Name: Criação de Sub-50 nm nanofluidic Junções em PDMS Microfluidic Chip via processo de automontagem de coloidal Particles (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: Aprenda a criar junções nanofluidicas sub-50 nm em chips de PDMS via automontagem de nanopartículas de sílica coloidal. Esta técnica permite a concentração eletrocinética de DNA e proteínas com membranas seletivas a cátions.

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Este trabalho foi financiado pelo NIH R21 EB008177-01A2 e New York University Abu Dhabi (NYUAD) Research Fund Enhancement 2013. Nós expressamos os nossos agradecimentos à equipe técnica do MIT MTL por seu apoio durante microfabricação e James Weston e Nikolas Giakoumidis de NYUAD para a sua apoio na tomada de SEM imagens e construir um divisor de tensão, respectivamente. A fabricação do dispositivo em PDMS foi realizada na unidade do núcleo de microfabricação NYUAD. Por fim, gostaríamos de agradecer a Rebecca Pittam a partir do Centro NYUAD para Scholarship Digital para a gravação de vídeo e edição.

1. Preparação da sílica coloidal Bead Suspensões <ol><li> Preparação de 300 nm e 500 nm de sílica suspensões grânulo <ol><li> Vortex a suspensão de pasta talão de sílica (10% w / v em água) durante 30 seg. para se obter uma suspensão homogénea. Pipetar um total de 600 ul da suspensão para um tubo de 1,5 mL e centrifuga-se que em 2600 xg durante 1 min. </li><li> Substituir o sobrenadante com 400 ul de tampão de fosfato de sódio 1 mM (PB, pH 7,0). </li><li> Suspender os grânulos de sílica para uma concentração final de 15% em solução de fosfato de sódio 1 mM, a pH 7,0 através de agitação em vórtice. </li></ol></li><li> Funcionalizar a superfície contas de 500 nm de sílica carboxilo com poli (cloridrato de alilamina, PAH), e com poli polielectrï¿½itos (estireno sulfonato de sódio, PSS) <ol><li> Suspender 0,1 g de esferas de sílica de 500 nm com um grupo carboxilo, com 10 mL de NaCl 1 M (pH 7,0) para 1% (w / v) de suspensão de pérolas. </li><li> Prepare 0,4% HAP (MW 65K) em 1 M NaCl por dissolução de 300 ul da solução-mãe (20% w / v em água) em 15 ml de 1 M de NaCl. Prepare 0,9% PSS (PM 70 K) em solução de 1 M de NaCl através da dissolução de 0,18 g PSS em 20 ml de solução 1 M de NaCl. Ambas as soluções Vortex durante 1 minuto. para dissolver os polielectrólitos completamente. </li><li> Adicionar 200 uL de solução de HAP a 9,8 ml de 1% de partículas de sílica carboxilo em um tubo de 15 mL para depositar uma camada de polielectrólito de carga positiva em grânulos de sílica com grupo funcional carboxilo. Vortex a suspensão de esferas durante 1 minuto. e incubar-lo no tubo de um rotor durante 60 min. à TA. </li><li> Centrifugar a suspensão do grânulo em 1801 xg durante 1 min. e lave os não ligados PAH cinco vezes com 10 ml de água DI. Depois de cada centrifugação e remoção do sobrenadante, as esferas foram densamente compactados na parte inferior do tubo. Interromper o grânulo aglomerado por pipetagem vigorosa com 2 ml de água desionizada antes da adição de 8 ml de água desionizada de modo a que as esferas podem ser re-suspenso e lavado antes do próximo passo de centrifugação. </li><li> Segueos passos em 1.2.3 e 1.2.4 para revestimento PSS para depositar uma camada carregada negativamente sobre os grânulos. Re-suspender as pérolas em 9,8 ml de NaCl 1 M antes da deposição PSS após a remoção do sobrenadante de água Dl a partir do passo de lavagem de 5 th 1.2.4. <ol><li> Utilizar o mesmo passo de pipetagem vigorosa com 2 ml de NaCl a 1 M para quebrar a aglomeração do grânulo na parte inferior do tubo de 15 ml e, em seguida, adicionar 8 mL de 1 M de NaCl. Adicionar 200 uL de solução de PSS para 9,8 ml das pérolas depositado sobre sílica com uma camada única de HAP. Após vortex durante 1 min. e incubação durante 60 min. na rotator tubo, repita 5 etapas de lavagem com água DI. </li><li> Medir o potencial zeta dos grânulos, antes e depois de cada revestimento polielectrólito utilizando um sistema de dispersão de luz dinâmica, de acordo com o protocolo do fabricante para verificar o procedimento de deposição de polielectrólito foi efectuado correctamente (ver Tabela 1). </li></ol></li><li> Repita cinco etapas de lavagem com água DI seguintes a camada PSS únicadeposição e re-suspender as pérolas em 650 ul de tampão de fosfato de sódio 1 mM com 0,05% de Tween 20 (15% w / v) antes da sua utilização no dispositivo de microfluidos para aumentar a sua fluidez. </li></ol></li><li> Siga o procedimento descrito acima 1.2.5 a 1.2.6 para 500 nm esferas de sílica com grupo funcional amina para depositar uma camada única de PSS. </li></ol> 2. Fabricação do PDMS Microfluidic Chip <ol><li> Microfabricação do mestre de silício <ol><li> Fabricar o mestre de silício para PDMS moldagem usando técnicas de microfabricação como segue. <ol><li> Spin revestimento de um fotorresiste fina 1 mm a 4.000 rpm em um wafer de silício. Padrão da camada usando projeção litografia (tempo de exposição de 170 ms.) E gravar 700 nanocanais planas profundas e 2 m de largura nm (atuando como nanoarmadilhas para as esferas de sílica) com gravação iónica reativa. </li><li> Utilize os seguintes parâmetros de gravura para alcançar uma taxa de corrosão de 3,5 nm / s: CHF 3 (45 sccm), (15 sccm) 4 CF, Ar (100 sccm), pressão de 100 mTorr, de potência de RF de 200 W. </li></ol></li><li> Spin revestir a segunda camada de fotorresiste de espessura 1 mm a 2.000 rpm e realizar um alinhamento com as nanoarmadilhas previamente modelados. Pattern os microcanais via litografia contato e por ataque profunda reativa iônica (DRIE) de silício. Utilizar a DRIE parâmetros 26 na Tabela 2. </li></ol></li><li> Fabricação de PDMS molde <ol><li> Silanizar o mestre de silício com trichlorosilane (50 ul) em um frasco de vácuo O / N. CUIDADO: Tricholorosilane é um material tóxico e corrosivo. Sempre usá-lo em uma capa química com equipamento adequado de proteção pessoal. </li><li> Misture a base para o agente de cura a 10: 1 de razão e elenco PDMS no mestre de silício silanizada e curá-la a 70 ° C durante 2 horas num forno de convecção. </li><li> Remova a placa de PDMS do mestre de silício com uma ligação faca e plasma-lo em um wafer em branco usando um aspirador de plasma depois de um pltratamento de asma num aspirador de plasma durante 1 min. Anexar fitas ao longo da borda para marcar uma linha de partição para os seguintes PDMS passo de fundição. </li><li> Silanizar o molde PDMS em um frasco de vácuo com trichlorosilane (50 ul) O / N. </li><li> Fundido PDMS (base: agente de cura na proporção de 10: 1) sobre o molde PDMS silanizada e curá-la a 70 ° C durante 2 horas num forno de convecção. </li></ol></li><li> Fabrico do dispositivo de PDMS <ol><li> Retire a laje PDMS curado a partir do molde PDMS ao longo da linha de partição marcada com a fita. </li><li> furos reservatórios perfurados com socos biópsia 1,5 mm, limpo, com uma fita, lavar com álcool isopropílico (IPA) e secar com azoto. </li><li> Plasma ligação do dispositivo de PDMS em um x 75 mm lâmina de microscópio de vidro de 25 mm após um tratamento com plasma em um aspirador de plasma para 1 min. </li></ol></li><li> Ultrasonicate da suspensão de esferas durante 60 minutos. num banho de ultra-sons antes do enchimento. Pipetar uma suspensão de esferas 10 ul (300 nm de sílica não-funcionalizado seranúncios, ou 500 nm esferas de sílica carboxilo com camadas HAP-PSS, ou 500 esferas de amina nm de sílica com uma camada PSS) para as entradas 4 e 6 cada (ver Figura 1 A, B), imediatamente após a colagem do plasma do chip PDMS a um substrato de vidro. Toque suavemente sobre o chip PDMS com uma ponta de pipeta para melhorar a embalagem do grânulo. <ol><li> Após o preenchimento dos canais de entrega de talão, cobrir todas as entradas, exceto para 1 e 9 com fita adesiva. Secar o dispositivo durante 3 h e armazenar a 4 ° C antes de usar. A Figura 2 apresenta um esquema passo-a-passo do processo de auto-montagem coloidal. </li></ol></li></ol> 3. Experiência por eletrocinéticas Concentração de DNA <ol><li> Encher os reservatórios 3, 7 com uma solução tampão (10 ul de PB 1 mM) e reservatório 5 com uma amostra de ADN (10 uL de 10 nM em PB 1 mM) e aplica uma pressão negativa suave com uma ponta de pipeta invertido em reservatórios 2 , 8 e 10 para preencher os canais com as soluções sem bolhas (ver <strong&gt; Figura 1B). </li><li> Adicionar 10 ml de PB 1 mM de reservatórios 2 e 8 e 10 ul de 10 nM DNA ao reservatório 10 para equilibrar a pressão e esperar por 5 min. para atingir o equilíbrio. </li><li> Insira os fios Pt em reservatórios 3, 5, 7, 10. </li><li> Aplicar a tensão através da junção nanofluidic utilizando um divisor de tensão ligado a um medidor de fonte e fios de Pt. Primeiro aplique 30 V em reservatórios 5, 10 e GND em reservatórios 3, 7. </li><li> Diminuir a tensão de 25 V no reservatório após 10 ~ 30 seg. </li><li> Usar um obturador mecânico com uma abertura periódica em cada 5 s para minimizar fotobranqueamento da amostra ao gravar os sinais de fluorescência do ADN. </li></ol>

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Os autores não têm nada a divulgar.

Seguindo o esquema de design do dispositivo comum para estudar nanofluidics, que fabricou uma junção nanofluidic entre dois canais microfluídicos usando a auto-montagem orientada por evaporação de nanopartículas coloidais em vez de lithographically padronização uma matriz de nanocanais. Quando fluir as partículas coloidais para dentro do canal de entrega do grânulo, uma matriz de nanoarmadilhas com uma profundidade de 700 nm e uma largura de 2 m em ambos os lados do canal de distribuição de pérolas a uma largura total d...

Nanofluidics é uma área emergente de pesquisa de u TAS (Micro Systems Analysis total) para estudar os processos biológicos ou fenómenos de transporte de íons e moléculas na escala de comprimento de 10 janeiro - 10 fevereiro nm. Com o advento das ferramentas nanofluidic como nanocanais, processos de transporte de moléculas e íons podem ser monitorizados com uma precisão sem precedentes e manipulado, se necessário, através da exploração de recursos que estão disponíveis apenas nesta escala de comprimento para a separação e detecção. 1,2 Um dos estas características em nanoescala característica é um elevado rácio de superfície de carga a granel (ou número Dukhin) em nanocanais que pode causar um desequilíbrio de carga e iniciar a polarização da concentração de iões (ICP) entre o nanochannel e 3 microcanal. Uma plataforma dispositivo comum para o estudo de fenómenos nanofluidic consiste de um sistema de dois microcanais ligados por uma matriz de nanocanais como uma junção 4-6. </sup&gt; O material de escolha para a construção de um dispositivo, tal nanofluidic é o silício devido à sua elevada rigidez, que evita que o canal de entrar em colapso durante o processo de colagem. 7 No entanto, o dispositivo de fabricação de silício requer máscaras caros e quantidade substancial de tratamento na instalação de salas limpas. 8- 10 Devido à facilidade de fabricação do dispositivo de moldagem por meio de colagem e de plasma, de polidimetilsiloxano (PDMS) tem sido amplamente aceite como um material de construção para microfluidos e seria um material ideal para nanofluidics bem. No entanto, módulo de sua baixa de Young em torno de 360-870 kPa, torna o canal PDMS facilmente desmontável durante a ligação de plasma. A razão mínima aspecto da nanochannel (largura de profundidade) tem de ser inferior a 10: 1, o que significa que o fabrico de dispositivos PDMS via fotolitografia padrão irá tornar-se extremamente difícil se a profundidade nanochannel tem de ser inferior a 100 nm, o que requer uma largura de canal menos do que o limite atual de fotolitoografia em cerca de 1 uM. Para superar essa limitação, tem havido tentativas de criar nanocanais em PDMS usando métodos não-litografia, como alongamento para iniciar rachaduras com profundidade média de 78 nm 11 ou para formar rugas após o tratamento de plasma. 12 desmoronamento de um canal de PDMS com pressão mecânica permitiu uma altura nanochannel tão baixo quanto 60 nm. 13 Mesmo que esses métodos não litográficas altamente inventivos permitido nanocanais construção abaixo de 100 nm em profundidade, a controlabilidade dimensional da fabricação nanochannel ainda representa um obstáculo para uma ampla aceitação de PDMS como material de construção para dispositivos nanofluidic. Outro problema crítico das nanocanais, quer em silício ou PDMS, a funcionalização da superfície é no caso de haver uma necessidade de alterar a carga de superfície na parede do canal para a manipulação de iões ou moléculas. Após a montagem do dispositivo por meio de ligação, os nanocanais são extremamente difíceis dechegar para a funcionalização da superfície devido ao transporte limita-difusão. Para criar um canal de nanoescala com alta fidelidade dimensional e funcionalização da superfície fácil, o método de auto-montagem de partículas coloidais induzidas por evaporação 14-16 em microcanais pode ser uma das abordagens promissoras. Além da capacidade de controlo de tamanho de poro e propriedades de superfície, existe ainda a possibilidade de ajustar o tamanho do poro in situ pelo uso de partículas coloidais revestidos com polielectrólitos, controlando a temperatura, pH 17, 18,19 e força iónica. 18 Devido a estes aplicações vantagens, o método de auto-montagem de partículas coloidais já encontrados para electrocromatograf, 20 biossensores, a concentração de proteína de 21 e 22 de separação de proteínas e de DNA em microfluidics. 14,23 neste estudo, foram implantados este método de auto-montagem para construir um dispositivo de pré-concentração electrokinetic emPDMS que requer uma junção entre duas nanofluidic microcanais. 24 o mecanismo fundamental para trás a concentração electrocinético é baseado em polarização de concentração de iões (ICP). 25 Uma descrição mais detalhada das etapas de fabricação e de montagem está incluído no seguinte protocolo.

<table><tbody><tr><td>Poli(Ácido Estirenossulfônico) Sal de Sódio</td><td>Policiências&nbsp;</td><td>08772</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Poli(alilamina)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>479144-5G</td><td></td></tr><tr><td>Microesfera de Sílica - 300 nm</td><td>Policiências&nbsp;</td><td>24321</td><td></td></tr><tr><td>Microesfera de Sílica - 500 nm</td><td>Policiências&nbsp;</td><td>24323</td><td></td></tr><tr><td>Sílica Microesfera Carboxil Funcional - 500 nm</td><td>Policiências&nbsp;</td><td>24753</td><td></td></tr><tr><td>Sílica Microesfera Amina Funcional - 500 nm</td><td>Policiências&nbsp;</td><td>24756</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Kit de Elastômero de Silicone</td><td>Dow Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triclorossilano</td><td>Sigma Aldrich</td><td>175552</td><td></td></tr><tr><td>Limpador Ultrassônico</td><td>Rotador de Tubo Branson</td><td>3510</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>VWR</td><td>10136-084</td><td></td></tr><tr><td>Misturador de vórtice</td><td>WiseMix</td><td>VM-10</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>VWR</td><td>Micro 1207</td><td></td></tr><tr><td>Limpador de plasma</td><td>Harrick Plasma</td><td>PDC-001-HP</td><td></td></tr><tr><td>Misturador PDMS</td><td>Thinky</td><td>ARE-250</td><td></td></tr><tr><td>Forno</td><td>Thermo Scientific</td><td>PR305220M</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio</td> <td>de EpifluorescênciaCâmera CCD Nikon</td><td>Eclipse Ti</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Andor</td><td>Clara</td><td></td></tr><tr><td>Platinum Electrodes</td><td>Alfa Aesar</td><td>43014</td><td></td></tr><tr><td>Source Meter</td><td>Multímetro Digital Keithley</td><td>2400</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Extech</td><td>410</td><td></td></tr><tr><td>Microscopia Vidro Slides</td><td>Thermo Scientific</td><td>2951-001</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Merck Millipore</td><td>822184</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>Fisher Scientific</td><td>7646-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de sódio monobásico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71505</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de sódio dibásico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3264</td><td></td></tr><tr><td>DNA</td><td>IDT</td><td></td><td>CAA CCG ATG CCA CAT CAT TAG CTA C</td></tr><tr><td>B-Ficoeritrina</td><td>Life Technologies</td><td>P-800</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de dispersão de luz dinâmica para medição de potencial Zeta</td><td>Malvern</td><td>Zetasizer Nano S</td><td></td></tr><tr><td>Photoresist&nbsp;</td><td>Shipley</td><td>SPR700-1.0</td><td></td></tr><tr><td>Projeção</td><td>litografia Nikon</td><td>NSR2005i9</td><td></td></tr><tr><td>Íon Reativo</td><td>Etcher Materiais Aplicados</td><td>AME P5000</td><td></td></tr><tr><td>ICP profundo reativo íon gravador</td><td>STS</td><td>STS-6 "</td><td></td></tr><tr><td>Contato litografia</td><td>Electronic Visions</td><td>EV620</td><td></td></tr><tr><td>Photoresist Coater Desenvolvedor</td><td>SSI</td><td>SSI 150</td><td></td></tr><tr><td>Perfiladora de superfície sem contato</td><td>Wyko</td><td>NT 9800</td><td></td></tr></tbody></table>

criação de sub-50 nm nanofluidic junções em pdms microfluidic chip via processo de automontagem de coloidal particles

Creating Sub-50 Nm Nanofluidic Junctions in PDMS Microfluidic Chip via Self-Assembly Process of Colloidal Particles

Polidimetilsiloxano (PDMS) é o material de construção predominante para tornar os dispositivos de microfluidos, devido à sua facilidade de moldagem e de ligação, bem como a sua transparência. Devido à suavidade do material de PDMS, no entanto, que é difícil de utilizar para a construção de nanocanais PDMS. Os canais tendem a entrar em colapso facilmente durante a ligação do plasma. Neste artigo, apresentamos um método de auto-montagem orientada por evaporação de nanopartículas de sílica coloidal para criar junções nanofluidic com sub-50 nm poros entre dois microcanais. A carga da superfície da junção nanofluidic de poros, bem como o tamanho é sintonizável simplesmente mudando a sílica coloidal e o tamanho do grânulo funcionalização de superfície exterior do dispositivo de microfluidos montados num frasco antes de o processo de auto-montagem. Utilizando o auto-montagem de nanopartículas com um tamanho de esfera de 300 nm, 500 nm e 900 nm, que era possível fabricar uma membrana porosa com um tamanho de poro de ~ 45 nM, ~ 75 nm e ~ 135 nm, respectivamente. sob elétricaal potencial, esta membrana iniciado polarização por concentração de íons (ICP) atuando nanoporous como uma membrana cátion-seletiva para concentrar DNA por ~ 1.700 vezes dentro de 15 min. Este processo de nanofabricação não litográfica abre uma nova oportunidade de construir uma junção nanofluidic sintonizável para o estudo de processos de transporte em nanoescala de íons e moléculas dentro de um chip microfluídico PDMS.

Um chip concentrador electrocinético PDMS em que contém uma junção nanofluidic auto-montados entre dois microcanais é mostrado na Figura 1A). O canal no meio do dispositivo é preenchido com uma solução de amostra de ADN e flanqueado por dois canais de solução tampão de cada lado por meio de um 50 um canal de largura de entrega talão (Figura 1B). A suspensão de sílica coloidal é levado para o canal de entrega grânulo imediatamente após a colagem do plasma...

Propomos uma técnica simples de automontagem de nanopartículas coloidais de sílica para criar uma junção nanofluídica entre dois microcanais em polidimetilsiloxano (PDMS). Usando esta técnica, uma membrana de grânulo nanoporosa com um tamanho de poro de até ~ 45 nm foi construída dentro de um microcanal e aplicada à pré-concentração eletrocinética de amostras de DNA.

Criação de Sub-50 nm nanofluidic Junções em PDMS Microfluidic Chip via processo de automontagem de coloidal Particles

Polydimethylsiloxane (PDMS) is the prevailing building material to make microfluidic devices due to its ease of molding and bonding as well as its ...

Este protocolo demonstra uma técnica nova e simples de automontagem de nanopartículas de sílica coloidal para criar uma junção nanofluídica entre dois microcanais em polidimetilsiloxano. A membrana do grânulo com um tamanho de poro de aproximadamente 45 nanômetros, atuando como uma membrana seletiva de cátions, pode ser usada para a concentração eletrocinética de amostras de DNA e proteínas. Visão geral:Na primeira etapa, o dispositivo PDMS com nanoarmadilhas é fundido por meio de um processo de moldagem dupla.Após a ligação do dispositivo a um substrato de vidro, esferas de sílica funcionalizadas na superfície são injetadas nos microcanais para formar a membrana coloidal de automontagem. Por fim, uma tensão é aplicada através da membrana usando um medidor de fonte e um divisor de tensão. A depleção de íons e o aumento da concentração são observados usando um microscópio de epifluorescência invertida, com uma câmera CCD.Preparação das suspensões de partículas coloidais de sílica: Começando com os grânulos de sílica de 300 nanômetros; coronha de contas de vórtice por 30 segundos; retire a suspensão de 600 microlitros em um tubo Eppendorf e centrifugue por um minuto a 2.600g. Após centrifugação, remova cuidadosamente o sobrenadante. Ressuspenda as esferas com 400 microlitros de tampão fosfato de sódio de um milimolar, para atingir uma concentração de trabalho de 15%.Vórtice para alcançar uma suspensão homogênea. Repita as mesmas etapas para preparar esferas de sílica de 500 nanômetros. Para contas de sílica carboxílica de 500 nanômetros, pese 100 miligramas em um tubo Falcon de 15 mililitros.Em seguida, transfira 9,8 mililitros de cloreto de sódio de um molar para ressuspender as contas. Vortex o tubo vigorosamente. Inverta o tubo várias vezes para deslocar as contas impactadas na parte inferior.Para modificar a carga superficial nos grânulos, preparamos dois polieletrólitos: PAH e PSS. O PSS a 0,9% é preparado dissolvendo 180 miligramas de PSS com 200 mililitros, cloreto de sódio monomolar. O 0,4% PAH é preparado iludindo 300 microlitros da solução estoque em 15 mililitros de cloreto de sódio monomolar.Vortex ambas as soluções para garantir que estejam totalmente dissolvidas. Para depositar uma camada de PAH carregada positivamente, adicione 200 microlitros da solução de PAH à suspensão do grânulo. Vortex por um minuto e incubar a suspensão em um rotador por uma hora em temperatura ambiente.Para lavar o HAP não ligado, centrifugue a suspensão a 1.801 g durante um minuto, para precipitar os grânulos. Remova o sobrenadante. Pipete de um a dois mililitros de água no tubo para romper as contas.Adicione os oito mililitros restantes de água e, em seguida, vórtice. Repita o procedimento de lavagem mais quatro vezes. Após a quinta lavagem e centrifugação, descarte o sobrenadante e restaure as esferas com 9,8 mililitros de cloreto de sódio monomolar.Para depositar a camada de PSS carregada negativamente, adicione 200 microlitros da solução de PSS à suspensão do cordão. Vortex por um minuto e incubar a suspensão no rotador por uma hora à temperatura ambiente. Lave os grânulos cinco vezes com água DI, como feito para o revestimento de HAP.Após a última lavagem, descarte o sobrenadante e ressuspenda as esferas com 650 microlitros de tampão fosfato de sódio de um milimolar com 0,05% Tween 20. Transfira a suspensão do talão para um tubo eppendorf. Para a preparação dos grânulos de sílica amina de 500 nanômetros, repita o mesmo procedimento para depositar uma única camada de PSS carregada negativamente.Fabricação do chip microfluídico PDMS: Para fabricar o mestre de silício, primeiro gire um fotorresistente de um micrômetro de espessura a 4.000 RPM em um wafer de silício. Em seguida, use a litografia de projeção e a gravação de íons reativos para criar nanocanais planares de 700 nanômetros de profundidade e dois micrômetros de largura como nanoarmadilhas para as contas. Em seguida, gire a camada de fotorresistência da 2ª camada a 2.000 RPM e execute um alinhamento com as nanoarmadilhas padronizadas anteriormente.Adicione os microcanais por litografia de contato e por gravação de íons de reação profunda do silício. Para criar a camada de liberação, silane o mestre de silício em um frasco a vácuo com 50 microlitros de triclorossilano, durante a noite. Para fundir o molde PDMS, misture a base PDMS com agente de cura na proporção de 10:1.Despeje a mistura em cima do mestre de silício. Coloque o mestre com PDMS em uma jarra a vácuo para remover as bolhas de ar e leve ao forno a 70 graus C para reticular o PDMS. Após assar por duas horas, remova cuidadosamente a placa PDMS do mestre de silício.Trate a superfície com plasma para criar uma ligação permanente a um wafer de silício em branco. Prenda a fita adesiva ao longo da borda para marcar uma linha de partição para a próxima etapa de fundição do PDMS. Para criar uma camada de desmoldagem, silane o molde PDMS em um frasco a vácuo durante a noite.Funda o PDMS em cima do molde PDMS e transfira-o para um frasco a vácuo para desgaseificação. Em seguida, asse no forno. Retire a placa PDMS curada do molde PDMS ao longo da linha divisória marcada com fita adesiva.Corte os dispositivos com cuidado e faça furos com um punção de biópsia de 1,5 milímetro nos reservatórios. Após a limpeza da superfície com fita adesiva e IPA, o plasma une o dispositivo PDMS em uma lâmina de vidro de microscópio de 25 milímetros por 75 milímetros. Imediatamente após a ligação do plasma, injete 10 microlitros da suspensão nas entradas quatro e seis dos canais de entrega do cordão.Depois de encher os canais de entrega de contas, cubra todos os reservatórios, exceto as saídas um e nove, dos canais de entrega de contas. Seque o dispositivo ao ar por três horas em temperatura ambiente e armazene a quatro graus C antes do uso. Micrografias do dispositivo mostram que as partículas coloidais se reúnem dentro dos canais de entrega do grânulo superior e inferior.A imagem SEM mostra partículas coloidais de sílica de 300 nanômetros automontadas presas com as matrizes de nanoarmadilhas, entre a amostra e o canal tampão. Encha as entradas três e sete dos canais tampão com 10 microlitros de tampão fosfato de sódio de um milimolar. Encha a entrada cinco do canal de amostra com 10 microlitros de amostra de DNA de 10 nanomolares.Aplique uma pressão negativa suave com uma ponta de pipeta invertida em todas as saídas para encher os canais com as soluções sem bolhas de ar. Adicione 10 microlitros de tampão fosfato de sódio aos reservatórios dois e oito e 10 microlitros de amostra de DNA ao reservatório 10, para estabilizar a pressão por cinco minutos. Experimento para concentração eletrocinética de DNA: Conecte o chip microfluídico com um divisor de tensão conectado a um medidor de fonte.Insira os fios PT nos reservatórios três, sete, cinco e 10. Aplique tensão em uma junção nanofluídica. Primeiro aplique 30 volts nos reservatórios cinco e 10 e aterrar nos reservatórios três e sete.Diminua a tensão para 25 volts no reservatório 10 após aproximadamente 30 segundos. Resultados da pré-concentração eletrocinética: O canal microfluídico é preenchido com DNA, com concentração inicial em 10 nanomolares. Micrografias de lapso de tempo mostram a formação de uma região de depleção de íons, ou junções coloidais nanofluídicas.A região de depleção de íons foi iniciada em 10 segundos. Um tampão de DNA concentrado foi gerado quando a tensão é aplicada ao canal da amostra, enquanto os canais tampão foram aterrados. As linhas pontilhadas foram usadas para destacar as paredes do canal.Um fator de concentração de cerca de 1.700 vezes é alcançado em 15 minutos usando membrana coloidal de 300 nanômetros. A intensidade média de fluorescência do DNA está aumentando em função do tempo em um membrabe nanoporoso. As linhas pontilhadas representam o nível de sinal para DNA de 10 nanomolares, 17 micromolares, dois micromolares e 10 micromolares.O tampão concentrado é gerado na membrana nanoporosa dos grânulos de sílica de 300 nanômetros; as contas de sílica de 500 nanômetros; os grânulos de sílica amina de 500 nanômetros, revestidos com uma única camada de PSS; e as esferas de carboxila de sílica de 500 nanômetros, revestidas com duas camadas de PAH e PSS. Conclusões: Usando a membrana de sílica coloidal auto-montada com um tamanho de poro estimado de 45 nanômetros, demonstramos a polarização da concentração de íons perto da junção nanofluídica e concentramos uma amostra de DNA em 1700 vezes em 15 minutos. Em comparação com os nanocanais à base de silício, a principal vantagem da membrana coloidal automontada é a possibilidade de realizar a funcionalização da superfície completamente fora do dispositivo microfluídico selado, em um frasco separado.Acreditamos que essa abordagem abre a possibilidade de fabricar uma plataforma micro nanofluídica rapidamente com tamanhos de poros facilmente ajustáveis, controlando o tamanho do grânulo, a força iônica ou o valor do pH da solução tampão para estudar o transporte iônico e molecular na faixa de 10 a 100 nanômetros.

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