Medição da captação de glicose e resposta à estimulação de insulina em miotubos primários humanos cultivados in vitro

O objetivo geral deste procedimento é medir a captação de glicose estimulada pela insulina nas células musculares primárias humanas. Este método pode ajudar a responder às principais questões no campo do metabolismo muscular, como a sensibilidade à insulina das células musculares. A principal vantagem desta técnica é que ela quantifica o efeito biológico efetivo das células musculares em resposta à estimulação hormonal.

Para iniciar o experimento, prepare o meio de proliferação, ou PM, suplementando o meio F-10 de Ham com 2% de soro fetal de bezerro, ou FCS, 2% de substituto de soro, 2 milimoles de glutamina e 5 microgramas por mililitro de penicilina estreptomicina. Prepare um meio de diferenciação, ou DM, suplementando o Modified Eagle Medium de Dulbecco, ou DMEM, com 2% FCS, 2 milimoles de glutamina e 5 microgramas por mililitro de estreptomicina de penicilina. Para preparar a solução salina tamponada com fosfato de X Dulbecco, ou XDPBS, faça uma solução de DBPS contendo 0,2% de peso por volume de albumina de soro bovino.