Name: Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Aprenda a induzir acidente vascular cerebral isquêmico em camundongos usando oclusão da artéria cerebral média. Esta técnica mantém a artéria cerebral externa intacta para infusão direta de tratamentos no hemisfério afetado.

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Gostaríamos de agradecer ao Dr. Lei Chen (Icahn School of Medicine no Mount Sinai, NY) que primeiro estabeleceu este modelo em nosso laboratório. Apoiado em parte pelo HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 e NSC 2015/17/B/NZ7/02985. O Dr. Luc Bertrand é apoiado em parte por uma bolsa de pós-doutorado da American Heart Association (16POST31170002).

Todos os procedimentos foram aprovados pela Universidade de Miami Institutional Animal Care e Use Committee (IACUC), de acordo com os Institutos Nacionais de diretrizes de Saúde (NIH). É necessária a utilização de equipamento estéril e técnicas assépticas. 1. Preparar o Oclusão Sutura <ol><li> Utilize uma sutura de 0,21 mm de diâmetro para os ratos entre 20-25 g e 0,23 mm para os ratos entre 25 - 35 g de peso corporal. A escolha do tipo de sutura para o procedimento MCAO depende do peso do animal. </li><li> Usando uma caneta de prata, marque a sutura em 9 mm a partir da ponta de silicone revestido. Isto irá servir como um guia para o comprimento da inserção. </li></ol> 2. preparação para a cirurgia <ol><li> Anestesiar rato com isoflurano misturado com o oxigênio, usando um sistema de anestesia laboratório. Use isoflurano na posição 5 e fluxo de oxigênio a 2 na máquina comercial (Veja a Tabela de Materiais). Transferir o animal ao surgery superfície e manter a anestesia utilizando um cone de nariz (use a configuração 1.5 isoflurano - 2,5 e fluxo de oxigênio a 2). <ol><li> Certifique-se de que a taxa respiratória do rato é de cerca de 1-2 respiração por segundo, sem ofegante. Além disso, garantir que o animal não apresenta reação estimulação bigodes e reflexo pedal (toe pitada). Monitorar a taxa de respiração e esforço durante a cirurgia, pelo menos a cada 5 min. </li></ol></li><li> Colocar uma gota de lubrificante oftálmica em cada olho utilizando uma zaragatoa estéril para evitar que sequem durante o procedimento. Em alternativa, aplicar pomada oftálmica para o olho a partir de um tubo farmacêutica estéril. </li><li> Virar o animal à sua volta e fazer a barba área da incisão. Depois, desinfectar completamente a área da cirurgia utilizando 70% de etanol, seguido de cloro-hexidina, e o cotonete final com 70% de etanol. Colocar o animal em uma superfície cirúrgica quente sob um microscópio estereoscópico. </li></ol> 3. A dissecção da artéria carótida comum e interna / External Ramificação <ol><li> Utilizando uma tesoura cirúrgica e uma pinça, executar uma incisão na linha média raso no pescoço, por cima do osso do peito para abaixo da mandíbula (cerca de 3-4 cm). campo cirúrgico deve ser colocada em torno da área da cirurgia para impedir que os instrumentos de entrar em contacto com superfícies não-estéreis. O campo cirúrgico foi omitido no vídeo atual para ajudar as filmagens. </li><li> Utilizando uma pinça, gordo cuidadosamente separados e do tecido conjuntivo para expor a traqueia. Tissue deve facilmente e naturalmente separar a ambos os lados. </li><li> Coloque um travesseiro (objeto redondo, cerca de 0,5 cm de diâmetro) na parte de trás do pescoço dos ratos para estender o pescoço, expondo ainda mais a área de cirurgia. </li><li> Abra a incisão utilizando um afastador de tecido ou ganchos. </li><li> No lado esquerdo do animal, da traqueia, cuidadosamente pinça para além do tecido conjuntivo para expor a artéria carótida comum esquerda (CCA). Tenha cuidado para não danificar os nervos e veias principais empacotados com o CCA. </li><li> Continue expondo a CCA, tomando cuidado para separar o tecido subjacente, e expor o topo de &quot;Y&quot; de ramificação da artéria cerebral interna (ICA) e da artéria cerebral externa (ECA). Para ajudar no descolamento da CCA, insira as pinças curvas sob o CCA para perfurar o tecido conjuntivo e depois, lentamente, permitir-lhes abrir. </li></ol> 4. Preparação do CCA MCAO para a inserção da sutura <ol><li> Insira 3 segmentos de fio de náilon de cerca de 4 cm de comprimento no âmbito do CCA. Certifique-se de que o CCA não é distorcido tal como esta iria complicar drasticamente a inserção do fio de sutura. </li><li> No ponto mais baixo possível, feche a sutura inferior usando um nó permanente. </li><li> Amarre a sutura superior, logo abaixo do ICA / ECA ramificação usando um nó corrediço removível. </li><li> Amarre a sutura meio usando um nó corrediço removível, mas mantê-lo aberto. É importante deixar bastante espaço, para não dificultar a inserção de sutura. </li><li> Usando microdissection primavera scissors, realizar uma incisão no CCA entre o fundo e as suturas média. Realizar a incisão 0,2 milímetros, próximo à sutura inferior. </li></ol> 5. Oriente oclusão da artéria cerebral <ol><li> Utilizando uma pinça, coloque a sutura MCAO na incisão CCA, guiando-a até o topo. Execute esta etapa rapidamente após o passo 4.5 para prevenir a coagulação e fechamento da abertura CCA. No caso em que a inserção de fio de sutura é bloqueado, usar as pontas de pinça para reabrir a incisão. </li><li> Gentilmente amarrar a sutura meio da parte de sutura silicone MCAO usando um nó corrediço para restringir o fluxo de sangue em torno dele, mas solta o suficiente para permitir que ele se mova livremente. </li><li> Cuidadosamente desfazer a sutura superior, certificando-se que a sutura MCAO não escorregar para fora. </li><li> Inserir o fio de sutura MCAO na ICA por um par de milímetros e, em seguida, voltar a fechar a parte superior de sutura, do mesmo modo como descrito no passo 5.2. </li><li> Orientar a sutura MCAO para a área de oclusão. Indicação de inserção bem sucedida éevidente pela baixa quantidade de refluxo de sangue a partir da incisão CCA e que a marca de prata 9 milímetros está situado entre a incisão e a bifurcação CCA ACI / CEA. A confirmação adicional de oclusão bem sucedida pode ser obtido utilizando métodos de controlo, tais como um sistema de monitorização de fluxo de sangue a laser Doppler 15, 16. NOTA: Uma gota de 90% do fluxo sanguíneo para a área do cérebro do meio no lado área ocluída indica oclusão bem sucedida. </li><li> Após a oclusão bem sucedida, amarrar a sutura médio e superior com força. Se realizar a inserção farsa, não religamento suturas mas pule em vez de imediato para o passo 7.3. </li></ol> 6. Incisão Encerramento e cuidados pós-operatórios <ol><li> Tuck nas suturas para a área da incisão. </li><li> Remover afastador ou tecido ganchos e travesseiro. </li><li> área de sutura limpa utilizando solução salina estéril e um cotonete. </li><li> Fechar a incisão usando nylon sutura / agulha e fórceps. </li> &lt;li&gt; Administrar anti-inflamatória (por exemplo, carprofeno 10 mg / kg, sc) e analgésicos (por exemplo, buprenorfina 0,1 mg / kg sc, duas vezes por dia) medicamentos para aliviar o desconforto pós-operatório. Colocar os ratinhos em uma gaiola colocada sobre uma almofada de aquecimento para evitar a hipotermia e dar acesso ad lábio de água e comida amolecida. </li><li> Monitorizar a recuperação de animais (5-10 min) e para os sinais de acidente vascular cerebral. Eles podem variar de paralisia lateral, leve e circulando a severa contração do flanco contralateral e rolamento. Vários pontos de avaliação são listadas na discussão. Animais que apresentam sinais de dificuldade respiratória ou convulsões graves devem ser sacrificados. </li><li> Dependendo do protocolo de reperfusão de isquemia, deixar o fio de sutura MCAO em lugar de 30 min a 120 min ou mais. Reduzindo o tempo de oclusão previne a mortalidade. </li><li> Para a oclusão permanente, deixar a MCAO sutura no lugar, durante 24 horas, no entanto a taxa de mortalidade significativa é que se espera. Após esse intervalo de tempo, proceder à step 7. <ol><li> Se usando o modelo de oclusão permanente, manter os ratos na gaiola até o ponto final. Naquele tempo, retire sutura (passos 7,1-7,8). Este procedimento também pode ser realizada após a eutanásia. </li></ol></li></ol> 7. A reperfusão <ol><li> Anestesiar o animal novamente (siga as instruções em 2.1) e remover suturas de fechamento da ferida. </li><li> Utilizando uma pinça e separadores de tecidos, re-abrir a incisão e expõem a CCA. </li><li> Remova cuidadosamente a sutura superior e puxe na sutura MCAO até que a parte de silicone revestido situa-se no nó meio. </li><li> Refazer o nó no topo da sutura para evitar que o sangue flua passar a sutura (não tem que ser um nó corrediço). </li><li> Cuidadosamente desfazer o nó meio e puxar a sutura após o alto nó, mas mantê-lo dentro do CCA. </li><li> Feche bem o nó superior para bloquear o fluxo de sangue arterial. </li><li> Retire completamente a sutura MCAO e fechar firmemente o nó meio. </li><li> A sutura pode ser MCAOre-utilizada várias vezes. Depois de cada utilização, limpar a sutura com cuidado em 70% de etanol para remover os contaminantes (por exemplo, de sangue ou de tecido), utilizando um gaze estéril. Em seguida, coloque a sutura em uma bolsa de esterilização e esterilizá-lo. </li><li> Repita os passos de 6,1-6,4 e monitorar a recuperação dos animais. </li></ol> Análise 8. Tissue <ol><li> Para monitorar o volume de curso, dissecar o cérebro. <ol><li> Eutanásia do rato utilizando um processo de duas etapas. Em primeiro lugar, expor o animal a uma overdose de isoflurano até parar de respirar. Para a coloração TTC, decapitar o mouse imediatamente e proceder à extracção do cérebro. Para o cérebro de corte (por exemplo, para as análises imuno), realização de perfusão através de uma punção cardíaca antes da decapitação. </li><li> Cut-off da cabeça na base do crânio e cortar o couro cabeludo da abertura em gargalo para o topo do crânio até entre os olhos. Com a cabeça exposta, cortar o osso ao longo de ambos os lados a partir da abertura da base do crânioaté a cavidade ocular. Faça este corte ao longo da vasta parte do crânio. Tenha cuidado para não chegar muito profundo com uma tesoura para evitar danos ao cérebro. </li><li> Em seguida, corte o osso entre as duas órbitas. </li></ol></li><li> Utilizando uma pinça, levante a parte superior do crânio para expor o cérebro. Deve haver apenas uma pequena resistência. Se não levantar facilmente, incisões crânio pode estar incompleta. Retire o cérebro suavemente com uma pinça curva sem corte. O cérebro ainda pode ser anexado por vários nervos. Proceder-se lentamente, removendo anexos ao longo do caminho. </li><li> Colocar o cérebro fresco em uma matriz de cérebro de 1 mm, adicionar um par de gotas de PBS, e o corte ao longo da matriz, utilizando uma lâmina de barbear ou lâmina de criostato. </li><li> Transferir o cérebro para uma placa de 100 mm e adicionar solução de coloração (2% de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio [TTC] dissolvidos em PBS) para cobrir o fundo do prato. Utilizando duas pinças, separada de todas as fatias do cérebro (parte da frente virada para baixo) e colocá-los em ordem, na parte inferior do prato. NOTA: A coloração vai virar tecido viável vermelho, com o tecido não viável restante branco. Aquecer a solução a 37 ° C irá acelerar coloração. Sinais de área de acidente vascular cerebral (branco) pode ser visto como o mais rapidamente 90 min após acidente vascular cerebral e permanecem visíveis durante mais de 7 dias. Imagem deve ser feito juntamente com uma régua para permitir o cálculo do volume de derrame. </li><li> Cérebros processam dissecados para seccionamento, imuno-coloração, isolamento de proteínas, ou uma variedade de outros procedimentos de 17, 18, 19. </li></ol>

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</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse concorrentes ou de interesse.

A utilização com sucesso do método descrito MCAO é altamente dependente de uma compreensão da anatomia do fluxo sanguíneo cerebral. Desde o posicionamento correto da sutura é difícil discernir devido à falta de pistas visuais diretos, a prática repetida é importante dominar o procedimento antes de usá-lo para estudos de investigação. volume de curso devem ser analisados ​​para garantir resultados consistentes. A adição de um sistema de laser Doppler pode ajudar a determinar o sucesso da oclusão do fluxo de sangue e deve...

O estudo de doenças cardiovasculares, tais como acidente vascular cerebral, baseia-se na utilização de modelos in vivo. Para compreender a possível implicação de isquemia, toxicidade da droga, e / ou de tratamento, existe a necessidade de usar um modelo adequado, padronizada, fiável e reprodutível da doença, o que permite estudos comparativos entre os grupos de tratamento. Neste artigo, nós estamos usando ratos, dada a disponibilidade de um grande número de ratos transgénicos e modelos de avaliação padronizados. Raking pontuação para avaliar comportamento motor e déficits seguintes AVC isquêmico experimental ea seguinte de recuperação foram desenvolvidos 1, 2. Vários modelos de acidente vascular cerebral isquêmico estão disponíveis, tais como isquemia cerebral global, completa, isquemia global incompleta, isquemia cerebral multifocal e isquemia cerebral focal. O último grupo é também a categoria de acidente vascular cerebral em pacientes mais prevalente. A maioria dos eveNTS é iniciada pela formação de uma oclusão embólica ou trombótica na ou perto da artéria cerebral média (MCA). Tendo em conta estes parâmetros, o modelo apresentado imita a etiologia da doença de acidente vascular cerebral humano e faz com que os resultados obtidos altamente relevantes 3. No entanto, a tradução de descobertas a partir de modelos animais para o tratamento da doença em seres humanos tem provado ser um desafio. Até agora, apenas a utilização de tecido trombolítica activador do plasminogénio tem sido aprovado para o tratamento de acidente vascular cerebral isquémico agudo 4. Entre os modelos de isquemia cerebral focal no rato, o modelo de circulação derrame cerebral posterior e modelo de trombose venosa cerebral são altamente invasivo, diminuindo a sua aplicabilidade e restringir a gama de análises que podem ser realizadas. No entanto, outras técnicas, tais como o modelo de embolia, modelo fototrombose, modelo de acidente vascular cerebral de endotelina-1 induzida, e a oclusão da artéria cerebral média sutura intraluminal (Hmodelo CAO), estão disponíveis para utilização sem estas limitações. O modelo MCAO é uma técnica descrita neste protocolo. Ela oferece um método de confiança de indução de isquemia cerebral focal que pode ser prontamente reperfundidos e realizada de um modo de alto rendimento. Existem duas abordagens para este modelo, ou seja, os métodos Zea-Longa e Koizumi. Eles diferem ligeiramente na forma como a sutura oclusão é inserido na vasculatura. Na técnica de Zea Longa-, a sutura é inserida através da artéria carótida externa 5. A técnica aqui apresentada é modificado a partir do método Koizumi, em que o fio de sutura de oclus é inserida através da artéria carótida comum 6. O modelo MCAO foi aplicado com sucesso para avaliar diferentes eventos que ocorrem durante o acidente vascular cerebral isquêmico. Após reperfusão, edema cerebral pode ser observada juntamente com a ruptura da barreira sangue-cérebro. Pico da morte neuronal é geralmente observada em 24 h; No entanto, ele revolta-se para os níveis basais após 7 dias 7. Nos seres humanos, o sexo ea idade são variáveis importantes na determinação do resultado do curso, o que também é observado em camundongos e ratos 8, 9, 10. Várias publicações têm utilizado o modelo MCAO para demonstrar a eficácia do tratamento 11, 12, 13, 14.

<table><tbody><tr><td>Sutura MCAO 0,23 mm</td><td>Doccol</td><td>702345PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>Sutura MCAO 0,21 mm</td><td>Doccol</td><td>702145PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>Grampos</td><td>de caneta prateada</td><td>503205</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de anestesia</td><td>Vetequip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica</td><td>Ferramenta de ciência fina</td><td>14558-09</td><td></td></tr><tr><td>Pinça cirúrgica ponta reta</td><td>Fina ferramenta científica</td><td>00108-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinça cirúrgica ponta angular</td><td>Ferramenta de ciência fina</td><td>00109-11</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola</td><td>Ferramenta de ciência fina</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de nylon</td><td>Braintree scintific</td><td>SUT-S 104</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de fechamento</td><td>VWR</td><td>95057-036</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5- Cloreto de trifeniltetrazólio</td><td>FisherSci</td><td>50-121-8005</td><td></td></tr><tr><td>Bloqueio cerebral</td><td>Braintree scintific</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina de criostato</td><td>VWR</td><td>89202-606</td><td></td></tr><tr><td>Opcional:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Periflux Sistema doppler a laser</td><td>Perimed</td><td>Periflux 5000</td><td></td></tr><tr><td>Unidade de monitoramento</td><td>Perimed</td><td>PF 5010 - LDPM</td><td></td></tr></tbody></table>

indução de acidente vascular cerebral isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria oriente e visualização de infarto Área

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

A doença cerebrovascular é altamente prevalente na população global e engloba vários tipos de condições, incluindo acidente vascular cerebral. Para estudar o impacto do AVC na lesão tecidual e avaliar a eficácia das intervenções terapêuticas, vários modelos experimentais em uma variedade de espécies foram desenvolvidos. Elas incluem isquemia cerebral global completa, isquemia global incompleta, isquemia cerebral focal e isquemia cerebral multifocal. O modelo descrito neste protocolo é baseado na oclusão da artéria cerebral média (OCM) e está relacionado à categoria de isquemia focal. Essa técnica produz isquemia focal consistente em uma região estritamente definida do hemisfério e é menos invasiva do que outros métodos. O procedimento descrito é realizado em camundongos, dada a disponibilidade de diversas variantes genéticas e o elevado número de testes padronizados para camundongos para auxiliar na avaliação comportamental e do neurodéficit.

O percurso de inserção do fio de sutura oclusão é demonstrado na Figura 1. A sutura MCAO é para ser encaminhado para a área de oclusão, bifurcando na ICA. oclusão bem sucedida do MCA vai levar à lesão tecidual, visível por coloração TTC. A Figura 2 apresenta imagens de manchas de animais com tratamento simulado (Figura 2A) e de um 60 min de reperfusão de isquemia MCAO animais (coloração em 90 minutos ou 24 horas após a oclusão, a <strong...

Descrevemos um modelo de camundongo de AVC induzido pela oclusão da artéria cerebral média usando uma sutura revestida de silicone. O protocolo pode ser aplicado para induzir oclusão permanente ou isquemia temporária, seguida de reperfusão.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...

O objetivo geral deste procedimento cirúrgico é induzir oficialmente e de forma confiável o AVC isquêmico, deixando a artéria cerebral externa intacta. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da pesquisa do AVC, como o impacto do tratamento na gravidade do AVC. A principal vantagem dessa técnica é que, após a indução do AVC, a artéria cerebral externa permanece disponível para infundir o tratamento diretamente no hemisfério afetado.Coloque um camundongo anestesiado com isoflurano na superfície de cirurgia preparada e coloque um cone nasal para administrar isoflurano misturado com oxigênio. Certifique-se de que a frequência respiratória esteja em torno de uma a duas respirações por segundo sem ofegar. Além disso, certifique-se de que o animal não apresente uma reação à estimulação do bigode ou ao reflexo do pedal.Coloque uma gota de lubrificante oftálmico em cada olho, usando um cotonete estéril para evitar que sequem durante o procedimento. Depois de raspar a área da incisão, desinfete completamente a área da cirurgia usando etanol a 70% e uma solução à base de clorexidina. Mantenha o animal em uma superfície cirúrgica quente sob um microscópio estéreo.Em seguida, usando tesouras cirúrgicas e fórceps, faça uma incisão superficial na linha média no pescoço, acima do osso do peito até abaixo da mandíbula. Usando uma pinça, separe cuidadosamente os tecidos adiposo e conjuntivo para expor a traqueia. Os tecidos devem se separar fácil e naturalmente para ambos os lados.Em seguida, coloque um travesseiro ou outro objeto redondo de cerca de 0,5 centímetros de diâmetro sob a parte de trás do pescoço para estender o pescoço e expor ainda mais a área para a cirurgia. Abra a incisão usando um afastador de tecido ou ganchos. Em seguida, no lado esquerdo da traqueia, separe cuidadosamente o tecido conjuntivo para expor a artéria carótida comum esquerda sem danificar os nervos próximos e as veias principais.Em seguida, insira a pinça curva sob o CCA para perfurar o tecido conjuntivo e, em seguida, deixe-a abrir lentamente para liberar o CCA. Separe o CCA do tecido subjacente e exponha a ramificação superior da artéria cerebral interna e da artéria cerebral externa. Uma vez que o CCA é exposto, insira três segmentos de sutura de náilon sob o CCA.Certifique-se de que o CCA não esteja torcido, pois isso complicaria drasticamente a inserção da sutura. Em seguida, no ponto mais baixo possível, feche a sutura inferior usando um nó permanente. Amarre a sutura superior logo abaixo da ramificação da ACI e ECA usando um nó corrediço removível.Em seguida, amarre a sutura do meio usando um nó corrediço removível, mas mantenha-a bem aberta. Em seguida, usando uma tesoura de mola de microdissecação, crie um 0,2 milímetro no CCA entre as suturas inferior e intermediária mais próximas da sutura inferior. Usando uma pinça, insira a sutura MCAO na incisão da CCA, guiando-a em direção à sutura superior.Em seguida, aperte suavemente o nó corrediço da sutura do meio no CCA para que ele restrinja o fluxo sanguíneo ao redor da sutura MCAO, mas fique solto o suficiente para permitir que a sutura MCAO se mova livremente. Agora desaperte cuidadosamente a sutura superior, certificando-se de que a sutura MCAO não escorregue. Insira a sutura MCAO alguns milímetros na ACI e, em seguida, feche novamente a sutura superior com um nó corrediço como antes.Em seguida, guie a sutura MCAO para a área de oclusão, primeiro encaminhando-a para a ACI passando pela ECA, depois garantindo que a sutura permaneça na ACI, contornando a artéria pterigopalatina. A inserção é bem-sucedida se houver pouco refluxo sanguíneo da incisão da ACC e se a marca prateada de nove milímetros estiver situada entre a incisão da ACC e a bifurcação da ACI e da ECA. Após a oclusão bem-sucedida, amarre bem a sutura do meio e da parte superior e, em seguida, dobre as suturas na área da incisão.Depois de remover o afastador ou os ganchos de tecido e o travesseiro, limpe a área de sutura usando solução salina estéril em um cotonete. Em seguida, feche a pele com sutura de náilon. Coloque o mouse em uma gaiola limpa situada em uma almofada aquecida para evitar hipotermia e permitir o acesso ad libitum à água e alimentos amolecidos.Monitore o animal em busca de sinais de derrame por pelo menos cinco a 10 minutos. Dependendo do protocolo de isquemia e reperfusão, deixe a sutura MCAO no local de 30 minutos a 120 minutos ou mais. Após anestesiar o animal como antes e remover as suturas de fechamento da ferida, use fórceps e separadores de tecido para reabrir a incisão e expor o CCA.Em seguida, remova cuidadosamente a sutura superior e puxe suavemente a sutura MCAO até que a parte revestida de silicone esteja situada no nó do meio. Refaça a sutura do nó superior para evitar que o sangue flua pela sutura MCAO. Em seguida, desfaça cuidadosamente o nó do meio e puxe a sutura MCAO além do nó superior, mantendo-o dentro do CCA.Feche bem o nó superior para bloquear o fluxo sanguíneo da artéria. Em seguida, puxe completamente a sutura MCAO e feche bem o nó do meio. Feche a ferida e administre os cuidados pós-operatórios como antes.Este esquema mostra a área de oclusão que resulta do procedimento demonstrado neste vídeo em azul. A área de cirurgia está localizada na parte inferior da figura, indicada pelo formato oval, e a colocação da sutura é indicada por linhas pretas. As imagens a seguir mostram a posição do TTC das seções cerebrais.Esta imagem representa a coloração típica após a inserção simulada. A imagem é representativa do dano tecidual causado por um MCAO de 60 minutos, seguido de 90 minutos de reperfusão. Maior dano tecidual é observado após 24 horas de reperfusão, após um MCAO de 60 minutos.A coloração imunofluorescente para o marcador neuronal MAP2 permite que a perda neuronal a partir de 60 minutos de oclusão, seguida de 23 horas de reperfusão, seja claramente visualizada na imagem à direita. A astrogliose é visível após a coloração imunofluorescente com GFAP. Na imagem à direita, a astroglia está concentrada na área adjacente ao dano tecidual no cérebro de isquemia e reperfusão, enquanto um padrão difuso de coloração é visto no controle operado por vergonha.Ao tentar este procedimento, é importante monitorar o bem-estar do animal e o tempo de oclusão. Após este procedimento, outras técnicas, como análise de comportamento ímpar e imunofluorescência, podem ser realizadas para responder a perguntas adicionais sobre lesão tecidual e recuperação.

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Research

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Medicine

Medicina

Indução cirúrgica de uma lesão cerebral isquêmico no rato é um modelo amplamente utilizado para a pesquisa acidente vascular cerebral. Aqui nós demonstram a indução de isquemia cerebral focal por oclusão da artéria cerebral média. Visualização do infarto resultantes de coloração histológica e ressonância magnética também é mostrada.

Modelo de isquemia focal cerebral por oclusão Suture Endovascular da artéria cerebral média no Rat

Filamentosas de oclusão da artéria cerebral média é um modelo comum para o estudo de AVC isquêmico em ratos.

Curso de modelagem em Ratos - Oclusão da Artéria Cerebral Média com o modelo de Filamento

Demonstramos no vídeo um método para produzir uma oclusão da artéria cerebral média em ratos adultos utilizando um monofilamento intraluminal. Também mostramos como avaliar a extensão do infarto cerebral por 2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto de coloração (TTC).

Modelo do rato de Oclusão da Artéria Cerebral Média

O intraluminal cerebral média de oclusão da artéria modelo (MCAO) é o modelo mais freqüente dentre os modelos experimentais acidente vascular cerebral isquêmico. Aqui vamos demonstrar todo o modelo em detalhes com o guia de Laser Doppler fluxometria, e os resultados do seu representante.

Intraluminal artéria cerebral média Oclusão Model (MCAO) para Acidente Vascular Cerebral Isquêmico com Laser Doppler Fluxometria Orientação em Ratos

O modelo de oclusão intraluminal cerebral média em ratinhos é aqui apresentada. A extensão do enfarte cerebral é avaliada por uma pontuação neurológica e coloração com violeta de cresilo, a coloração de uma alternativa ao TTC, que oferece a grande vantagem de testar em paralelo marcadores de interesse muitos.

Modelo de Rato OACM Intraluminal: Avaliação infarto cerebral por coloração violeta Cresyl

A fim de compreender a patofisiologia de acidente vascular cerebral, é importante o uso de modelos fiáveis. Este documento descreve um dos modelos de AVC mais utilizados em camundongos, denominado o meio modelo de oclusão da artéria cerebral (MCAo) (também denominado o filamento intraluminal ou modelo de sutura) com a reperfusão.

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

Oclusão de filamento intraluminal da artéria cerebral média é o modelo mais frequentemente utilizadas na vivo do acidente vascular cerebral experimental em roedores. Uma abordagem alternativa cirúrgica para permitir a reparação de artéria carótida comum é realizada aqui, que permite a reperfusão da artéria carótida comum e uma reperfusão completa no território da artéria cerebral média.

Oclusão de artéria Cerebral média, permitindo a reperfusão através de reparação de artéria carótida comum em ratos

Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.

Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral

Descrevemos um método simples e reprodutível que pode induzir infarto do miocárdio ou lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior esquerda através de micromanipulação.

Indução de Infarto do Miocárdio e Lesão de Isquemia-Reperfusão Miocárdica em Camundongos

Este protocolo descreve o modelo de isquemia cerebral focal transitória em camundongos através da oclusão intraluminal da artéria cerebral média. Além disso, exemplos de avaliação de resultados são mostrados usando ressonância magnética e testes comportamentais.

Modelo de Oclusão Transitória da Artéria Cerebral Média do Acidente Vascular Encefálico

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

Aprenda a induzir acidente vascular cerebral isquêmico em camundongos usando oclusão da artéria cerebral média. Esta técnica mantém a artéria cerebral externa intacta para infusão direta de tratamentos no hemisfério afetado.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área (Vídeo) | JoVE Journal

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

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