Murino Transplante de pele de espessura total

O objetivo geral deste artigo em vídeo é realizar um transplante de pele com espessura total e descrever os passos importantes necessários para um procedimento bem-sucedido. O transplante de pele com espessura total em camundongos é um modelo bem estabelecido para estudar respostas aloimunes e rejeição de enxerto. O procedimento é fácil de executar e não requer técnicas microcirúrgicas delicadas.

A rejeição do enxerto, neste modelo, ocorre como uma reação imunológica altamente reprodutível e pode ser facilmente monitorada por inspeção direta e palpação. Além disso, transplantes cutâneos secundários com enxertos de pele compatíveis com o doador ou de terceiros podem ser realizados para modelos de transplante mais complexos, como um método alternativo e simples para avaliar a tolerância específica ao doador. Após anestesiar um camundongo doador de acordo com o protocolo descrito, utilize uma máquina de cortar cabelo elétrica para raspar as costas do animal.

Além disso, com iodo-povidona a 10%, desinfete a pele. Usando tesoura e dissecação romba, retire a pele dorsal do doador do quadril até a nuca ao nível do tecido conjuntivo areolar. Coloque a pele dorsal sob um microscópio e use tesoura fina de tenotomia para separar o tecido conjuntivo e o pânico carnoso da pele.

Recorte enxertos de 15 por 15 milímetros da pele das costas para um leito de enxerto de 10 por 10 a 15 por 15 milímetros. Armazene os enxertos em gaze embebida com PBS em uma placa de Petri e coloque-a sobre gelo. Anestesie o camundongo receptor de acordo com o protocolo descrito no texto.

Apare a lateralidade das costas do animal, onde o enxerto será inserido, e administre então 0,02 miligramas por quilograma de buprenorfina para alívio da dor pós-operatória. Utilize 10% de povídona-iodo para desinfetar a área. Com tesoura, e de forma o mais superficial possível, corte um quadrado de pele de 10 por 10 a 15 por 15 milímetros.

Tenha cuidado para preservar o pânico carnoso e os vasos sanguíneos que correm superficialmente a ele. Em seguida, posicione o enxerto sobre o leito do enxerto, evitando dobras nas bordas. Depois, coloque oito suturas nos cantos do enxerto e na metade de cada borda, passando a agulha através do enxerto e, em seguida, através do pânico carnoso do leito do enxerto, abaixo da pele receptora circundante.

Coloque uma gaze dobrada sobre uma atadura dobrada e, em seguida, posicione o animal sobre a atadura, com o lado do enxerto voltado para baixo, removendo a máscara anestésica para permitir que o animal se recupere parcialmente. Em seguida, enrole a atadura ao redor do animal. O fator mais crítico no processo de enxertia é a revascularização do tecido enxertado pelo crescimento de vasos do hospedeiro em direção ao enxerto.

A dissecação do pânico carnoso e a colocação correta do curativo são os passos mais importantes. Imediatamente após a cirurgia, administre 5 miligramas por quilograma de enrofloxacina para profilaxia contra infecção. Coloque o camundongo transplantado em uma gaiola limpa até que se recupere completamente da anestesia.

Observe o camundongo por uma hora após a cirurgia, antes de devolvê-lo ao alojamento. Monitore cuidadosamente o camundongo durante a recuperação para garantir que o curativo não esteja restringindo a excursão torácica e a respiração. Oito dias depois, observe e palpe o enxerto em busca de sinais de crostas, contração ou endurecimento.

Se algum desses sinais estiver presente, o enxerto pode não ter alcançado uma vascularização adequada e deve ser considerado uma falha técnica. Monitore o enxerto diariamente quanto aos sinais de rejeição. Considere os enxertos rejeitados quando maior ou igual a 90% do tecido do enxerto se tornar necrótico.

Em modelos de incompatibilidade completa, enxertos de pele de espessura total geralmente são rejeitados em oito a 12 dias. Em modelos de incompatibilidade menor, as respostas de rejeição são mais lentas, mais variáveis, e a aparência do enxerto de pele é caracterizada por alterações menos nítidas, como contração ou perda de pelos. A rejeição aguda do enxerto geralmente começa com inchaço e eritema do enxerto.

Esses eventos são seguidos por dessecação do enxerto, formação de crosta e retração, conforme observado aqui. Dependendo do grau de incompatibilidade de MHC e do protocolo de imunossupressão, a rejeição pode ocorrer por um processo subagudo marcado por alterações sutis, como perda de pelos, pigmentação, sulcos dérmicos e volume do enxerto. Nessas situações, um enxerto rejeitado apresenta-se brilhante, branco e sem pelos, com bordas irregulares.

Usando camundongos BALB/c como doadores e C57 black 6 como receptores, observou-se que a inibição da glicólise e da fosforilação oxidativa, ou do metabolismo da glutamina isoladamente, prolongou a sobrevida do enxerto de pele. No entanto, bloquear simultaneamente os três caminhos metabólicos resultou em aumento significativo da sobrevida do enxerto. Além disso, a terapia metabólica tripla foi mais eficaz do que a ciclosporina convencional ou a rapamicina.

Além disso, a histologia dos enxertos de pele do grupo com terapia metabólica exibiu um alinhamento tecidual mais preservado e menor infiltrado inflamatório linfocítico, em comparação com o tecido não tratado. Os resultados dos transplantes de órgãos melhoraram significativamente com os avanços nos procedimentos cirúrgicos e nos protocolos de imunossupressão. No entanto, a imunossupressão de longo prazo está associada a efeitos colaterais significativos, e novas estratégias que promovam tolerância continuam sendo o objetivo da pesquisa moderna em transplantes.

Sabe-se bem da importância do metabolismo na regulação dos linfócitos T. Ao inibir a glicólise, a fosforilação oxidativa e o metabolismo da glutamina, fomos capazes de aumentar significativamente a sobrevida do aloenxerto. Essa abordagem inovadora foi mais eficaz do que a terapia convencional e representa uma mudança de paradigma na abordagem potencial da regulação imunológica e do transplante.