Name: Quantificação histológico de miocárdio crônico infarto em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Aprenda a quantificar infarto do miocárdio em ratos usando amostragem sistemática e análise de imagem de seções coradas. Este método histológico permite avaliar com precisão o tamanho do infarto e o remodelamento do ventrículo esquerdo em modelos cardíacos crônicos.

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O estudo foi apoiado pela Fundação Nacional Suíça [SNF 310030-149986 para MNG], pela Universidade de Friburgo e pelo Hospital de Friburgo.

Todos os animais receberam cuidados de acordo com a Convenção Europeia dos Animal Care. Os procedimentos cirúrgicos foram realizados em conformidade com a Lei de Protecção dos Animais Suíça depois de obter autorização do Serviço Veterinário do Estado, Fribourg, aprovado pelo Swiss Federal Veterinário, Suíça. Colheita 1. Coração NOTA: Todas as intervenções cirúrgicas foram realizadas sob anestesia isoflurano. Foram feitos esforços para diminuir o sofrimento animal. Em particular, todos os animais receberam uma injecção subcutânea de 0,1 mg / kg de buprenorfina pré-anestésica. O protocolo cirúrgico para indução de enfarte do miocárdio foi anteriormente descrito noutro local 13. <ol><li> Executar uma esternotomia sobre um animal myocardially infartada sob anestesia (animal entubado, 2,5% de isoflurano, a anestesia adequada confirmados pela pata pitada reflex). <ol><li> Abra o animal por o corte da pele e, em seguida, os músculoscom uma tesoura cirúrgica. Corte as costelas do lado esquerdo e direito, e em seguida, remover o peito. </li><li> Retirar as adesões restantes após a cirurgia anterior (LAD ligadura). Cortar a aorta e remover o coração. Colocar o tecido em KCl 1 M (em PBS), e em seguida lavar com PBS. </li></ol></li></ol> 2. Preparação do Tecido <ol><li> Colocar o coração infartado longitudinalmente em uma matriz de coração de rato acrílico. Mantê-lo a -20 ° C durante 1 h. </li><li> Cortar o coração diretamente na matriz usando uma lâmina de barbear com uma transversal. Certifique-se de cada fatia é de 2 mm de espessura. Cortar aproximadamente 5-7 diapositivos para cada coração (com base no nível de remodelação); isso é chamado de amostragem sistemática. </li><li> Neste passo, realizar a coloração com cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) é opcional (manter a orientação da base de fatias de coração-a-ápice). <ol><li> Incubar em 1% de TTC em PBS durante 50 min a 37 ° C. Incubar-lo em 4% de paraformaldeído (PFA) durante 20 min a 1 h. Coloque as seções between duas placas de vidro com espaçadores de 2 mm e tirar fotos com um microscópio estereológica acoplado com uma câmera de 15X de ampliação. CUIDADO! O paraformaldeído é tóxico. </li></ol></li><li> Deslize congelamento (1 opção st) <ol><li> Colocar cada lâmina em um molde de plástico (10 x 10 x 5 mm) com meio para cryotomy (temperatura de corte óptima, outubro) de montagem, manter a orientação (colocar o lado do vértice orientado da secção para baixo na parte inferior do molde). Congelar os blocos com vapores de 2-metilbutano em atmosfera de azoto líquido de arrefecimento para 10 - 15 min. Finalmente, armazenar o tecido a -80 ° C. </li></ol></li><li> Parafinização (2 opção nd) <ol><li> Colocar cada lâmina na incorporação de cassetes (manter a orientação, colocando o lado orientado para o vértice da secção para baixo na parte inferior da cassete) e, em seguida, em PFA a 4% durante 24 h. Coloque-o em uma noite máquina de processador de tecidos. <ol><li> Incubar-lo em etanol a 70% durante 2 h. Incubar em que etanol 95% durante 2 h. Incubar-lo em etanol a 100% durante 3 h. Incubar-lo em xilol durante 4 h. Incubar-lo em parafina (derretida a 60 ° C num forno), durante 5 h. Finalmente, fazer blocos, incorporando cada slide coração em parafina. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Masson-Goldner tricromo <ol><li> Fazer secções de tecido a partir de blocos de parafina com um micrótomo manual (espessura: 5 ^ M) ou a partir de blocos PTU com um criostato ajustado para -18 ° C (espessura: 7 mm). </li><li> Manchar um slide de cada peça do coração para cada rato (3 - 4 secções transversais por slide) com Masson-Goldner tricromo (ver anexo). NOTA: Iniciar a partir deste passo para as seções de parafina. <ol><li> Derreter as lâminas a 60 ° C num forno. De acordo com um exaustor, eles Desparafinar duas vezes em xilol durante 10 minutos cada. Rehidratar-los em 100% de etanol, 95% de etanol, 70% de etanol, e água destilada, durante 3 minutos cada. NOTA: Iniciar a partir deste passo para o criocortes. </li><li> Corrigi-los em Bouin solução durante a noite. Em seguida, lave-os em água corrente por 10 - 15 min. Lave-os em água destilada. Incubar-los em hematoxilina de Mayer por 3 min. </li><li> Retirar as lâminas e deixá-los em água destilada durante 5 minutos. Em seguida, incubam-los em ácido fucsina-Ponceau durante 5 min. Lave-os em ácido acético a 1% durante 1 min. </li><li> Em seguida, incubam-los em ácido fosfomolíbdico Orange G durante 1 min. Lave-os em ácido acético a 1% durante 1 min, incubar-las à luz corante verde durante 10 minutos, e lavá-los em ácido acético a 1% durante 1 min. </li><li> Desidratar-os em 70% de etanol (30 seg), 95% de etanol (30 seg), e etanol a 100% (5 min). Coloque uma gota de um meio de montagem resinoso nas secções de tecido, cobri-los com lamelas, e deixe-os secar. </li></ol></li></ol> Análise Tamanho 4. Infarto <ol><li> Adquirir uma imagem de cada slide em uma lupa estereoscópica (15X de ampliação) acoplado com uma câmera. Fotografar uma régua com a mesma configuraçãos. </li><li> Use software de análise de imagem para medir a espessura da cicatriz no meio do enfarte, a espessura do septo, área da cavidade do ventrículo esquerdo (VE), a área de enfarte e área de tecido do LV utilizando. <ol><li> Definir a escala com a imagem régua (Figura 1A). <ol><li> Clique em Medidas, em seguida, selecione Definir Fator de Conversão. Desenhar uma linha na barra de calibração. Botão direito do mouse sobre a imagem e clique sobre a calibração End. Observe o valor bar, e, em seguida, clique em OK. </li></ol></li><li> Escolha do LV a partir da imagem do coração coradas (Figura 1B). Use a ferramenta segmento múltipla. Selecione o ponto-a-ponto LV, e clique depois à direita Copiar / colar em qualquer lugar. </li><li> Medir a espessura da cicatriz e do septo usando a ferramenta de medição único segmento (Figura 1C </strong&gt;). </li><li> Detectar automaticamente o LV cavidade, enfarte, e áreas LV utilizando a ferramenta de medição de área automático no modo RGB (Figura 1D). <ol><li> Clique na ferramenta. Ative Só Fronteiras e Contígua no modo RGB. Finalmente, clique dentro da área de interesse para detectá-lo. Se necessário, use ferramentas de precisão. </li></ol></li></ol></li><li> Calcular o tamanho do enfarte como a relação da área de enfarte e a área de LV. </li><li> Calcular o índice de expansão da seguinte forma: [área da cavidade LV / toda a área LV] / [espessura enfarte / espessura do septo], com toda a área de LV incluindo tanto a cavidade do VE e áreas de tecido do LV. </li><li> Finalmente, calcule uma &quot;média&quot; para cada coração como segue: [média de índice de expansão das lâminas infartados] * [Número de lâminas infartados / número total de slides]. </li></ol>

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<li>Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+administration+after+myocardial+infarction+promotes+early+infarct+expansion.+A+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat.</a> J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Passos críticos dentro do Protocolo tecido fibrótico pode ser avaliada com precisão em um modelo de rato MI crónica utilizando amostragem sistemática do coração e imagem colhida análises dos cortes histológicos tricromáticas-manchado obtidos a partir da base para o ápice. Dois passos são particularmente importantes para implementação do protocolo de sucesso. Em primeiro lugar, o uso de KCl para a colheita coração permite que o músculo cardíaco a ser mantido num estado relaxa...

O infarto do miocárdio (MI) é uma das principais causas de morte e incapacidade em todo o mundo. A doença cardíaca coronária é a causa principal; MI resulta de isquemia consecutiva a eventos coronarianos, como a oclusão. Quando reperfusão não é realizada dentro do primeiro 6 horas, isquemia induz necrose miocárdica irreversível. Em pacientes, o caracterização de MI conta com diferentes ferramentas de diagnóstico, incluindo sinais clínicos, eletrocardiograma, avaliação dos níveis plasmáticos de biomarcadores, ecocardiograma, imagiologia de ressonância magnética, e histológica 1. MI aguda e crónica são classificados como duas fases diferentes da lesão de acordo com a temporização da necrose do miocárdio em relação ao momento da oclusão coronária. A fase aguda, ocorrendo durante os primeiros 7 dias, está associada com a perda de cardiomiócitos, inflamação extensiva, e o recrutamento de fibroblastos. A fase sub-aguda, caracterizada por a cura do tecido cardíaco e a formação de uma cicatriz, ocorreentre 1 e 4 - 6 semanas. Expansão do infarto, afinamento da parede do ventrículo, e dilatação do ventrículo caracterizar a fase crônica. Remodelação extensa do ventrículo esquerdo resulta progressivamente de insuficiência cardíaca grave 2. MI induzida pelo permanente anterior esquerda artéria descendente (LAD) ligadura representa o modelo de roedor padrão de infarto crônico do miocárdio. Os imita ligadura coronária oclusão coronária. O tamanho do enfarte depende do local da ligadura. Caracterização de lesão isquémica do miocárdio em um modelo de roedor é classicamente realizada utilizando os níveis plasmáticos de biomarcadores, como a troponina I e T 3, ecocardiograma, ressonância magnética, e histologia 4,5. níveis de biomarcadores são correlacionados com a extensão da morte de cardiomiócitos. Ecocardiografia avalia a esquerda comprometimento da função ventricular resultante de anormalidades de movimento de parede regional. Além disso, técnicas de imagem não invasivos, como a ressonância magnética ou de alta resoluçãoecocardiografia, permitir a avaliação da redução do movimento da parede, o volume da área da cicatriz com diminuição da perfusão e miocárdio viável, eo afinamento da parede. dimensões do VE permitir a avaliação precisa do tamanho do infarto. Finalmente, a quantificação do miocárdio viável e mortos podem ser post-mortem realizados usando manchas específicas de secções histológicas de corações colhidas e permite a verificação do tamanho do enfarte (IS). Outra característica importante é a avaliação do índice de expansão do enfarte (EI) 6. A EI é associado com o infarto transmural e começa nos primeiros 3 dias. A EI é caracterizada por uma redução progressiva da espessura da parede, um aumento no tamanho da cavidade do VE, e consequentes alterações na forma do LV. A fim de avaliar a eficácia terapêutica de novos tratamentos - em particular, as estratégias baseadas em células regenerativas, matrizes, e o gene de avaliação de entrega precisas de MI em roedores é de importância primordial.Quando medido em uma única seção transversal obtida ao nível dos músculos papilares, o tamanho é pode ser tendenciosa, devido à grande variabilidade que existe no desenvolvimento do infarto seguinte ligadura LAD; o enfarte apex pode ser, em seguida, ocultado. Importante, as metodologias mais precisas para o tamanho determinado MI têm sido descritos para ratinhos ou ratos 7-9 10. No entanto, é insuficiente para quantificar com precisão remodelação LV ou reduções induzidas terapeuticamente (ou prevenções) da remodelação. Com efeito, este modo é geralmente expressa como uma percentagem do volume total do VE avaliada em secções transversais do coração. Embora este método é válido para infarto agudo do miocárdio, o afinamento da parede do LV que ocorre durante a remodelação permanece sub-avaliada 11,12. A quantificação morfométrica completa do tamanho do infarto e mudanças estruturais devem quantificar vários parâmetros, tais como comprimentos do endocárdio e epicárdio e diâmetros, bem como enfarte e áreas saudáveis. Nós descrevemos um aprox metodológicaoach para avaliar com precisão MI e remodelação em um modelo de rato crônica.

<table><tbody><tr><td>Matriz acrílica do coração do rato 2 milímetros</td><td>72-5015</td><td>Harvard Appartus</td><td></td></tr><tr><td>Inspira ventilador controlado volume avançado</td><td>Aparelho de Harvard</td><td>557058</td><td></td></tr><tr><td>cateter Insyte 14 G</td><td>BD</td><td>381267</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T</td><td>BDHA361603E</td><td>VWR</td><td></td></tr><tr><td>TTC</td><td>T8877-10G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Mayer hematoxilina</td><td>MHS32-1L</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Ácido Fucsin CI 42685</td><td>F8129-50G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau Xylidin CI 16150</td><td>P2395-25G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Laranja G CI 16230</td><td>O3756-100G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Verde claro CI 42095</td><td>L5382-25G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>P9333-500G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Xylol</td><td>10315083</td><td>HoneyWell</td><td></td></tr><tr><td>Etanol absoluto</td><td>10303990</td><td>HoneyWell</td><td></td></tr><tr><td>2-metilbutano</td><td>M32631-1L</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio estereogical</td><td>SM2800</td><td>Nikon</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeído</td><td>99340</td><td>Reactolab</td><td></td></tr><tr><td>de incorporação</td><td>K113.1</td><td>Carl Roth</td><td></td></tr><tr><td>Bersoft Software</td><td></td> de medição de imagem <td>Bersoft.com</td><td>Software licenciado</td></tr></tbody></table>

quantificação histológico de miocárdio crônico infarto em ratos

Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats

O infarto do miocárdio é definido como a morte de cardiomiócitos devido à isquemia prolongada; uma resposta inflamatória e formação de cicatrizes (fibrose) seguem a lesão isquêmica. Após a fase aguda inicial, o remodelamento crônico do ventrículo esquerdo (VE) modifica a estrutura e a função do coração. A ligadura coronária permanente em pequenos animais tem sido amplamente utilizada como modelo de referência para um modelo crônico de infarto. O afinamento da parede infartada evolui progressivamente para fibrose transmural. A avaliação histológica do tamanho do infarto é comumente realizada; No entanto, falta uma padronização dos métodos de quantificação. De fato, aspectos metodológicos importantes, como o número de seções analisadas e os métodos de amostragem e quantificação, geralmente não são descritos e, portanto, impedem a comparação entre as investigações. Muitas vezes, a quantificação é realizada em um único corte obtido ao nível dos músculos papilares. Como novas estratégias destinadas a reduzir a expansão e remodelação do infarto estão sendo investigadas, há uma necessidade importante de padronização de protocolos precisos de amostragem cardíaca. Descrevemos um método preciso para quantificar o tamanho do infarto usando uma amostragem sistemática de coração de rato colhido e análises de imagem de cortes histológicos corados tricromáticos obtidos da base ao ápice. Também fornecemos evidências de que o cálculo do índice de expansão (IE) permitiu a avaliação do tamanho do infarto, levando em consideração as alterações do ventrículo esquerdo ao longo do remodelamento.

pós-LAD ligadura seis semanas, corações foram colhidas de ratos Lewis. secções de tecido de 2 mm foram obtidas a partir do vértice para a base. Um procedimento de coloração TTC foi realizada para visualizar a área de enfarte, que aparece em branco, eo miocárdio saudável, que aparece em vermelho (Figura 2). Dependendo do local de ligação da ADA, a dimensão do enfarte varia. Para grande MI, infartos transmurais foram observados a partir do vértice para a base (Figu...

A avaliação post-mortem do infarto do miocárdio (IM) em roedores é baseada na quantificação do infarto em cortes cardíacos corados. Descrevemos um método preciso para quantificar o tamanho do infarto usando amostragem sistemática de corações de ratos colhidos da base ao ápice e análises de imagem de cortes histológicos corados com tricrômio.

Quantificação histológico de miocárdio crônico infarto em ratos

Myocardial infarction is defined as cardiomyocyte death due to prolonged ischemia; an inflammatory response and scar formation (fibrosis) follow the ...

O objetivo geral deste procedimento histológico é realizar a quantificação morfométrica do índice de expansão do infarto e dos parâmetros estruturais cardíacos utilizando um modelo de rato com infarto do miocárdio, a fim de avaliar o tamanho do infarto e o remodelamento do ventrículo esquerdo. Este método pode ajudar a responder questões fundamentais na área cardíaca, como o efeito de terapias regenerativas após infarto do miocárdio ou novas estratégias destinadas a reduzir a expansão do infarto. A principal vantagem desta técnica é o uso de amostragem sistemática do coração de rato colhido para avaliar com precisão o tamanho do infarto e considerar as alterações do ventrículo esquerdo ao longo do remodelamento.Após seguir este método, é possível obter informações sobre o tamanho do infarto em modelos crônicos de infarto do miocárdio em ratos. Ele também pode ser aplicado a camundongos ou outros modelos isquêmicos, como infarto do miocárdio agudo ou isquemia com reperfusão. Para iniciar este procedimento, realize uma esternotomia em um animal com infarto do miocárdio sob anestesia.Faça uma incisão na pele e nos músculos ao longo do esterno com tesoura cirúrgica. Em seguida, corte as costelas do lado esquerdo e direito para remover o tórax. Depois disso, remova as aderências residuais após a ligadura da artéria descendente anterior (LAD).Corte a aorta e remova o coração, em seguida coloque o tecido em PBS com cloreto de potássio 1 M por menos de um minuto antes de lavá-lo com PBS. Para preservar o tecido, o PBS dentro dos ventrículos deve ser cuidadosamente removido. Posteriormente, transfira o coração infartado para uma matriz acrílica de coração de rato e posicione-o longitudinalmente.Em seguida, mantenha-o a menos 20 graus Celsius por uma hora. Para amostragem sistemática após uma hora, corte o coração diretamente na matriz usando uma lâmina de barbear. Certifique-se de que cada seção tenha dois milímetros de espessura.Em seguida, realize a coloração com TTC incubando as secções em TTC 1% por 15 minutos a 37 graus Celsius, depois incube-as em PFA 4% por 20 a 60 minutos à temperatura ambiente. Posteriormente, coloque as secções entre duas lâminas de vidro com espaçadores de dois milímetros e tire imagens com um microscópio estereológico acoplado a uma câmera com ampliação de 15x. Um procedimento de coloração com TTC foi realizado para visualizar a área de infarto, que aparece em branco, e o miocárdio saudável, que aparece em vermelho.Para um infarto do miocárdio extenso, observaram-se infartos transmurais do ápice até a base. Infartos menores apresentavam tecido infartado branco visível do ápice até a região média do coração. Para infartos pequenos e não transmurais, o tecido fibrotico foi observado em apenas uma ou duas secções do ápice.Para congelar as seções, coloque cada seção em um molde plástico com meio de montagem para criotomia e posicione o ápice voltado para baixo no molde. Congele os blocos com vapores de 2-Metilbutano sob resfriamento com nitrogênio líquido por 10 a 15 minutos. Após isso, armazene os tecidos a menos 80 graus Celsius.Para a parafinização, coloque cada seção em um cassete de inclusão com o ápice voltado para baixo e mantenha os cassetes em PFA 4% por 24 horas. Em seguida, coloque-os em um processador de tecidos durante a noite. Após a conclusão do processamento, faça blocos incluindo cada seção cardíaca em parafina.Neste procedimento, prepare cortes teciduais de 5 mícrons de espessura a partir dos blocos de parafina utilizando um micrótomo manual. Em seguida, cora um lâmina de cada seção cardíaca de cada rato com coloração tricrômica de Masson-Goldner. Para as seções em parafina, derreta os tecidos a 60 graus Celsius em uma estufa.Sob uma capela de exaustão, desparafinize-os em xilol duas vezes durante dez minutos cada. Em seguida, reidrate-os em etanol 100%, etanol 95%, etanol 70% e, depois, em água destilada durante três minutos cada. Para as seções desparafinizadas e para as seções criostáticas, fixe-as em solução de Bouin durante a noite.Na manhã seguinte, lave-os com água corrente da torneira por 10 a 15 minutos, depois enxágue novamente usando água destilada. A fixação com Bouin é a etapa mais importante para garantir uma coloração Goldner esplêndida. Incube-os em hematoxilina de Mayer por três minutos.Após três minutos, remova as lâminas e deixe-as em água destilada por cinco minutos. Em seguida, incube-as em fucsina ácida de ponceau por cinco minutos antes de lavar com ácido acético 1% por um minuto. A seguir, incube as seções em ácido fosfomolibdico laranja g por um minuto e depois lave-as em ácido acético 1% por um minuto.Incube na tintura verde-clara por dez minutos e, em seguida, enxágue em ácido acético 1% por um minuto. Por fim, desidrate as seções em etanol 70% por 30 segundos, etanol 95% por 30 segundos e etanol 100% por cinco minutos, sequencialmente. Aplique uma gota de meio de montagem resinoso sobre as seções de tecido, cubra-as com lamínulas e deixe-as secar.Nesta etapa, adquira uma imagem de cada lâmina utilizando um microscópio estereoscópico acoplado a uma câmera com ampliação de 15x. Fotografe uma régua nas mesmas condições. Foram cortadas secções finas de cinco micrômetros de cada fatia cardíaca e coradas com tricrômio de Masson-Goldner.Os tecidos saudáveis apareceram em vermelho e o tecido conjuntivo em verde. Em seguida, utilize o software de análise de imagem para medir a espessura da cicatriz no centro do infarto, a espessura do septo, a área da cavidade do ventrículo esquerdo, a área do infarto e a área do tecido do VE. Para tanto, defina a escala com a imagem da régua.Clique nas medições e selecione definir fator de conversão. Desenhe uma linha sobre a barra de calibração. Clique com o botão direito na imagem e clique em finalizar calibração.Observe o valor da barra e clique em OK. Use a ferramenta de segmento múltiplo para selecionar o VE ponto a ponto e, em seguida, clique com o botão direito para copiar e colar em qualquer lugar. Depois disso, meça a espessura da cicatriz e do septo utilizando a ferramenta de medição de segmento único. Em seguida, detecte automaticamente a cavidade do VE, a área de infarto e as áreas do VE utilizando a ferramenta de medição automática de área no modo RGB.Ative apenas bordas e contíguas no modo RGB. Por fim, clique dentro da área de interesse para detectá-la. Em seguida, calcule o tamanho do infarto como a razão entre a área do infarto e a área do VE.Em seguida, calcule o índice de expansão utilizando esta fórmula. Por fim, calcule uma média para cada coração utilizando a fórmula apresentada. O índice de expansão calculado a partir da coloração de Goldner é um bom indicador para avaliar o desenvolvimento do infarto.Conforme mostrado na figura, ela se correlaciona com o tamanho do infarto expresso como porcentagem do ventrículo esquerdo e com a fração de ejeção medida por ecocardiografia. Nos gráficos estão representadas a regressão linear e os intervalos de confiança de 95%. O índice de expansão do infarto foi calculado conforme descrito na fórmula apresentada aqui.A área total do VE foi medida como a soma da cavidade do VE e da área do tecido do VE. A porcentagem do infarto foi calculada conforme mostrado. A função foi avaliada seis semanas após a ligadura da ADA utilizando ecocardiografia de alta resolução.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar uma amostragem sistemática do coração e como avaliar o tamanho do infarto com base em uma análise de imagem de cortes corados.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Numerosas manipulações genéticas e / ou injeções intramiocárdica de genes, proteínas, células e / ou biomateriais são sobrepostos sobre a dimensão do tempo em estudos de lesão de isquemia / reperfusão aguda e crônica em camundongos remodelação. Este vídeo ilustra os procedimentos de microcirurgia para isquemia / reperfusão, ligadura da artéria coronária permanente, e estudos de injeção intramiocárdica.

Ligadura da artéria coronária e injeção intramiocárdica em um modelo murino de infarto

Este protocolo descreve o modelo suíno infarto do miocárdio (IM) usando um 90 min-peito fechado oclusão coronária balão da artéria descendente anterior esquerda (LAD), seguida de reperfusão. Além disso, o protocolo para vários parâmetros de resultados, tais como a função cardíaca, hemodinâmica, resistência microvascular e tamanho do infarto, também são apresentados.

Infarto do Miocárdio e Avaliação de Resultados Funcional em porcos

Um modelo altamente reprodutível para infarto do miocárdio em camundongos com manipulações minimamente invasivas é descrito. O modelo pode ser facilmente executado, resultando em alta reprodutibilidade e taxa de sobrevida. Assim, o modelo descrito reduzirá o número de animais necessários conforme solicitado pelo princípio 3R (Substituição, Refinamento e Redução).

Minimal procedimento cirúrgico invasivo de induzir Infarto do Miocárdio em Ratos

Este método descreve o uso da Microtomografia Computadorizada Quântica (MicroCT) para avaliar a morfologia, função, perfusão, metabolismo e viabilidade cardíaca com contraste iodado em camundongos com isquemia miocárdica induzida experimentalmente. A técnica pode ser aplicada para imagens longitudinais in vivo não destrutivas de alto rendimento de vários modelos animais de doenças cardíacas humanas.

In Vivo quantitativa Avaliação da Estrutura do miocárdio, função, perfusão e viabilidade Usando Cardiac Micro-Tomografia Computadorizada

avaliação fiável e exacta resultado é a chave para a tradução de terapias pré-clínicos para o tratamento clínico. O presente artigo descreve como avaliar três parâmetros de resultado primário clinicamente relevantes de desempenho cardíaco e danos em um modelo de infarto do miocárdio porco aguda.

Avaliação do resultado principal em um modelo suíno de Infarto Agudo do Miocárdio

Aqui vamos demonstrar um protocolo para padronizar os procedimentos de amostragem de um modelo estabelecido de suínos de infarto agudo do miocárdio, a fim de aumentar seu valor de translação no entendimento da fisiopatologia da lesão de isquemia/reperfusão miocárdica e para testar candidatos a novos fármacos.

Aprimoramento do modelo de suínos do miocárdio peito fechado pela padronização do tecido e os procedimentos de recolha de amostras de sangue

Nisto nós descrevemos um procedimento cirúrgico que mostra como conseguir a ligadura permanente da artéria coronária descendente esquerdo-anterior nos ratos. Este modelo é de grande relevância para investigar a fisiopatologia do infarto do miocárdio e os processos biológicos concomitantes.

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Sob anestesia adequada, o coração de camundongo foi exteriorizado através do espaço intercostal, e o infarto do miocárdio foi induzido com sucesso pela ligadura da artéria descendente anterior (DA) usando materiais prontamente disponíveis na maioria dos laboratórios.

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