Um protocolo otimizado para a radiomarcação eficiente de nanopartículas de ouro usando um ¹²⁵ Marcado com Eu Azida grupo prostético

O objetivo geral deste protocolo é fornecer um método sintético eficiente e rápido para nanopartículas de ouro marcadas com iodo radioativo usando a reação de clique livre de cobre promovida por cepa. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da radioquímica, como a síntese de isótopos de rádio marcados há cerca de três anos, bem como sondas de imagem regulares para estudos de imagem pad ou spec. A principal vantagem desta técnica é que um a cinco iodos marcados com partículas douradas podem ser sintetizados de forma eficiente usando o grupo protético azida com excelente rendimento radioquímico e pureza radioquímica.

A demonstração visual desse método é crítica, pois as etapas de avaliação de rádio são difíceis de aprender. Uma vez que tais procedimentos exigem uma instalação adequada e lidam com a experiência de rotulagem de rádio. Junto com o estudo, o estudante de rádio Ha Eun Shim demonstrará o procedimento.

Para realizar a reação de iodação de rádio, adicione uma solução precursora a um tubo de 1,5 mL. Adicione 10 microlitros de ácido acético à solução precursora à temperatura ambiente. Em seguida, adicione 150 mega bekarel de iodo 125 em 50 microlitros, hidróxido de sódio 0,1 molar à mistura de reação.

Adicionar uma solução de cloramina T e fechar o tubo de microcentrífuga que contém a mistura de reacção. Incubar a mistura de reacção à temperatura ambiente durante quinze minutos até que a reacção de iodação rádio esteja completa. Em seguida, adicione uma solução de metabissulfito de sódio à mistura de reação para extinguir a reação de iodação de rádio.

Retire 0,2 microlitros do produto bruto e dilua-o com 100 microlitros de aceto nitril a 50% em água para cromatografia líquida de alta eficiência ou análise por HPLC. Analisar o produto bruto diluído utilizando uma radioHPLC analítica de fase inversa. Transfira toda a mistura de reação para um frasco para HPLC.

Enxágue o tubo de reação com 0,5 mL de aceto nitrilo e adicione o enxágue no mesmo frasco para injetáveis. Diluir a solução recolhida com um ml de água. Para purificar o produto bruto com HPLC reparadora, injetar o produto bruto em uma radioHPLC preparativa.

Colete o pico radioativo representando a azida marcada com iodo 125 em um tubo de ensaio de vidro. Meça o rendimento radioquímico da fração usando um calibrador de dose de radioatividade de acordo com o protocolo do fabricante. Em seguida, injectar o produto purificado numa radioHPLC analítica, utilizando as mesmas condições de HPLC para determinar a pureza radioquímica do produto.

Para realizar a extração em fase sólida do produto, diluir a fração contendo o produto desejado com 40 mL de água pura. Adicione a solução diluída em um cartucho TC18 pré-condicionado. Lave o cartucho com mais 15 mL de água.

Eluir o produto preso no cartucho com 2 mL de acetona em um frasco de vidro de 10 mL protegido por um escudo de chumbo. Meça a radioatividade do produto eluído usando um calibrador de dose de radioatividade de acordo com o protocolo do fabricante. Após evaporar a acetona, dissolva o resíduo com 100 a 200 microlitros de DMSO para a próxima etapa de rotulagem do rádio.

Realizar a síntese de nanopartículas de ouro modificadas do grupo DBCO conforme descrito no protocolo de texto. Preparar uma solução concentrada das nanopartículas de ouro modificadas do grupo DBCO por centrifugação. E ajuste a concentração das nanopartículas de ouro para dois micro molares.

Adicione 4,1 mega bekarel de azida marcada com iodo 125 em 5 microlitros de DMSO a uma suspensão de 50 microlitros de 2 nanopartículas de ouro micro molar. Incubar a mistura de reação resultante a 40 graus Celsius por 60 minutos. Retirar um aloquot de 0,2 microlitros do produto bruto e aplicá-lo numa cromatografia em camada fina codificada em sílica ou em uma placa TLC.

Desenvolver a placa TLC utilizando acetato de etilo como fase móvel. Coloque a placa TLC em um scanner TLC de rádio e execute o scanner para monitorar a reação de rotulagem de rádio de acordo com o protocolo do fabricante. Purifique a mistura de reação contendo as nanopartículas de ouro marcadas com iodo 125 por centrifugação.

Transvase o sobrenadante e adicione água pura para ressuspensão dos grânulos de nanopartículas de ouro. Retirar um aloquot de 0,2 microlitros do produto purificado e aplicá-lo numa placa TLC revestida de sílica. Desenvolver a placa TLC utilizando acetato de etilo como fase móvel.

Coloque a placa TLC em um scanner TLC de rádio e execute o scanner para determinar o rendimento radioquímico e a pureza radioquímica das nanopartículas de ouro marcadas com iodo 125, de acordo com o protocolo do fabricante. Os resultados representativos do grupo protético de azida marcado com iodo 125 são mostrados aqui. Um rendimento radioquímico de 75% foi determinado usando um calibrador de dose de radioatividade.

O resultado da HPLC de rádio analítica mostra excelente pureza radioquímica do produto. Os resultados representativos da nanopartícula de ouro marcada com iodo 125 são mostrados aqui. A análise de TLC de rádio mostra que tanto o rendimento radioquímico quanto a pureza da nanopartícula de ouro purificada foram superiores a 95%Uma vez dominada, esta técnica pode ser feita em três horas se for realizada corretamente.

As implicações dessa técnica se estenderam à preparação de várias sondas moleculares para fins terapêuticos de imagem nuclear porque a química de marcação no método atual é altamente eficiente e direta. Não se esqueça de que trabalhar com iodo radioativo pode ser extremamente perigoso e os cuidados como tijolos ou sapatos mais leves devem sempre ser tomados durante a realização deste procedimento.