Name: ADSC folhas transplante para prevenir a estenose após estendido esofágico endoscópica submucosa Dissection (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Aprenda o transplante de folhas de ADSC para prevenir estenose esofágica após dissecção submucosa endoscópica em modelo suíno. Esta técnica promissora de terapia celular demonstra eficácia na redução da fibrose e melhora da cicatrização tecidual.

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Este estudo foi apoiado e financiado pela Fundação Avenir (Fondation de l'Avenir, 255 rue de Vaugirard, 75719 Paris cedex 15, Paris, França). Este estudo nunca teria sido realizado sem a preciosa ajuda da equipe veterinária do Laboratório de Pesquisa Biocirúrgica da Fundação Alain Carpentier.

Todos os animais foram tratados de acordo com a Comissão de Ética em Pesquisa Animal (orientações do Ministério da Agricultura francês). O protocolo recebeu a aprovação do comitê de ética local autorizado para experimentações com animais na Descartes Universidade Paris (número registrado MESR 2.035,02; Faculdade de Medicina de Paris Descartes, Paris, França). 1. ADSC Cultura e Etiquetagem <ol><li> Obter ADSCs confirmados de uma instituição privada. Culturas ADSCs alogénicas a 37 ° C e 5% de CO 2 com meio essencial mínimo alfa incluindo soro bovino fetal a 10% e 1% de antibióticos (penicilina e estreptomicina). </li><li> Obter cerca de 24 x 10 6 ADSCs por animal usando procedimentos de expansão celular padrão (37 ° C e 5% CO 2). Colher as ADSCs usando uma solução de tripsina-padrão (10 mL para um prato T150). Realizar contagem de células com um hemocitómetro. </li><li> Execute célula rotular o dia antes do transplante usando o pr coloração PKH67ocedure descrito abaixo. NOTA: O objectivo do processo de coloração é a de permitir o rastreamento de células após o transplante. <ol><li> A fim de marcar 2 x 10 6 ADSCs, preparar a solução A (2 X 10 6 células com 100 uL de diluente de C) e solução B (4 uL de PKH67 com 1 ml de solvente C). </li><li> Incubar as soluções A e B durante 2 min. Em seguida, adicionar 100 uL de soro fetal bovino durante 1 min. </li><li> Lavar a solução com 300 uL de meio RPMI citrado (298,5 mL de RPMI e 1,5 mL de citrato) e centrifugar a 1500 xg durante 5 min. Repita esta operação 2 vezes. Manter as células marcadas e protegê-los da luz até que a construção folha. </li></ol></li></ol> 2. Faça duplo ADSC folhas Construct <ol><li> No dia antes do transplante, preparar um prato de cultura de células responsivas temperatura de 12 poços com 4 mL por poço de meio de cultura de células, descritos acima, antes de PKH-rotulagem. Semear o prato com 1,5 x 10 6 PKH-Labeled células por poço e incubar durante 12 h (37 ° C e 5% de CO 2). </li><li> No dia do transplante, separar a camada de células confluentes por incubação do prato à temperatura ambiente durante 30 min. </li><li> Aspirar cuidadosamente uma folha ADSC com uma pipeta e mergulhá-la em um papel hidrofóbica (1,5 cm de diâmetro). Use este papel como uma membrana de suporte. </li><li> Compreender uma outra folha ADSC e depositá-lo suavemente no topo do outro para obter uma construção de camada dupla. </li><li> Repita estes procedimentos para obter o maior número de construções ADSC folhas, conforme necessário (4 por animal). </li></ol> 3. esofágico endoscópica submucosa Dissection (ESD) <ol><li> No dia do transplante, pré-medicar os animais com 10 mg / kg de cetamina por via intramuscular e induzi-los com 8 mg / kg de propofol. Em seguida, execute a entubação endotraqueal e manter a anestesia com isoflurano inalação 2,5%. </li><li> Uma vez que o animal está sob anestesia geral, realizar a ESD com uma gastroscope, um videoscope, e uma unidade de eletrocirurgia. <ol><li> Use uma faca de endoscópica e coagulação macia para obter marcas dorsais hemi-circunferencial que variam de 40 cm a 45 cm da arcada dentária. </li><li> Injectar uma solução de glicerol que contém corante indigo carmim na camada submucosa para a separação da camada de mucosa da túnica muscular. </li><li> Use uma faca de endoscópica com o modo endocut I obter incisões circunferenciais. </li><li> Use uma faca de endoscópica com o modo de coagulação forçado a realizar a dissecção submucosa, movendo-se a partir da incisão proximal da incisão distal. </li></ol></li><li> No final do procedimento de ESD, a observar, cicatriz esofágica 5 cm de comprimento de hemi-circunferencial expor a camada muscular. </li></ol> 4. endoscópica Transplantation <ol><li> Imediatamente após a ESD, por via endoscópica transplantar animais com 4 construções duplas ADSC folhas. <ol><li> Segure uma construção ADSC folhas com pinça endoscópica eprotegê-lo durante o transporte para o local da ferida por meio de um grande, tampão endoscópica transparente. </li><li> Aplicar toda a superfície da construção ADSC folhas ao leito da ferida. </li><li> Suavemente aplicar o construto ADSC folhas durante 10 minutos para se obter um enxerto completa e estável. Para aplicação, utilizar pinça endoscópica ou um tampão endoscópica e aplicar toda a superfície da ADSC construir sobre a camada da submucosa do esôfago. </li></ol></li><li> Repetir este procedimento quatro vezes para cada animal, a fim de obter quatro constructos-camada de células transplantadas e aderentes duplos. NOTA: O objectivo é cobrir approximatively metade da área ferida. </li></ol> 5. pós-operatória Avaliação e Acompanhamento <ol><li> Para cada animal, garantir pós-ESD analgesia com a injecção intramuscular de 0,2 mg / kg de morfina três vezes por dia para o primeiro dia e com 28 dias de tratamento anti-ácido de esomeprazol (40 mg / dia). Realize profilaxia antibiótica com amoxicillem (1 g / dia), durante 7 dias. Autorizar líquidos no dia 1 e sólidos no dia seguinte. </li><li> Seguir-se com os animais durante 28 dias. Obter avaliações clínicas diárias usando Mellow Pinkas pontuações disfagia 16 e medições de variação de peso. </li><li> avaliação de estenose Multimodal: sob anestesia geral, em dias programados 3, 14 e 28, realizar uma avaliação multimodal de ocorrência de estenose. <ol><li> Realizar uma avaliação endoscópica usando descrição cicatriz, medição de estenose, e detecção de membrana suporte de papel. Medir a estenose através do endoscópio para atravessar a estenose (o diâmetro do endoscópio é de 8 mm). Observe a cicatriz, prestando atenção ao aspecto inflamatório (eritema da mucosa, edema da mucosa, e de mucosa hemorragia espontânea) e ausência ou presença da membrana suporte de papel dentro da cicatriz. </li><li> Aplicar sonda verde pCLE através do canal do operador gastroscópio diretamente para a cama cicatriz. Procurar por uma espontâneae organizado sinal verde compatível com construção enxerto ADSC folhas PKH67 marcado. </li><li> Execute 2 incidências ortogonais de esofagografia barita com um aro radiológica (frente e incidências do lado esquerdo). Manter a incidência mais apertado para avaliação estenose (grau de estenose (%) = [1- (comprimento do eixo menor sob estenose / comprimento do eixo normal sob estenose) x 100)]) 17, 18. </li></ol></li><li> O sacrifício de animais. <ol><li> No 28 ° dia, no final do período de seguimento, realizar o sacrifício dos animais. Enquanto o animal está ainda sob anestesia geral, injectar 100 mg / kg de fenobarbital intravenosa. Certifique-se de morte do animal por exame clínico para a ausência de uma batida do coração e de circulação de respirar. </li><li> Após uma exposição esternotomia e órgão, remover o esôfago de cada animal sacrificado (com 10% de fixação de formalina tamponada, inclusão em parafina e secções 4 mm de espessura). Manchar os slidescom Hematoxilina e Saffron 15. Digitalizar os slides para análise computadorizada e comparar os grupos de animais 15. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Neste modelo suíno, o transplante ADSC folhas foi tecnicamente bem sucedida, ea avaliação in vivo pCLE permitido para monitoramento enxerto de células. As avaliações clínicas, endoscópicos, radiológicos e histológicos demonstraram a eficácia da folha ADSC endoscópica na prevenção de estenose esofágica após ESD estendida. O transplante endoscópica de uma solução ADSC glicerol contendo uma folha de carmim indigo é uma abordagem inovadora em medicina regenerativa. Ohki et ai. ...

A gestão de tumores esofágicos superficial mudou com o desenvolvimento de novas técnicas endoscópicas. Hoje em dia, a ressecção endoscópica é o tratamento de primeira linha. Na verdade, ele é associado com menores taxas de morbidade e mortalidade do que uma cirurgia com a igualdade de resultados oncológicos 1, 2, 3. ressecção endoscópica da mucosa (EMR) e ressecção endoscópica da submucosa (ESD) são as técnicas mais amplamente utilizados. No caso de um tumor superficial prolongado, ESD é preferido. Comparado ao EMR, ESD permite en ressecção bloco, independentemente do tamanho da lesão e moldar 4, 5, 6. A principal complicação tardia de ESD é a formação de estenose de esôfago, o que geralmente ocorre entre uma e duas semanas após a ressecção. Estudos publicados recentes têm demonstrado que a formação de estenose está correlacionada com atamanho da ressecção. O japonês endoscópica Society recomenda evitar ESD tamanho superior a ¾ da circunferência do esôfago porque eles estão associados com o desenvolvimento de estenose em mais de 90% dos casos e são responsáveis ​​por problemas de alimentação graves e grande deterioração da qualidade de vida. A prevenção da estenose de esôfago continua sendo um desafio. Mecanismos envolvidos na formação de estenose são apenas parcialmente conhecida. Estenose formações parece resultar da associação de dois mecanismos diferentes: (1) o recrutamento celular pró-inflamatórios e (2) o desenvolvimento de fibrose excessiva 7. Vários tratamentos preventivos têm sido propostos. No entanto, os resultados não foram satisfatórios, com pouco benefício e efeitos colaterais graves 8, 9. Recentemente, uma equipe japonesa, Ohki et al. , Proposto para transplantar uma folha de células de camada única de células da mucosa oral autólogas para o esophcicatriz ageal. O transplante foi realizado imediatamente após ESD 10, 11. Eles demonstraram a eficácia desta abordagem inovadora, primeiro num modelo canino e, em seguida, em pacientes. células estromais derivadas de tecido adiposo (ADSCs) são promissores na medicina regenerativa. A sua aplicação em vários campos tem mostrado resultados interessantes, especialmente no processo de cicatrização de feridas. Terapia ADSC oferece várias vantagens, porque as células são facilmente isoladas e estão associados com propriedades anti-inflamatórias, efeitos imunomoduladores locais, indução neovascularização, e habilidades de diferenciação em mesenquimais e linhagens não-mesenquimais 12, 13, 14. Em um estudo anterior, a nossa equipa demonstrou a eficácia do transplante endoscópica dupla ADSC folhas para prev estenose esofágicaenção após ESD estendida em um modelo suíno 15. Neste artigo, os relatos de construção ADSC folhas e técnica de transplante endoscópico são apresentados.

<table><tbody><tr><td>Tampa endoscópica transparente compatível com Q180</td><td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GIF-Q180 gastroscópio&nbsp;</td>Sistema de Videoscópio <td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Exera II&nbsp;</td>Agulha de injeção <td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>18 G</td> Unidade de eletrocirurgia <td>Olympus Optical Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ERBE ICC 350&nbsp;</td><td>Tecnologia</td><td></td><td></td>ERBE</tr><tr><td>Indigo carmin 1%</td><td>Life</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Faca híbrida endoscópica</td><td>Life</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Minisonde Z pCLE sonda verde</td><td>Tecnologia Mauna Kea Você</td><td></td><td>deve aprender a usar a sonda. A manipulação pode ser difícil.</td></tr><tr><td>Soro fetal bovino</td><td>Sigma Aldrich</td><td>12105C</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T146</td><td></td></tr><tr><td>Alfa mínimo essencial meio Thermo</td><td>Fisher</td><td>22561-021</td><td></td></tr><tr><td>Soluções salinas tampoadas com fosfato</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>PKH67 kit de corante</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Mini67-KT</td><td></td></tr><tr><td>Célula responsiva à temperatura de 12 poços placa de cultura</td><td>Upcell Thermo Scientific</td><td>174900</td><td>Sinta o weel com 4 mL de cultura média padrão 30 min antes de semear células</td></tr><tr><td>Esomeprazol 40 mg&nbsp;</td><td>Biogaran</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Moprhine Sulfato 50 mg/mL</td><td>Lavoisier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amoxicilina 1 g</td><td>Biogaran</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cetamina 250 mg/5 mL</td><td>Panpharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Propofol 10 mg/mL</td><td>Fresenius</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Papel hidrofóbico</td><td>Carrefour</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

adsc folhas transplante para prevenir a estenose após estendido esofágico endoscópica submucosa dissection

ADSC-sheet Transplantation to Prevent Stricture after Extended Esophageal Endoscopic Submucosal Dissection

Nos últimos anos, a construção de folhas de células estimulou grande interesse na medicina regenerativa, especialmente para procedimentos de cirurgia reconstrutiva. O desenvolvimento de tecnologias diversificadas que combinam células estromais derivadas de tecido adiposo (ADSCs) com vários biomateriais levou à construção de vários tipos de substitutos de engenharia de tecidos, tais como osso, cartilagem e tecidos adiposos de roedor, de porcino, ou ADSCs humanos. esofágico dissecção submucosa endoscópica estendida (ESD) é responsável pela formação de estenose de esôfago. prevenção de estenose continua sendo um desafio, sem tratamentos eficazes disponíveis. Estudos anteriores relataram a eficácia do transplante de folhas de células da mucosa no modelo canino e em seres humanos. ADSCs são atribuídas propriedades anti-inflamatórias, efeitos de modulação imunes locais, indução neovascularização e habilidades diferenciação em mesenquimais e linhagens não-mesenquimais. Este estudo original descreve o tra endoscópicansplantation de uma construção da engenharia de tecidos ADSC para evitar estenose esofágica em um modelo suína. A construção ADSC foi composta de duas folhas adsc alogénicos em camadas umas sobre as outras em uma membrana de suporte de papel. As ADSCs foram marcadas com o fluororo PKH67 para permitir à base de sonda endomicroscopy de laser confocal de monitorização (pCLE). No dia do transplante, efectuou-se uma 5-cm e ESD hemi-circunferencial que se sabe induzir estenose esofágica. Os animais foram imediatamente endoscopicamente transplantado com 4 construções adsc. A completa adesão das construções adsc foi obtido após 10 min de aplicação suave. Os animais foram sacrificados no dia 28. Todos os animais foram transplantados com sucesso. O transplante foi confirmada no dia 3 com uma avaliação pCLE positivo. Em comparação com animais transplantados, animais de controle desenvolvido restrições graves, com maior desenvolvimento do tecido fibrótico, o problema alimentar mais frequente, e ganho de peso reduzido. No nosso modelo, o transplante de allogenic ADSCs, organizadas em folhas de células duplas, depois de ESD estendida foi bem sucedida e fortemente associada com uma taxa de estreitamento esofágico inferior.

A cultura de ADSCs e o procedimento para obter a folha de ADSC é mostrado na Figura 1. A Figura 2 mostra a construção do enxerto, composto por duas folhas adsc em camadas umas sobre as outras na sua membrana de suporte de papel. ADSCs foram previamente marcado com o fluoróforo PKH67 para permitir a entrada de monitorização do enxerto vivo com pCLE. A Figura 3 mostra as diferentes etapas de dissecção esofágica submucosa ...

Este estudo relata um método bem-sucedido de células adiposo endoscópica derivadas de tecido do estroma (ADSC) em folha transplante para a prevenção de estenose esofágica após uma dissecção endoscópica da submucosa estendida (ESD) em suínos.

ADSC folhas transplante para prevenir a estenose após estendido esofágico endoscópica submucosa Dissection

In past years, the cell-sheet construct has spurred wide interest in regenerative medicine, especially for reconstructive surgery procedures. The ...

Na prática clínica, a ocorrência de estenose esofágica é uma limitação importante para a ressecção endoscópica estendida de neoplasia superficial esofágica. Este vídeo apresenta uma técnica de transplante de folha ADSC que previne tais estenoses, possibilitando a ressecção endoscópica estendida em um modelo suíno. Este método pode avançar uma questão-chave no campo da prevenção de estenose esofágica após ressecção estendida endoscópica.A principal vantagem dessa técnica é que o transplante endoscópico de folha ADSC é significativo, eficaz e não demorado para prevenir essa estenose esofágica. Demonstrando este procedimento estará Gabriel Rahmi, um médico do meu laboratório, e eu. Colete cerca de 24 milhões de ADSCs por porco usando procedimentos padrão de expansão celular e frascos de cultura T150.Colher os ADSCs com 10 mililitros de solução-padrão de tripsina por balão. Em seguida, conte as células usando um citômetro automático. Carregue 1,5 milhão de células em cada poço de uma placa de cultura de células responsiva à temperatura de 12 poços.Agora, encha cada poço até quatro mililitros com meio de cultura. Em seguida, incube as placas por 12 horas durante a noite para o transplan

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Medicine

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A preparação e a transplantação de lençóis de células-tronco (ASC) derivado de tecido adiposo para anastomoses Colorretais insuficientemente suturados em um modelo do rato é apresentado. Esta aplicação romance mostra que folhas ASC podem reduzir o vazamento de anastomose colorretal.

Transplante de células-tronco derivadas de tecido adiposo folha para reduzir o vazamento após colectomia parcial em um modelo do rato

Descrevemos uma nova técnica anastogásótica intratorácica, projetada para criar uma anastomose de grande diâmetro, mantendo simultaneamente o suprimento sanguíneo do conduíte para minimizar a incidência de vazamentos e estratos. A construção e orientação do conduíte estomacal projetado para otimizar a função do trato gastrointestinal superior também é descrita.

Uma esofactomia de Ivor Lewis projetada para minimizar complicações anastomóticas e otimizar a função do conduíte

A reconstrução do esôfago é um procedimento desafiador, e o desenvolvimento de um esôfago projetado por tecido que permite a regeneração da mucosa esofágica e muscular e que pode ser implantado à medida que um enxerto artificial é necessário. Aqui, apresentamos nosso protocolo para gerar um esôfago artificial, incluindo fabricação de andaimes, cultivo de bioreatores e várias técnicas cirúrgicas.

Enxerto projetado por tecido para reconstrução circunferencial do Esôfago em Ratos

Aqui, apresentamos um protocolo para terapia endoscópica a vácuo (EVT) no manejo de vazamentos anastomóticos após gastrectomia total com esofagojejunostomia.

Terapia Endoscópica a Vácuo para Tratamento de Vazamento Anastomótico após Gastrectomia Total com Esofagojejunostomia

Este protocolo descreve a escavação endoscópica submucosa por incisão longitudinal, uma técnica projetada para facilitar a resseção e o fechamento de defeitos das lesões subepiteliais gástricas.

Avaliação da Eficácia da Incisão Longitudinal para Escavação Submucosa Endoscópica de Lesões Subepiteliais Gástricas

Este estudo detalha um protocolo padronizado PCM-ESD para ressecar grandes LSTs retais, visando aumentar a velocidade da dissecação e prevenir perfuração transmural por tunelamento submucoso.

O procedimento de criação de bolsões da dissecção endoscópica submucosa para tumores retales grandes de espalhamento lateral

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Método de Tração Interna Auto-Fabricado para Dissecação Submucosa Endoscópica de Câncer Gástrico Precoce

Descrevemos um protocolo para a realização de hepatectomy parcial (PHx) e transplante de células através do baço em NOD. SCID (ASSENTIMENTO. CB17-Prkdcscid/J) ratos. Neste protocolo, uma incisão é feita para expor e fazer a ressecção do lobo esquerdo do fígado seguido por outra incisão para o transplante intrasplenic de células.

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O objetivo deste artigo é descrever a metodologia de exclusivamente endoscópica cadavérico médio ouvido dissecação. Além disso, nosso objetivo é fornecer um guia completo de anatomia endoscópica de ouvido médio.

Descobrindo a anatomia do ouvido médio por cirurgia endoscópica de ouvido de Transcanal: um Manual de dissecação

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Complicações reduzidas após reconexão arterial em um modelo de rato de transplante de fígado ortotópico

Aprenda o transplante de folhas de ADSC para prevenir estenose esofágica após dissecção submucosa endoscópica em modelo suíno. Esta técnica promissora de terapia celular demonstra eficácia na redução da fibrose e melhora da cicatrização tecidual.

ADSC folhas transplante para prevenir a estenose após estendido esofágico endoscópica submucosa Dissection

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