Name: Método de anestesia, cirurgia e colheita para avaliação de parafusos transpediculares usando um In Vivo Modelo de espinha lombar porcina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: Aprenda a avaliar parafusos transpediculares em modelo porcino in vivo para cirurgia ortopédica da coluna lombar. Este método permite comparar a estabilidade de longo prazo de diferentes tipos de implantes.

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Este estudo foi apoiado por uma bolsa (CNUH-BRI-2012-02-005) financiada pelo Instituto de Pesquisa Biomédica do Hospital Nacional de Chonbuk (CNUH-BRI), República da Coréia.

O Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Nacional de Chonbuk aprovou este estudo. O tratamento, uso e manipulação de animais seguiram todas as diretrizes e políticas. Manter a sala de operação a 24 ° C. 1. Anestesia <ol><li> Aclimatar porcos em miniatura, com idade de 12 meses, na unidade experimental por pelo menos uma semana. Realize um exame clínico que mede a freqüência respiratória, o coração e a temperatura corporal. Não alimente cada porco em miniatura por 12 h antes do procedimento de anestesia. </li><li> Injecte atropina (0,05 mg / kg) e ketamin (20 mg / kg) / xilaxina (2 mg / kg) na região lateral do músculo cervical, atrás da orelha, para a pré-medicação. </li><li> Após a sedação, aplique uma fita adesiva ao redor da base da orelha e limpe a orelha com álcool tópico. </li><li> Coloque um cateter plástico em cima da agulha na veia da orelha e remova a borracha. Confirme se o cateter está corretamente colocado. GripePegue o cateter com solução salina heparinizada e conserte com fita adesiva. </li><li> Para a intubação endotraqueal, posicione o porco em miniatura na decúbito esternal. Com a ajuda de um assistente, segure o maxilar do porco com uma funda adequada e abra a boca. <ol><li> Passe a ponta do laringoscópio na cavidade faríngea para deslocar a epiglota do paladar macio. Use a ponta da lâmina do laringoscópio para tornar visíveis os cordões vocais e avance o tubo endotraqueal para a traquéia durante a expiração. </li><li> Sinta-se para uma passagem livre de ar para a intubação adequada e verifique a ausculta do tórax para sons de respiração nos lados esquerdo e direito do porco em miniatura. </li></ol></li><li> Encha o manguito com o volume apropriado de ar do tubo endotraqueal com ar usando uma seringa de 10 mL e conserte o tubo no focinho usando fita adesiva. </li><li> Fornecer uma concentração de 2,0% de isoflurano, um anestésico por inalação para anestesia prolongada, através do endotrTubo de intubação transversal. Teste os reflexos corneano e palpebral para confirmar a anestesia e usar pomada nos olhos para evitar a secura. </li><li> Monitorize o sistema cardiovascular, o sistema respiratório e a temperatura corporal durante a anestesia pelo menos a cada 5 min até o porco em miniatura se recuperar. </li><li> 30 minutos antes da cirurgia da coluna vertebral, aplique 30 mg / kg de cefazolina IV lentamente, a 1ª geração de antibióticos de cefalosporina. </li><li> Administrar 5 a 10 mL / kg / h de solução salina quente (37 ° C) usando uma linha IV para manter a homeostase e fornecer 50 μg / kg / min de fentanil para controlar a dor. </li><li> Após a cirurgia da coluna vertebral, realizar extubação quando um forte reflexo de deglutição é aparente. </li><li> Pegue o porco em miniatura em uma sala e monitore até que ele se recupere da anestesia. Fornecer comida e água quando o porco em miniatura estiver totalmente consciente. </li><li> Aplique 3 mg / kg de antibiótico de enrofloxacina com 4,4 mg / kg de carprofeno diariamente para controle da dor durante os primeiros 3 dias. </li><li> MoniDiariamente ao porco até a remoção das suturas. </li></ol> 2. Cirurgia da coluna vertebral <ol><li> Autoclave os parafusos transpediculares e os sistemas fixadores posteriores para esterilização, seguindo as diretrizes do fabricante. </li><li> Raspe a parte de trás do porco em miniatura, a aproximadamente 10 cm do centro para a esquerda ou para a direita, usando um raspador enquanto o porco está em posição supina. Limpe a pele com solução de povidona-iodo e 70% de álcool. </li><li> Faça uma incisão longitudinal longitudinal a partir do segundo processo espinhoso da coluna lombar até a primeira crista sacral mediana usando um bisturi. Dissecar através do tecido subcutâneo e fáscia até a ponta dos processos espinhosos. </li><li> Elevar os músculos paraspinal subperiosteamente das lâminas subjacentes usando um elevador Cobb. Dissecte ao longo do processo espinhoso e a lâmina limitada às articulações facetadas. </li><li> Abra o córtex superficial do ponto de entrada (que é apenas inferior ao processo mamilítico de L3Para L5 em ambos os lados) com uma rebarba ou uma rongeur. </li><li> Insira o pino de guia em um local aberto, paralelo à placa de extremidade superior e a um ângulo de 20 ° para o processo espinhoso. Defina o ponto de partida ideal usando o braço em C ou radiografias postero-anterior / laterais portáteis. </li><li> Insira uma sonda de pedículo até 25 mm de acordo com a radiografia. Confirme a trajetória intra-ósea completa por palpação do pedículo e do corpo usando um dispositivo de sondagem do pedículo. </li><li> Insira seis parafusos pediculares no pedículo preparado de L3 a L5 até que a cabeça do parafuso esteja bem encaixada. Aponte a abertura lateral da cabeça do implante na direção desejada e alinhe a posição horizontal com a trajetória da haste. </li><li> Insira duas hastes em ambos os lados das cabeças dos parafusos do pedículo, respectivamente. Coloque a manga e a porca na cabeça do parafuso do pedículo usando uma alça universal. </li><li> Aperte suavemente a porca com uma chave de soquete reta e aperte firmemente a porca com uma chave de torque contadora. </li><li> Confirme as posições oF os parafusos pediculares usando raios X postero-anterior / laterais portáteis. NOTA: Aguarde até que o porco em miniatura acorde e verifique os padrões de marcha e a função do motor do membro traseiro para determinar se um parafuso foi mal implantado. </li><li> Irrigar o local da cirurgia com 3 L de solução salina normal usando uma seringa de irrigação com bulbo com sucção. </li><li> Coloque um dreno de silicone no local da cirurgia e tire a ponta de silicone. Feche os músculos paraspinal e subcutâneo usando suturas absorvíveis métricas. Feche a pele com suturas de nylon métricas não absorvíveis de 2.0. </li><li> Desinfecte o sítio da sutura com povidona-iodo e aplique um curativo usando gaze esterilizada e fita adesiva. </li></ol> 3. Procedimento de colheita <ol><li> Às 12 semanas pós-operatório, injete xilazina (2 mg / kg) e cetamina (10 mg / kg) na região lateral do músculo cervical, atrás da orelha, para a pré-medicação. </li><li> Após a sedação, administre 15 mg / kg de KCl diretamente na veia da orelhaCateter para a eutanásia. </li><li> Faça uma incisão longitudinal da linha média na lesão anterior da cicatriz cirúrgica. Dissecar os tecidos moles e os músculos paraspinal. </li><li> Exponha o processo espinhoso das espinhas lombares, laminas, hastes, nozes e processos transversais de L3 a L5. </li><li> Remova as porcas usando uma chave de torque com contador e hastes. Corte o espaço do disco L2-3 e o espaço do disco L5-S1 usando uma serra oscilante. </li><li> Dissecte ambos os lados da parte anterior e média da coluna L3-5 com um elevador Cobb e fórceps de torre. Após a colheita, se a coluna vertebral não pode ser testada imediatamente, envolva-a em uma gaze embebida com solução salina e guarde-a a -20 ° C. </li></ol>

<ol><li>Greenfield, R. T., Grant, R. E., Bryant, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pedicle+screw+fixation+in+the+management+of+unstable+thoracolumbar+spine+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Orthop+Rev%22%5BJournal%5D)">Pedicle screw fixation in the management of unstable thoracolumbar spine injuries.</a> Orthop Rev. 21 (6), 701-706 (1992).</li>
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<li>Giavaresi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+preclinical+evaluation+of+the+influence+of+osteoporosis+on+the+anchorage+of+different+pedicle+screw+designs%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Spine+J%22%5BJournal%5D)">In vivo preclinical evaluation of the influence of osteoporosis on the anchorage of different pedicle screw designs.</a> Eur Spine J. 20 (8), 1289-1296 (2011).</li>
<li>Hasegawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydroxyapatite-coating+of+pedicle+screws+improves+resistance+against+pull-out+force+in+the+osteoporotic+canine+lumbar+spine+model%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+J%22%5BJournal%5D)">Hydroxyapatite-coating of pedicle screws improves resistance against pull-out force in the osteoporotic canine lumbar spine model: a pilot study.</a> Spine J. 5 (3), 239-243 (2005).</li>
<li>Smorgick, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-+versus+multilevel+fusion+for+single-level+degenerative+spondylolisthesis+and+multilevel+lumbar+stenosis%3A+four-year+results+of+the+spine+patient+outcomes+research+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Spine%22%5BJournal%5D)">Single- versus multilevel fusion for single-level degenerative spondylolisthesis and multilevel lumbar stenosis: four-year results of the spine patient outcomes research trial.</a> Spine. 38 (10), 797-805 (2013).</li>
<li>Busscher, I., Ploegmakers, J. J., Verkerke, G. J., Veldhuizen, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+anatomical+dimensions+of+the+complete+human+and+porcine+spine%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Spine+J%22%5BJournal%5D)">Comparative anatomical dimensions of the complete human and porcine spine.</a> Eur Spine J. 19 (7), 1104-1114 (2010).</li>
</ol>

Os autores não têm nada relacionado a este artigo para divulgar.

A avaliação dos parafusos transpediculares na espinha porcina requer muito tempo e esforço. Primeiro, o porco em miniatura é um animal grande. Para cuidados com animais e anestesia, o pesquisador precisa de um protocolo especializado. Em segundo lugar, a cirurgia deve manter um ambiente semelhante ao da cirurgia humana. O objetivo da avaliação dos parafusos pedicais na espinha porcina é desenvolver um parafuso eficiente que possa ser aplicado aos seres humanos. Em terceiro lugar, avaliar a estabilidade a longo prazo dos...

A fixação com parafuso transpedicular é um tratamento padrão-ouro para coluna lombar degenerativa e fratura explosiva, pois envolve três colunas da coluna vertebral e atinge estabilização1,2. No entanto, a maioria dos pacientes submetidos a essa cirurgia também tem osteoporose3,4. Muitos estudos avaliaram a força de fixação e o estado de osseointegração dos parafusos transpediculares, pois a soltura dos parafusos pediculares atualmente em uso tem sido relatada em pacientes com osteoporose5,6.
A coluna vertebral suína é semelhante à coluna vertebral humana em termos de tamanho. É mais barato em comparação com um modelo primata7. Além disso, um estudo mecânico in vivo demonstrou que a coluna vertebral suína quadrúpede é essencialmente carregada da mesma forma que a coluna vertebral humana8, razão pela qual muitos pesquisadores usam espinhas suínas para estudos sobre a prevenção do afrouxamento do parafuso pedicular. No entanto, leva vários meses para estudar os parafusos pediculares na coluna suína porque identificar a estabilidade a longo prazo dos parafusos pediculares leva tempo. Para comparar diferentes tipos de parafusos no corpo vertebral, é necessário inserir os parafusos em posições semelhantes. Portanto, os pesquisadores devem estar bem familiarizados com técnicas de anestesia adequadas, protocolos cirúrgicos padronizados e procedimentos de colheita antes de realizar qualquer experimento. Aqui, descrevemos um método detalhado para anestesia, cirurgia e colheita para a avaliação da fixação do parafuso pedicular usando um modelo de coluna suína, incluindo imagens ex vivo, histologia e testes de força.

<table><tbody><tr><td>Porco em miniatura</td><td>OrientBio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Atropine</td><td>Jeil farmacêutico</td><td>A04900241</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Sobre o cateter de plástico com agulha</td><td>BD</td><td>REF382412</td><td>Manutenção da linha IV</td></tr><tr><td>Cetamina</td><td>Yuhan</td><td>A04502441</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer Korea</td><td>A00800071</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Laringoscópio</td><td>Karl storz</td><td></td><td>Intubação</td></tr><tr><td>Tubo endotraqueal</td><td>Covidien</td><td></td><td>Intubação</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>JW pharmaceutical Co</td><td>A02104781</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Pomada para os olhos</td><td>Hanlim pharma</td><td>A37851721</td><td>Proteção do olho de porco</td></tr><tr><td>Cefazolina</td><td>Donga pharma</td><td>A01503951</td><td>Antibióticos</td></tr><tr><td>Solução salina</td><td>JW pharmaceutical Co</td><td>A02151392</td><td>Manutenção da homeostase fluida</td></tr><tr><td>Fentanil</td><td>Hana pharm</td><td>C03200032</td><td>Controle da dor</td></tr><tr><td>Enrofloxacina</td><td>Bayer</td><td>93106-60-6&nbsp;</td><td>Antibióticos</td></tr><tr><td>Morfina</td><td>Myungmoon pharma</td><td>C03700091</td><td>Controle da dor</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>A07600711</td><td>Antibióticos</td></tr><tr><td>Povidona-iodo</td><td>Hyundai pharma</td><td></td><td>Curativo de feridas</td></tr><tr><td>Bisturi lâmina tamanho 15</td><td>Braun</td><td>&nbsp; I1 BB515</td><td>Incisão na pele</td></tr><tr><td>Elevador Cobb</td><td>Codman</td><td>65-2546</td><td>Dissecção do músculo</td></tr><tr><td>Burr</td><td>Medtronic</td><td></td><td>Fabricação do ponto de partida do parafuso</td></tr><tr><td>Rongeur</td><td>Aesculap</td><td>FO515R</td><td>Fabricação do ponto de partida do parafuso</td></tr><tr><td>Pino guia (fio K)</td> <td>CE</td><td>01067803</td><td>Orientação da trajetória do parafuso</td></tr><tr><td>Braço C</td><td>GE</td><td>OEC 9800 plus</td><td>Orientação da trajetória do parafuso</td></tr><tr><td>Raio X portátil</td><td>Siemens</td><td>Mobile XP híbrido</td><td>Orientação da trajetória do parafuso</td></tr><tr><td>Sonda pedicular</td><td>OtisBiotech</td><td>SPI-02-01</td><td>Orientação da trajetória do parafuso</td></tr><tr><td>Dispositivo de sondagem pedicular</td><td>OtisBiotech</td><td>SPI-03-01</td><td>Orientação da trajetória do parafuso</td></tr><tr><td>Parafuso pedicular</td><td>OtisBiotech</td><td>MS-40025</td><td></td></tr><tr><td>Sistemas de fixação posterior</td><td>OtisBiotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rod&nbsp;</td><td>OtisBiotech</td><td>ROD-60140</td><td>Fixação rígida entre parafusos</td></tr><tr><td>Punho universal</td><td>OtisBiotech</td><td>SPI-08-01</td><td>Para fixar os parafusos na haste</td></tr><tr><td>Chave de soquete reta</td><td>OtisBiotech</td><td>SPI-06-01</td><td>Para fixar os parafusos na</td></tr><tr><td>chave de torque do contador</td> da haste <td>OtisBiotech</td><td>SPI-07-01</td><td>Para fixar os parafusos na haste</td></tr><tr><td>Seringa de irrigação de bulbo</td><td>Hyupsug medical</td><td>HS-IR-140</td><td>Dreno</td></tr> de silicone de irrigação <tr><td></td><td>Sewon médico</td><td>2205-006</td><td>Para drenar o fluido no local cirúrgico</td></tr><tr><td>3.0 sutura absorvível métrica</td><td>Ethicon</td><td>BA1673H</td><td>Sutura muscular</td></tr><tr><td>2.0 sutura de nylon não absorvível métrica</td><td>Ethicon</td><td>W1626T</td><td>Sutura da pele</td></tr><tr><td>Gaze</td><td>Kingphar Coréia</td><td>KP120-06</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>Hanlim pharma</td><td>645301221</td><td>Eutanásia</td></tr><tr><td>Serra oscilante</td><td>Zimmer</td><td></td><td>Harvest coluna</td></tr><tr><td>Torre fórceps</td><td>Aesculap</td><td>BF461R</td><td>Colheita espinha</td></tr></tbody></table>

método de anestesia, cirurgia e colheita para avaliação de parafusos transpediculares usando um<em&gt; in vivo</em&gt; modelo de espinha lombar porcina

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

A fixação do parafuso pedículo é o padrão-ouro para o tratamento de doenças da coluna vertebral. No entanto, muitos estudos relataram a questão do afrouxamento dos parafusos pedicais após a cirurgia da coluna vertebral, o que é uma preocupação séria. Para resolver este problema, diversos tipos de parafusos pedicais foram examinados para identificar aqueles com boa força de fixação e osseointegração no osso da coluna vertebral. A espinha porcina é uma boa alternativa para a coluna vertebral humana na avaliação de parafusos pediculares devido ao tamanho anatômico, características mecânicas e custo. Embora vários estudos tenham relatado que os parafusos pediculares são eficientes no modelo porcino, nenhum estudo descreveu protocolos detalhados para a avaliação de um parafuso de pedículo usando o modelo porcino. Aqui, descrevemos um método detalhado para avaliar os parafusos transpediculares usando um modelo de coluna espinhal porcino in vivo . Os detalhes técnicos para anestesia, cirurgia de coluna e colheita fornecidos aqui facilitarão com a avaliação do tModelo de fixação de parafuso ranspedicular.

Um protocolo detalhado para anestesia, cirurgia e colheita para avaliação de parafusos transpediculares usando um modelo de coluna espinhal porcino in vivo é descrito aqui. Este protocolo é adequado para uma série de análises a jusante, incluindo testes mecânicos ( Figura 1 ), avaliação quantitativa de micro-CT ( Figura 2 ) e histologia ( Figura 3 ). Testes mecânicos representativos ( Figura 1 ) mostram o torque...

Aqui, apresentamos um método para avaliar os parafusos transpediculares utilizando um modelo de coluna lombar porcino in vivo .

Método de anestesia, cirurgia e colheita para avaliação de parafusos transpediculares usando um<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de espinha lombar porcina

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...

O objetivo geral dessa intervenção cirúrgica é avaliar parafusos transpediculares utilizando um modelo in vivo da coluna lombar de suíno. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais sobre complicações da coluna, como o afrouxamento do parafuso pedicular. A principal vantagem dessa técnica é que podemos comparar a estabilidade de longo prazo de diferentes tipos de parafusos.Mantenha porcos anões de 12 meses de idade na unidade experimental por pelo menos uma semana. Após este período de aclimatação, realize um exame clínico em cada porco, meça a frequência respiratória, a frequência cardíaca e a temperatura corporal. Antes da anestesia, mantenha os porcos em jejum por 12 horas.Para sedar um porco, injete atropina na região muscular cervical lateral atrás da orelha. Após a sedação, pressione a mão ao redor da base da orelha e, em seguida, limpe a orelha com álcool. Depois, insira um cateter plástico com agulha na veia da orelha.Em seguida, lave o cateter com solução salina heparinizada e fixe-o com fita adesiva. Agora, induza anestesia utilizando cetamina e xilazina por meio do cateter. Para entubar o porco, posicione-o em decúbito esternal.E com a ajuda de um assisten

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Neste vídeo, descrevemos o procedimento cirúrgico para induzir instabilidade da coluna lombar em um modelo de camundongo, ressecando o processo espinhoso lombar L3 a L5 junto com os ligamentos supraespinhosos e interespinhosos.

Indução Cirúrgica da Instabilidade da Coluna Lombar em Modelo de Camundongo: Um Procedimento Cirúrgico para a Ressecção dos Processos Espinhosos Lombares e Ligamentos Conectados em Modelo Murino

Neste vídeo, descrevemos um procedimento para a implantação de uma câmara de imagem óptica crônica sobre a medula espinhal dorsal de um rato vivo. A câmara, procedimento cirúrgico, e imagiologia crônica são revisados ​​e demonstrada.

Um Processo de Implantação de uma Câmara Spinal para Longitudinal In Vivo Criação de Imagens do Cordão do rato Spinal

A degeneração do disco intervertebral é um contribuinte significativo para dor nas costas e uma das principais causas de incapacidade em todo o mundo. Existem numerosos modelos animais de degeneração de disco intervertebral. Demonstramos um modelo ovino de degeneração de disco intervertebral, utilizando uma broca, o que atinge uma lesão de disco consistente e nível reprodutível de degeneração de disco.

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Este protocolo descreve a implantação de uma janela de vidro na medula espinal de um rato para facilitar o visualização pela microscopia intravital.

Implante de janela de laminectomia e medula espinhal no mouse

O protocolo descreve um novo modelo in vivo de infecção de implante espinhal em camundongos, onde um implante de fio k de aço inoxidável é infectado com Staphylococcus aureus Xen36 bioluminescente. A carga bacteriana é monitorada longitudinalmente com imagens bioluminescentes e confirmada com contagens de unidades formadoras de colônias após a eutanásia.

Modelo in vivo de infecção de implante espinhal em camundongos

Desenvolvemos um modelo de rato de degeneração de disco intervertebral lombar por ressecção de processos spinous L3–L5, juntamente com ligamentos supra e inter-espinhosos e desprendimento de músculos paraspinos.

Um modelo de mouse de instabilidade lombar

A microcirculação da medula espinhal desempenha um papel fundamental na lesão medular. A maioria dos métodos não permite a avaliação em tempo real da microcirculação da medula espinhal, essencial para o desenvolvimento de terapias voltadas à microcirculação. Aqui, propomos um protocolo usando sondas Laser-Doppler-Flow Needle em um grande modelo animal de isquemia/reperfusão.

Avaliação em tempo real da microperfusão da medula espinhal em um modelo suíno de isquemia/reperfusão

O display de realidade aumentada montado na cabeça, Magic Leap, foi usado em combinação com um sistema de navegação convencional para colocar parafusos pediculares em um modelo porcino, aderindo a um novo fluxo de trabalho. Com mediana de tempo de inserção de &lt;2,5 min, obteve-se acurácia técnica submilimétrica e 100% de acurácia clínica, segundo Gertzbein.

Colocação de parafuso pedicular usando um display de realidade aumentada montado na cabeça em um modelo suíno

Determinando o enxerto de células do doador representa um desafio em ratinho ósseas modelos de transplante de medula que carecem bem definidos marcadores fenotípicos. Nós descrevemos uma metodologia para quantificar o enxerto de células de doadores do sexo masculino em camundongos fêmeas receptoras de transplante. Este método pode ser utilizado em todas as estirpes de ratinho para o estudo de funções HSC.

Usando Quantitative PCR em tempo real para determinar enxerto célula dadora num modelo murino de osso Competitiva Marrow Transplantation

Este artigo apresenta um método rápido e simples para a administração de bleomicina diretamente na traquéia do mouse através de intubação. As principais vantagens deste método é que ele é altamente reprodutível, fácil de dominar, e não requer equipamento especializado ou tempos de recuperação longos.

Um método melhorado para rápida de intubação da traqueia em Ratos

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