Name: Eliciando e Analisando Canções de Vocalização Ultrassônica de Rato Masculino (USV) (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 44 s
Description: Aprenda a registrar e analisar vocalizações ultrassônicas em camundongos machos adultos em diferentes contextos sociais. Este método permite estudar comunicação vocal e distúrbios neuropsiquiátricos em modelos animais.

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Este trabalho foi apoiado pelo Howard Hughes Medical Institute fundos para EDJ. Agradecemos ao Pr. Sylvie Granon (NeuroPSI - Universidade Paris sul XI - França) por nos emprestar o hardware do alto-falante. Agradecemos também aos membros do Laboratório Jarvis por seu apoio, discussões, correções e comentários sobre este trabalho, especialmente Joshua Jones Macopson para ajuda com figuras e testes. Agradecemos ao Dr. Gustavo Arriaga pela ajuda com o software Mouse Song Analyzer, atualizando-o para a V1.3 e outros aspectos deste protocolo. V1.0 do software foi desenvolvido por Holy e Guo, e v1.1 e v1.3 por Arriaga.

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<li>Holfoth, D. P., Neilans, E. G., Dent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrimination+of+partial+from+whole+ultrasonic+vocalizations+using+a+go%2Fno-go+task+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Acoust.+Soc.+Am%22%5BJournal%5D)">Discrimination of partial from whole ultrasonic vocalizations using a go/no-go task in mice.</a> J. Acoust. Soc. Am. 136, 3401(2014).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Este protocolo fornece abordagens para coletar, quantificar e estudar vocalizações macho namoro namoro no laboratório em uma variedade de estímulos, principalmente feminino-relacionados. Conforme apresentado anteriormente em Chabout, et al. 23 e nos resultados representativos, o uso deste método nos permitiu descobrir vocalizações contextuais e sintaxe que importam para as fêmeas receptoras. A padronização desses estímulos proporcionará a coleta de um número confiável de USVs e permitirá análises detalhadas das canções e repertórios do namoro masculino. Quando uma fêmea viva está presente com o macho, o protocolo não nos permite identificar claramente o emissor das vocalizações. No entanto, estudos anteriores mostraram que a maioria das vocalizações emitidas nesse contexto eram do sexo masculino 26 , 29 . A maioria dos estudos usando um congênero (masculino ou feminino)Como um estímulo para os machos acreditam que a quantidade de vocalizações femininas nesses contextos é desprezível 4 , 5 , 22 , 30 . No entanto, um artigo recente usou a triangulação para localizar a vocalização do emissor em condições de alojamento em grupo 31 e mostrou que dentro de uma díade, a fêmea contribui para ~ 10% dos USVs. No presente protocolo o uso da fêmea anestesiada permite ao usuário estudar as vocalizações masculinas na presença de uma fêmea sem sua vocalização. Em contraste com as expectativas deste estudo recente 31 , não encontramos diferença no número de sílabas emitidas entre as condições FE e AF 23 . É possível que as fêmeas vivas não contribuíram significativamente para as gravações ou que os machos vocalizaram menos na presença de fêmeas vivas versus fêmeas anestesiadasAles No entanto, acreditamos que futuras experiências devem considerar o uso deste método de triangulação para avaliar o efeito potencial da contribuição feminina. Há outros softwares disponíveis que podem fazer algumas das etapas que descrevemos, embora não acreditemos de forma suficiente para as perguntas que fizemos usando uma combinação de três programas: Software A, Mouse Song Analyzer software C usando o software B Software de análise de sintaxe usando cálculos de D + E de um software de planilha personalizado e decodificação de sintaxe usando R. Por exemplo, um artigo recente propôs um software chamado VoICE que permite ao usuário extrair variáveis ​​acústicas automaticamente a partir dos sonogramas ou diretamente em unidades que tinham sido manualmente Selecionado pelo usuário 32 . Mas, as análises de seqüência automatizadas ou semi-automatizadas não são tão detalhadas quanto a nossa abordagem. Alguns softwares comerciais podem analisar automaticamente os recursos acústicos, mas não fornecemClassificação das sílabas; O usuário tem que classificar as diferentes sílabas depois. Grimsley, Gadziola, et ai. 33 desenvolveu um programa de órgão vocal de rato virtual baseado em mesa que agrupa sílabas baseadas em características acústicas compartilhadas, mas não fornece detecção automática das sílabas. Seu programa 34 é único porque cria novas sequências de músicas gravadas usando modelos de Markov e, portanto, possui recursos mais avançados do que simples edição. A maioria dos estudos prévios de comunicação em ratos concentrou-se no lado do emissor 35 , 36 . Poucos estudos exploraram o lado do receptor 30 , 37 , 38 . Os protocolos de reprodução e discriminação fornecem um teste simples para estudar o lado do receptor, como o descrito também recentemente por Asaba, Kato, etAl. 39 . Nesse estudo, os autores usaram uma caixa de teste de duas opções separada com espuma acústica em vez da caixa Y-labirinto descrita aqui. Ambas as configurações de escolha têm vantagens e desvantagens. Primeiro, o labirinto Y não isolar o som de um braço para o outro, mas a caixa de duas opções faz. No entanto, usando o design Y-labirinto, o animal pode rapidamente avaliar as duas músicas que são tocadas simultaneamente, e avançar para o preferido. No entanto, experimentos de reprodução em geral ajudam os experimentadores a determinar o significado e, portanto, as funções das vocalizações geradas para animais conspécificos. Em conclusão, após dominar as técnicas deste protocolo e análises, os leitores devem ser capazes de abordar muitas questões que influenciam o contexto, genética e neurobiologia de USVs mouse. Usando ratos B6D2F1 / J, os estímulos associados femininos quase sempre provocam USVs dos machos testados em nosso laboratório. É crítico paraCt sílabas suficientes (&gt; 100 em 5 min) para ser capaz de obter forte análise estatística. Para solução de problemas, se nenhum USVs for gravado (ou não o suficiente), verifique a configuração para certificar-se de que os sons são gravados. Fazer uma inspeção ao vivo do que está acontecendo na gaiola durante a gravação, olhando para o ultra-som em tempo real na tela do computador após a introdução do estímulo. Caso contrário, tente re-expor o macho a uma fêmea sexualmente madura / receptiva durante a noite e depois deixá-los sozinhos por vários dias ou até uma semana antes de gravar novamente. Com base em observações anedóticas, descobrimos que alguns machos cantam muito em um dia (por quase todos os 5 min), e não muito no dia seguinte e, em seguida, novamente outro dia. Nós não sabemos a razão pela qual tal variabilidade sujeito dentro ocorre, mas supomos que é provavelmente um motivacional ou sazonal para os homens, eo estado de estro para a urina feminina. Se nenhum USVs for gravado, tente gravar o animal em vários dias para pegar esses efeitos variáveis. NãoIke nas aves canoras, não observamos diferenças evidentes na quantidade de canto com base na hora do dia. Descobrimos que os machos não cantam muito (&lt;100 sílabas em 5 min) antes de terem 7 semanas de idade. Os métodos de detecção apresentados aqui podem extrair milhares de sílabas e todos os parâmetros acústicos em poucos minutos. Mas como qualquer método de detecção automática, é muito sensível ao ruído de fundo. O uso do software de detecção de Song Song com gravações barulhentas (por exemplo, de animais gravados com camas) pode exigir ajuste do &quot;limiar&quot; de detecção para permitir mais flexibilidade. No entanto, isso também aumentará o número de sílabas falso-positivas ea detecção automática poderá falhar. Em tais circunstâncias, a codificação manual pode ser usada. Como mencionado anteriormente, o número, os repertórios e a latência das vocalizações são amplamente variáveis ​​dependendo da tensão, assim, pode-se ter que mudar os parâmetros (comprimento da gravação,Estímulo, detecção automatizada de sílabas, etc. ) para algumas cepas para garantir gravações óptimas para análises estatísticas.

Em relação aos seres humanos, os ratinhos produzem vocalizações de frequências baixas e altas, as mais tarde conhecidas como vocalizações ultra-sônicas (USVs) acima da nossa faixa auditiva. Os USVs são produzidos em uma variedade de contextos, incluindo de mãe-pup retrieval, interações juvenis, ao oposto ou mesmo sexo adulto interações 4 , 12 . Estes USVs são compostos de um repertório multisilábico diverso que pode ser categorizado manualmente 9 ou automaticamente 10 , 11 . O papel destes USVs na comunicação tem estado sob crescente investigação nos últimos anos. Estes incluem o uso de USVs como leituras de mouse modelos de transtornos neuropsiquiátricos, de desenvolvimento ou comportamentais 7 , 8 , internos e motivacionais / estados emocionais [ 13] . Os USVs são pensados ​​para transmitir informações confiáveis ​​sobre o eQue é útil para o receptor 14 , 15 . Em 2005, Holy e Guo 11 , avançaram a idéia de que os ratos machos adultos USVs foram organizados como uma sucessão de elementos de chamada multisilábica ou sílabas semelhantes aos pássaros canoras. Em muitas espécies, um repertório multisilábico permite ao emissor combinar e ordenar sílabas de diferentes maneiras para aumentar as informações potenciais transportadas pela música. Acredita-se que a variação nesta sintaxe tenha uma relevância etológica para o comportamento sexual e as preferências de mate 16 , 17 . Estudos posteriores mostraram que os ratos machos foram capazes de alterar a composição relativa dos tipos de sílaba que produzem antes, durante e depois da presença de uma fêmea 5 , 18 . Ou seja, os ratos machos adultos usam seus USVs para comportamento de namoro, seja para atrairOu manter contato próximo com uma fêmea, ou para facilitar o acasalamento 19 , 20 , 21 . Eles também são emitidos nas interações homem-macho, provavelmente para transmitir informações sociais durante as interações 4 . Para captar essas mudanças nos repertórios, os cientistas geralmente medem as características espectrales (parâmetros acústicos, como amplitude, freqüências, etc. ), número de sílabas ou chamadas de USVs e latência para o primeiro USV. No entanto, poucos realmente olhar para a dinâmica de seqüência destes USVs em detalhe 22 . Recentemente, nosso grupo desenvolveu um novo método para medir mudanças dinâmicas nas seqüências de sílaba USV 23 . Mostramos que a ordem da sílaba dentro de uma canção sobre (ou seja, a sintaxe) não é aleatória, que muda dependendo do contexto social, e que os animais ouvintes detectam essas mudanças como sendo etologicamente relevantes. Nós notamosEm muitos investigadores que estudam a comunicação animal não atribuem ao termo &quot;sintaxe&quot; o mesmo significado exato que a sintaxe usada na fala humana. Para estudos de comunicação animal, nós simplesmente queremos dizer uma sequência ordenada, não-aleatória de sons com algumas regras. Para seres humanos, além disso, as sequências específicas são conhecidas por terem significados específicos. Não sabemos se esse é o caso dos ratos. Neste artigo e vídeo associado, pretendemos fornecer protocolos fiáveis ​​para gravar os camundongos machos em vários contextos e fazer reproduções. O uso de três software utilizado sequencialmente para: 1) gravações automatizadas; 2) detecção e codificação de sílabas; E 3) análise em profundidade das características da sílaba e sintaxe é demonstrada ( Figura 1 ). Isso nos permite aprender mais sobre a estrutura e função do USV camundongos. Acreditamos que tais métodos facilitam a análise de dados e podem abrir novos horizontes na caracterização da comunicação vocal normal e anormalSe modelos de comunicação e distúrbios neuropsiquiátricos, respectivamente.

<table><tbody><tr><td>Refrigerador de praia à prova</td><td>de som Veja o papel Gus tem mais informações sobre o tipo</td><td></td> específico <td>Dimensões internas (L 27 x W 23 x H 47 cm):</td></tr><tr><td>Microfone de ultrassom condensador CM16/CMPA</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlim, Alemanha</td><td>#40011</td><td>Inclui cabo de extensão&nbsp;</td></tr><tr><td>Placa de som Ultrasound Gate 1216H</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlim, Alemanha</td><td>#34175</td><td>Placa de som de 12 canais</td></tr><tr><td>Ultrasound Gate Player 216H</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlim, Alemanha</td><td>#70117</td><td>Leitor de reprodução de 2 canais</td></tr><tr><td>Alto-falante eletrostático ultrassônico ESS polaroid</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlim, Alemanha</td><td>#60103</td><td>2 alto-falantes de reprodução</td></tr><tr><td>Gaiola de teste&nbsp;</td><td>Ace</td><td>#PC75J</td><td>30 x 8 x 13 cm de altura; plexiglas</td></tr><tr><td>separação de plexiglas</td><td>caseira</td> <td>-</td> <td>4 x 13 cm plexiglas com furos de 1 cm</td></tr><tr><td>Câmera de vídeo</td><td>Logitech</td><td>C920</td><td>logitech HD Pro webcam C920</td></tr><tr><td>Almofada de calor&nbsp;</td><td>Sunbeam</td><td>722-810-000</td><td></td></tr><tr><td>Y-maze&nbsp;</td><td>Feito em</td> <td>casa-Dimensões</td> <td>internas (L 30 x W 11 x H 29 cm):</td></tr><tr><td>Pinças</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Avisoft Recorder (Software A)</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlim, Alemanha#</td><td>10101, #10111, #10102, #10112</td><td>http://www.avisoft.com</td></tr><tr><td>MATLAB R2013a (Software B)</td><td>MathWorks</td><td>-</td><td>MATLAB R2013a (8.1.0.604)</td></tr><tr><td>Mouse Song Analyzer v1.3 (Software C)</td><td>Projetado por Holy, Guo, Arriaga, & Jarvis; Funciona com o software B</td><td></td><td>http://jarvislab.net/wp-content/uploads/2014/12/Mouse_Song_Analyzer_ v1.3-2015-03-23.zip</td></tr><tr><td>Microsoft Office Excel 2013 (Software D)</td><td>Guia</td> de Análise de Músicas do <td>Microsoft-Microsoft</td> <td>Office Excel</td></tr><tr><td>v1.1 (Software E)</td><td>Projetado sob medida por Chabout & Jarvis. Planilhas de calculadora do Excel, funciona com o software D</td><td></td><td>http://jarvislab.net/wp-content/uploads/2014/12/Song-analysis_Guided.xlsx</td></tr><tr><td>Sintaxe decorder v1.1 (Software F)</td> <td>Projetado por Sakar, Chabout, Dunson, Jarvis - no estúdio</td><td></td> R <td>https://www.rstudio.com/products/rstudio/download/</td></tr> <tr><td>Graphiz (Software G)</td> <td>AT & T Research e outros&nbsp;</td><td></td><td>http://www.graphviz.org</td></tr><tr><td>Avisoft SASLab (Software H)</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlim, Alemanha#</td><td>10101, #10111, #10102, #10112</td><td>http://www.avisoft.com</td></tr><tr><td>Reagentes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xilazina (20 mg/mL)</td><td>HCl</td> <td>de cetamina</td><td></td> anaseizada</tr> <tr><td>(100 mg/mL)</td><td>Henry Schein</td><td>#045822</td><td></td></tr><tr>água <td></td><td></td><td></td><td>destilada</td></tr><tr><td>Pomada para os olhos&nbsp;</td><td>Pomada Veterinária Puralube&nbsp;</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Pontas</td><td></td><td></td><td></td>de algodão</tr><tr><td>Placa</td><td></td><td></td><td></td> de Petri</tr></tbody></table>

eliciando e analisando canções de vocalização ultrassônica de rato masculino (usv)

Eliciting and Analyzing Male Mouse Ultrasonic Vocalization (USV) Songs

Os ratos produzem vocalizações ultra-sônicas (USVs) em uma variedade de contextos sociais ao longo do desenvolvimento e da idade adulta. Estes USVs são usados ​​para a recuperação 1 da mãe-filhote, interações juvenis 2 , interações opostas e do mesmo sexo 3 , 4 , 5 , e interações territoriais 6 . Durante décadas, os USVs têm sido utilizados pelos investigadores como proxies para estudar neuropsiquiátricos e transtornos comportamentais ou de desenvolvimento 7 , 8 , 9 e, mais recentemente, para compreender mecanismos e evolução da comunicação vocal entre os vertebrados 10 . Dentro das interações sexuais, ratos machos adultos produzem canções USV, que têm algumas características semelhantes às canções de namoro de aves canoras 11 . A utilização de tal repertório multisilábicoToires pode aumentar a flexibilidade potencial ea informação que carregam, porque podem ser variados em como os elementos são organizados e recombined, a saber syntax. Neste protocolo é descrito um método confiável para a obtenção de canções USV de ratos machos em vários contextos sociais, tais como exposição a urina feminina fresca, animais anestesiados e fêmeas em estro. Isto inclui condições para induzir uma grande quantidade de sílabas dos ratinhos. Reduzimos a gravação de ruídos ambientais com câmaras de som de baixo custo e apresentamos um método de quantificação para detectar, classificar e analisar automaticamente os USVs. Este último inclui a avaliação da taxa de chamada, repertório vocal, parâmetros acústicos e sintaxe. Várias abordagens e insights sobre o uso de reproduções para estudar a preferência de um animal por tipos de canções específicas são descritos. Estes métodos foram utilizados para descrever alterações acústicas e de sintaxe em diferentes contextos em camundongos machos e preferências de canções em ratinhos fêmeas.

No presente protocolo, foram caracterizadas alterações no comportamento vocal e sintaxe de camundongos B6D2F1 / J machos. Em geral, usando este protocolo, foi possível registrar, em média por macho por sessão de 5 min, 675 ± 98,5 sílabas classificadas em resposta à UR feminina, 615,6 ± 72 na FE, 450 ± 134 na FA, 75,6 ± 38,9 na AM e 0,2 ± 0,1 em UR macho (n = 12 machos). As taxas foram ~ 130 sílabas / min para mulheres UR, ~ 120 sílabas / min para FE, ou ~ 100 sílabas / min para AF contextos ( Figura 5A ). Os machos produzem uma quantidade muito maior de sílabas em resposta à urina recém-coletada em relação à urina coletada durante a noite 10 , 23 . Os machos também cantam consideravelmente menos na presença de uma anestesia masculina ou urina masculina fresca Figura 5A ). Os homens também mudam seu repertório através do contexto 23 . Por exemplo, os machos B6D2F1 / J aumentam significativamente Produção de sílabas de "m" de salto de passo múltiplo na condição de urina feminina ( Figura 5B ). Eles também mudam as características acústicas das sílabas individuais através do contexto. Por exemplo, os machos B6D2F1 / J cantam sílabas com maior amplitude e largura de banda no contexto da urina feminina e maior pureza espectral no contexto feminino acordado em comparação com os outros ( Figura 6 ) 23 . Este protocolo também fornece um meio para medir características dinâmicas de seqüência e, portanto, mudanças de sintaxe. Utilizando um mï¿½odo adaptado de Ey, et al. 22 , usamos o ISI para definir os intervalos entre as sequências ( Figura 7A ) 23 , e então usamos as lacunas para distinguir e analisar os padrões temporais de seqüências de sílabas. Mostramos que os comprimentos de sequência mais longos são produzidos no contexto feminino acordado ( Figura 7B )F "&gt; 23. Esta técnica permite calcular a razão de sequências complexas (composta por pelo menos 2 ocorrências do tipo" sílica m ") em relação a sequências simples (composta de um ou nenhum tipo" m "e, portanto, principalmente por" ( Figura 7C ) 23 , indicando que produziram sílabas mais complexas na condição da urina feminina, mas também que tais sílabas estão distribuídas Sobre mais sequências. Também somos capazes de calcular as probabilidades de transição condicional de um tipo de sílaba para outro (24 tipos de transição total incluindo as transições de e para o estado de "silêncio") 23 . Descobrimos que em contextos diferentes, a escolha dos ratos de tipos de transição para as sílabas de partida dadas difere, e que há mais sintaxe divIdades na condição da urina feminina ( Figura 8 ) 23 . Estas observações são consistentes com relatos anteriores que mostram que os machos podem alterar as características acústicas ou repertório composição de suas vocalizações em resposta a diferentes estímulos e experiências 4 , 5 , 24 . Finalmente, o presente protocolo fornece orientação para testar preferências femininas com playbacks. Descobrimos que as fêmeas B6D2F1 / J preferem canções mais complexas (contendo 2 ou mais sílabas "m") em relação a canções simples 23 . A maioria das mulheres escolheu ficar mais frequentemente do lado do labirinto em Y que tocava as músicas complexas ( Figura 4B ). <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig1.jpg"> Figura 1: Fluxograma de SofUtilização e Análises. Cada programa e código associado recebe um nome de letra para ajudar a explicar sua identidade e uso no texto principal. Em () são os programas específicos que usamos em nosso protocolo. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig2.jpg"> Figura 2: Configuração para gravar músicas de ratos masculinos. (A) Imagem de uma caixa de gravação de atenuação de som e configurada para gravar vocalizações de USV. (B) Exemplo de sonograma de uma gravação feita com o Software A ( Tabela 1 ), incluindo características espectrais detalhadas calculadas por "Mouse Song Analyzer v1.3": duração, intervalo entre sílabas (ISI), frequência de pico min (Pf min) Frequência máxima de pico (Pf máx.), Início de frequência de pico (Pf start), frequência de pico Fim (fim Pf) e largura de banda. (C) Sonogramas de outro macho cantando para uma fêmea viva, dentro da caixa de atenuação de som e fora da caixa no banco de laboratório na mesma sala. Nossas observações anedóticas indicam que as gravações na caixa do mesmo animal mostram maior volume (intensidade mais forte) e menos harmônicos, mas nenhuma evidência de ecos na caixa sem espuma de som. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig3.jpg"> Figura 3: Captura de tela do "Mouse Song Analyzer v1.3" whis_gui Janela mostrando as diferentes opções disponíveis para análises. Os parâmetros mostrados são aqueles usados ​​para registrar USVs masculinos nas figuras e as análises de dados apresentadas (exceto a duração da nota min foi de 3 ms). .com / files / ftp_upload / 54137 / 54137fig3large.jpg "target =" _ blank "&gt; Clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig4.jpg"> Figura 4: Escolhas Femininas entre Reproduções de Canções Complexas e Simples. (A) Imagem do aparelho Y-labirinto utilizado e medições de dimensão. (B) Tempo gasto pelas fêmeas em cada braço, jogando a partir de um complexo (orina feminina eliciada) ou mais simples (acordada feminino eliciado) canção do mesmo macho. Os dados são apresentados para n = 10 ratinhos fêmeas B6D2F1J como média ± SE, com valores individuais também mostrados; 9 das 10 fêmeas mostraram preferência pela canção sílaba / seqüência mais complexa. * P &lt;0,05 teste t pareado de aluno. Figura modificada de Chabout, et al. 23 com permissão.Blank "&gt; Clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig5.jpg"> Figura 5: Número de sílabas emitidas e repertório em condições diferentes . (A) Taxa de produção de sílaba de machos em diferentes contextos. (B) Composições do repertório de machos quando na presença de urina feminina (UR), feminina anestesiada (FA), vigília feminina (FE) e anestesiada (AM). Os dados são apresentados como média ± SEM. P &lt;0,03; ** p &lt;0,005; *** p &lt;0,0001 para teste post-hoc de t de Student pareado após correção de Benjamini e Hochberg (n = 12 machos). Figura de Chabout, et al. 23 com permissão. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig5large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> Together.within-page = "1"&gt; <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig6.jpg"> Figura 6: Exemplos de características espectrais em contexto diferente. (A) Amplitude. * P &lt;0,025 para teste post-hoc de t de Student pareado após correção. (B) Faixa de freqüência ou largura de banda. *: P &amp; lt; 0,041; **: p &amp; lt; 0,005; ***: p &lt;0,0001 após correção. (C) Pureza espectral das sílabas. * P: &lt;0,025; **: p &amp; lt; 0,005; ***: p &lt;0,0001 após correção. Abreviações: urina feminina (UR), fêmea anestesiada (FA), mulher acordada (FE) e anestesiada (AM). As figuras modificadas de Chabout, et al. 23 com permissão. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig6large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> 37fig7.jpg "/&gt; Figura 7: Medições de Seqüência. (A) Uso do ISI para separar a seqüência. O ISI curto (SI) e o ISI médio (MI) são usados ​​para separar sílabas dentro de uma seqüência, e ISI longo mais de 250 ms (LI) separam duas seqüências. (B) Comprimento das seqüências, medido como número de sílabas por seqüência, produzido por machos em diferentes contextos. *: P &amp; lt; 0,025; ** p &lt;0,005; *** p &lt;0,0001 após a correção. (C) Relação de músicas complexas sobre canções simples produzidas por homens em contextos diferentes. * P &lt;0,041; ** p &lt;0,005; *** p &lt;0,0001 após a correção. Os dados são apresentados como média ± SEM (n = 12 machos). Figura de Chabout, et al. 23 com permissão. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig7large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> Figura 8: Diagramas de sintaxe da sílaba de seqüências baseadas em probabilidades condicionais para cada contexto. A espessura da seta é proporcional à ocorrência de probabilidade condicional de um tipo de transição em cada contexto em média de n = 12 machos: P (ocorrência de uma transição dada a sílaba inicial). Para maior clareza, raras transições abaixo de uma probabilidade de 0,05 não são mostradas. Figura de Chabout, et al. 23 com permissão. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig8large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Os ratos produzem um complexo repertório multisilábico de vocalizações ultra-sônicas (USVs). Estes USVs são amplamente utilizados como leituras para transtornos neuropsiquiátricos. Este protocolo descreve algumas das práticas que aprendemos e desenvolvemos para consistentemente induzir, coletar e analisar as características acústicas e sintaxe de canções de mouse.

Eliciando e Analisando Canções de Vocalização Ultrassônica de Rato Masculino (USV)

Mice produce ultrasonic vocalizations (USVs) in a variety of social contexts throughout development and adulthood. These USVs are used for mother-pup ...

O objetivo geral deste procedimento é coletar e realizar de forma confiável uma análise acústica em vocalizações ultrassônicas de camundongos machos adultos ou USVs em uma variedade de contextos sociais. Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave sobre comunicação vocal e distúrbios associados. Incluindo transtornos neuropsiquiátricos e transtornos autistas usando modelos de camundongos.Uma das principais vantagens dessa técnica é que ela fornece um meio para obter USVs em vários contextos. Geralmente, indivíduos novos nesse método podem ter dificuldade para fazer com que seus ratos se comportem, então você deve manuseá-los com cuidado e delicadeza para fazê-los cantar. O alojamento padrão dos animais é suficiente para este protocolo.Três dias antes de fazer uma gravação em gaiolas neutras, exponha os machos a uma fêmea receptiva sexualmente madura durante a noite. Em cada gaiola, até três machos podem ser emparelhados com uma fêmea. No dia seguinte, remova as fêmeas.Mantenha os machos alojados em seus grupos por pelo menos mais dois dias antes da primeira sessão de gravação. Para registrar USVs de um macho preparado, transfira suavemente o animal pela cauda para uma gaiola limpa sem cama. Coloque esta gaiola dentro de uma caixa à prova de som.Em seguida, cubra a gaiola com a tampa aberta com fio. Feche a caixa e deixe o animal se habituar a ela por 15 minutos Enquanto isso, prepare um estimulante para o ensaio, conforme descrito na seção seguinte. Para usar amostras de urina frescas, colete-as dentro de cinco minutos após a sessão de gravação.Primeiro pegue um rato pela nuca como para uma injeção de droga. Em seguida, usando uma ponta de algodão presa por uma pinça, esfregue suavemente e empurre a bexiga do animal para extrair uma gota de urina e absorva-a completamente com o algodão. Em seguida, selecione um mouse de uma gaiola diferente e repita o processo usando a mesma ponta de algodão.Usar uma mistura de urinas frescas é importante. Guarde a ponta de algodão em um prato limpo até que seja necessário Para preparar uma fêmea alerta como estímulo, selecione uma que esteja no estágio de pré-estro ou estro. O camundongo terá uma ampla abertura vaginal e tecido rosa ao redor.Isole essa fêmea até que seja necessário. Para preparar um camundongo anestesiado, basta fornecer anestesia como de costume. Confirme o estado anestesiado com uma pitada no dedo do pé e aplique pomada oftálmica.Até que seja necessário, mantenha o animal anestesiado em uma gaiola limpa em uma toalha de papel com uma almofada térmica embaixo da gaiola ajustada para o calor mínimo. Certifique-se de verificar regularmente a respiração e a temperatura corporal dos animais. O camundongo anestesiado pode ser usado em até três sessões consecutivas.Quando estiver pronto para gravar, clique no botão de gravação no software enquanto apresenta simultaneamente o estímulo. Para apresentar urina ou um animal vivo, basta colocá-lo dentro da gaiola. Para apresentar um animal anestesiado, no entanto, coloque-o em cima da tampa das gaiolas.Em seguida, feche silenciosamente a caixa e registre USVs por cinco minutos ou mais. Para encerrar uma gravação, pressione o quadrado de parada no software. Verifique o animal anestesiado pelo menos a cada 15 minutos.Até que tenha recuperado a decúbito esternal. Em seguida, ele pode ser devolvido à sua gaiola de origem. Entre os testes, limpe a gaiola de teste com álcool 70% e água destilada.Processe as gravações acústicas usando o software analisador de música do mouse. Sua sílaba, estrutura acústica e sintaxe podem, portanto, ser analisadas e reestruturadas para reprodução conforme necessário. Primeiro lave o aparelho de reprodução com álcool 70% seguido de água destilada.Use um labirinto em Y opaco de cor preta com braços de 30 centímetros. Nas extremidades de dois braços, há orifícios perfurados no nível do chão que se encaixam nos alto-falantes de ultrassom. Após a lavagem, seque o labirinto com uma toalha.Depois de seco, configure com os alto-falantes de reprodução e a câmera de vídeo suspensa montada. Para iniciar o teste, primeiro coloque a fêmea no labirinto por um período de habituação de 10 minutos. Após 10 minutos, se a fêmea não estiver no braço inicial, empurre-a suavemente de volta para o braço inicial e feche suavemente a janela de separação de plástico.Em seguida, inicie a gravação de vídeo e inicie as gravações de áudio na reprodução em loop. Por exemplo, toque uma música capturada da estimulação urinária em um braço e toque uma música capturada da estimulação feminina no outro braço. Agora permita que a fêmea explore o labirinto por cinco minutos.Isso constitui uma sessão. Após cinco minutos, pare a gravação e retorne a fêmea de volta ao braço inicial. Mantenha-a lá por um minuto durante a limpeza com água destilada para remover qualquer urina ou excremento.Faça isso entre todas as sessões. Para a segunda sessão, mude a reprodução gravada para os braços opostos e grave a fêmea explorando esse cenário por cinco minutos. Para a terceira e quarta sessões, repita os dois parâmetros da sessão anterior por um total de 20 minutos de gravações de teste.Sempre pare a gravação de vídeo no final de todas as sessões. Uma semana depois, realize outro teste na mesma coorte de animais. Mas use exemplos de músicas diferentes.Faça isso para reforçar a confiabilidade das descobertas. Para análise, meça o tempo gasto pelas fêmeas em cada braço para cada sessão. Utilizando o protocolo apresentado, foram caracterizadas alterações no comportamento vocal e na sintaxe de camundongos machos B6D2F1J.Durante uma sessão de gravação de cinco minutos, um homem médio respondeu de maneira muito diferente aos três estímulos. Os machos também mudaram seu repertório em todo o contexto. Por exemplo, em resposta à urina fresca, os machos produziram uma fração significativamente maior de vocalizações multissílabas em suas canções.Os machos também mudaram as características acústicas de sílabas individuais em todo o contexto. Por exemplo, eles cantaram certas sílabas em maior amplitude e largura de banda no contexto da urina feminina. E com maior pureza espectral no contexto feminino acordado.Em um teste de preferência de música, as mulheres em um labirinto em Y optaram por passar mais tempo no braço com músicas complexas contendo duas ou mais vocalizações multissílabas. Ao contrário do braço oposto, onde apenas músicas simples eram tocadas. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como coletar USVs de camundongos em uma variedade de contextos sociais, como reproduzi-los para os camundongos e como fazer análises acústicas e de sequência de suas vocalizações.Uma vez masterizado, as gravações de comportamento podem ser feitas dentro de cinco a 10 minutos por mouse. Você deve aguardar várias horas para análise. E certifique-se de manusear os ratos com cuidado, para não alterar as respostas comportamentais.

eliciting-and-analyzing-male-mouse-ultrasonic-vocalization-usv-songs

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

As vocalizações ultrassônicas (USVs) em camundongos diferem dependendo da idade, sexo, condição e histórico genético. Usando dois emissores de ultrassom transmitindo simultaneamente em locais diferentes, este teste de duas opções pode avaliar o reconhecimento murino e as respostas de preferência a diferentes características dos USVs.

Determinando Preferências Ultrasonic vocalização em ratos utilizando um teste de reprodução de dois escolha

As vocalizações ultrassônicas de camundongos são usadas como proxies para modelar as bases genéticas dos déficits de comunicação vocal em modelos de camundongos para distúrbios neuropsiquiátricos. O presente protocolo descreve três contextos experimentais que provocam vocalizações ultrassônicas de forma confiável de filhotes (ao longo do desenvolvimento) e camundongos adultos (interações entre pessoas do mesmo sexo, interações macho-estro feminino).

Gravação mouse ultra-som vocalizações para avaliar Comunicação Social

Atividade locomotora (LMA) é uma medida simples e de fácil execução de comportamento em camundongos. O acoplamento do software de rastreamento de vídeo (VTS) e LMA permite a melhoria da especificidade e sensibilidade, especialmente quando comparado com o manual, o método de análise cruzando a linha de LMA. Além disso VTS permite o acompanhamento a longo prazo de rato LMA.

Rato de curto e longo prazo da atividade locomotora analisados ​​pelo software Rastreamento Vídeo

Este artigo apresenta um protocolo para um teste de condicionamento do medo contextual e cued usando um sistema de vídeo de análise para avaliar o medo de aprendizagem e memória em camundongos.

Contextual e Cued Medo Condicionado Teste Usando um sistema de análise de vídeo em Ratos

O paradigma de ligação distrator-resposta é descrito. Pode ser usado para lançar luz sobre a influência que estímulos irrelevantes, competindo com alvos por uma resposta, podem ter na ação humana. Tanto os efeitos de recuperação de resposta quanto os efeitos de inibição do distrator podem ser analisados dentro do paradigma.

Estímulos irrelevantes e Controle Ação: analisar a influência da Ignorado estímulos através do distrator-Resposta Encadernação Paradigm

Este manuscrito descreve um protocolo de labirinto aquático de Morris (MWM) adaptado para uso com um modelo de camundongo comumente usado da doença de Alzheimer. O MWM é amplamente utilizado em modelos de camundongos transgênicos. A implementação de um procedimento sensível à tensão de fundo do modelo de camundongo é essencial para detectar diferenças de grupo.

Morris Water Maze Teste: Otimização para Mouse e Strain Testing Ambiente

Este passo a passo protocolo analisa o comportamento de geotaxis negativo de drosófila usando um sistema automatizado de vários cilindro que hospeda centenas de moscas e sincroniza a sua acção por um motor elétrico. Após a sincronização, comportamento de voar geotaxis negativo é analisado, digitalmente gravada e analisados utilizando o software RflyDetection auto-concebidos.

Um ensaio automatizado rápida iterativo Geotaxis negativo para analisar o comportamento de adultos de escalada em um modelo de drosófila de neurodegeneração

Apresentamos a detecção, aquisição e análise das taxas de eyeblink enquanto assiste o conteúdo de mídia.

Usando medições de Eletroencefalografia e gravação de vídeo de alta qualidade para analisar a percepção Visual de conteúdo de mídia

Este artigo apresenta um aparelho automatizado de ZIF que inventamos, e um protocolo baseado no aparelho para análise de tomada de decisão baseada em atraso e tomada de decisão baseada no esforço em roedores em movimento livre.

Uma ZIF automatizado baseado aparelhos e protocolo para análise de tomada de decisão baseada em atraso e esforço em roedores em movimento livre

Este protocolo mede aprendizagem espacial e memória usando o labirinto de Barnes. Um novo paradigma de donzela em apuros é usado para avaliar a atividade locomotora e comportamento pró-social em camundongos.

Analisando a aprendizagem espacial e comportamento pró-social nos ratos usando o labirinto de Barnes e paradigmas de donzela em apuros

Aprenda a registrar e analisar vocalizações ultrassônicas em camundongos machos adultos em diferentes contextos sociais. Este método permite estudar comunicação vocal e distúrbios neuropsiquiátricos em modelos animais.

Eliciando e Analisando Canções de Vocalização Ultrassônica de Rato Masculino (USV)

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