Realização de Cromatografia de Camada Fina 1D

1. Placas TLC

1. Os adsorventes comuns para TLC são sílica gel, alumina e celulose. As placas TLC estão disponíveis comercialmente com uma variedade de propriedades. Escolha uma placa TLC e corte-a em um tamanho apropriado (aproximadamente 5 cm x 5 cm é suficiente para a maioria das aplicações). Para placas TLC com suporte de vidro, corte o vidro usando uma régua e um cortador de vidro e, em seguida, quebre cuidadosamente ao longo da linha.

2. Manchas

1. Dissolva a amostra em um solvente adequado para fazer uma solução de aproximadamente 1%. Se possível, o solvente deve ser apolar. Podem ser utilizadas fracções de cromatografia em coluna e outras soluções diluídas sem diluição se o soluto estiver presente numa concentração compreendida entre 0,2% e 2,0%.
2. Marque a linha de base com um lápis a cerca de 1,0 cm do fundo da placa. Posicione as manchas a pelo menos 1.0 cm da borda da placa e etiquete-as adequadamente.
3. As manchas podem ser aplicadas usando um capilar de vidro. Para localizar a placa de TLC, mergulhe o capilar na solução para aspirar uma pequena quantidade de líquido. Toque suavemente a ponta no local desejado na placa TLC e remova-a imediatamente.
4. Como alternativa, aplique manchas com uma seringa de microlitro, fornecendo aproximadamente 1 μL de solução para cada aplicação.
5. As manchas podem ser aplicadas sucessivamente em cada local, tomando cuidado para não perturbar a superfície do adsorvente com o observador. Deixe o solvente secar entre as aplicações.

3. Escolhendo um solvente revelador

1. É preferível usar o solvente menos polar possível para uma boa separação. Os solventes comuns para TLC incluem hexano, acetato de etila, diclorometano e metanol (Tabela 1).
2. Uma maneira conveniente de encontrar uma fase móvel apropriada é localizar a placa TLC com uma amostra. Aplique solvente suficiente diretamente no local para formar um círculo de solvente de 1 a 2 cm de diâmetro. Marque a circunferência do círculo. Após a visualização, um solvente apropriado mostrará anéis bem separados, com o anel mais externo a cerca de 50% da distância do centro à frente do solvente.
3. Pode ser necessário ajustar a polaridade da fase móvel escolhendo dois solventes miscíveis e testando-os em proporções variadas. Exemplos de misturas comuns são hexanos com acetato de etila e diclorometano com metanol.

4. Desenvolvimento

1. Coloque a placa de TLC manchada em uma câmara de revelação contendo o solvente de revelação apropriado. A linha de solvente deve estar abaixo da linha de base marcada na placa TLC.
2. A câmara de revelação pode ser um frasco com tampa ou um copo coberto com papel alumínio ou filme plástico. Use o menor recipiente disponível que acomode a placa TLC.
3. Não permita que o solvente atinja a borda superior da placa. Quando a frente do solvente (o limite onde termina a parte úmida do adsorvente) estiver a 5–10 mm do topo da placa, remova a placa TLC da câmara de revelação e marque a frente do solvente com um lápis antes que o solvente seque.

5. Visualização

1. Manchas coloridas podem ser visualizadas imediatamente e marcadas com um lápis. Muitas vezes, as manchas não são visíveis e, portanto, devem ser visualizadas por algum outro método.
2. Freqüentemente, o adsorvente TLC contém um indicador fluorescente. Os pontos podem ser visualizados usando uma lâmpada ultravioleta (UV) portátil. Os compostos que extinguem a fluorescência aparecerão como manchas escuras quando a placa for irradiada com luz UV de ondas curtas (254 nm). Os compostos fluorescentes produzirão pontos brilhantes quando irradiados com luz UV de comprimento de onda apropriado. Marque o centro de cada ponto com um lápis.
3. As manchas também podem ser visualizadas aplicando um reagente de visualização ou coloração na placa de TLC. O reagente de visualização pode ser aplicado mergulhando a placa no reagente ou limpando a placa com uma bola de algodão saturada com um reagente não corrosivo.
4. Uma solução a 20% de ácido fosfomolíbdico em etanol é útil para a visualização da maioria dos compostos orgânicos. As manchas aparecem ao aquecer a placa com uma pistola de ar quente ou em um forno.
5. Outros reagentes podem ser usados para visualização de classes específicas de compostos. Por exemplo, o reagente de ninidrina é usado para visualização de aminoácidos e 2,4-dinitrofenilhidrazina para aldeídos e cetonas.

6. Análise

1. O fator de retardo (R_f) é a razão entre a distância que um composto percorre em uma placa TLC e a distância que o solvente percorre. Isso pode ser determinado medindo a distância da linha de base ao centro do ponto e dividindo o valor pela distância da linha de base à frente do solvente.
   
2. O R_f de um composto é característico de suas propriedades físicas e dependente de fatores como temperatura, tamanho da amostra e espessura e atividade do adsorvente, temperatura e tamanho da amostra.
3. Para confirmar que uma incógnita é idêntica a um composto conhecido, um padrão deve ser identificado na mesma placa de TLC. Substâncias idênticas terão a mesma característica R_f.