Usando a técnica de manga em um modelo do rato da transplantação da aorta - um vídeo instrutivo
22 de outubro de 2017
Apresentamos um modelo de aórtica transplante ortotópico utilizando a técnica de manga em ratos. É um método de anastomose muito rápida, que pode ser empregado em estudos de doença vascular.
Nesse procedimento, a aorta do doador é colocada em posição ortopneica e as mordidas superficiais são feitas no vaso de alimentação. Anestesiar os camundongos com uma mistura de 1,5% de isoflurano em volume e 100% de oxigênio através de uma máscara facial. Coloque o mouse em uma plataforma em decúbito dorsal e prenda todas as pernas na mesa de operação.
Coloque pomada oftálmica nos olhos para evitar o ressecamento durante o procedimento. Verifique os reflexos, beliscando as patas traseiras para ter certeza de que o mouse está suficientemente anestesiado. Remova todos os pelos do abdômen.
Aplique um creme depilatório ou use um barbeador. Execute a operação em condições estéreis. Desinfete o abdômen.
Para remover a aorta doadora, faça uma incisão abdominal na linha média e retraia o intestino manualmente para a direita. Reflita suavemente os intestinos para o lado usando luvas sem pó. Coloque as entranhas em um pedaço de gaze umedecida com soro fisiológico para mantê-las úmidas.
Disseque a aorta abdominal com muito cuidado do tecido circundante usando dissecção romba com uma pinça. Dissecar o segmento da aorta entre a artéria renal e a bifurcação da veia cava com a pinça. Prenda todos os pequenos ramos deste segmento usando sutura simples de monofilamento 11-0.
Antes de remover a aorta, injete 0,5 mililitro de solução salina contendo 50 unidades de heparina na veia cava inferior. Deixe o animal doador sangrar antes que o segmento da aorta seja removido. Enxágue o enxerto completamente com solução salina e coloque-o imediatamente em um recipiente com solução salina gelada.
Para preparar o receptor, anestesiar o animal com uma máscara facial, remover os pelos e desinfetar como acima, e fazer uma incisão na linha média do xifóide à pelve com um bisturi. Retraia as paredes abdominais com afastadores. Enrole os intestinos em gaze umedecida com solução salina e desloque-os suavemente para a direita do animal.
Dissecar a aorta infrarrenal livre entre as artérias renais proximalmente e a bifurcação distalmente com as pinças. Prenda todos os pequenos ramos deste segmento usando sutura simples de monofilamento 11-0. Clampeie as porções proximal e distal da aorta por meio de uma sutura de seda única 6-0.
Divida a aorta ao meio entre as pinças e irrigue as extremidades cortadas com solução salina heparinizada para abrir o lúmen. Coloque o enxerto na posição ortopneica. Realizar a anastomose pela técnica sleeve com suturas com monofilamento 11-0.
Com este método, a extremidade do recipiente de alimentação é colocada no recipiente receptor. Coloque a extremidade da aorta do receptor infrarrenal dentro da extremidade proximal da aorta do doador. Realize a anastomose distal da mesma maneira.
Coloque a extremidade distal da aorta doadora dentro da extremidade distal da aorta receptora. Tome cuidado para evitar qualquer torção da aorta, garantindo o alinhamento perfeito da aorta doadora e receptora. O momento da liberação da pinça é uma etapa muito importante do procedimento e deve ser realizada com muito cuidado.
Depois de verificar se a anastomose está em ordem, solte os grampos. Primeiro solte o clamp distal suavemente, seguido pelo clamp proximal. Desta forma, há baixa pressão para manter as paredes juntas antes que o lado de alta pressão seja liberado.
O enxerto é perfundido imediatamente e um pulso é visível. Remova suavemente os restos da seda. Coloque de volta o conteúdo abdominal na cavidade abdominal e feche a ferida usando uma sutura de ácido poliglicólico 3-0
.Administre buprenorfina 0,05 miligrama por quilograma ao camundongo antes de interromper a anestesia. Apresentamos os exemplos das fotos de necropsia do enxerto seis semanas após o transplante e sua visão tridimensional e modo B ultrassonográfica. As fotos mostram a perviedade do enxerto.
Não há alterações nas dimensões do lúmen mostradas pelo enxerto. Além disso, não encontramos estenose ou formações aneurismáticas. Não observamos lesões significativas nas aortas transplantadas pela coloração histológica e imuno-histoquímica.
Os núcleos foram contra-corados por DAPI. Em conclusão, este método de anastomose muito rápida pode ser usado para estudar doenças vasculares em camundongos geneticamente modificados.
Visão Geral
Este artigo apresenta um modelo de transplante aórtico ortotópico utilizando a técnica de manguito em camundongos, que permite anastomose rápida. Este método pode ser utilizado em estudos de doenças vasculares.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Cirurgia vascular
- Técnicas de transplante
- Modelos de camundongo para doenças
Antecedentes
- O transplante aórtico ortotópico é essencial para o estudo de doenças vasculares.
- A técnica de manguito oferece um método rápido para anastomose.
- Modelos murinos são comumente utilizados na pesquisa biomédica.
- Compreender a perviedade do enxerto vascular é crucial para melhorar os resultados cirúrgicos.
Objetivo do Estudo
- Desenvolver uma técnica rápida de anastomose para transplante aórtico.
- Avaliar a viabilidade do enxerto após o transplante.
- Fornecer um modelo para o estudo de doenças vasculares em camundongos geneticamente modificados.
Métodos Utilizados
- A aorta doadora é colhida e preparada em condições estéreis.
- Os camundongos receptores são anestesiados e preparados para a cirurgia.
- A anastomose é realizada utilizando a técnica de manguito com suturas finas.
- A avaliação pós-operatória inclui ultrassonografia e análise histológica.
Resultados Principais
- O enxerto mostrou perviedade seis semanas após o transplante.
- Não foram observadas alterações significativas nas dimensões da luz.
- A análise histológica revelou ausência de estenose ou formações aneurismáticas.
- A coloração imuno-histoquímica não mostrou lesões significativas nas aortas transplantadas.
Conclusões
- O método de anastomose rápida é eficaz para transplante aórtico.
- Este modelo pode facilitar pesquisas sobre doenças vasculares.
- Estudos futuros podem utilizar esta técnica para investigações adicionais.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
A técnica do manguito para transplante aórtico ortotópico em camundongos permite um enxerto vascular rápido e reprodutível com baixas taxas de falha, apoiando estudos de alto rendimento da biologia vascular. Este modelo facilita a desmistificação mecanicista e a validação de alvos na pesquisa pré-clínica de doenças vasculares, fornecendo uma plataforma robusta para avaliar intervenções genéticas e farmacológicas. Sua simplicidade operacional e confiabilidade tornam-no valioso para triagem de portfólio e continuidade translacional em pesquisa e desenvolvimento cardiovascular.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Permite a investigação dos mecanismos de doenças vasculares em modelos de camundongos geneticamente modificados.
- Apoia a validação funcional de alvos candidatos que afetam o remodelamento vascular e a perviedade do enxerto.
- Facilita a confiança preditiva em estudos pré-clínicos de eficácia de terapêuticas vasculares.
Desenvolvimento de Triagem e Ensaios
- Oferece um modelo padronizado e reprodutível para avaliação dos resultados de enxertos vasculares.
- Fornece resultados quantitativos, como patecia do enxerto, dimensões do lúmen e integridade histológica.
- Permite avaliação confiável dos efeitos de intervenções compostas ou genéticas na reparação vascular.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Alinha-se a desfechos relevantes para doenças, incluindo estenose, formação de aneurisma e desenvolvimento de lesões vasculares.
- Permite a continuidade desde a descoberta até a validação pré-clínica de alvos e intervenções vasculares.
- Reduz o risco biológico ao modelar processos clinicamente relevantes de lesão e reparo vascular.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este modelo de transplante aórtico em camundongo se integra ao continuum de descoberta a pré-clínico para a pesquisa de doenças vasculares, conectando estudos mecanicistas e validação translacional.
- Biologia da Descoberta: Permite testar hipóteses sobre vias de lesão, reparo e remodelamento vasculares.
- Triagem: Oferece prontidão para ensaios com pontos finais cirúrgicos e analíticos reprodutíveis.
- Análises: Permite medições quantitativas da perviedade do enxerto, tamanho da luz e histopatologia.
- Pesquisa Translacional: Modela desfechos vasculares relevantes para doenças em avaliação pré-clínica.
- Reutilização Empresarial: Oferece uma plataforma padronizada e reutilizável para diversos programas de pesquisa vascular.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva e reduz a ambiguidade mecanicista na validação de alvos vasculares.
- Valor Operacional: Fornece procedimentos padronizados, escalonáveis e reprodutíveis de transplante.
- Valor Estratégico: Melhora a tomada de decisões de avanço ou interrupção e a eficiência do capital em portfólios de P&D vascular.
- Impacto no Portfólio: Permite a priorização ajustada ao risco de alvos vasculares e candidatos terapêuticos.
Considerações sobre a Implementação
- Exige experiência cirúrgica em anastomose vascular microcirúrgica em camundongos.
- Requer acesso a anestesia, salas cirúrgicas estéreis e infraestrutura de imagem para avaliação pós-transplante.
- Exige padronização entre equipes dos protocolos cirúrgicos e analíticos para reprodutibilidade.
- Pode ser necessária adaptação para diferentes linhagens de camundongos ou fundos genéticos.
- As limitações potenciais incluem variabilidade técnica e a necessidade de treinamento especializado.
