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DOI: 10.3791/55234-v
Gurpreet Kaur1,2, Jaimo Ahn1, Kurt D. Hankenson1,3, Jason W. Ashley1,4
1Department of Orthopaedic Surgery,Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania, 2Department of Biological Sciences,University of the Sciences, 3The Department of Small Animal Clinical Sciences,College of Veterinary Medicine, Michigan State University, 4Department of Biology,College of Science, Technology, Engineering, & Mathematics, Eastern Washington University
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A sinalização Notch é uma forma de comunicação celular que depende do contato direto entre as células. Para induzir adequadamente a sinalização Notch in vitro, os ligantes Notch devem ser apresentados às células em estado imobilizado. Este protocolo descreve métodos para estimulação in vitro da sinalização Notch em precursores de osteoclastos de camundongos.
O objetivo geral deste procedimento é observar os efeitos da estimulação da sinalização de entalhe em vários pontos durante o processo de diferenciação dos osteoclastos. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da biologia celular, como:Como o papel da sinalização de entalhe muda durante um processo celular? A principal vantagem desta técnica é a sua marginalidade, o que permite que seja adaptada a outras células ou ligantes de entalhe.
Embora esse método possa fornecer informações sobre a diferenciação de osteoclastos, ele também pode ser aplicado a outros processos, como sobrevivência celular, proliferação ou diferenciação de outros tipos de células. Comece o procedimento prendendo um camundongo em decúbito dorsal e desinfetando a pele com etanol a 70%. Em seguida, faça uma incisão ao longo da superfície anterior de um membro posterior para expor a tíbia e o fêmur.
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