Um Estudo Comparativo de drogas métodos de entrega direcionados à orelha de rato Inner: Bullostomy Versus Injeção transtimpânica

O objetivo geral deste trabalho é descrever e comparar duas abordagens de microcirurgia para administração local de medicamentos na orelha interna em termos de impacto nos parâmetros auditivos e marcadores de citoarquitetura coclear. Esses procedimentos podem nos ajudar a responder a perguntas-chave no campo auditivo, especialmente no desenvolvimento de estudos pró-químicos em animais. A principal vantagem dessas técnicas é que elas são minimamente invasivas.

E isso permite que a substância chegue didaticamente ao ouvido interno. A aplicação dessas técnicas se estende à terapia da perda auditiva, pois seus procedimentos microcirúrgicos são adequados para parto seco na orelha média. A demonstração pacífica desse método é fundamental, pois a bulostomia e a injeção transtimpânica são difíceis de aprender e requerem conhecimento anatômico e treinamento cirúrgico.

Para começar, coloque um tampão na orelha contralateral de um camundongo anestesiado para obter respostas predominantemente mono-aurais. Em seguida, coloque o mouse em decúbito ventral em uma almofada de aquecimento dentro de uma câmara de atenuação de som. Coloque o eletrodo de agulha subdérmica de aço inoxidável positivo no couro cabeludo entre as orelhas sobre o vértice do crânio.

Coloque o eletrodo de referência na região parótida abaixo do pavilhão auricular. Em seguida, coloque o eletrodo de aterramento na região das costas, cauda ou membros posteriores. Verifique a impedância elétrica nos eletrodos positivo e negativo.

Certifique-se de que a impedância seja inferior a três kiloohms. Coloque o alto-falante pré-preenchido a uma distância fixa voltado para a orelha selecionada, com o centro do alto-falante alinhado com o canal auditivo externo. Certifique-se de que não haja obstáculos entre o alto-falante e o ouvido e que o pavilhão auricular esteja completamente aberto.

Conecte a saída da estação de trabalho digital para analógica ao alto-falante selecionado. Alto-falantes de campo livre são usados aqui. Conecte um amplificador com baixo ruído e uma boa relação sinal-ruído à entrada analógico-digital.

Em seguida, inicie o processo de entrega de estímulos acústicos no canal auditivo externo usando estímulos predefinidos ou novos sinais projetados com o software apropriado. Apresente os estímulos começando com alta intensidade e reduzindo a intensidade em etapas de nível de pressão sonora de cinco a 10 decibéis. Registre a resposta elétrica nos primeiros 10 milissegundos após a estimulação, pois as respostas evocadas do PEATE aparecem em seis a oito milissegundos.

Use o software para determinar o limite ABR conforme descrito na parte escrita do protocolo. Depois de administrar a anestesia de acordo com os protocolos aprovados, verifique se um plano cirúrgico de anestesia foi alcançado pela ausência de reação a uma pinça no dedo do pé e pela apresentação de respiração regular. Use uma tesoura para remover o pelo na superfície ventral do pescoço e proteja os olhos da ceratite da córnea com um gel à base de hidroxi-propilmetilcelulose.

Coloque o camundongo na área cirúrgica estéril em decúbito dorsal. Limpe a pele com uma solução anti-séptica à base de iodopovidona e cubra com uma cortina estéril. Depois de usar um bisturi para fazer uma incisão longitudinal de dois centímetros da mandíbula até a clavícula, olhe através do microscópio cirúrgico e identifique as glândulas submandibulares.

Separe as duas glândulas submandibulares com uma pinça, retraia-as e localize a origem do músculo digástrico no nervo facial. Em seguida, faça uma incisão na origem do músculo digástrico com uma tesoura e retraia-o ventralmente, expondo o aspecto medial inferior subjacente da bolha timpânica. Em seguida, use uma agulha de calibre 27 para perfurar a bula e criar uma abertura.

Limpe o sangue da área perfurada com uma esponja de gelatina absorvível. Localize a artéria estapedial na membrana da janela redonda aninhada a ela. Usando um cateter de calibre 34 e uma microsseringa de vidro, injete lentamente de três a cinco microlitros de solução veicular através da bulostomia e diretamente no nicho da janela redonda para preenchê-la.

Sele a bulostomia com uma a duas gotas de adesivo tecidual. Retorne as glândulas submandibulares à sua posição inicial e feche as incisões na pele com sutura cirúrgica de seda 5-0. Aplique anti-séptico à base de iodopovidona ou clorexidina ao redor da incisão para evitar infecção da ferida.

Mantenha o mouse em uma almofada de aquecimento até que ele recupere a consciência suficiente para manter a decúbito esternal. Devolva o animal à gaiola de casa somente depois que ele estiver totalmente recuperado. Coloque o camundongo em decúbito lateral e prepare-o em uma área cirúrgica séptica abaixo do conduto auditivo externo, conforme mostrado anteriormente.

Após fazer uma incisão longitudinal de 0,5 centímetro na parte vertical do meato acústico externo, localize a membrana timpânica com o auxílio do microscópio cirúrgico. Identifique a pars flácida superior na pars tensa inferior, que é dividida em seções anterior e posterior pela alça do martelo. Em seguida, faça uma pequena miringostomia na porção caudal da pars flaccida e uma incisão adicional na pars tensa da membrana timpânica para permitir a evacuação do ar durante a injeção.

Use uma microsseringa de vidro conectada a um cateter de calibre 34 para injetar suavemente 10 a 15 microlitros de veículo através da pars flácida, perto do nicho da janela redonda, até que o ouvido médio esteja claramente cheio. Feche as incisões na pele com uma sutura cirúrgica de seda 5-0 e limpe conforme descrito anteriormente. Este gráfico mostra os limiares ABR em camundongos C57BL/6J machos de 8 semanas de idade em resposta a estímulos clique antes da cirurgia e sete, 14 e 28 dias após a microcirurgia.

Os dados de bulostomia são mostrados em laranja, os dados de injeção transtimpânica são mostrados em azul e os dados de animais não operados são mostrados em cinza. Este gráfico mostra os limiares do PEATE em resposta a estímulos tone-burst na faixa de oito a 40 kilohertz no mesmo período de tempo após a microcirurgia. Novamente, não foram observadas diferenças significativas entre as abordagens de bulostomia e transtimpânica.

Estudos morfológicos demonstram que a escala média não apresenta alterações após a entrega do veículo por bulostomia ou injeção transtimpânica, indicando que nenhum dos procedimentos isoladamente resulta em dano. Ao tentar o procedimento de bulostomia, é importante lembrar de revisar a estrutura crítica e anatômica ao redor da orelha média e interna dos roedores. Após esses procedimentos, outras técnicas poderiam ser realizadas.

Por exemplo, amostragem de Berlim para estudos farmacocinéticos Após seu desenvolvimento, essas técnicas abrem caminho para pesquisadores no campo da neurociência auditiva explorarem potenciais terapias locais em modelos animais, principalmente em roedores. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como administrar medicamentos no ouvido médio e como avaliar a audição em roedores.