Name: PM10 parçacık bağlı Bet v 1 Allergen Akışı Sitometrik Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 42 s
Description: Öğrenin, akış sitometrisi kullanarak PM10 parçacıklarındaki Bet v 1 alerjen yükünü hızlıca nicelendirmeyi. Bu yöntem, solunum yolu sağlığı araştırmalarında çevresel alerjen taşınımını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, değerli hazırlık çalışmaları için Katrin Bossmann, Anett Neumann ve Eike Wolter'e (Alman Çevre Ajansı) teşekkür eder.

NOT: Bu protokol, sekonder antikor -etiketli Bet v 1, ana huş poleni antijeni bileşeni, artı bir alofikosiyanin (APC) karşı bir monoklonal antikor ile PM10 partiküllerinin dolaylı boyama (monoklonal, fare IgG1 antikoru, klon MA-3B4) tarif (anti -fare IgG1 antikoru, klon A85-1) ve bir akış sitometresi üzerinde sonraki analiz. Uygun diğer antikorlar mevcut, bu yöntem, çevre hava taneciklerine bağlanmış diğer antijenlerin tespiti da kapsayacak şekilde genişletilebilir. 1. PM10 Örnekleme <ol><li> Politetrafloroetilen (PTFE) ile çevre havası arasında PM10 toplamak 2.3 m3 / saat olarak (Şekil 1) &#39;in bir akış oranı ile, bir düşük ses örnekleyici kullanılarak filtreler. Burada tarif edilen deneyler için kullanılan numune bir karakterizasyonu, 16 bulunur. çalışma süresi gerekli PM10 miktarı (genellikle 1 ila 10 gün) bağlıdır. </li><li> İnkübasyon süresi sonunda, örnekleyici filtreyi kaldırmak ve en dondurmak-20 ° C kadar kullanılması. </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54721/54721fig1.jpg" /> Şekil 1. Düşük hacimli PM10 örnekleyici. Düşük hacimli PM10 numune örneği. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54721/54721fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 2. PM10 Kaldırma ve Partikül Sayımı <ol><li> yaklaşık 5 dakika boyunca PTFE filtre çözülme edelim. Sonra temiz bir polistirol Petri kabı (Şekil 2A) filtreyi koydu. birden fazla filtre işleme durumunda, her filtre için yeni bir Petri çanağı. </li><li> Daha sonra, fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile PTFE filtresi kaplaması. Bu protokol ml başına 8x10 6 parçacıkların bir nihai PM10 konsantrasyon için kurulmuştur (adım 3.3). en azından konsantrasyonu elde etmek için, filtreyi bindirmek için PBS aşağıdaki ampirik hacmini kullanın: PM10 toplama zamanı olsaydı &lt;<html> 2 gün, 2 ml kullanın. İnkübasyon süreleri ≥2 gün boyunca, 4 ml kullanın. Not: Bu, uygun ise, PM10 süspansiyonunun parçacık konsantrasyonunu arttırmak için, farklı filtreler arasında süspansiyonlar, havuza. </li><li> 1 dakika için duyarlı bir fırça kafası (Şekil 2b, 2c) olan bir elektrik diş fırçası ile cımbız ve fırça ile PTFE filtresi tutun. Temiz bir reaksiyon tüpüne, parçacık-PBS-süspansiyon, bundan sonra adlandırılan PM10 süspansiyon aktarın. </li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54721/54721fig2.jpg" /> Elektrikli bir diş fırçasının Şekil 2. PM10 çıkarılması. Örneklenmiş PM10 ile politetrafluoroetilen filtresi polistirol Petri kabı (A) içine yerleştirilmiş ve 4 mL PBS ile kaplanır. Ardından, PM10 bir elektrik diş fırçası ile çıkarılır (B: 1 dakika fırçalama sonra: fırçalama ve C öncesi).= &quot;Http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54721/54721fig2large.jpg&quot; target = &quot;_ blank&quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <ol start="4"><li> Bir tanecik sayacı kullanımı ile, örneğin, PM10 parçacıkların konsantrasyonu ölçümü. , PM10 süspansiyon 10 ml izotonik ölçüm tamponunda gibi 50 ul yeterli bir hacmi sulandırmak üç kez ölçmek ve ml başına partiküllerin ortalama toplam sayısını hesaplayın. İlgili boyutta parçacıkları tespit edebilen bir parçacık sayacı kullandığınızdan emin olun. </li></ol> 3. Bet v 1 Boyama <ol><li> örnek analiz için gerekli reaksiyon tüpleri sayısını hesaplayın: en az üç, reaksiyon tüpleri gereklidir: (i) örnek, yalnızca (yerel kontrol) ile birlikte bir boru numunesinin ve ikincil antikor (negatif kontrol) ile birlikte, (ii) bir boru ve ( iii) örnek ve primer ve sekonder antikor (spesifik numune) ile bir boru. İlk kez ölçülür ise, (I) için en az iki reaksiyon tüpleri hazırlanması, (ii),ve (iii) düzgün ayarlarla sitometre ayarlamak için yeterli malzeme var (adım 4.1). </li><li> Reaksiyon tüplerin sayısı için gerekli PM10 süspansiyon miktarını hesaplayın. Her bir reaksiyon tüpü süspansiyonuna 50 ul gerektirir. </li><li> PBS, uygun bir miktarda eklenmesi ile, ml başına 8x10 6 partiküllerin nihai bir konsantrasyona kadar adım 3.2 hesaplanan süspansiyon hacminin Aşama 2.4&#39;te ölçülen partikül konsantrasyonu ayarlayın. NOT: Bu protokol için yeni hazırlanmış PM10 süspansiyon önerilir rağmen kalan PM10 süspansiyon, gelecek deneyler için -20 ° C&#39;de donmuş olabilir. </li><li> Blok,% 1 BSA PBS ile hazırlanan bir stok çözeltisi,% 0.02 nihai konsantrasyonu, sığır serum albümini (BSA) ile PM10 süspansiyonu ilave ile spesifik olmayan bağlanma. Vorteks kısa ve oda sıcaklığında 20 dakika inkübe edilir. </li><li> Her bir numune, akış sitometrisi ile analiz edilmesi için, AC adım 3.4 süspansiyon 50 ul transferyalın reaksiyon tüpü. Kısaca, belirli boyama, girdap için belirlenmiş reaksiyon tüpleri 0.02 ug / ul bir son konsantrasyonda Bet v 1 karşı bir monoklonal fare antikoru ilave edin ve oda sıcaklığında 60 dakika inkübe edilir. <ol><li> Yerel kontrol ve negatif kontrol de, oda sıcaklığında 60 dakika boyunca kalacak için belirlenmiş PM10-BSA süspansiyonu ile reaksiyon tüpleri olsun. </li></ol></li><li> PBS, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 4,700 x g&#39;de numuneler daha sonra her bir reaksiyon tüpüne, girdap kısaca ve santrifüj% 0.02 BSA ile takviye edilmiş 500 ul ilave edilerek tüm örnekler yıkayın. bir vakum pompası kullanılarak dikkatli bir şekilde süpernatant atın. </li><li> Adımı tekrarlayın 3.6. </li><li> PBS Reaksiyon tüp başına% 0.02 BSA ile takviye edilmiş 50 ul içinde çözülmüş 1 mg antikor gerekli APC etiketli ikincil anti-fare IgG1 antikoru toplam miktarını belirler. % 0.02 BSA ile takviye edilmiş PBS ilgili hacmi, antikorun uygun miktarda seyreltilir. </li><li> Yerel kontrol için belirlenmiş reaksiyon tüpü hariç tüm reaksiyon tüpleri seyreltilmiş sekonder antikor, 50 ul ekle. PBS,% 0.02 BSA ile takviye edilmiş 50 ul ikincisi Ek. Girdap birkaç saniye için tüm örnekler. </li><li> Karanlıkta 30 dakika için tüm örnekler inkübe edin. </li><li> Adımı yineleyin 3.6 kez. </li><li> her bir reaksiyon tüpü, girdaba 50 ul PBS ilave edin ve bir akış sitometresi üzerinde analiz örnekleri. </li></ol> 4. Akım Sitometrisi Analizi <ol><li> parametreler sitometri aşağıdaki yerli kontrolü adjust kullanarak veri analizi optimize etmek. <ol><li> aygıt kontrol gemide görüntülenen ileri saçılım (FSC) eşik denetleyicisi kullanarak, en düşük değer (200) de FSC eşik ayarlamak ve analiz başlatın. </li><li> dağılım gerilim kontrolörü kullanılarak, tüm PM10 parçacıkları tespit edilebilir bu şekilde FSC ve yana saçılma (SSC) ayarlamak ve parçacıkların nüfusu th takriben olduğuFSC ekseninin ve SSC ekseninin alt yarısında e orta. </li><li> Floresan gerilim kontrolörü kullanılarak APC gerilim ve gerektiğinde, APC gibi aynı dalga uzunluğunda yaymaz flöresin izotiyosiyanat (FITC), gibi bir floresan gerilimini ayarlamak. tüm parçacıkların hem floresan eksenleri alt yarısında görünür olduğundan emin olun. </li></ol></li><li> Ardışık, yerli kontrolü dahil olmak üzere her örnek incelemek ve örnek başına en az 10.000 parçacıkların FSC, SSC, APC ve FITC veri depolamak. </li><li> İlgili yazılım ile verileri değerlendirmek. Belirli numunedeki adsorbe allerjen içeriği iki şekilde belirlenebilir: <ol><li> Tüm PM10 parçacıkları üzerinde Bet v 1 yükünün bir ölçüsü olarak, tüm partiküllerin (ortalama değer) APC floresan yoğunluğu analiz edin. NOT: Belirli örnek alerjen içeriyorsa, APC floresan yoğunluğu negatif kontrole kıyasla spesifik numunede artmalıdır. Buna karşın, diğer florEscence yoğunlukları (örn., FITC floresan yoğunluk) önemli bir değişiklik gerekir. </li><li> bağlı anti-Bet v 1 antikoru ile PM10 partikülleri yüzdesini hesaplayın. Böylece, negatif kontrol olarak, kopyalama ve özel numune içine bu kapıyı yapıştırın ve belirli numune APC pozitif parçacıkların yüzde negatif kontrol APC pozitif partiküllerin yüzdesini çıkarmak, APC pozitif kabul parçacıklar etrafında bir kapı ayarlayın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Cakmak, S., Dales, R. E., Coates, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+air+pollution+increase+the+effect+of+aeroallergens+on+hospitalization+for+asthma%3F%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Does air pollution increase the effect of aeroallergens on hospitalization for asthma?</a> J Allergy Clin Immunol. 129 (1), 228-231 (2012).</li>
<li>Barraza-Villarreal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air+pollution%2C+airway+inflammation%2C+and+lung+function+in+a+cohort+study+of+Mexico+City+schoolchildren%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Air pollution, airway inflammation, and lung function in a cohort study of Mexico City schoolchildren.</a> Environ Health Perspect. 116 (6), 832-838 (2008).</li>
<li>Chen, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+of+ambient+air+pollution+with+airway+inflammation+in+schoolchildren%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">The association of ambient air pollution with airway inflammation in schoolchildren.</a> Am J Epidemiol. 175 (8), 764-774 (2012).</li>
<li>Cyprowski, M., Buczynska, A., Szadkowska-Stanczyk, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indoor+allergens+in+settled+dust+from+kindergartens+in+city+of+Lodz%2C+Poland%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Occup+Med+Environ+Health%22%5BJournal%5D)">Indoor allergens in settled dust from kindergartens in city of Lodz, Poland.</a> Int J Occup Med Environ Health. 26 (6), 890-899 (2013).</li>
<li>Brough, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+peanut+protein+in+the+home+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Distribution of peanut protein in the home environment.</a> J Allergy Clin Immunol. 132 (3), 623-629 (2013).</li>
<li>Galli, S. J., Tsai, M., Piliponsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+allergic+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The development of allergic inflammation.</a> Nature. 454 (7203), 445-454 (2008).</li>
<li> World Health Organisation, R. O. f. E. Phenology and human health: allergic disorders: report on WHO meeting Rome, Italy. 16-17 January 2003, Copenhagen, Denmark, , WHO Regional Office for Europe. Chicago. 256(2003).</li>
<li>Wuthrich, B., Schindler, C., Leuenberger, P., Ackermann-Liebrich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+atopy+and+pollinosis+in+the+adult+population+of+Switzerland+%28SAPALDIA+study%29.+Swiss+Study+on+Air+Pollution+and+Lung+Diseases+in+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Arch+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Prevalence of atopy and pollinosis in the adult population of Switzerland (SAPALDIA study). Swiss Study on Air Pollution and Lung Diseases in Adults.</a> Int Arch Allergy Immunol. 106 (2), 149-156 (1995).</li>
<li>Grote, M., Valenta, R., Reichelt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abortive+pollen+germination%3A+a+mechanism+of+allergen+release+in+birch%2C+alder%2C+and+hazel+revealed+by+immunogold+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Abortive pollen germination: a mechanism of allergen release in birch, alder, and hazel revealed by immunogold electron microscopy.</a> J Allergy Clin Immunol. 111 (5), 1017-1023 (2003).</li>
<li>Namork, E., Johansen, B. V., Lovik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+allergens+adsorbed+to+ambient+air+particles+collected+in+four+European+cities%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Lett%22%5BJournal%5D)">Detection of allergens adsorbed to ambient air particles collected in four European cities.</a> Toxicol Lett. 165 (1), 71-78 (2006).</li>
<li>Süring, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PM10+contains+particle-bound+allergens%3A+Dust+analysis+by+Flow+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Env+Technol+Inn%22%5BJournal%5D)">PM10 contains particle-bound allergens: Dust analysis by Flow Cytometry.</a> Env Technol Inn. 5, 60-66 (2016).</li>
<li>Schappi, G. F., Suphioglu, C., Taylor, P. E., Knox, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentrations+of+the+major+birch+tree+allergen+Bet+v+1+in+pollen+and+respirable+fine+particles+in+the+atmosphere%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Concentrations of the major birch tree allergen Bet v 1 in pollen and respirable fine particles in the atmosphere.</a> J Allergy Clin Immunol. 100 (5), 656-661 (1997).</li>
<li>Buters, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+allergen+Bet+v+1+in+fractions+of+ambient+air+deviates+from+birch+pollen+counts%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">The allergen Bet v 1 in fractions of ambient air deviates from birch pollen counts.</a> Allergy. 65 (7), 850-858 (2010).</li>
<li>Buters, J. T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Release+of+Bet+v+1+from+birch+pollen+from+5+European+countries.+Results+from+the+HIALINE+study%5BTitle%5D)+AND+%22Atmos+Environ%22%5BJournal%5D)">Release of Bet v 1 from birch pollen from 5 European countries. Results from the HIALINE study.</a> Atmos Environ. 55, 496-505 (2012).</li>
<li>Ormstad, H., Johansen, B. V., Gaarder, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airborne+house+dust+particles+and+diesel+exhaust+particles+as+allergen+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Allergy%22%5BJournal%5D)">Airborne house dust particles and diesel exhaust particles as allergen carriers.</a> Clin Exp Allergy. 28 (6), 702-708 (1998).</li>
<li>Sven Leckel Ingenieurburo GmbH. LVS3/MVS6. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.leckel.de/index.php?option=com_docman&task=doc_download&gid=18
">http://www.leckel.de/index.php?option=com_docman&task=doc_download&gid=18
</a> (2016).</li>
<li>Brough, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peanut+protein+in+household+dust+is+related+to+household+peanut+consumption+and+is+biologically+active%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Peanut protein in household dust is related to household peanut consumption and is biologically active.</a> J Allergy Clin Immunol. 132 (3), 630-638 (2013).</li>
<li>Jochner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+variation+of+birch+and+grass+pollen+loads+and+allergen+release+at+two+sites+in+the+German+Alps%5BTitle%5D)+AND+%22Atmos+Env%22%5BJournal%5D)">Seasonal variation of birch and grass pollen loads and allergen release at two sites in the German Alps.</a> Atmos Env. , (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

protokol kritik bir safha, çevredeki havadan PM10 partiküllerinin toplanması için uygun bir filtre kullanımı (adım 1.1). Filtre bir elektrik diş fırçası ile fırçalama katlanmak için yeterince güçlü olmak zorunda değil, tüm filtre malzemeleri bu şartı yerine getirmek. Boyama protokolü ml başına 8x10 6 parçacık, bir PM10 partikül konsantrasyonu ile kurulmuştur. materyal sınırlıdır ve numunelerin havuzu uygun değildir, ancak eğer yöntem muhtemelen de işlev görecektir, ancak antikor konsantrasyonları ayarlanması gerekebilir (adımlarını 3.5 ve 3.8 bakınız). PM10 parçacıkların Bet v 1 boyama pozitif ve negatif boyanmış parçacıkların farklı popülasyonlarda sonuçlanmamıştır. Bu kadar çok az bir miktarda yüksek arasında değişen partiküller her adsorbe Bet v 1 alerjen değişen miktarlarda neden olabilir. Bu nedenle nüfus doğru kayması APC sinyali genişlemesine neden olabilirAPC pozitifliği. Tüm parçacıkların ortalama APC floresans yoğunluğunu ölçülmesi ile (I) &#39;e göre miktar: negatif parçacıklardan pozitif ayırmak zor olduğu için, iki belirleme yöntemi PM10&gt; 0.5 örneklerin Bet v 1 içeriğine farklılıkları belirlemek için kullanıldı ve (ii) APC pozitif parçacıkların oranının belirlenmesini içerir. Düşük ve yüksek polen sezonu PM10&gt; 0.5 parçacıkların Bet v 1 yükü ile ilgili olarak, her iki yöntem de benzer sonuçlar ortaya koydu. bu nedenle kapıyı yerleştirme bağımsız ve olduğu gibi Yine de, tüm parçacıkların ortalama floresan yoğunluğu göreceli ölçümü önerilmektedir muhtemelen daha az hata eğilimli. Bugüne kadar birçok çalışma ELISA 5,12-14,17 ile ilgili alerjen ve sonraki ölçümü çıkartarak ortam hava partiküler madde alerjen içeriğini incelemek. Burada anlatılan prosedürü ve quantificatio arasında temel bir fark vardırn ELISA ile: akış sitometri parçacık bağlı antijen analizleri ise ELISA, ayıklanır ve çözünmüş antijeni rakamlarla. ELISA vasıtasıyla test PM10 örneklerin Bet v 1 yük (n = 8) 1.2 ng / ml teşhis sınırının altında olduğunu (veriler gösterilmemiştir). Benzer şekilde, Buters ve diğerleri PM &lt;2.5 mikron fraksiyonu ve 10 um sadece yaklaşık% 7&gt; PM&gt; 2.5 mikron fraksiyonu, ancak PM ortam havasının 13&gt; 10 mikron kesir fazla% 93 hiçbir Bahis v 1 belirledi. Bir taraftan ve diğer taraftan da, FACS analizi, ELISA zıt sonuçları, birbirinden farklı hassasiyet ile bağlantılı olarak saptama yöntemi farklılıklardan kaynaklanabilir. Daha fazla araştırma ancak tam olarak bu farkı anlamak için gereklidir. Bir yöntem parçacık bağlı antijen elektron mikroskobu 10,14 tarıyor görselleştirmek için. Taramalı elektron mikroskopisi, Ormstad ve ark., Asılı partikül mat yüzeyi görsel Bet v 1r kurum parçacıkları yüksek polen mevsimi ve düşük polen sezon 15 örneklenmiş parçacıklar üzerinde daha az bir ölçüde örneklenmiş. Buna ek olarak, polen, lateks ve β-glukan alerjenleri, ortam havası 10 yanma parçacıklarına bulunmuştur. Bu yöntem, bununla birlikte, partikül bağlı allerjen miktarının izin vermez. akış sitometrisi kullanılmasıyla parçacık bağlı Bet v 1 alerjen nicelendirilebilir. Böylece, yandan diğer uygun antikorlar gibi PM10 10 ile 0,5 um biyolojik fraksiyonu karakterize etmek için yeni bir yol sunabilir akış sitometri, bu yöntem, ortam hava partiküllerinin, örneğin, kalıp, toz akarı diğer antijenlerin tespiti için uzatılabilir olabilir alerjenler veya LPS. PM10 partikülleri oldukça kolay da kimyasallar ve metaller sadece biyolojik madde absorbe, ancak, antikorların bağlanma belirsiz, ancak bir sorun teşkil edebilir. Yeni bir antikor test edilirse, kritik bir adımdır belirli bağlama kanıtlamak içining. Bu 11 boyanmadan önce ilgili antijen ile spesifik antikor bağlanma kapasitesini bloke örneğin yapılabilir. 14,18 saymak Bet v olarak ortam havasının 1 içerik huş poleni sayısı 12,13,18 farklı olabilir, alerjik belirtiler belki polen ile daha alerjen düzeyi ile daha iyi ilişki olabilir. Bu nedenle, klinik verilerle birlikte sunulan yöntem huş alerjik reaksiyonlar PM10&gt; 0.5 Bet v 1 alerjen yükü uygun olup olmadığını gelecek deneylerde incelemek için olanak sağlar.

Hava kirliliği son yıllarda 1-3 gözlenen solunum alerji artan insidansı ve şiddeti önemli bir çevre nedeni olarak kabul ediliyor. Ayrıca, toz 4,5&#39;ten ortak allerjenlerin dağılımında giderek artan bir ilgi vardı. Huş ağacı polen saman nezlesi sebep olabilir ama aynı zamanda alerjik astım 6-8 önemli bir tetikleyicisi olabilir. Tüm huş poleni alt solunum yoluna veya boyutu (çapı 22 mm) bir sonucu olarak, PM10 bulunabilir olası değildir. Ancak, Bet v 1, büyük huş poleni alerjen bileşeni gibi huş ağacı poleni alerjenler polen rüptürü 9 sonra serbest bırakılabilir ve alt solunum yollarını böylece muhtemelen, ortam hava partiküllerinin 10 bağlanan girebilirsiniz. Gerçekten de, bir polen alerjisi Probandın 11 bazofil in vitro aktivasyonu ile gösterildiği gibi PM10 biyolojik olarak aktif alerjenler içerebilir gösterilmiştir </sus&gt;. PM10 örneklerinde Bet v 1 allerjen içeriği ELISA 12-14 ile ilgili alerjen ve sonraki ölçümü ayıklanması tarafından incelenmiştir. ELISA tekniği ile, çözünmüş alerjen ölçüldü, ancak allerjen yüklü parçacıkların miktarı hala bilinmemektedir. Taramalı elektron mikroskobu alerjen yüklü parçacıklar açığa ama miktarının 10,15 izin vermedi. Bu çalışma ortam havası örneklerinde Bet v 1-yüklü PM10 partikülleri oranını ölçmek için flow sitometri kullanır. akış saptama sınırının dolayı, sadece daha büyük 0,5 um incelenebilir parçacıkları sitometresi. PM10&gt; 0.5 mikron fraksiyon PM10 olarak&gt; 0.5 sevk edilecektir.

<table><tbody><tr><td>Teflon filtre</td><td>Pall Life Sciences, ABD</td><td>R2PL047</td><td>47 mm, 1.0 & m</td></tr><tr><td>düşük hacimli örnekleyici</td><td>Sven Leckel Ingenieur B&uuml; ro GmbH, Almanya</td><td>LVS3</td><td>hava akışı 2,3 m3/saat</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Biochrom, Almanya</td><td>L1825</td><td>, Ca/Mg olmadan, düşük endotoksinli</td></tr><tr><td>elektrikli diş fırçası&nbsp;</td><td>Braun, Almanya</td><td>Oral-B Vitality Sensitive</td><td></td></tr><tr><td>Casy hücre sayacı&nbsp;</td><td>Sch&auml; rfe System GmbH, Almanya</td><td>Model TTC</td><td>algılanabilir partikül boyutu aralığı: 0,7 & mikro; m ila 45&nbsp; &mikro; m</td></tr><tr><td>FACSCanto II&nbsp;</td><td>Becton Dickinson, ABD</td><td>3 lazer, 8 renkli (4-2-2)</td><td></td></tr> <tr><td>FACS Diva Software v6.1.3&nbsp;</td><td>Becton Dickinson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sığır serum albümini (BSA)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich, ABD</td><td>A2153-10G</td><td></td></tr><tr><td>monoklonal fare IgG1 antikoru Bet v 1</td><td>Indoor Biotechnologies, İngiltere</td><td>&nbsp; MA-3B4</td><td>klonu MA-3B4</td></tr><tr><td>APC (Allofikosiyanin) etiketli ikincil anti-Fare IgG1 antikoru&nbsp;</td><td>Becton Dickinson</td><td>560089</td><td>klonu A85-1</td></tr><tr><td>SPSSTM yazılım sürümü 18&nbsp;</td><td>PASW İstatistikleri 18, Hongkong, Çin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri Kabı</td><td>Gosselin, Fransa</td><td>BP50-02</td><td>D 55&nbsp; mm, H 15&nbsp; mm</td></tr><tr><td>FACS Tüp&nbsp;</td><td>Becton Dickinson, ABD</td><td>REF 352054</td><td>5 ml Polistiren</td></tr><tr><td>CASYton</td><td>Roche Almanya</td><td>REF 05651808001</td><td></td></tr><tr><td>Matris Boş Tüpler</td><td>Thermo Scientific, ABD</td><td>4140</td><td>1.4 ml, PP</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Heraeus, Thermo Scientific</td><td>Megafuge 40R</td><td></td></tr><tr><td>Vakum Pompası</td><td>INTEGRA Biosciences AG, İsviçre</td><td>Model 158 320</td><td>Inetrgra Vacusafe</td></tr><tr><td>rekombinant Bet v 1a antijeni&nbsp;</td><td>İç Mekan Biyoteknolojileri, İngiltere</td><td>LTR-BV1A-1</td><td>Konsantrasyon: 2.0 mg / ml</td></tr></tbody></table>

pm10 parçacık bağlı bet v 1 allergen akışı sitometrik analizi

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

Akış sitometri yaygın olarak 0.5 ila çapı onlarca mikrometre büyüklüğünde bir boyut aralığında hücreleri ya da bakteri gibi askıda katı madde miktarını belirlemek için kullanılan bir yöntemdir. ileri ve yana saçılma özellikleri bir karakterizasyonu ek olarak, ilgili yapıların tespit etmek için antikorlar gibi flüoresan etiketli markerlerin kullanımı sağlar. dolaylı bir antikor lekelemesi kullanılarak, huş polen alerjeni ölçmek için sitometrisi Burada kullanıldığı akış solunabilir parçacık halinde madde (PM10, parçacık boyutu çapı ≤10 um) çapı 0.5 ila 10 um parçacıklar -yüklü (tam olarak v, 1 BET). adsorbe olan alerjenlerin taşıyıcısı muhtemelen onlar alerjik reaksiyonlara yol açabileceğini alt solunum yollarının, onları taşımak olarak PM10 partikülleri hareket edebilir. Şimdiye kadar PM10 alerjen içeriği enzim bağlı immünosorbent deneyleri (ELISA) ve taramalı elektron mikroskobu ile incelenmiştir. ELISA parçacık çözündürüldü olup ölçerTT-bağlı allerjen. Alerjen yüklü parçacıklar görselleştirmek ayrıca onları ölçmek olabilir sitometrisi akabilir taramalı elektron mikroskobu ile karşılaştırıldığında. ortam havasının alerjen içeriği huş ağacı polen sayımı sapabilir gibi alerjik belirtiler belki polen sayımı daha alerjene maruz daha iyi korelasyon olabilir. klinik veriler ile birlikte, sunulan yöntem alerjik reaksiyonlar polen antijenleri PM10 partikülleri&gt; 0.5 um Bet v 1 allerjen içeriği ile ilişkilidir huş edip gelecek deneylerde test etmek için bir fırsat sunmaktadır.

PM10&gt; 0.5 parçacıklara Bet v 1 alerjen adsorpsiyon bir akış sitometresi üzerinde dolaylı bir antikor boyama ve daha sonra analizi ile nicelleştirilmiştir. yüksek polen mevsimi A PM10 örnek şablon olarak görev yaptı. Adım 3.1&#39;de belirtildiği gibi, negatif kontrol yalnızca sekonder antikor (Şekil 3A) etiketli APC ile inkübe PM10 parçacıklardan oluşur. Anti-Bet v 1 antikoru ve ikincil antikor ile boyandı PM10 parçacıkları alerjen yüklü parçacıklar (Şekil 3B) gösterilir. Aşama 4.3&#39;te tarif edildiği gibi, allerjen yükü miktarının iki yolu kullanılmıştır: Bir yandan, tüm partiküllerin APC floresan yoğunluğunun medyan değeri belirli bir numune için negatif kontrol için 137 ve 904 olmak analiz edilmiştir. Diğer tarafta, bağlanan bir anti-Bet v 1 antikoru olan partiküllerin yüzdesi tespit edilmiştir: bir kapı negatif kontrol APC pozitif partiküller etrafında yer alan ve daha sonra da kopied ve özel numune yapıştırılan. Negatif kontrol olarak, PM10&gt; 0.5 partiküllerin% 3 APC pozitif kabul edildi. Yanlış pozitif parçacıkların Bu yüzde, böylece% 77.5 APC pozitif PM10 ile sonuçlanan belirli bir numune pozitif partiküllerin yüzdesi&gt; Belirli örnek 0.5 partiküller çıkartılmıştır. gözlenen anti-Bet bağlayıcı v 1 antikor özel olduğunu kanıtlamak için, bağlama kapasitesi boyamadan önce ilgili antijen ile bloke edilmiştir. Bet v 1 pozitif PM10&gt; 0.5 partikülleri (Şekil 3C) yüzdesi ile belirlenir halinde APC floresan yoğunluğu ile belirlenir ve% 84 oranında, bu,% 69, anti-Bet v 1 antikorun azaldı. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54721/54721fig3.jpg" /> Şekil 3. Parçacık bağlı 1 alerjen yüksek po bir PM10 numune akışı sitometri. APC floresan yoğunluğu tarafından görüntülenmiştir olabilir Bet vSadece APC ile lekelenmiş llen sezonu ve rekombinant Bet v 1 antijen ile birincil antikor engelleme sonra ikincil antikor (B) etiketli anti-Bet v 1, birincil antikor, ve daha sonra da APC ile lekeli ikincil antikoru (A) işaretli (Cı ). Geçitli, P APC + APC pozitif kabul parçacıkların çevresinde kurulmuştur (kırmızı gösterilir) ve ilgili yüzdeler verilmiştir. Bu rakam biraz 11&#39;den modifiye edilmiştir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54721/54721fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Bu yöntem, yüksek gelen ve düşük polen sezon PM10&gt; 0.5 örneklerin adsorbe Bet v 1 içerik miktarı farklılıkları ortaya çıkarmak için kabul edilebilir olup olmadığını test etmek için, yüksek 13 PM10 örnekleri ve düşük polen mevsimi 6 PM10 örnekleri analiz edildi. Şekil 4APC floresan ve Bet v 1 pozitif PM10&gt; düşük polen sezon PM10 örneklere göre yüksek polen sezon PM10 örneklerinin 0.5 parçacıkların oranında önemli farklılıklar göstermektedir. Hem miktar yöntemleri burada benzer sonuçlar göstermiştir. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54721/54721fig4.jpg" /> Düşük ve yüksek polen mevsimi gelen Şekil 4. PM10 örnekleri (1. Düşük polen sezonu PM10 sonbahar / kış 2013 örneklenmiş (n = 6), yüksek polen sezonu PM10 Mayıs 2012 ile 2013 yılında oldu adsorbe Bet v kendi miktarında farklılık n = 13). (A) PM10 APC floresan yoğunluğu&gt; yüksek polen mevsimi 0.5 parçacıklar düşük polen mevsimi (medyan / min / max yüksek polen sezonu dan anlamlı olarak daha yüksek olduğu: 796/313/1097; medyan / min / max düşük polen sezonu: 197 / 85/277). (B) PM10 yüksek polen mevsimi gelen significan içeriyorduDüşük polen sezon PM10 daha tly fazla Bet v 1-pozitif PM10&gt; 0.5 partiküller (medyan / min / max yüksek polen sezonu: 45.2 / 18.5 / 74.5; medyan / min / max düşük polen sezon: 11.8 / 4.4 / 19.8). Kutu grafiği sırasıyla medyan değerleri (kutunun iç hat), 25. ve 75. yüzdelik (kutunun alt ve üst sınırları) ve minimum ve maksimum değerler (bıyık) göstermektedir. *** Düşük polen mevsimi karşı p &lt;0.001, Mann Whitney U testi. Bu rakam biraz 11&#39;den modifiye edilmiştir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54721/54721fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Burada, flow sitometri alerjen yüklü parçacıklar ölçmek için bir protokol mevcut. Ortam partiküler madde parçacıkları adsorbe alerjenlerin taşıyıcıları olarak hareket edebilir. Bu akış sitometrisi, bir yöntem olup çok çapı 0.5 um, bu alerjene yüklü parçacıkları ölçmek için kullanılabilir&gt; askıda katı madde karakterize etmek için kullanılan burada gösterir.

PM10 parçacık bağlı Bet v 1 Allergen Akışı Sitometrik Analizi

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Bu yöntemin genel amacı, akış sitometrisi kullanarak alerjen yüklü ortam partikül madde parçacıklarını miktar belirlemektir. Bu yöntem, PM10 parçacıklarının alerjen yüküne ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu parçacıklar, absorbe edilmiş alerjenlerin taşıyıcıları olarak görev yapabilir ve onları alt solunum yollarına taşıyabilir; bu tekniğin temel avantajı ise alerjen yüklü PM10 parçacıklarını görselleştirmenin ve miktarını belirlemenin hızlı bir yolu olmasıdır.Bu yöntemi Bet v 1 antijeni için oluşturduk, ancak diğer antijenler için de uygulanabilir. Prosedürü, laboratuvarımızdan teknisyen Sabine Bach gösterecek. Başlamak için, ortam havasındaki çapı 10 mikrometre veya daha küçük olan partikül maddeleri politetrafloroetilen filtrelere toplamak amacıyla düşük hacimli bir örnekleyici kullanın.Havadaki partikül madde miktarına ve istenen zamansal çözünürlüğe bağlı olarak toplayıcıyı 1 ile 10 gün arasında çalıştırın. Toplama işleminin sonunda, filtreyi örnekleyiciden çıkarın ve analiz edilene kadar -20 °C'de dondurun.Numune analizine devam etmeye hazır olduğunuzda, politetrafloroetilen filtreyi dondurucudan çıkarın ve yaklaşık beş dakika boyunca çözünmeye bırakın. Ardından, filtreyi temiz bir polistiren petri kabına yerleştirin ve mililitre başına 8 x 10⁶ partikül konsantrasyonu elde edecek miktarda PBS ile filtreyi kaplayın.Filtreyi bir cımbız yardımıyla tutun ve hassas fırçalı bir elektrikli diş fırçası ile bir dakika boyunca fırçalayın. Ardından, partikül PBS süspansiyonunu temiz bir reaksiyon tüpüne aktarın. 50 µL PM10 süspansiyonunu, 10 mL izotonik ölçüm tamponunda seyreltin.Toplanan PM10 partiküllerinin konsantrasyonunu ölçmek için bir partikül sayacı kullanın. Üç ayrı ölçümden ortalama partikül konsantrasyonunu hesaplayın. Partikül madde konsantrasyonunun çok düşük olduğu tespit edilirse ve birden fazla örnekten havuzlama yapılması uygunsa, başka bir filtreden partikül toplamak için bir örneğe ait partikül PBS süspansiyonunu kullanın.Öncelikle, gerekli reaksiyon tüpü miktarını belirleyin. Analiz edilecek her PM10 süspansiyonu için üç tip reaksiyon tüpü gereklidir. Bir tüp doğal kontrol örneği, bir tüp negatif kontrol örneği ve bir tüp spesifik olarak boyanmış örnek içermelidir.Ardından, gerekli PM10 süspansiyon hacmini hesaplayın. Her bir reaksiyon tüpü 50 µL süspansiyon gerektirir. Daha sonra, uygun miktarda PBS ekleyerek numunede ölçülen partikül konsantrasyonunu 8 × 10⁶ partikül/mL nihai konsantrasyona ayarlayın.Ardından, PBS ile hazırlanmış %1'lik BSA stok çözeltisinden seyrelterek PM10 süspansiyonunu %0,02 BSA ile takviye ederek spesifik olmayan bağlanmayı engelleyin. PM10 BSA süspansiyonunu kısa süre vortexleyin ve oda sıcaklığında 20 dakika inkübe edin. Akış sitometrisi ile analiz edilecek her bir örnek için, süspansiyondan 50 µL'yi temiz bir reaksiyon tüpüne aktarın.Spesifik boyama için belirlenen reaksiyon tüplerine, Bet v 1'e karşı monoklonal fare antikörünü 0,02 µg/µL son konsantrasyonda ekleyin. Tüpleri kısa süre vorteksleyin ve ardından tüm reaksiyon tüplerini oda sıcaklığında 60 dakika boyunca inkübe edin. Daha sonra, her bir reaksiyon tüpüne %0,02 BSA ile desteklenmiş 500 µL PBS ekleyip örnekleri kısa süre vorteksleyerek tüm örnekleri yıkayın.Ardından, örnekleri pelletleyin ve süpernatantı bir vakum pompası kullanarak dikkatlice uzaklaştırın. Gereken toplam APC işaretli sekonder anti-mouse IgG1 antikor miktarını belirleyin ve bunu 0,02% BSA ile desteklenmiş uygun hacimdeki PBS ile seyreltin. Natif kontrol hariç tüm reaksiyon tüplerine 50 µL seyreltilmiş sekonder antikor ekleyin.Native kontrole, %0,02 BSA ile desteklenmiş 50 µL PBS ekleyin. Tüm örnekleri birkaç saniye boyunca vorteksleyin ve karanlıkta 30 dakika inkübe edin. İnkübasyonun ardından, tüm örnekleri daha önce gösterildiği gibi iki kez yıkayın.Son yıkamadan sonra, her bir reaksiyon tüpüne 50 µL sade PBS ekleyin. Ardından, örnekleri vorteksleyin ve bir akış sitometresinde analiz edin. Veri analizini optimize etmek için sitometre parametrelerini doğal kontrolü kullanarak ayarlayın.Öncelikle, ileri saçılım (forward scatter) eşiğini 200 olan en düşük değere ayarlayın ve analizi başlatın. Ardından, tüm PM10 partiküllerinin tespit edilmesi ve partikül popülasyonunun ileri saçılım ekseninin yaklaşık olarak ortasına ve yan saçılım (sideward scatter) ekseninin alt yarısına yerleşmesi için saçılım voltaj kontrolcüsünü kullanarak önce ileri saçılımı, ardından yan saçılımı ayarlayın. Analizi yeniden başlatın ve verileri kaydedin.Ardından, sekonder antikor floresans voltajı ve FITC gibi diğer floresans voltajları için ayarlama yapmak üzere floresans voltaj kontrolörünü kullanın. Bu işlem tamamlandığında, analizi yeniden başlatın ve verileri kaydedin. Tüm partiküllerin her iki floresans ekseninin alt yarısında görünür olduğundan emin olun.Her bir örneği ardışık olarak inceleyin ve örnek başına en az 10.000 partikülün ileri saçılım, yan saçılım, sekonder antikor floresansı ve FITC verilerini kaydedin. Absorbe edilen alerjen içeriğini nicelleştirmenin bir yolu, tüm partiküllerin APC floresans yoğunluğunu analiz etmektir. Bu amaçla, FITC medyan ve APC medyan düğmelerine tıklayarak istatistikleri düzenleyin.Ardından, ilgili değerleri ve negatif kontrolü, spesifik olarak boyanmış örnektekilerle karşılaştırın. Absorbe edilen alerjen içeriğini nicelleştirmek için başka bir yöntem, anti-Bet v 1 antikoru bağlı PM10 partiküllerinin yüzdesini belirlemektir. Bu işlem, öncelikle yanlış pozitif olarak değerlendirilen partiküllerin etrafına bir kapı (gate) ayarlanarak gerçekleştirilir.Ardından, spesifik olarak boyanmış örneğe tıklayın ve aynı kapıyı (gate) kullanarak spesifik örnekteki APC pozitif partikülleri çözümleyin. Polen mevsiminin yoğun olduğu dönemlerde, çok sayıda PM10 partikülüne Bet v 1 antijeni bağlanmıştır. Birincil antikor, Bet v 1 antijeninin rekombinant bir versiyonu ile bloke edildiğinde sinyal önemli ölçüde düştüğünden, Bet v 1 tanıma işlemi spesifiktir.Yüksek polen sezonunda toplanan PM10 partikülleri, düşük polen sezonundakilerle karşılaştırıldığında, Bet v 1 pozitif PM10 partiküllerinin yüzdesinde belirgin bir fark görülmüştür. Yüksek polen sezonunda toplanan partiküllerin Bet v 1 antijeni içerme olasılığı çok daha yüksektir. Uzmanlaşıldığında, örneklenen PM10'un akış sitometrik analizi, doğru şekilde yürütüldüğü takdirde dört ila beş saat içinde tamamlanabilir.Lütfen akış sitometrisinin yalnızca 5 mikrolitre'den büyük partikülleri tespit edebildiğini unutmayın. Bu prosedürü uygularken, bu yöntemi PM10 partiküllerinin Bet v 1 alerjen yükünü belirlemek için geliştirdiğimizi ve bunun, çözünmüş antijenle çalışılan ELISA yönteminden temel bir fark olduğunu hatırlamak önemlidir. Ortam havasındaki Bet v 1 içeriği polen sayısından farklılık gösterebiliyorsa, alerjik semptomlar alerjen seviyesiyle ilişkili olabilir.Klinik verilerle birlikte bu yöntem, huş ağacı polenine karşı gelişen alerjik reaksiyonların PM10'daki alerjen düzeyi ile uyumlu olup olmadığını incelememize olanak tanır. Mevcut diğer uygun antikorlarla bu yöntem; LPS veya küf ya da toz akarı alerjenleri gibi ortam havası partikülleri üzerindeki diğer antijenlerin tespitine genişletilebilir.

flow-cytometric-analysis-of-particle-bound-bet-v-1-allergen-in-pm10

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu yazıda, akciğer doğuştan gelen bağışıklık hücreleri ikamet ve polianhidrid nanopartiküller ile ko-kültür tepki olarak aktivasyon inceleyerek murin alveoler makrofaj, hasat için protokoller açıklanmaktadır.

Polianhidrid Nanopartiküller Bağlı Mürin Alveoler Makrofajlar Hasat ve Değerlendirme Hücresel Etkinleştirme

Biz ovalbumin bağlı alerjik hava yolu inflamasyonu ayarı ovalbumin yanıt olarak pulmoner dendritik hücrelerin olgunlaşma ve göç izlemek için bir strateji tanımlamak. Bu strateji, enfeksiyon ayarlarında pulmoner dendritik hücreler göç değerlendirmek için modifiye edilebilir.

Alerjik Havayolu Enflamasyon sırasındaki solunum Dendritik Hücre olgunlaşması ve Göç Analizi

Bu videoda, akış sitometrisi kullanarak bir test alerjeninin varlığında bazofil aktivasyonunu değerlendirmek için testi gösteriyoruz.

Flow Sitometri Kullanarak Bir Test Alerjeni Varlığında Bazofil Aktivasyonunun Analiz Edilmesi

Bu çalışma, Güney Çin'den allerjik rinit ve / veya astımlı bir hasta grubunda ot polen allerjenlerine duyarlılığı araştırmak için bileşen çözümü yaklaşımını kullanan bir protokolü açıklamaktadır.

Allerjik Rinit ve / veya Astımı olan Çinlilerin Çimen Poleni Allerjenleri Üzerine Bir Çalışma İçin Bileşen ile Çözümlenmiş Bir Teşhis Yaklaşımı

Çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde solunum işlevin sonucunu önerilen yordamları ayrıntılı bir açıklama sağlamak için mevcut makale hedefidir.

Solunum fonksiyon çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde değerlendirilmesi

Çevre partiküler madde biyolojik kompozisyon anlama hastalığı yaymak ve insan sağlığı üzerinde önemli etkileri çalışma için önemlidir. Burada, biz üç tür bioaerosol örnekleme yöntemleri ve havada mikrop biyolojik bir analizini farklı çevresel koşullar altında hava mikrobiyal topluluklar daha iyi keşfetmek için kullanılır.

Kompozisyon ve Bioaerosols farklı çevresel koşullar altında dağıtım Analizi

Bu kağıt bir mikrosıvısal kartuş tabanlı Kemiluminesan sistemi ve kullanışlılığı değerlendirilmesi ile serum özel immünglobulin E Anti tanılar algılamak için bir protokol sunar.

Biochip mikrosıvısal teknolojisi uygulama algılamak Serum alerjen özgü immünglobulin e (sIgE)

Ev tozu akarları (HDM) gibi çevresel alerjenler genellikle alerjik iltihabı düzenlemek için doğuştan gelen bağışıklık yanıtlarını aktive mikrobiyal maddeler içerir. Burada sunulan protokol HDM alerjenlerinde dsRNA türlerinin tanımlanmasını ve eozinofilik akciğer iltihabının modüle edilmesinde immünojenik faaliyetlerinin karakterizasyonunu göstermektedir.

Eozinofilik Akciğer İltihabını Modüle Eden HDM Alerjenlerinde İmmünojenik RNA Türlerinin Tanımlanması ve Karakterizasyonu

Burada, tipik olarak tip 1 alerjik reaksiyonlarda gözlenen efektör hücrelerin degranülasyonunu simüle etmek için insan IgE reseptörü ile transfected bir sıçan bazofilik lösemi hücre hattı kullanarak mediatör salınım testini sunuyoruz. Bu yöntem, alerjenlerin biyolojik aktivitesini son derece hassas, tekrarlanabilir ve uyarlanabilir bir şekilde araştırır.

Alerjen Gücü için Okuma Olarak İnsanlaştırılmış Arabulucu Sürümü Tahlil

Büyük bir randomize kontrollü çalışma sırasında Hindistan saha sahalarındaki hava ve biyolojik örnekleme süreçleri boyunca kullanılan tutarlı, yüksek kaliteli prosedürleri detaylandırıyoruz. Kırsal bölgelerde maruz kalma değerlendirmesi için uyarlanmış yenilikçi teknolojilerin uygulamalarının gözetiminden toplanan içgörüler, daha güvenilir sonuçlarla daha iyi saha veri toplama uygulamaları sağlar.

Hindistan'da Hanehalkı Hava Kirliliği Müdahale Ağı Denemesi için Maruz Kalma ve Biyobelirteç Değerlendirmelerinin Saha Veri Toplama Prosedürlerinin Görselleştirilmesi

Bu makale, bireysel partikül madde maruziyeti düzeyinde iç maruziyet dozunu değerlendirmek amacıyla hava yolu makrofajlarının karbon içeriğini ölçmek için ayrıntılı bir deneysel protokolü açıklamaktadır.

Karbon İçeren Partikül Maddelere Maruz Kalan Hava Yolu Makrofajlarındaki Karbon İçeriğinin Ölçülmesi

Öğrenin, akış sitometrisi kullanarak PM10 parçacıklarındaki Bet v 1 alerjen yükünü hızlıca nicelendirmeyi. Bu yöntem, solunum yolu sağlığı araştırmalarında çevresel alerjen taşınımını anlamaya yardımcı olur.

PM10 parçacık bağlı Bet v 1 Allergen Akışı Sitometrik Analizi

Daha fazla video keşfet