e repita este procedimento até a sexta diluição. Usando ponteiras divididas, transfira 20 microlitros da solução da placa de 96 poços para a placa KB de 150 milímetros por 15 milímetros.Trabalhe a partir da suspensão mais diluída até a mais concentrada, para que não seja necessário trocar as ponteiras da pipeta entre as diluições. Seque a placa em temperatura ambiente com a tampa entreaberta. Assim que não for mais possível observar líquido na superfície da placa, feche a tampa, inverta e incube a placa em temperatura ambiente.Incube as placas por 40 a 60 horas até que as colônias fiquem visíveis. Confirme que as bactérias nas placas reflitam a redução previsível na ordem de dez vezes nas unidades formadoras de colônia.Conte as bactérias antes que elas supercresçam e as colônias se fundam. Determine o número de bactérias na menor diluição que não apresenta colônias sobrepostas. Geralmente, a diluição preferida para contagem conterá entre 10 e 50 colônias, e pode variar entre réplicas técnicas.Para calcular os níveis de proliferação bacteriana, determine o número de unidades formadoras de colônia por disco foliar utilizando esta fórmula, em que R é o número da linha e T é o número de bactérias em cada réplica técnica. Os dados são então utilizados para produzir um gráfico. Cada ponto de dado é representado como a média de seis réplicas técnicas em uma escala logarítmica.As barras de erro representam o intervalo de confiança de 95% da média da doença agravada. A suscetibilidade contra P-S-M-E-S 43 26 foi avaliada por infecção com um inóculo com uma OD 600 de 0,0002. Os resultados mostram que os mutantes NPR um traço um altamente suscetíveis apresentam aproximadamente 2,5 log ou 300 vezes mais crescimento do patógeno em comparação com as plantas do tipo selvagem Columbia zero.O ensaio de infiltração com seringa pode ser modificado para avaliar diferentes camadas da resposta imune. Para avaliar a imunidade induzida pelo ácido salicílico, aplica-se externamente salicilato de sódio para desencadear a resposta imune, a qual é quantificada pelo crescimento do patógeno. A perda de NPR1, que atua como receptor do ácido salicílico e principal co-regulador transcricional de genes-alvo dependentes de ácido salicílico, leva à insensibilidade à aplicação exógena do derivado do ácido salicílico.Para caracterizar a imunidade desencadeada por padrões moleculares associados a micróbios, as plantas foram previamente tratadas com dois indutores conhecidos. As plantas selvagens do tipo Columbia zero tratadas com FLAG 22 apresentaram uma redução de um log, ou seja, 10 vezes menor, na população bacteriana, enquanto as plantas mutantes FLS dois não conseguiram desencadear o efeito de restrição do crescimento bacteriano. De maneira semelhante, as plantas mutantes EFR foram insensíveis ao pré-tratamento com L 18.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como quantificar a resposta imune de Arabidopsis por meio do ensaio de infiltração com seringa. Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de monitorar o desenvolvimento da doença e coletar o tecido após o surgimento das lesões. O Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 é um patógeno hemibiotrófico.Assim, a coleta de amostras deve ser realizada antes da transição para a fase neurotrófica. Após este procedimento, outros métodos, como PCR quantitativa em tempo real e análise sanguínea ocidental, podem ser realizados para responder perguntas adicionais, como qual via de sinalização imune específica está alterada. Não se esqueça de que você está trabalhando com bactérias vivas.Embora o Pseudomona Senge não seja patogênico para humanos, lembre-se de descartar adequadamente os materiais descartáveis contaminados e as plantas infectadas durante a realização deste procedimento.

bacterial-leaf-infiltration-assay-for-fine-characterization-plant

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Uma célula de ensaio de morte com base em plantas para PTI Nicotiana benthamiana é descrito.

Ensaio para Pathogen-Associated Padrão Molecular (PAMP) Triggered-Imunidade (PTI) em Plantas

Nós desenvolvemos um protocolo simples e reprodutível para acessar a resposta estomática ao bactérias vivas. Este método minimiza ferimento e manipulação da folha, em comparação com o uso de peelings epidérmicos relatado anteriormente.

Avaliar a resposta estomática ao vivo células bacterianas usando imagens Folha Inteira

Fonte: Lee, H. et. al., Sistema de proteína fluorescente verde dividida para visualizar efetores entregues por bactérias durante a infecção. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra um método para monitorar a infecção bacteriana e a entrega de proteínas efetoras em células vegetais usando a complementação de proteína fluorescente verde de superpasta dividida (sfGFP) combinada com microscopia confocal. A abordagem permite a visualização precisa da translocação efetora para o citosol da célula...

Monitoramento da infecção bacteriana e entrega de proteínas efetoras em células vegetais

Fonte: Rufián, J. S., et.al. Análise de célula única da expressão dos genes de Pseudomonas syringae no tecido vegetal. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra um método de infiltração a vácuo para introduzir um patógeno bacteriano nas folhas das plantas de Arabidopsis . A abordagem utiliza uma suspensão bacteriana preparada e pulsos de vácuo para permitir uma entrada uniforme através dos estomas, resultando em infecção controlada nas folhas.

Inoculação de um patógeno bacteriano nas folhas de Arabidopsis por infiltração a vácuo

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Assessing Pseudomonas syringae Infection Load in Arabidopsis thaliana Leaves

Nós relatamos um método simples e versátil para executar ao vivo-imagem fluorescente de Arabidopsis thaliana folhas durante um período prolongado de tempo. Nós usamos uma Arabidopsis de plantas transgênicas expressando um gene repórter fluorescente sob o controle de um promotor de imunidade-relacionados como um exemplo para ganhar spatiotemporal compreensão das respostas imunes de planta.

Um método versátil para a montagem de Arabidopsis deixa para Intravital imagem de lapso de tempo

Este trabalho descreve dois métodos para quantificar as respostas de defesa em Arabidopsis Arabidopsis thaliana após a exposição aos elicitors imunes: o estouro oxidativo transiente, e a inibição do crescimento de plântulas.

Ensaios de explosão oxidativa desencadeada por padrão e inibição do crescimento de plântulas em Arabidopsis Arabidopsis thaliana

O presente protocolo descreve um método que permite a análise da expressão gênica unicelular em populações de Pseudomonas syringae cultivadas dentro do apoplasto vegetal.

Análise Unicelular da Expressão de Genes de Seringas de Pseudomonas syringae no Tecido Vegetal

Aqui, apresentamos um método simples para observação direta e medida automatizada das respostas estomáticas à invasão bacteriana em Arabidopsis thaliana. Esse método utiliza um dispositivo portátil de imagem estomática, juntamente com um pipeline de análise de imagem projetado para imagens foliares capturadas pelo dispositivo.

Observação Direta e Mensuração Automatizada das Respostas Estomáticas a Pseudomonas syringae pv. tomate DC3000 em Arabidopsis thaliana

Esse protocolo descreve uma abordagem de alto rendimento para avaliar vazamento de íons da planta, atividade da peroxidase e produção de calosas na mesma amostra.

Avaliação das Respostas Foliares a Metabólitos Secundários Microbianos Usando um Formato de Alta Produção

Aprenda a caracterizar respostas imunes em Arabidopsis thaliana usando o ensaio de infiltração foliar com Pseudomonas syringae. Este método otimizado permite quantificar com precisão o crescimento bacteriano e avaliar mecanismos de defesa vegetal.

Bacteriana Folha Infiltração Ensaio para Belas Caracterização das respostas de defesa da planta usando o Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Patossistema (Vídeo) | JoVE Journal

Bacteriana Folha Infiltração Ensaio para Belas Caracterização das respostas de defesa da planta usando o

Explorar mais vídeos