Espectroscopia de RMN como uma ferramenta robusta para a avaliação rápida do perfil lipídico do óleo de peixes suplementa

O objetivo geral deste método é determinar o perfil lipídico de suplementos de óleo de peixe usando espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear. Este método pode ajudar a responder a questões-chave para a análise lipídica, como o conteúdo lipídico de suplementos de óleo de peixe e a distribuição posicional de vários ácidos graxos no esqueleto do glicerol. A principal vantagem dessa técnica é que ela torna viável a análise rápida e robusta de várias moléculas diferentes em um instantâneo sem usar etapas de separação e purificação.

Para preparar as amostras para análise de RMN de prótons e carbono, primeiro extraia 120 microlitros, que são cerca de 110 miligramas de óleo de peixe, de uma cápsula dietética usando uma seringa e coloque-a em um frasco de vidro de 4 mL. Registre o peso do óleo de peixe. Use 500 microlitros de uma solução estoque de BHT para dissolver 100 miligramas mais ou menos 10 miligramas de óleo de peixe.

Depois de dissolver o óleo, transfira toda a solução diretamente para um tubo de RMN de cinco milímetros de alta qualidade e coloque uma tampa. Analise as amostras dentro de 24 horas após a preparação das amostras. Insira o tubo de RMN em uma turbina giratória.

Coloque o spinner e o tubo na parte superior de um medidor de profundidade graduado e empurre suavemente a parte superior do tubo até que sua parte inferior toque a parte inferior do medidor. Em seguida, coloque o tubo de RMN em um local aberto do estojo de amostra. Observe o número do slot em que a amostra é colocada.

Para carregar a amostra no instrumento de RMN, retorne ao computador de controle e digite número SX, onde número é o slot no estojo de amostra que contém a amostra. Aguarde até que o sinal de deutério do clorofórmio deuterado apareça na tela. Assim que o sinal de deutério estiver visível, digite lock" na linha de comando e selecione clorofórmio deuterado na lista de solventes para bloquear a amostra usando sua ressonância de deutério.

Digite bsmsdisp"na linha de comando para garantir que a rotação não esteja ativa. Se o botão de rotação estiver verde, clique nele para desativar a rotação. Depois de digitar o comando novo"para criar um novo conjunto de dados, insira um nome para o conjunto de dados na guia nome e o número do experimento na guia número do experimento intitulada EXPNO.

Use o número um na guia de número do processo intitulada PROCNO. Escreva o título do experimento na guia TÍTULO. Na guia Experimento, clique em Selecionar e escolha o arquivo de parâmetro C13IG.

Em seguida, clique em Definir item selecionado no editor"e clique em OK. Digite getprosol"na linha de comando para obter os parâmetros padrão para a sonda de RMN e o solvente atuais. Em seguida, digite o comando atma"para realizar o ajuste automático e a correspondência da sonda para núcleos de carbono e prótons. Em seguida, execute o calço de gradiente unidimensional para obter um campo magnético altamente homogêneo e, portanto, uma forma de linha ideal para os sinais de RMN.

Para fazer isso, use o procedimento automático padrão para calço 1D simplesmente executando sequencialmente os comandos qu topshim 1dfast ss; qu topshim tuneb ss; e qu topshim report"na linha de comando. Após a otimização dos parâmetros, conforme descrito no protocolo de texto, adquira espectros de RMN de carbono unidimensionais. Para fazer isso, vá para o conjunto de dados de carbono e use uma sequência de pulso desacoplada com portão inverso digitando pulprog zgig"na linha de comando.

Digite comandos na linha de comando para configurar o espectral com nppm, o centro do transmissor de RF, o número de varreduras, o número de varreduras fictícias, o número de pontos de dados e a duração do pulso para um ângulo de pulso de noventa graus. Digite digmod baseopt"na linha de comando para adquirir um espectro com uma linha de base aprimorada. Em seguida, defina um atraso de relaxamento de 60 segundos para o instrumento de 850 megahertz digitando di 60s"na linha de comando.

Defina o ganho do receptor para um valor apropriado usando o comando rga"para cálculo automático do ganho do receptor. Por fim, inicie a aquisição digitando o botão adquirir comando zg"na linha de comando. Para processar os dados, primeiro digite si 64K"na linha de comando para aplicar o preenchimento zero e definir o tamanho do espectro ferroviário para 64K.

Em seguida, defina o parâmetro de alargamento de linha para 1,0 hertz digitando lb 1,0" na linha de comando para aplicar uma função de espera com um fator de alargamento de linha de 1,0 hertz antes da transformação 4ea. Execute a transformação 4ea digitando efp"na linha de comando. Em seguida, execute a correção automática de fase digitando o comando apk"na linha de comando.

Se forem necessários ajustes de fase adicionais para melhorar ainda mais o espectro, clique na guia Processo. Em seguida, clique no ícone Ajustar fase e nos ícones Correção de fase para correção de fase de ordem zero e primeira ordem. Enquanto clica nos ícones de correção de fase de ordem zero e primeira ordem, arraste o mouse até que todos os sinais estejam no modo de absorção positiva.

Aplique e salve os valores de correção de fase clicando no botão Retornar e salvar para sair do modo de correção de fase. Aplique uma função polinomial de quarta ordem para correção de linha de base na integração digitando o comando abs n"na linha de comando. Para relatar mudanças químicas em ppm do TMS, amplie o sinal TMS, clique no ícone Calibração e coloque o cursor com a linha vermelha na parte superior do sinal NMR a ser referenciado, TMS neste caso.

Para ajustar a intensidade do limite, use o botão do meio do mouse, se necessário. Clique com o botão esquerdo e digite 0. Ao usar o BHT como padrão interno, integre o pico em delta 151.45 estendendo-se cinco hertz de cada lado do pico.

Em seguida, defina a integral igual aos micromoles de BHT por 0,5 mililitros da solução estoque. Integre os picos de interesse estendendo cinco hertz de cada lado do pico. Se houver necessidade de focar em uma região, clique no ícone de destaque para desativá-la.

Em seguida, clique com o botão esquerdo e arraste para ampliar a região. Clique no ícone de destaque novamente para ativar a função de integração e passar para o próximo pico. Clique com o botão esquerdo e arraste o cursor pela integral.

Clique no botão Retornar regiões salvas. Aqui é mostrado um espectro representativo da análise de RMN de carbono na região do carbono carbonílico. Os sinais de RMN de EPA e DHA nas posições sn-1, 3 e sn-2 são mostrados.

Esses sinais podem ser usados para a determinação quantitativa de EPA e DHA. Aqui é mostrado um espectro representativo da análise de RMN de prótons. Os sinais de RMN de EPA e DHA que podem ser usados para sua determinação são mostrados.

O espectro de RMN de prótons é caracterizado por uma largura espectral mais estreita em comparação com o espectro de RMN de carbono e, portanto, uma resolução espectral mais baixa. Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em menos de 30 minutos se for executada corretamente. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para que pesquisadores da área de análise lipídica analisassem rapidamente vários componentes lipídicos que aparecem em matrizes multicomponentes, como suplementos dietéticos, óleo vegetal e biocombustíveis.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como aplicar prótons e carbono, espectroscopia de RMN para a análise do perfil lipídico de suplementos de óleo de peixe. Não se esqueça de que trabalhar com campos magnéticos fortes produzidos por espectrômetros de RMN pode ser extremamente perigoso para marca-passos e próteses cirúrgicas, bem como itens eletrônicos, como cartões de crédito e relógios.