De alta resolução Respirometria para avaliar a função mitocondrial em permeabilizadas e células intactas

O objetivo geral deste procedimento é usar respirometria de alta resolução para determinar o consumo de oxigênio mitocondrial. Este método pode ajudar a responder a questões-chave nas síndromes e doenças associadas à disfunção mitocondrial, como; sepse, diversas doenças neurológicas e distúrbios relacionados à idade. As principais vantagens desta técnica é que ela possui maior sensibilidade e capacidade de realizar experimentos de titulação de substrato em inibidores acoplados com um pequeno número de amostras biológicas, como células intactas ou permeabilizadas.

Demonstrando o procedimento estará Sandra Nansoz, uma técnica do meu laboratório. Antes de iniciar o procedimento, calibre os sensores polarográficos de oxigênio, ressuspenda as células no tampão respiratório para uma concentração de uma vez dez elevado à sexta células por mililitro e substitua o meio respiratório em uma câmara do oxígrafo por 2,1 mililitros da suspensão celular. Feche a câmara com a rolha e ajuste a barra de agitação magnética na câmara para 700 rotações por minuto.