Name: Um procedimento mecânico simples de criar Limbal Deficiência Stem Cell no mouse (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 55 s
Description: Aprenda a criar um modelo sustentável de deficiência de células-tronco limbais em camundongos sem causar lesões oculares indesejadas. Esta técnica mecânica simples permite estudar processos celulares e moleculares a longo prazo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Os autores agradecem Ruth Zelkha, MS, por sua assistência generosa em imagem. Esta pesquisa foi apoiada pelo Programa de Clínica de Desenvolvimento Scientist Award K12EY021475 para mim, conceder R01 EY024349-01A1 a ARD, EY01792 concessão núcleo do National Eye Institute, NIH, e um donativo incondicional da Pesquisa para prevenir a cegueira. ARD é o destinatário de um Prémio Carreira de Desenvolvimento de Pesquisa para prevenir a cegueira.

Todos os procedimentos realizados em animais em conformidade com a Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia declarações para o uso de animais em pesquisa visão. Quatorze quatro a 6J de seis meses de idade, macho / fêmea C57BL / tipo selvagem foram utilizados: dez ratos para o modelo de lesão e quatro como animais de controlo (córneas sem ferimentos). 1. Preparação de animais <ol><li> Anestesiar um rato com uma injecção intraperitoneal de 100 mg / kg de cetamina e 5 mg / kg de mistura de xilazina. Após a anestesia começou a produzir efeitos, apertar o dedo do pé para confirmar a profundidade da anestesia; o animal não deve reagir. </li><li> Inspecione o olho sob uma lâmpada de fenda antes de realizar os experimentos para verificar a ausência de qualquer lesão da córnea anterior. </li><li> Instilar uma gota de cloridrato de tetracaína a 1% para o olho. Depois de 60-90 segundos, teste do reflexo corneal para confirmar a ausência de sensação. Anestalcon 0,5% pode ser usado em seu lugar. </li><li> Quando a perda de sensibilidade da córnea édeterminado, suavemente colocar uma gota de 5% de povidona-iodo no olho e no cabelo em torno do olho. Limpe a queda após 1 min ou espalhá-lo sobre o cabelo ao redor do olho para evitar que o cabelo de interferir com a ponta da ferramenta. </li></ol> 2. Equipamento abrasivo do epitélio corneano <ol><li> Usar luvas cirúrgicas e um vestido. Prepare as ferramentas necessárias: uma rebarba rotativa estéril e um par de pinças estéreis. Para um melhor controle, use uma pinça dobrados. Coloque as ferramentas em uma folha esterilizada durante o procedimento. </li><li> Usando a pinça dobrados, estabilizar o olho, agarrando as tampas do lado nasal e gentilmente proptosing o olho. Evitar o uso de muita pressão. </li><li> Sob um microscópio cirúrgico, fazer a barba 360 ° ao redor da área de limbo duas vezes utilizando a broca rotativa estéril. Vá ao redor do limbo com uma velocidade de 5-6 segundos por rodada. NOTA: A broca tem uma velocidade fixa. No entanto, para que o mesmo rode à velocidade estabelecida, a &quot;porca final&quot; deve ser completamente apertados. </li><li> Remover todo o epitélio corneano do limbo a limbo com a rebarba giratória. Para melhores resultados, mover a ferramenta de forma circular e prendê-lo de alguma forma paralela à superfície da córnea para trabalhar com a face lateral da ponta da mesma. Tome cuidado para não ferir o estroma por não re-escovar as áreas onde o epitélio já foi removido. Não aplique pressão sobre o olho. Limpe a ponta do pincel conforme necessário. </li><li> Instilar uma gota de tampão fosfato estéril sobre a córnea e limpe as folhas epiteliais isolada com um tecido de limpeza macio. </li><li> Raspar o epitélio remanescente, se alguma. </li><li> Preste atenção para a cauda do rato durante a cirurgia. NOTA: Se ocorrer qualquer movimento, a profundidade da anestesia se desvaneceu e mais injeção é necessária. Um terço a dois terços do volume injectado primária deve ser suficiente. Não overdose do animal com a medicação anestésica. </li><li> Esterilizar todas as ferramentas antes de usá-los em outro olho. </li></ol> 3. Confirmar remoção epitelial completa <ol><li> Aplicar uma gota de 1 mg / ml de fluoresceína de sódio sobre a córnea. Limpe a córnea após 30 seg e examiná-lo sob um microscópio com um filtro azul cobalto para verificar a completa remoção do epitélio. NOTA: As áreas de córnea com defeitos epiteliais são visualizados em verde. </li></ol> 4. Pós-operação Cuidados <ol><li> Coloque o animal em um cobertor de aquecimento e mantê-lo em um lugar seguro (por exemplo, em sua gaiola), enquanto em recuperação. Não manter um animal inconsciente na companhia de os conscientes. </li><li> Aplicar uma pomada oftálmica% eritromicina. Isso também irá prevenir o ressecamento dos olhos. Continuar a aplicação da diária de antibiótico por uma semana. </li><li> Injectar 0,1 mg / kg de buprenorfina por via subcutânea, após o procedimento e novamente após 12 horas. Continuar a injecção duas vezes por dia durante dois dias. </li><li> Observar o animal durante 30 - 45 min, até a recuperação completa da anestesia. NOTA: Movimento suave dos músculos respiratórios na superfície ventral indica bem-estar animal enquanto em recuperação. </li></ol>

<ol><li>Afsharkhamseh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+limbal+stem+cell+deficiency+after+mechanical+and+thermal+injuries+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Stability of limbal stem cell deficiency after mechanical and thermal injuries in mice.</a> Exp. Eye Res. 145, 88-92 (2015).</li>
<li>Dorà, N. J., Hill, R. E., Collinson, J. M., West, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+tracing+in+the+adult+mouse+corneal+epithelium+supports+the+limbal+epithelial+stem+cell+hypothesis+with+intermittent+periods+of+stem+cell+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Lineage tracing in the adult mouse corneal epithelium supports the limbal epithelial stem cell hypothesis with intermittent periods of stem cell quiescence.</a> Stem Cell Res. 15 (3), 665-677 (2015).</li>
<li>Ahmad, S., Osei-Bempong, C., Dana, R., Jurkunas, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+culture+and+transplantation+of+human+limbal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">The culture and transplantation of human limbal stem cells.</a> J. Cell Physiol. 225 (1), 15-19 (2010).</li>
<li>Kolli, S., Ahmad, S., Lako, M., Figueiredo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+clinical+implementation+of+corneal+epithelial+stem+cell+therapy+for+treatment+of+unilateral+limbal+stem+cell+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Successful clinical implementation of corneal epithelial stem cell therapy for treatment of unilateral limbal stem cell deficiency.</a> Stem Cells. 28 (3), 597-610 (2010).</li>
<li>Ahmad, S., Figueiredo, F., Lako, M. Corneal epithelial stem cells: characterization, culture and transplantation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAhmad%2C+S+%22Regen.+Med%22">Regen. Med</a>. 1 (1), 29-44 (2006).</li>
<li>He, H., Yiu, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-based+therapy+for+treating+limbal+stem+cells+deficiency%3A+A+review+of+different+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Saudi+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Stem cell-based therapy for treating limbal stem cells deficiency: A review of different strategies.</a> Saudi J. Ophthalmol. 28 (3), 188-194 (2014).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+basement+membrane+enhances+corneal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing.</a> Exp Eye Res. 93 (6), 927-936 (2011).</li>
<li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Exp. Eye Res. 121, 178-193 (2014).</li>
<li>Amirjamshidi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbal+fibroblast+conditioned+media%3A+a+non-invasive+treatment+for+limbal+stem+cell+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Limbal fibroblast conditioned media: a non-invasive treatment for limbal stem cell deficiency.</a> Mol. Vis. 17, 658-666 (2011).</li>
<li>Li, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+AlgerBrush+II+rotating+burr+as+a+tool+for+inducing+ocular+surface+failure+in+the+New+Zealand+White+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the AlgerBrush II rotating burr as a tool for inducing ocular surface failure in the New Zealand White rabbit.</a> Exp. Eye Res. 147, 1-11 (2016).</li>
<li>Ti, S. E., Anderson, D., Touhami, A., Kim, C., Tseng, S. C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+outcome+following+transplantation+of+ex+vivo+expanded+limbal+epithelium+on+amniotic+membrane+for+total+limbal+deficiency+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Factors affecting outcome following transplantation of ex vivo expanded limbal epithelium on amniotic membrane for total limbal deficiency in rabbits.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 43 (8), 2584-2592 (2002).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+chemically+burned+rat+corneal+surface+by+bone+marrow-derived+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of chemically burned rat corneal surface by bone marrow-derived human mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 24 (2), 315-321 (2006).</li>
<li>Bu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+activated+omental+cells+on+rat+limbal+corneal+alkali+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of activated omental cells on rat limbal corneal alkali injury.</a> Exp. Eye Res. 121, 143-146 (2014).</li>
<li>Luengo Gimeno, F., Lavigne, V., Gatto, S., Croxatto, J. O., Correa, L., Gallo, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+corneal+stem-cell+transplantation+in+rabbits+with+severe+ocular+alkali+burns%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cataract+Refract.+Surg%22%5BJournal%5D)">Advances in corneal stem-cell transplantation in rabbits with severe ocular alkali burns.</a> J. Cataract Refract. Surg. 33 (11), 1958-1965 (2007).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+limbal+stem+cell+deficiency+induced+by+topical+medication+with+the+preservative+benzalkonium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">A mouse model of limbal stem cell deficiency induced by topical medication with the preservative benzalkonium chloride.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6314-6325 (2013).</li>
<li>Huang, A. J., Tseng, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+epithelial+wound+healing+in+the+absence+of+limbal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Corneal epithelial wound healing in the absence of limbal epithelium.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32 (1), 96-105 (1991).</li>
<li>Liu, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cornea-specific+expression+of+K12+keratin+during+mouse+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Cornea-specific expression of K12 keratin during mouse development.</a> Curr. Eye Res. 12 (11), 963-974 (1993).</li>
<li>Nakatsu, M. N., González, S., Mei, H., Deng, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+limbal+mesenchymal+cells+support+the+growth+of+human+corneal+epithelial+stem%2Fprogenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Human limbal mesenchymal cells support the growth of human corneal epithelial stem/progenitor cells.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 55 (10), 6953-6959 (2014).</li>
<li>Pajoohesh-Ganji, A., Pal-Ghosh, S., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+goblet+cells+and+their+niche%3A+implications+for+corneal+stem+cell+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Corneal goblet cells and their niche: implications for corneal stem cell deficiency.</a> Stem Cells. 30 (9), 2032-2043 (2012).</li>
<li>McCloy, R. A., Rogers, S., Caldon, C. E., Lorca, T., Castro, A., Burgess, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+inhibition+of+Cdk1+in+G+2+phase+overrides+the+SAC+and+decouples+mitotic+events%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Partial inhibition of Cdk1 in G 2 phase overrides the SAC and decouples mitotic events.</a> Cell Cycle. 13, 1400-1412 (2014).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm nada a divulgar.

Este artigo descreve uma técnica reproduzível e relativamente simples para criar um modelo de mouse LSCD. Há vários aspectos importantes deste modelo que são dignos de nota. Em primeiro lugar, ao contrário dos modelos que usam produtos químicos 11, 12, a lesão envolve primariamente o epitélio de superfície (e membrana basal), com danos mínimos para o estroma corneano subjacente ou para outras estruturas intra-oculares. Assim, existe apenas a inflamação limitada e cicatrizes, ambos os quais podem complicar o p...

O epitélio corneano é necessária para manter a clareza ea integridade da córnea. É constantemente renovada ao longo da vida através das células estaminais epiteliais que residem no limbo-uma zona estreita na junção da córnea e da conjuntiva. Estas células estaminais do limbo auto-renovação desempenham um papel crucial na regeneração do epitélio da córnea, tanto normalmente e após a lesão. esgotamento parcial ou total destas células estaminais irão resultar em erosões corneanas recorrentes, dor, cicatrização da córnea e neovascularização, a aparência das células caliciformes, e, se deixados sem tratamento cegueira, da córnea. Esta condição é conhecida como deficiência límbica (LSCD) e pode ser idiopática; hereditária; ou adquirida devido a lesões químicas ou térmicas, lentes de contacto prolongado desgaste, e inflamação crônica 1-6. Investigação sobre LSCD exige um modelo animal adequado que não imita apenas a doença em seres humanos, mas é reprodutível e sustentável, com o mínimo ummontagem de prejuízo para outras estruturas da córnea e oculares. Este modelo é necessário avaliar tratamentos e esclarecer os mecanismos da doença em níveis moleculares e celulares. Tal como descrito antes 1, com a utilização de uma broca rotativa, pode-se facilmente desenvolver um modelo de ratinho de LSCD que apresenta as vantagens acima mencionadas e persiste durante pelo menos três meses. O objetivo deste estudo é apresentar um modelo simples, reprodutível e sustentável do rato de LSCD. A broca rotativa é uma ferramenta útil que remove uniformemente o epitélio sem ferir o estroma subjacente 1. Ele tem sido usado para induzir a erosão da córnea central 7, 8 em estudos de cicatrização de feridas. A técnica apresentada, ora para criar LSCD em um mouse não tem sido relatada antes. Anteriormente introduzidos métodos de raspagem do epitélio com um resultado espátula romba num menos uniforme lesão, particularmente no limbo e um fenótipo mais variável 1, 9, com mais restauração óepitélio normal da córnea f 1. Ao contrário do raspador sem corte, a broca rotativa elimina a membrana basal epitelial bem como 7, 8, 10. Outros métodos descritos para separar as células estaminais envolvem a utilização de produtos químicos, tais como hidróxido de sódio, n-heptanol, e cloreto de benzalcónio, o que não só pode induzir lesão indesejada para estruturas oculares subjacentes, mas também pode levar a inflamação significativa e subsequente opacificação da córnea ou metaplasia escamosa epitelial 11-15. A rebarba de rotação não está associado a estas complicações graves. A remoção cirúrgica do epitélio do limbo, sozinho ou com o uso de produtos químicos 10, 11, 16, é mais difícil de realizar e não é a melhor opção em animais com pequenas olhos e um epitélio do limbo fina (como ratos). Além disso, surpreendentemente, limbectomy pode ainda deixar algum do epitélio do limbo para trás 10. A técnica descrita abaixo irá resultar em LSCD com uma neovascularizaçãod conjuntivalização que imita a apresentação de LSCD completa em pacientes e tem a duração de pelo menos três meses 1. É apropriado para aqueles que pretendem estudar LSCD ou fisiopatologia cicatrização de feridas, imunologia e potenciais tratamentos em ratinhos. Possivelmente, com algumas modificações, este procedimento pode ser realizado em ratos ou coelhos 10. À medida que a rebarba rotativo remove eficientemente o epitélio, ele pode ser utilizado em qualquer pesquisa relativos à abrasão da córnea epitelial / ferimento e em qualquer tratamento relacionada ou estudos de biologia molecular.

<table><tbody><tr><td>Rebarba rotativa: Removedor de anel de ferrugem AlgerBrush II&nbsp;</td><td>Rumex International Co, Clearwater, FL</td><td>16-141</td><td>rebarba de 0,5 mm. Também disponível em outras empresas.</td></tr><tr><td>Microscópio cirúrgico</td><td>Wild Heerbrugg, Suíça</td><td>Wild M691</td><td></td></tr><tr><td>Câmera digital</td><td>Nikon, Tailândia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon FS-2 lâmpada de fenda</td><td>Nikon, Japão</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo policlonal anti-CK12</td><td>Santa Cruz Blotechnology, CA,</td> <td>SC-17101</td><td>Concentração de 1:100</td></tr><tr><td>Anticorpo monoclonal anti-CK8</td><td>TROMA-I-s, Iowa City, IA</td><td>AB_531826</td><td>Concentração 1:50</td></tr></tbody></table>

um procedimento mecânico simples de criar limbal deficiência stem cell no mouse

A Simple Mechanical Procedure to Create Limbal Stem Cell Deficiency in Mouse

deficiência límbica (LSCD) é um estado de mau funcionamento ou perda de células-tronco epiteliais do limbo, após o qual o epitélio corneano é substituído por conjuntiva. Os pacientes sofrem de defeitos da córnea recorrentes, dor, inflamação, e perda de visão. Anteriormente, foi descrito um modelo de murídeo de LSCD e comparado com dois outros modelos. O objetivo era produzir um modelo de rato consistente de LSCD que ambos os imita o fenótipo em humanos e dura o tempo suficiente para torná-lo possível estudar a fisiopatologia da doença e avaliar novos tratamentos. Aqui, a técnica é descrita em mais detalhe. Uma ferramenta motorizada com uma broca rotativa foi concebida para remover os anéis de ferrugem a partir da superfície da córnea ou para suavizar a cama pterígio em pacientes. É um dispositivo adequado para criar o modelo LSCD desejado. É um fácil de usar ferramenta prontamente disponível, com uma ponta fina que torna apropriado para trabalhar em pequenos olhos, comoem ratinhos. A sua aplicação impede traumas desnecessários ao olho e que não resultam em lesões indesejadas, como é frequentemente o caso com os modelos de lesão química. Ao contrário de um raspador romba, que remove o epitélio com a membrana basal. Neste protocolo, a área límbica foi desgastada duas vezes, e então todo o epitélio corneano foi raspada do limbo a limbo. Para evitar lesões estroma, o cuidado foi tomado para não escovar a superfície da córnea uma vez que o epitélio já foi removido.

Dentro de um mês após a realização desta técnica, 100% das córneas desenvolveram neovascularização superficial (Figura 1A. As fotos foram tiradas com uma câmera conectada a uma lâmpada de fenda sob um campo brilhante e filtro azul cobalto). Em 18/20 (90%) dos olhos, neovascularização envolvida a totalidade da superfície da córnea (Figura 1A). Em 2/20 (10%), a neovascularização foi observada em três dos quatro quadrantes da córnea, mas ainda atingido o ce...

O seguinte artigo fornece uma técnica fácil, reprodutível para efetivamente criar um modelo do rato sustentável da deficiência límbica (LSCD). Este modelo animal é útil em testar e comparar a eficácia dos tratamentos para as doenças de células estaminais do limbo.

Um procedimento mecânico simples de criar Limbal Deficiência Stem Cell no mouse

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with ...

O objetivo geral deste procedimento é criar um modelo reprodutível, sustentável e persistente de deficiência de células-tronco limbares em camundongos. Esta técnica simples fornece um modelo animal consistente de deficiência de células-tronco limbares, sem induzir lesões indesejadas no olho, o que é difícil de alcançar com os modelos padrão de lesão química. Este modelo é útil para estudar o processo da doença a longo prazo em nível celular e molecular.E para testar ou comparar a eficácia de tratamentos novos. Após anestesiar o camundongo, pinçe o dedo do pé para garantir profundidade adequada da anestesia. Examine o olho sob uma lâmpada de fenda para verificar a ausência de lesão corneana prévia.Administre uma gota de cloridrato de tetracaína 1% no olho e aguarde 60 segundos. Em seguida, aplique suavemente iodo-povidona 5% no olho e nos pelos ao redor. Após um minuto, remova a gota ou espalhe-a pelos pelos ao redor do olho para evitar que os pelos interfiram na ponta da ferramenta.Prepare uma broca rotatória estéril e um par de pinças curvas estéreis, e mantenha-as sobre uma folha estéril durante o procedimento. Agora, estabilize o olho segurando as pálpebras pelo lado nasal com a

a-simple-mechanical-procedure-to-create-limbal-stem-cell-deficiency

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Um método é descrito para propagar tumores retinoblastoma humano em camundongos. Células tumorais são diretamente injetadas nos olhos de ratos imune deficiente. Tumores secundários foram estabelecidas com sucesso usando as duas células diretamente colhidas a partir de tumores humanos e tumorspheres cultivadas.

Estabelecimento e propagação de Tumores Humanos em Retinoblastoma Imune camundongos deficientes

Este artigo descreve uma sequência otimizada de eventos para imagiologia multimodal de enxertos celulares no cérebro de roedores por meio de: (i) na bioluminescência vivo e ressonância magnética, e (ii) a análise post mortem histológica. A combinação destas modalidades de imagem em um único animal permite uma avaliação do enxerto celular com alta resolução, sensibilidade e especificidade.

Imagem Multimodal de implante de células-tronco no sistema nervoso central de camundongos

A geração e caracterização de células T específicas de tumor utilizando ratinhos humanizados é descrita aqui. Tecido do timo humano e geneticamente modificadas de células-tronco hematopoiéticas são transplantadas em ratos imunocomprometidos. Isto resulta na reconstituição de um sistema imune humano permitindo engenharia para exame in vivo de anticorpos anti-tumorais respostas imunes.

Utilizando o rato como um BLT humanizado baseado Stem Modelo Gene Therapy célula tumoral

A injeção sub-retiniana é uma técnica cirúrgica para entrega gênica eficaz ao epitélio pigmentar da retina no olho do camundongo.  Aqui descrevemos um método fácil e replicável para injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina em camundongos experimentais.

Limbo Abordagem-Subretinal injeção de vetores virais para terapia genética em ratos Retinal Pigment Epithelium

Neste artigo, descrevemos os princípios para projetar e realizar um experimento de rastreamento de linhagem multicolorido usando camundongos R26R-Confetti. Fornecemos um protocolo específico para rastreamento de células epiteliais da córnea que podem ser modificadas para outros tecidos de interesse.

Um método para Lineage Tracing de células da córnea Usando Multi-cor repórter fluorescente Mice

Este protocolo descreve um método para induzir uma lesão córnea e límbica precisa e reprodutível em um modelo de camundongo. O protocolo é vantajoso, pois permite uma lesão uniformemente distribuída na córnea e no limbo de camundongos altamente curvos.

Indução de lesão de córnea e límplice alcalino pela técnica punch-trephine em modelo murino

Aqui, apresentamos um protocolo para isolar e identificar as células do nicho limbal humano.

Isolamento e Identificação de Células de Nicho Limbal

Descrevemos um protocolo detalhado para a preparação de células progenitoras fotorreceptoras derivadas de hESC pós-criopreservadas e a liberação sub-retiniana dessas células em camundongos rd10 .

Liberação Sub-Retiniana de Progenitores de Fotorreceptores Derivados de Células-Tronco Embrionárias Humanas em Camundongos rd10

Este método modela a cirurgia de catarata in vivo , removendo as células da fibra do cristalino de camundongos adultos e deixando para trás a bolsa capsular com células epiteliais do cristalino (LECs) anexadas. A resposta à lesão é então avaliada em vários momentos após a cirurgia usando critérios moleculares e morfológicos.

Modelagem de cirurgia de catarata em camundongos

Desenvolvemos um modelo de rato de inflamação grave da córnea por meio de curetagem do epitélio da córnea combinada com suturas da córnea. O estudo avaliou os padrões de inflamação da córnea, proliferação epitelial e alterações nas células-tronco límbicas sob condições inflamatórias.

Estabelecendo um modelo de inflamação grave da córnea em ratos com base na curetagem do epitélio da córnea combinada com suturas da córnea

Aqui, apresentamos um protocolo para obter suspensões unicelulares de alta qualidade de córneas inteiras de camundongo por meio da digestão sequencial com colagênase A e tripsina. Esse método gera células únicas viáveis com alta integridade de RNA, tornando-as compatíveis com aplicações posteriores, como sequenciamento de RNA de célula única e citometradorde fluxo y.

Um Protocolo para Colheita de Suspensão de Célula Única de Córneas de Camundongos

Aprenda a criar um modelo sustentável de deficiência de células-tronco limbais em camundongos sem causar lesões oculares indesejadas. Esta técnica mecânica simples permite estudar processos celulares e moleculares a longo prazo.

Um procedimento mecânico simples de criar Limbal Deficiência Stem Cell no mouse

Explorar mais vídeos