Name: Preparação Facile da Internamente auto-montados Lipid partículas estabilizada por nanotubos de carbono (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Aprenda a preparar partículas híbridas nanostruturadas usando nanotubos de carbono e auto-montagens lipídicas para aplicações biomédicas. Este método simples estabiliza emulsões óleo-água com potencial para sistemas de liberação de fármacos.

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Nós gostaríamos de agradecer ao Dr. Matthew J. Baker, agora na Universidade de Strathclyde, em Glasgow para o apoio com experimentos Raman e Mr. Nick Gaunt por seu trabalho antes deste projeto.

Cuidado: os nanotubos de carbono usados ​​neste trabalho estão na forma de nanopartículas, que podem ter riscos adicionais em comparação com as suas contrapartes granel. A inalação de grafite, tanto naturais como sintéticas, podem causar pneumoconiose 62 semelhante a pneumoconiose dos mineiros de carvão. Além disso, tem havido preocupações relativamente à toxicidade de nanoestruturas à base de carbono e alguns dos estudos anteriores sugerem que a toxicidade aguda e crónica associada com a inalação de nanotubos de carbono 63-68. Assim, evitar a inalação do pó CNT multa e segurá-lo com muito cuidado. Se inalado, mover-se para o ar fresco. Se a respiração é difícil, usar oxigênio puro em vez disso e procurar consulta médica. formulações de solução / dispersão de nanotubos de carbono são bastante seguro de manusear. Cuidado: Os lipídios e surfactantes usados ​​neste estudo são materiais de qualidade alimentar e, portanto, não perigosos em geral, mas eles são irritantes para os olhos e pele, e também altamente inflamável. Por isso, utilize todas as práticas de segurança adequadas, tais como o uso de encontroles engenha- (exaustor) e equipamentos de proteção individual (óculos de segurança, luvas, jaleco, calça de corpo inteiro, sapatos fechados) amostras de nanopartículas durante o manuseamento ou a preparar. Em caso de contacto com a pele ou olhos, imediatamente lave a pele ou os olhos com água em abundância por pelo menos 15 min. Consultar um médico, se necessário. 1. Preparação de lípidos massa Fases / Água Cuidado: Armazenar os lipídios na geladeira a 4 ° C. lípidos puro grau deve ser armazenado no congelador (-20 ° C). Alíquota-os em pequenos frascos de vidro para evitar a contaminação de todo o caldo e comodidade de manuseamento. Outros produtos químicos, incluindo os nanotubos de carbono e surfactantes pode ser armazenado à temperatura ambiente, mas mantê-los longe da luz solar direta. <ol><li> Manter lípidos, isto é, Dimodan L (DU) e Phytantriol (PT) a TA durante 15-20 min antes de abrir o / tampa de frasco de garrafa, a fim de evitar a condensação de humidade. (Nota: DU é um glicérido destilada que compreende 96% de monoglicéridos e aresto são diglicéridos e ácidos graxos livres. Dois componentes principais monoglicérido DU são linoleato (62%) e oleato (25%). Por conseguinte, a parte hidrofóbica do DU contém principalmente cadeias C18 (91%), a composição exacta dos quais é como se segue; C18: 2 (61,9%), C18: 1 (24,9%), e C18: 0 (4.2%), indica onde a C18 de cadeia 18C e depois o número de cólon indica o número de ligações C = C. A PT é uma mistura de isómeros ópticos 3,7,11,15-tetrametil-1,2,3-hexadecanetriol. Ele não contém um grupo funcional éster mas consiste em cauda phytanyl altamente ramificada com uma headgroup tri-hidroxi. Ambos DU e PT formar fases cúbicas em presença de excesso de água, que também é o caso para os núcleos de partículas lipídicas estabilizadas 13, 45). </li><li> Derreter os lípidos, colocando os frascos num banho de água quente ou de um copo contendo água mantida acima de 60 ° C (aquecimento agitador magnético: 230 V, 50 Hz, 630 W ou semelhante para ser usado para aquecer a água numa proveta). </li><li> Alternativamente frascos de calor que utilizam aquecedores de bloco. Não aquecer o lípido contendo frascos directamente sobre a placa quente, a fim de evitar um gradiente de temperatura e a subsequente decomposição de lípidos. </li><li> Pesar 500 mg do lípido fundido, em tubo de microcentrífuga pesado previamente (com tampa de encaixe cónico, 1,5 ml), utilizando uma pipeta de Pasteur de vidro com uma lâmpada de látex. </li><li> Adicionar 500 ml de água ultrapura (resistividade de água = 18,2 mohms · cm) para o tubo de microcentrífuga acima. </li><li> Misturar os componentes manualmente durante 15 min usando minúsculos (custom-built) espátula. Fazer tal espátula pelo achatamento da ponta de uma agulha de seringa (0,9 mm Comprimento cânula x 40 mm) usando um alicate. </li><li> Centrifugar a mistura de lípido / água durante 10 min a uma velocidade de 2000 x g. Novamente agitar a mistura manualmente durante 10 min, em seguida equilibrar-lo durante 24 h. Antes de caracterizar as amostras, agitá-los, durante 5 min e depois deixá-los à temperatura ambiente. </li><li> Para assegurar a formação de uma fase lipídica equilíbrio ao longo de todo o tubo, executar cerca de 10 ciclos de congelamento e descongelamento e inte<html> rmittently realizar um passo de centrifugação, tal como definido acima. Tanto a forma altamente viscosos fases lipídicas granel DU e PT tornando difícil lidar com eles manualmente (Figura 1). Nota: O protocolo acima (seção 1) só é necessário, se um gostaria de comparar o comportamento nanoestrutural (tipo treliça e dimensões de auto-montagem) de partículas dispersas com a fase lipídica granel e / ou usá-lo como um controle para confirmar a retenção de nanoestrutura originais. </li></ol><img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/53489/53489fig1.jpg" /> Figura 1. Preparação de S / W com emulsão de partículas de consistência fluida fase lipídica altamente viscosa utilizando a entrada de energia elevada (ultra-sons) e utilizando diferentes estabilizadores CNT-SWCNT, nomeadamente, MWCNT-OH, MWCNT-COOH (Figura reproduzida a partir da referência [50] com permissão da The Royal Society of Chemistry)._upload / 53489 / 53489fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. 2. Preparação do surfactante estabilizada Partículas lipídicas <ol><li> Preparar uma solução a 0,2% (w / w) de surfactante (Pluronic F127) em solução de água. <ol><li> Dissolve-se 200 mg do agente tensioactivo (pó fofo branco) em 100 ml de água ultrapura por agitação durante 20-30 min (numa placa magnética com uma barra de agitação magnética). Pluronic F127 é um tensioactivo não iónico e é comumente utilizado como estabilizador de emulsão. É um copolímero tribloco PEO de 99 -PPO 67 -PEO 99, e, consequentemente, demora muito tempo a dissolver-se em água. </li></ol></li><li> Adicionar 500 mg de fundido DU ou PT (usando uma pipeta de Pasteur de vidro) para um frasco de vidro (de cintilação de soda-cal equipado com uma folha de tampa forrada ureia, 20 ml). </li><li> Adicionar 9,5 g de solução de F127 a 0,2%. </li><li> Na máquina de ultra-som sonda, prender firmemente o frasco para a retorta ficar mandíbula (Retort Montagem Stands comsuporte, braçadeira, base, haste, borracha 3 mandíbula e bosshead), de modo que possa resistir às vibrações geradas por sonicação. </li><li> Inserir a sonda liga de titânio sólido (13 mm de diâmetro x comprimento 139 milímetros) ligado ao Sonicator celular. Ajuste a altura ea posição do frasco para garantir que os seus lados e no fundo não se estão a tocar a sonda. Uma distância de 0,5 cm entre a ponta da sonda e o fundo do frasco de vidro dá bons resultados. </li><li> Sonicar a mistura durante 10 min num modo pulsado com impulsos de 1 segundo mediada pelo tempo de atraso de 1 segundo a 35% (do máximo) de energia. O frasco fica muito quente devido ao calor gerado durante a sonicação. Portanto, deixe-o arrefecer até à temperatura ambiente antes de tirá-lo do grampo. </li><li> Armazenar a dispersão formada-leitoso à temperatura ambiente durante pelo menos 24 horas, antes de posterior utilização. Isto é para assegurar a sua estabilidade contra a separação de fase. Nota: Antes e depois de usar a sonda, limpe-o com acetona e seco com uma toalha de papel, em seguida, lave-o com água ultrapura umd secá-lo mais uma vez. </li></ol> 3. Preparação de dispersões de nanotubos de carbono puros de Água <ol><li> Em dois copos separados, pesam em 4 mg de pó MWCNT-OH e MWCNT-COOH, ambos os quais são de cor preta. </li><li> Adicionar 500 ml de água ultrapura a cada copo. Usando uma sonda de ultrasonicator sonicar as misturas durante 2 minutos num modo de impulsos contínua a 40% (do máximo) de energia. A concentração resultante da dispersão MWCNT é de 8 ug / ml (solução-mãe). </li><li> Diluir a solução estoque MWCNT com quantidades apropriadas de água ultrapura para atingir 6,25, 5, 4, 2 ug / ml de dispersões MWCNT. </li><li> Sonicate estas dispersões como descrito anteriormente (ver 3.2). </li><li> Da mesma forma, dispersar 3 mg de SWCNT em pó (também na cor preta) em 500 ml de água ultrapura para fazer uma / dispersão SWCNT ml 6 mg (solução-mãe). </li><li> Dilui-se a solução estoque SWCNT e sonicar-los como acima descrito (ver 3.2) para se obter 0,5, 0,4, 0,3125, 0,2 ug / ml dispe SWCNTrsions. Nota: Todas as dispersões são claros para cerca de 30 min, após o que os nanotubos de carbono começam a se depositam no fundo. </li></ol> 4. Preparação de CNT-estabilizado nanoestruturado Lipid partículas (Figura 1) <ol><li> Pesa-se 500 mg do DU fundido num frasco de vidro. </li><li> Adicionar 9,5 ml de o / mL de dispersão de SWCNT 6 ug para o frasco. </li><li> Sonicar a mistura CNT-DU utilizando os mesmos parâmetros utilizados para fazer dispersões CNT puro (ver 3.2). Após arrefecimento até à temperatura ambiente, as partículas lipídicas CNT-estabilizado com nanoestrutura auto-montados internamente conservada estará pronto. </li><li> De uma maneira similar, preparar as partículas lipídicas utilizando os 0,4 ug / ml e 0,2 ug / ml dispersões SWCNT. </li><li> Seguir os protocolos de 4,1 a 4,4 para fazer partículas lipídicas utilizando MWCNT-OH e MWCNT-COOH, mas usando concentrações diferentes, a saber, 8, 4 e 2 ug / ml de CNT. </li><li> Do mesmo modo, preparar três dispersões CNT-PT diferentes usando 4 ug / ml MWCNT-OH e MWCNT-COOH, Bem como 0,4 ug / mL SWCNT. Note-se que as dispersões CNT-PT requerem menos energia (35% do máximo) mas mais tempo (15 min) num modo contínuo de impulsos. Arrefecer as dispersões para RT e deixá-los por 24 horas antes de caracterizá-los. Nota: Os parâmetros de sonicação pode ser diferente para diferentes lipídios (como para DU e PT aqui) e para composições diferentes; que necessitam de ser optimizados para conseguir dispersões bem estabilizadas. </li></ol> 5. Controlo da estabilidade das dispersões de lípidos CNT-estabilizados <ol><li> Monitorizar a estabilidade das dispersões por observação visual: verificar se as dispersões são desestabilizadas ou protuberâncias se formaram nas dispersões. </li><li> Tirar fotos (com câmera digital) em intervalos regulares. Por exemplo, tirar fotos de dispersões todos os dias na primeira semana, em seguida, todos os dias durante uma semana seguida de uma vez por semana, durante as próximas duas semanas, e, finalmente, uma vez por mês como por obrigação. </li></ol>

Não temos nada a divulgar.

A estabilização de partículas lipídicas Três nanotubos de carbono diferentes são usados ​​para estabilizar as dispersões de lípidos; dois dos quais são de paredes múltiplas e funcionalizado utilizando -OH e grupos -COOH, e um único é murado e não-funcionalizado (primitivo). O CNT variaram em tamanho, como se segue (diâmetro x comprimento): MWCNT-COOH: 9,5 nm x 1,5 m; MWCNT-OH: 8-15 nm x 50 mm; SWCNT: 1-2 nm x 1-3 | im. Os nanotubos de carbono em pó foram dispersas em água por sonda de ultra-sonic...

Ao longo das últimas décadas, a nanotecnologia emergiu como uma ferramenta poderosa especialmente na área de desenvolvimento pré-clínico de medicamentos para combater doenças tais como cancro notórios 1. Neste contexto, as estruturas em nano-escala com um tamanho &lt;1000 nm são amplamente explorados como veículo de entrega de várias biomoléculas activas tais como drogas, proteínas, ácidos nucleicos, genes e agentes de diagnóstico por imagem 1-4. Estas biomoléculas ou são encapsulados dentro das nanopartículas ou conjugado sobre a superfície das nanopartículas e são libertados no sítio da acção por disparadores tais como pH 5,6 ou temperatura. Embora extremamente pequeno em tamanho, a grande área de superfície destas nanopartículas prova ser muito vantajosa para a entrega direccionada de biomoléculas activas. O controlo sobre o tamanho de partícula e biocompatibilidade é de extrema importância, a fim de optimizar a eficácia terapêutica e, por conseguinte, a aplicabilidade de nanopartículas 7,8.Lipídios 9-13, polímeros, metais 14,15 16,17 e nanotubos de carbono 18,19 têm sido comumente empregada como nanocarriers para várias aplicações biomédicas e farmacêuticas. Além disso, as aplicações nanocarrier baseados em nanoestruturas auto-organizadas de lipídios têm uma grande importância em muitas outras disciplinas, incluindo alimentos e indústrias de cosméticos 20,21. Por exemplo, eles são utilizados na cristalização de proteínas 22, 23 de separação de biomoléculas, como por exemplo estabilizadores alimentares, em sobremesas 24, e na entrega de moléculas activas, tais como nutrientes, aromatizantes e perfumes 25-31. Nanoestruturas de lípidos auto-montadas não só têm a capacidade de libertar moléculas bioactivas, de forma controlada e direccionada 32-38, mas que também são capazes de proteger as moléculas funcionais de degradação química e enzimática 39,40. Embora bicamada fluido planar é a mais Commna nanoestrutura formada por moléculas de lípidos anfifílicos em presença de água, outras estruturas tais como a hexagonal e cúbica são também frequentemente observadas 20,41,42. O tipo de nanoestrutura formado dependerá estrutura forma molecular dos lípidos, a composição lipídica em água, bem como sobre as condições físico-químicas empregues, tais como a temperatura e pressão 43. A aplicabilidade de nanoestruturas de lípidos não planares que especialmente de fases cúbicas, é restrito devido à sua elevada viscosidade e consistência domínio não-homogênea. Estes problemas são ultrapassados ​​por dispersão dos nanoestruturas lipídicas em grande quantidade de água para formar emulsões que contêm micron ou submicron partículas lipídicas dimensionada de óleo-em-água (O / W). Desta maneira, um produto adequado de baixa viscosidade podem ser preparados mantendo a estrutura auto-montada lipídica original para dentro das partículas dispersas. A formação destas partículas auto-montadas internamente (abreviado como 44 ISAsomes </sup&gt; Por exemplo, cubosomes de fases cúbicas e hexagonais hexosomes de fases) normalmente requer uma combinação de um passo de entrada de alta energia e a adição de estabilizadores, tais como agentes tensioactivos ou polímeros. Uma pesquisa recente neste sentido demonstra a aplicação de várias partículas sólidas 45, incluindo nanopartículas de sílica 46, argila 47-49 e nanotubos de carbono 50 para a estabilização de emulsões acima mencionados, adequadamente denominado como Pickering 51 ou emulsões Ramsden-Pickering 52. Nos últimos anos, o carbono nanoestruturas como nanotubos de parede única de carbono (SWCNTs) com base, os nanotubos de carbono de paredes múltiplas (MWCNTs) e fulerenos ter recebido uma grande atenção como novos biomateriais 53,54. As principais preocupações são a sua toxicidade 55-58, insolubilidade em água 59 e, portanto, sua biocompatibilidade 56. Uma maneira eficiente de resolver estas questões é a função de superfíciezação por meio de moléculas não-tóxicos e biocompatíveis tais como lípidos. Na presença de água, os lípidos interagir com os nanotubos de carbono de forma que a superfície hidrofóbica dos nanotubos de carbono é protegido a partir de meio aquoso polar enquanto que os grupos de cabeça hidrófilos de lípidos auxiliar a sua solubilidade em água ou dispersão 60,61. Os lípidos são componentes integrais de organelos celulares, bem como alguns materiais alimentares, por conseguinte, a sua decoração devem, idealmente, diminuir a toxicidade in vivo de nanotubos de carbono. Aplicações biomédicas com base independentemente em nanotubos de carbono 18,19 e nanoestruturas lipídicas 9-13 estão em desenvolvimento extenso, mas as aplicações que combinam as propriedades dos dois ainda não são bem-explorado. Neste trabalho, empregamos dois tipos diferentes de lipídios e três tipos de nanotubos de carbono dos quais SWCNTs estão na forma pura enquanto MWCNTs são funcionalizado com hidroxilo e grupos carboxílicos. Usámos concentrações muito baixas de nanotubos de carbono para preparar as dispersões cujosestabilidade depende de vários factores, por exemplo, o tipo de lípido, tipo de CNT, razão de lípido para CNT utilizado, bem como sobre os parâmetros de sonicação empregues, tais como o poder e a duração. Este protocolo de vídeo fornece detalhes técnicos de um método de cineticamente estabilização nanopartículas lipídicas utilizando várias CNT-estabilizadores.

<table><tbody><tr><td>Dimodan U</td><td>Danisco</td><td>15312</td><td>Loja em 4&nbsp; &deg;C. Não perigoso. Irritante para os olhos e a pele.</td></tr><tr><td>Fitantriol (> 95%, GC)</td><td>TCI Europe N.V.</td><td>P1674</td><td>Loja em 4&nbsp; &deg;C. Não perigoso. Irritante para os olhos e a pele.</td></tr><tr><td>Nanotubos de carbono de parede simples (90%)</td><td>Nanoestruturados e Materiais Amorfos, Inc.&nbsp;</td><td>1246YJS</td><td>Armazene em temperatura ambiente. Longe da luz direta. Irritante para os olhos, pele e sistema respiratório.</td></tr><tr><td>Nanotubos de carbono funcionalizados com ácido carboxílico de paredes múltiplas (>&nbsp; 80% Caron base, >&nbsp; 8% de ácido carboxílico funcionalizado)</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC&nbsp;</td><td>755125</td><td>Armazene em temperatura ambiente. Longe da luz direta. Causa irritação ocular grave. Pode causar irritação respiratória.</td></tr><tr><td>Nanotubos de carbono funcionalizados hidroxi de paredes múltiplas grafitizados (99,9%)</td> <td>Nanoestruturados e Amorphous Materials, Inc. (NanoAmor)&nbsp;</td><td>1224YJF</td><td>Armazene em temperatura ambiente. Longe da luz direta. Irritante para os olhos, pele e sistema respiratório.</td></tr><tr><td>Pluronic F127</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC&nbsp;</td><td>P2443</td><td>BioReagent, adequado para cultura de células. Não é uma substância ou mistura perigosa. Armazene em temperatura ambiente.</td></tr><tr><td>Acetona (99,5%)</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>10134100</td><td>Líquido altamente inflamável. Causa irritação ocular grave. Pode causar sonolência ou tontura.</td></tr><tr><td>Frascos com tampas soltas e envolventes (375&nbsp; ml)</td><td>VWR International Ltd</td><td>216-3308</td><td></td></tr><tr><td>Beaker, 1.000 ml</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12942161</td><td>forma pesada, baixa, com bico e graduações</td></tr><tr><td>Pipeta de vidro Pasteur (150 mm de comprimento) com bulbo de látex</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10006021</tr><tr><td>Tubo de Microcentrífuga com tampa de pressão cônica 1.5&nbsp; ml</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>11558232</tr><tr><td>Espátula</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>11352204</tr><tr><td>Agitador magnético de aquecimento</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>11715704</tr><tr><td>Barras de agitação magnéticas (cilíndricas, PTFE opacas, 30&nbsp; mm x 7&nbsp; mm (l x diâmetro))Fisher</td> <td>Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10011792</tr><tr><td>Agulha (0,9 mm x 40&nbsp; mm de comprimento da cânula)</td> <td>Terumo UK Ltd</td><td>MN-2038MQ</td><td></td></tr><tr><td>Conjunto de suporte de retorta - Com suporte, braçadeira, base, haste, borracha 3 mandíbulas e bosshead</td><td>Camlab Ltd, Reino Unido</td><td>1177157</td><td></td></tr><tr><td>Equipamento de água Millipore</td><td>Barnstead Nanopure, Thermoscientific, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microcentrífuga Digital Progen Genfuge 24D</td><td>Progen Scientific</td><td>C-2400</td><td></td></tr><tr><td>Probe ultra-sonicator, com 13 mm&nbsp;</td><td>SONICS, Vibracell,&nbsp; Câmera USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 MP com foco automático e flash LED</td><td>Samsung Galaxy Fame Câmera</td><td></td><td></td>móvel</tr><tr><td>Raman Spectrometer</td><td>Horiba Jobin-Yvon LabRAM HR800 espectrômetro</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mastersizer 3000</td><td>&nbsp; Malvern Instruments Ltd, Malvern, Reino Unido</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Espalhamento de raios X a baixo ângulo (SAXS)</td><td>Câmera SAXSpace (Anton Paar, Graz, Áustria), equipamento gerador de raios X (ISO-DEBYEFLEX3003, GE Inspection Technologies GmbH), circuito fechado de água (Chilly 35, HYFRA, Alemanha).&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

preparação facile da internamente auto-montados lipid partículas estabilizada por nanotubos de carbono

Facile Preparation of Internally Self-assembled Lipid Particles Stabilized by Carbon Nanotubes

Nós apresentamos um método fácil de preparar partículas lipídicas nanoestruturados estabilizados por meio de nanotubos de carbono (CNT). De parede única (primitivo) e com paredes múltiplas (funcionalizados) nanotubos de carbono são usados ​​como estabilizadores para produzir emulsões de tipo óleo Pickering-em-água (O / W). Os lípidos ou seja, Dimodan L e Phytantriol são utilizados como emulsionantes, que em excesso de água auto-montar em fase cúbica bi continua Pn3m. Esta fase altamente viscoso é fragmentada em partículas menores, utilizando uma sonda ultrasonicator na presença de estabilizadores surfactantes convencionais ou nanotubos de carbono como feito aqui. Inicialmente, os nanotubos de carbono (pó) são dispersos em água seguido de mais ultra-sons, com o lípido fundido para formar a emulsão final. Durante este processo, os nanotubos de carbono se revestido com moléculas de lípidos, as quais, por sua vez, se suponha que rodeiam as gotículas de gordura para formar uma emulsão de partículas que é estável durante meses. O tamanho médio das partículas lipídicas nanoestruturados CNT-estabilizado é no submicrónica range, o que compara bem com as partículas estabilizadas utilizando surfactantes convencionais. Dados de Raios X de ângulo pequeno espalhamento confirma a retenção da fase cúbica inicial Pn3m nas dispersões de lípidos CNT-estabilizados em relação à fase lipídica pura (estado a granel). deslocamento para o azul e abaixamento das intensidades de bandas característico e L de nanotubos de carbono observados em espectroscopia Raman G &#39;caracterizar a interacção entre moléculas de superfície e de lípidos CNT. Estes resultados sugerem que as interacções entre os nanotubos de carbono e lípidos são responsáveis ​​pela sua estabilização mútua em soluções aquosas. À medida que as concentrações de nanotubos de carbono empregues para a estabilização são muito baixos e as moléculas de lípidos são capazes de funcionalizar os nanotubos de carbono, é esperado que a toxicidade de nanotubos de carbono a ser insignificante, enquanto a sua biocompatibilidade é grandemente aumentada. Por conseguinte, a presente abordagem encontra um grande potencial em várias aplicações biomédicas, por exemplo, para o desenvolvimento de sistemas de nanocarrier híbridos para a entrega de multiple moléculas funcionais como em terapia de combinação ou politerapia.

Os resultados seguintes representam a) a estabilidade de dispersões, b), a distribuição do tamanho de partículas de lípidos, c) do tipo de auto-montagem e d) a evidência para o revestimento lipídico de nanotubos de carbono. A estabilidade das dispersões (Figura 2) foi monitorado usando uma câmera de 5 MP com foco automático e flash LED. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53489/53489fig2.jpg" /> <s...

Relatamos uma aplicação inteligente de nanotubos de carbono para estabilização cinética de partículas lipídicas que contêm nanoestruturas automontadas em seus núcleos. A preparação de partículas lipídicas requer concentrações bastante baixas de nanotubos de carbono, permitindo seu uso em aplicações biomédicas, como administração de medicamentos.

Preparação Facile da Internamente auto-montados Lipid partículas estabilizada por nanotubos de carbono

We present a facile method to prepare nanostructured lipid particles stabilized by carbon nanotubes (CNTs). Single-walled (pristine) and multi-walled ...

O objetivo geral deste método é preparar partículas híbridas nanoestruturadas utilizando nanotubos de carbono, ou CNTs, e autoagregados lipídicos. Este método apresenta uma das aplicações inteligentes dos nanotubos de carbono, na qual ocorre a emulsão nanoestruturada estabilizada de partículas lipídicas internamente autoagregadas. A principal vantagem desta técnica é que o protocolo é bastante simples e combina propriedades dos CNTs e das nanoestruturas lipídicas.A estabilização dos CNTs produz uma emulsão de óleo e água na qual as partículas têm um tamanho de cerca de um mícron ou inferior, e o núcleo contém uma nanoestrutura lipídica cúbica bi-contínua. Devido ao revestimento dos CNTs com moléculas lipídicas biocompatíveis, espera-se que sua toxicidade seja baixa. Relatos recentes até o momento mostraram que a funcionalização reduz notavelmente os efeitos tóxicos e citotóxicos dos CNTs, ao mesmo tempo que aumenta a biocompatibilidade.Demonstrando o procedimento estará Yogita Patil-Sen, uma pós-doutoranda do meu laboratório, e Amin Sadeghpour, um pós-doutorando do laboratório da Professora Rappolt. Prepare uma solução de surfactante a 0,2% em água dissolvendo 200 miligramas do surfactante em 100 mililitros de água ultra-pura, sob agitação durante 20 a 30 minutos. Adicione 500 miligramas de Dimodan U fundido, DU, ou Fitantriol, ou PT, a um frasco de vidro.Em seguida, adicione 9,5 gramas da solução de F127 0,2%. Na máquina de ultrassonicação com sonda, prenda firmemente o frasco à morsa do suporte universal, de modo que ele possa resistir às vibrações geradas pela sonicação. Insira a sonda sólida de liga de titânio conectada ao sonicator de células.Ajuste a altura e a posição do frasco para garantir que suas laterais e fundo não toquem na sonda. Sonique a mistura por dez minutos em modo pulsado, com um pulso de um segundo seguido por um intervalo de um segundo, a 35% da potência. O frasco aquece muito devido ao calor gerado durante a sonicação.Portanto, deixe esfriar até a temperatura ambiente antes de removê-lo da pinça. Armazene a dispersão esbranquiçada formada à temperatura ambiente por pelo menos 24 horas antes de utilizá-la novamente. Isso é necessário para garantir sua estabilidade contra a separação em fases.Antes e depois de usar a sonda, limpe-a com acetona e seque com um papel toalha. Em seguida, enxágue-a com água ultra-pura e seque-a novamente. Em dois béqueres separados, pese quatro miligramas de CNTs funcionalizadas com hidroxila e quatro miligramas de CNTs funcionalizadas com carboxila, ambas na cor preta.Adicione 500 mililitros de água ultrapura a cada béquer. Usando um ultrassonicator de imersão, sonique as misturas por dois minutos em modo de pulso contínuo a 40% da potência. A concentração resultante da dispersão de nanotubos de carbono de múltiplas paredes é de oito microgramas por mililitro.Dilua a solução estoque de CNTs de múltiplas paredes com quantidades apropriadas de água ultrapura para obter dispersões de CNTs de múltiplas paredes em várias concentrações diferentes. Sonique essas dispersões como anteriormente. De forma semelhante, disperse três miligramas de CNTs em pó de parede simples em 500 mililitros de água ultrapura para preparar uma solução estoque de dispersão de CNTs de parede simples com concentração de seis microgramas por mililitro.Dilua a solução estoque de CNT de parede simples e sonique como antes para obter dispersões de CNT de parede simples em várias concentrações. Pese 500 miligramas do DU fundido em um frasco de vidro. Em seguida, adicione 9,5 mililitros da dispersão de CNT de parede simples a seis microgramas por mililitro ao frasco.Sonicar a mistura de CNT DU usando os mesmos parâmetros utilizados para preparar dispersões puras de CNT. Após resfriamento à temperatura ambiente, as partículas lipídicas estabilizadas com CNT, com nanoestrutura autossimilar interna conservada, estarão prontas. De maneira semelhante, prepare as partículas lipídicas utilizando as dispersões de CNT de parede simples de 0,4 microgramas por mililitro e 0,2 microgramas por mililitro.Sonicar as dispersões de CNT PT a 35% de potência por um tempo mais longo de quinze minutos em modo de pulso contínuo. Resfrie as dispersões até a temperatura ambiente e deixe-as em repouso por 24 horas antes de caracterizá-las. Monitore a estabilidade das dispersões por observação visual.Verifique se as dispersões estão desestabilizadas ou se se formaram grumos nas dispersões. Tire fotos em intervalos regulares com uma câmera digital. Por exemplo, tire fotos das dispersões todos os dias na primeira semana.Então a cada dois dias durante uma semana. Seguido por uma vez por semana nas próximas duas semanas e, finalmente, uma vez por mês conforme necessário. A técnica de espalhamento de raios X em pequeno ângulo é utilizada para determinar o tipo de rede da inter-nanoestrutura das partículas lipídicas estabilizadas.Encha a amostra em um capilar de quartzo de um milímetro e feche-o adequadamente. Em seguida, coloque o capilar em uma platina de amostra com controle de temperatura. Evacue a câmara de amostra utilizando uma bomba de vácuo.Registre os padrões de espalhamento 1D com um detector de raios X de microfita controlado por software. Após obter três perfis com um tempo de exposição de 300 segundos, integre esses perfis e prossiga com a análise conforme descrito no protocolo textual. Indexe todos os padrões de difração registrados com o grupo espacial PN3M, no qual as reflexões um-um-zero, um-um-um, dois-zero-zero, dois-um-um, dois-dois-zero e dois-dois-um podem ser claramente observadas.O fase cúbica lipídica altamente viscosa é desagregada em partículas por meio de ultrassonicação. Nanotubos de carbono de parede simples preservados ou de parede múltipla funcionalizados são utilizados como estabilizantes para produzir uma emulsão de óleo e água com consistência fluida. Uma proporção ideal de nanotubos de carbono para lipídio é necessária para obter emulsões homogêneas e estáveis.Emulsões com quantidade insuficiente de CNTs contêm grumos de lipídio. Já emulsões com excesso de CNTs contêm grumos de lipídio com CNTs. Os padrões de espalhamento de raios X em ângulo pequeno confirmam que a fase cúbica PN3M, exibida também pelo lipídio Phytantriol a granel em excesso de água, é mantida em emulsões estabilizadas por F127, bem como em todas as emulsões estabilizadas por CNTs.Estudos de espalhamento estático de luz demonstram que a distribuição de tamanho de cubossomos estabilizados por F127 é comparável à distribuição de tamanho de cubossomos estabilizados por CNT, e o tamanho médio das partículas encontra-se na faixa submicrométrica. As bandas características G e G linha prima, ou CNTs observadas em espectros Raman, apresentam deslocamento para o azul em partículas lipídicas estabilizadas por CNT. Isso demonstra o possível revestimento de CNTs por moléculas lipídicas, conforme representado neste diagrama esquemático.Após assistir a esta revisão, você deverá ter uma boa compreensão de como preparar partículas híbridas de lipídeos e nanotubos de carbono, conforme demonstrado em poucos e simples passos. Essas partículas lipídicas nanoestruturadas envolvem o aprendizado de moléculas funcionais dentro da autoagregação lipídica, bem como na superfície dos nanotubos de carbono, o que abre caminho para a exploração de nanomoléculas híbridas em terapias combinadas contra doenças graves.

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Química

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