Name: Murino Transplante de pele de espessura total (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Aprenda o transplante de pele de espessura total em camundongos para estudar respostas aloimunes e rejeição de enxertos. Este método reprodutível permite monitorar a rejeição por inspeção direta sem necessidade de microcirurgia avançada.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho foi financiado pelo NIH conceder R01AI077610.

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do Instituto Nacional de Saúde (NIH) e foram aprovados pela Comissão de Johns Hopkins University animal Cuidado e Uso (JHUACUC). Os procedimentos específicos foram realizados sob a MO13M292 protocolos ACUC aprovado e MO13M370. 1. Donor Colheita da pele <ol><li> Anestesiar o rato doador com isoflurano (vaporizador de indução a 4%, manutenção a 1 - 2% através do cone mouse). Use o dedo retirada pitada reflexo para monitorizar a profundidade de anestesia. </li><li> Usando uma máquina de barbear, a barba do dorso do animal e desinfecção com 10% de iodo de povidona (por exemplo, Betadine). </li><li> Com uma tesoura estéril, luvas e técnica asséptica, colheita doador de pele de volta a partir do quadril para o pescoço, com dissecção romba ao nível do tecido conjuntivo areolar. </li><li> Eutanásia do animal por deslocamento cervical após a colheita daenxerto de pele. </li><li> Sob um microscópio, separar o tecido conjuntivo, tecido adiposo, e panículo carnoso da pele do dorso utilizando tesouras finas Tenotomia. O panículo carnoso é um músculo fino e transparente responsáveis ​​por movimentos espasmos pele. </li><li> Utilizando uma técnica estéril instrumentos, cortar enxertos de 15 mm x 15 mm a partir da pele de volta para uma de 10 mm x 10 mm para a cama enxerto de 15 mm x 15 mm. </li><li> Armazenar os enxertos em gazes impregnadas com solução salina estéril tamponada com fosfato (PBS) numa placa de petri em gelo. NOTA: 8 - 10 enxertos pode ser obtido a partir de um rato dador. </li></ol> Transplante de pele 2. Destinatário <ol><li> Anestesiar o mouse destinatário com isoflurano (vaporizador de indução a 4%, manutenção a 1 - 2% através do cone mouse). Use o dedo retirada pitada reflexo para monitorizar a profundidade de anestesia. </li><li> Administrar 0,02 mg / kg de peso corporal de buprenorfina para o alívio da dor pós-operatória. </li><li> Raspar o lado das costas do animal, onde o wi enxertoll ser inserido e desinfectar com 10% de iodopovidona. </li><li> Com uma tesoura, corte de 10 mm x 10 mm a 15 mm x 15 mm quadrado de pele. O tamanho de defeito deve ser ligeiramente maior (10%) do que o enxerto. Corte o mais superficialmente possível. Tome cuidado para preservar o panículo carnoso e vasos. O panículo carnoso pode ser distinguida da fáscia subjacente por sua mobilidade e os vasos sanguíneos superficiais que executam a ele. </li><li> Posicionar o enxerto no leito de enxerto, evitando dobras ao longo das bordas. </li><li> Coloque 8 suturas nos cantos e no meio de cada borda. Para cada fio de sutura, a agulha passar através do enxerto e, em seguida, através do panículo carnoso do enxerto de leito inferior a pele circundante destinatário. </li><li> Retire a máscara de anestésico e deixar o animal recuperar parcialmente da anestesia antes de aplicar a bandagem adesiva. </li><li> Enrole o mouse destinatário em uma bandagem adesiva com gaze dobrada sobre o enxerto. Faça o curativo pela combinação de duas ataduras, cortandoa parte adesiva de um e colocando as duas almofadas absorventes em conjunto. </li><li> Monitorar o mouse de perto durante a recuperação para garantir que o curativo não está restringindo tórax excursão e respirar. Remover o curativo, se a taxa respiratória diminui ou o animal começa a ofegar ou respiração superficial. </li></ol> 3. Cuidados Pós-Operatórios <ol><li> Administrar enrofloxacina 5 mg / kg após a cirurgia para a profilaxia da infecção. </li><li> Posicione o mouse transplantado em uma gaiola limpa sobre uma almofada de aquecimento no forno até que se recupere totalmente da anestesia. </li><li> Observe o mouse por 1 hora de pós-operatório antes de retornar para a instalação de habitação. </li><li> Sete dias após a cirurgia, anestesiar o rato como no Passo 2.1. Remover o curativo, cortando apenas através do lado ventral do curativo. </li><li> Observar e palpar o enxerto no dia seguinte para sinais de formação de crostas, contração ou dureza. Se estiver presente, o enxerto pode não ter alcançado vasculariza adequadação e deve ser considerada uma falha técnica. </li><li> Monitorizar diariamente quanto a sinais de rejeição. Considere enxertos rejeitada quando ≥90% do tecido do enxerto torna-se necrótica. </li><li> Eutanásia dos animais rejeitados e colhê-las para análise. </li></ol>

<ol><li>Furtmuller, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+Hind+Limb+Transplantation+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse.</a> J Vis Exp. , (2016).</li>
<li>Oh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Microsurgical+Model+for+Heterotopic%2C+En+Bloc+Chest+Wall%2C+Thymus%2C+and+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice.</a> J Vis Exp. , (2016).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> J Vis Exp. , e50753(2014).</li>
<li>Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+identifies+selectins+that+regulate+T+cell+traffic+into+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts.</a> J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).</li>
<li>Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+innate+and+adaptive+immune+responses+underlying+allograft+rejection+by+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy.</a> Nat Med. 17, 744-749 (2011).</li>
<li>Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+behaviour+and+fate+of+skin+autografts+and+skin+homografts+in+rabbits%3A+A+report+to+the+War+Wounds+Committee+of+the+Medical+Research+Council%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council.</a> J Anat. 78, 176-199 (1944).</li>
<li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+studies+on+tissue+transplantation+immunity.+I.+The+survival+times+of+skin+homografts+exchanged+between+members+of+different+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice.</a> Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).</li>
<li>Garrod, K. R., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+skin+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine skin transplantation.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+tail+skin+to+study+allogeneic+CD4+T+cell+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice.</a> J Vis Exp. , e51724(2014).</li>
<li>Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+numbers+and+distribution+of+Langerhans+cells+in+skin+with+unique+immunologic+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties.</a> J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).</li>
<li>Chen, H. D., Silvers, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+Langerhans+cells+on+the+survival+of+H-Y+incompatible+skin+grafts+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats.</a> J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).</li>
<li>Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+and+limits+of+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Lessons and limits of mouse models.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495(2013).</li>
<li>Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+surgical+technique+for+experimental+free+skin+grafting+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Surg%22%5BJournal%5D)">A surgical technique for experimental free skin grafting in mice.</a> Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).</li>
<li>McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Skin allograft rejection.</a> Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).</li>
<li>Lee, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+Allograft+Rejection+by+Targeting+Immune+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+reports%22%5BJournal%5D)">Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism.</a> Cell reports. 13, 760-770 (2015).</li>
<li>Pollizzi, K. N., Powell, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+canonical+and+metabolic+signalling+programmes+in+the+regulation+of+T+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses.</a> Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).</li>
<li>Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fueling+immunity%3A+insights+into+metabolism+and+lymphocyte+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function.</a> Science. 342, 1242454(2013).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para revelar.

Desde a sua introdução por Medawar, primeiro em estudos humanos e, em seguida, em coelhos e ratinhos, o transplante de pele tem sido um modelo de valor inestimável para o estudo das respostas imunitárias alogénicas 6,7. Neste artigo, apresentamos um modelo de grande escala, o transplante de pele não-vascularizado de espessura total com a pele para trás superior e inferior. Vários métodos alternativos, incluindo o uso da pele da cauda ou da pele da orelha de rato como fonte de tecido do enxerto, foram relatado...

O transplante de órgãos é o tratamento de escolha para pacientes com casos de insuficiência terminal de órgãos, e os resultados têm melhorado notavelmente com os avanços em procedimentos cirúrgicos e protocolos de imunossupressão. No entanto, a imunossupressão a longo prazo está associada a efeitos colaterais significativos, e o desenvolvimento de novas estratégias que promovem a tolerância continua a ser o objectivo da investigação moderna transplante. Numerosos modelos animais têm sido desenvolvidos para a pesquisa básica em transplante, para estudar os mecanismos da rejeição do enxerto e para testar se aproxima de imunossupressão para a prevenção da rejeição de enxertos e para promover a tolerância a longo prazo 1-3. mouse modelos tornaram-se o esteio da pesquisa imunológica devido à disponibilidade exclusiva e vasta de anticorpos diagnósticos e terapêuticos e estirpes puras e transgênicas bem definidas. transplante de pele é um procedimento simples que não requer habilidades especiais de microcirurgia e podeser facilmente monitorizado no pós-operatório. Tomados em conjunto, o transplante de pele de ratinho tem sido uma ferramenta excepcional para estudar muitos aspectos envolvidos na resposta aloimune, incluindo a entrega de antigénio, o tráfico de células, e a destruição do tecido durante a rejeição de enxerto de 4,5. Aqui, mostramos o procedimento passo-a-passo para o transplante de pele de espessura total utilizando o modelo de rato, e descrevemos as etapas importantes necessárias para um enxerto bem-sucedida da pele transplantada.

<table><tbody><tr><td>Micro pinça reta</td><td>Sigma</td><td>F4017</td><td></td></tr><tr><td>Micro pinça curva</td><td>Aesculap</td><td>BD333R</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de tenotomia Stevens curva</td><td>Aesculap</td><td>BC905R</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de dissecação Mayo</td><td>Sigma</td><td>S3146</td><td></td></tr><tr><td>Micro porta-agulha</td><td>Aesculap</td><td>BM563R</td><td></td></tr><tr><td>Gaze estéril</td><td>Covidien</td><td></td><td></td>441218</tr><tr><td>6-0 Sutura de Nylon</td><td>MWI</td><td>31849</td><td></td></tr><tr><td>Tira de Plástico Banda&#45; Ajuda</td><td>Johnson & Johnson</td><td></td><td>Obtido da farmácia</td></tr><tr><td>10 cm Placa de Petri</td><td>Fisherbrand</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Qualidade Biológica</td><td>119069131</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td></td><td></td><td>Número DEA necessário; Obtido da farmácia hospitalar</td></tr><tr><td>Enrofloxacina</td><td>Bayer Health Care</td><td>186599</td><td></td></tr></tbody></table>

murino transplante de pele de espessura total

Murine Full-thickness Skin Transplantation

O transplante de pele de espessura total de murino é um modelo bem estabelecido para o estudo in vivo de resposta aloimune e rejeição de enxerto. Apesar da sua aplicação limitada a seres humanos, o transplante de pele em ratinhos tem sido amplamente utilizada para a pesquisa em transplantes. O procedimento é fácil de aprender e executar, e não requer técnicas de microcirurgia delicada, nem treinamento extensivo. Além disso, a rejeição do enxerto neste modelo ocorre em uma reacção imunológica muito reprodutível e é facilmente monitorizado por inspecção e palpação directa. Além disso, o transplante de pele secundário combinados com enxertos de pele de doadores ou de terceiros pode ser realizada em modelos de transplante mais complexos como um método alternativo e simples para avaliar a tolerância específica do dador. As complicações são baixos e são, em geral, limitado a uma overdose de anestesia ou angústia respiratória após o procedimento. falha do enxerto, por outro lado, ocorre geralmente como um resultado da má preparação da Grpopa, posicionamento incorreto no leito do enxerto, ou posicionamento inadequado de o curativo. Neste artigo, apresentamos um protocolo para o transplante de pele de espessura total em ratos e descrever os passos importantes necessários para o sucesso do procedimento.

A colocação do curativo sobre o mouse destinatário é um passo importante do processo. O enxerto de pele é posicionada no tronco recipiente, entre o ombro, anca e espinha (Figura 1). A ligadura é feita com gaze dobrada e a combinação de duas ataduras adesivas de plástico. O rato receptor é colocado com o enxerto para baixo sobre a gaze sobre o centro da ligadura. Usando dois micro pinças curvas, a extremidade inferior da ligadura é primeiro removido, e em seguida, a parte...

transplante de pele de espessura total murino é um modelo bem estabelecido para estudar a rejeição em um ambiente alloimmune. Aqui, nós fornecemos um tutorial de cada etapa envolvida na realização de um / c BALB -&gt; C57BL / 6 transplante de pele de espessura total.

Murino Transplante de pele de espessura total

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

O objetivo geral deste artigo em vídeo é realizar um transplante de pele com espessura total e descrever os passos importantes necessários para um procedimento bem-sucedido. O transplante de pele com espessura total em camundongos é um modelo bem estabelecido para estudar respostas aloimunes e rejeição de enxerto. O procedimento é fácil de executar e não requer técnicas microcirúrgicas delicadas.A rejeição do enxerto, neste modelo, ocorre como uma reação imunológica altamente reprodutível e pode ser facilmente monitorada por inspeção direta e palpação. Além disso, transplantes cutâneos secundários com enxertos de pele compatíveis com o doador ou de terceiros podem ser realizados para modelos de transplante mais complexos, como um método alternativo e simples para avaliar a tolerância específica ao doador. Após anestesiar um camundongo doador de acordo com o protocolo descrito, utilize uma máquina de cortar cabelo elétrica para raspar as costas do animal.Além disso, com iodo-povidona a 10%, desinfete a pele. Usando tesoura e dissecação romba, retire a pele dorsal do doador do quadril até a nuca ao nível do tecido conjuntivo areolar. Coloque a pele dorsal sob um microscópio e use tes

murine-full-thickness-skin-transplantation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Transplante alogênico de pele é um modelo padrão para ensaio de anfitrião respostas das células T aos antígenos MHC-díspares doador. Este vídeo-artigo fornece um tutorial visual de cada etapa envolvida na realização de um transplante de BALB/c--&gt; C57BL / 6 da pele.

Transplante de pele murinos

Neste relatório, nós descrevemos a pele tridimensional reconstruir modelo que imita a pele humana em arquitetura e composição. Fisiologia dos melanócitos, a progressão de melanoma eo destino de células-tronco dérmica foram investigados usando a pele reconstruir modelo. O modelo também é útil como uma ferramenta de pré-clínicos para avaliação de drogas.

A Pele Tridimensional Humanos Reconstruir Modelo: uma Ferramenta para o Estudo da Pele Normal e Progressão Melanoma

Este vídeo demonstra um método para enxertar pele humana em um camundongo imunodeficiente com uma resposta de neutrófilos suprimida. O método envolve a aplicação de pele humana de espessura dividida no leito do enxerto do camundongo, selando-o e cobrindo-o para recuperação. Eventualmente, a pele humana adere à pele do camundongo, estabelecendo vascularização e circulação, resultando em um xenoenxerto cutâneo bem-sucedido.

Uma técnica para enxerto de pele humana em um modelo de camundongo

A vascularização é essencial para abordagens de engenharia de tecidos bem sucedida. Portanto, tecnologias confiáveis ​​são necessários para avaliar o desenvolvimento de redes vasculares em tecido construções. Aqui apresentamos um método simples e de baixo custo para visualizar e quantificar a vascularização in vivo.

A pele completa Defeito Modelo Estudar a vascularização de Biomateriais<em&gt; In Vivo</em

O transplante de pele da cauda é um modelo poderoso para estudar a rejeição dependente de células T e a indução de tolerância durante respostas imunes alogênicas em camundongos. As vantagens deste protocolo são pequenas cirurgias invasivas e facilidade de monitoramento sem a necessidade de sacrificar o camundongo receptor.

O transplante de pele da cauda para estudar as respostas das células T CD4 alogênico em camundongos

Durante o desenvolvimento dos mamíferos, as feridas cutâneas gestacionais precoces cicatrizam sem cicatriz. Aqui, detalhamos um modelo confiável e reprodutível de cicatrização de feridas sem cicatrizes fetais no dorso cutâneo de embriões de camundongos E16.5 (sem cicatrizes) e E18.5 (cicatrizes).

Um modelo de pele Rato Fetal de reparação de feridas Scarless

O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo murino de cicatrização de feridas queimadas. Uma queimadura térmica foi induzida na pele dorsal de camundongos usando um modelo de latão pré-aquecido. Tecido queimado foi desbridado e sobreposto com um enxerto de pele colhido da cauda de um rato doador geneticamente semelhante.

Um modelo murino de uma ferida de queimadura reconstruída com um enxerto de pele aogenética

O presente protocolo descreve como enxertar pele humana em camundongos diabéticos não obesos (NOD)-scid interleucina-2 receptor de cadeia gama (NSG) camundongos. Uma descrição detalhada da preparação da pele humana para transplante, preparação de camundongos para transplante, transplante de pele humana de espessura dividida e procedimento de recuperação pós-transplante estão incluídas no relatório.

Modelo de pele de xenoenxerto para manipular respostas imunes humanas in vivo

O presente artigo descreve uma técnica modificada para transplante cardíaco vascularizado heterotópico com técnica asséptica atualizada, analgesia e anestesia.

Protocolo de transplante cardíaco heterotópico murino modificado que atende aos padrões contemporâneos de técnica asséptica, anestesia e analgesia

Apresentamos um modelo reprodutível de camundongo de alotransplante composto vascularizado de membros posteriores para pescoço, heterotópico. Esse protocolo supermicrocirúrgico, envolvendo anastomoses de vasos de 0,3 a 0,5 mm, integra guiagem com filamento de náilon e algemamento venoso. Ela oferece uma plataforma confiável para estudos translacionais sobre tolerância, lesões por isquemia-reperfusão e mecanismos imunológicos em alotransplante composto vascularizado.

Transplante Heterotópico de Membro Posterior para Pescoço no Camundongo: Um Modelo Supermicrocirúrgico de Alotransplante Composto Vascularizado

Aprenda o transplante de pele de espessura total em camundongos para estudar respostas aloimunes e rejeição de enxertos. Este método reprodutível permite monitorar a rejeição por inspeção direta sem necessidade de microcirurgia avançada.

Murino Transplante de pele de espessura total

Explorar mais vídeos