Usando a técnica de manga em um modelo do rato da transplantação da aorta - um vídeo instrutivo

Apresentamos um modelo de aórtica transplante ortotópico utilizando a técnica de manga em ratos. É um método de anastomose muito rápida, que pode ser empregado em estudos de doença vascular.

Nesse procedimento, a aorta do doador é colocada em posição ortopneica e as mordidas superficiais são feitas no vaso de alimentação. Anestesiar os camundongos com uma mistura de 1,5% de isoflurano em volume e 100% de oxigênio através de uma máscara facial. Coloque o mouse em uma plataforma em decúbito dorsal e prenda todas as pernas na mesa de operação.

Coloque pomada oftálmica nos olhos para evitar o ressecamento durante o procedimento. Verifique os reflexos, beliscando as patas traseiras para ter certeza de que o mouse está suficientemente anestesiado. Remova todos os pelos do abdômen.

Aplique um creme depilatório ou use um barbeador. Execute a operação em condições estéreis. Desinfete o abdômen.

Para remover a aorta doadora, faça uma incisão abdominal na linha média e retraia o intestino manualmente para a direita. Reflita suavemente os intestinos para o lado usando luvas sem pó. Coloque as entranhas em um pedaço de gaze umedecida com soro fisiológico para mantê-las úmidas.

Disseque a aorta abdominal com muito cuidado do tecido circundante usando dissecção romba com uma pinça. Dissecar o segmento da aorta entre a artéria renal e a bifurcação da veia cava com a pinça. Prenda todos os pequenos ramos deste segmento usando sutura simples de monofilamento 11-0.

Antes de remover a aorta, injete 0,5 mililitro de solução salina contendo 50 unidades de heparina na veia cava inferior. Deixe o animal doador sangrar antes que o segmento da aorta seja removido. Enxágue o enxerto completamente com solução salina e coloque-o imediatamente em um recipiente com solução salina gelada.

Para preparar o receptor, anestesiar o animal com uma máscara facial, remover os pelos e desinfetar como acima, e fazer uma incisão na linha média do xifóide à pelve com um bisturi. Retraia as paredes abdominais com afastadores. Enrole os intestinos em gaze umedecida com solução salina e desloque-os suavemente para a direita do animal.

Dissecar a aorta infrarrenal livre entre as artérias renais proximalmente e a bifurcação distalmente com as pinças. Prenda todos os pequenos ramos deste segmento usando sutura simples de monofilamento 11-0. Clampeie as porções proximal e distal da aorta por meio de uma sutura de seda única 6-0.

Divida a aorta ao meio entre as pinças e irrigue as extremidades cortadas com solução salina heparinizada para abrir o lúmen. Coloque o enxerto na posição ortopneica. Realizar a anastomose pela técnica sleeve com suturas com monofilamento 11-0.

Com este método, a extremidade do recipiente de alimentação é colocada no recipiente receptor. Coloque a extremidade da aorta do receptor infrarrenal dentro da extremidade proximal da aorta do doador. Realize a anastomose distal da mesma maneira.

Coloque a extremidade distal da aorta doadora dentro da extremidade distal da aorta receptora. Tome cuidado para evitar qualquer torção da aorta, garantindo o alinhamento perfeito da aorta doadora e receptora. O momento da liberação da pinça é uma etapa muito importante do procedimento e deve ser realizada com muito cuidado.

Depois de verificar se a anastomose está em ordem, solte os grampos. Primeiro solte o clamp distal suavemente, seguido pelo clamp proximal. Desta forma, há baixa pressão para manter as paredes juntas antes que o lado de alta pressão seja liberado.

O enxerto é perfundido imediatamente e um pulso é visível. Remova suavemente os restos da seda. Coloque de volta o conteúdo abdominal na cavidade abdominal e feche a ferida usando uma sutura de ácido poliglicólico 3-0

Administre buprenorfina 0,05 miligrama por quilograma ao camundongo antes de interromper a anestesia. Apresentamos os exemplos das fotos de necropsia do enxerto seis semanas após o transplante e sua visão tridimensional e modo B ultrassonográfica. As fotos mostram a perviedade do enxerto.

Não há alterações nas dimensões do lúmen mostradas pelo enxerto. Além disso, não encontramos estenose ou formações aneurismáticas. Não observamos lesões significativas nas aortas transplantadas pela coloração histológica e imuno-histoquímica.

Os núcleos foram contra-corados por DAPI. Em conclusão, este método de anastomose muito rápida pode ser usado para estudar doenças vasculares em camundongos geneticamente modificados.