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DOI: 10.3791/53900-v
Marco Giallombardo*1,2, Jorge Chacártegui Borrás*2,3, Marta Castiglia4, Nele Van Der Steen3, Inge Mertens5,6, Patrick Pauwels7,3, Marc Peeters8,3, Christian Rolfo2,3
1Department of Biopathology and Medical Biotechnology, Section of Biology and Genetics,University of Palermo, 2Phase I-Early Clinical Trials Unit, Oncology Department,Antwerp University Hospital (UZA), 3Center for Oncological Research (CORE),Antwerp University, 4Department of Surgical, Oncological and Oral Sciences, Section of Medical Oncology,University of Palermo, 5Flemish Institute for Technological Research (VITO), 6CORE, Campus Groenenborger,Antwerp University, 7Molecular Pathology, Pathology Department,Antwerp University Hospital (UZA), 8Oncology Department,Antwerp University Hospital (UZA)
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Este protocolo descreve a viabilidade de realizar o perfil de miRNAs em exossomos, liberados no plasma de pacientes com NSCLC, por meio de um kit comercial de isolamento de exossomos com tratamentos com Proteinase K e RNAse, a fim de evitar a contaminação de miRNAs circulantes e avaliar suas características de biomarcadores em NSCLC.
O objetivo geral deste procedimento é isolar exossomos presentes no plasma de pacientes com NSCLC que estão livres de fontes de micro RNA não exossômicas, como micro RNAse circulante livre, usando um tratamento enzimático duplo antes do isolamento do exossomo. Este método pode auxiliar na análise de biópsias lipídicas de microRNA para o compartimento do exossomo, o que ajudará a elucidar seu uso como biomarcadores. A principal vantagem deste procedimento é o pré-tratamento enzimático que elimina fontes não exossômicas de micro RNA que poderiam interferir na análise.
Para começar, descongele uma amostra de plasma de um mL no gelo. Depois de descongelado, inverta o tubo várias vezes para desagregar quaisquer crioprecipitados que possam ter se formado. Em seguida, centrifugue o plasma a 2.000 G por 20 minutos à temperatura ambiente para remover células e detritos.
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