Um novo uso da ultra-sonografia tridimensional de alta frequência para caracterização de gravidez precoce no Mouse

O objetivo geral deste procedimento de imagem de ultrassom é detectar, monitorar e caracterizar a gravidez precoce no camundongo. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da biologia reprodutiva murina e estabelecer o crescimento, desenvolvimento e viabilidade de gestações precoces em camundongos. A principal vantagem dessa técnica é que essas gestações podem ser caracterizadas e fenotipadas in vivo, sem interrupção da gravidez em camundongos, permitindo a coleta longitudinal de dados.

Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldade em obter todas as imagens em um plano. Isso se deve aos pequenos movimentos incrementais da sonda de ultrassom que são necessários. Comece preparando a máquina de ultrassom.

Ligue o transdutor e, em seguida, conecte o estágio do motor 3-D ao transdutor. Em seguida, conecte a sonda ao transdutor clamp. Agora, posicione o mouse, em decúbito dorsal, na plataforma de monitoramento.

Forneça anestésico através do cone do nariz e prenda suavemente todas as suas patas nas almofadas de monitoramento da frequência cardíaca na plataforma. Em seguida, esfregue cerca de um ou dois mililitros de gel de transmissão de ultrassom no abdômen. Em seguida, posicione a sonda de ultrassom na parte inferior do abdômen usando o estágio motor manual.

Usando o ultrassom, localize a bexiga, que deve aparecer como uma olheira cheia de comida apenas cefálica à abertura vaginal. Uma vez localizada a bexiga, mova a sonda muito lentamente cefálica para visualizar o útero grávido, que deve aparecer como uma forma cilíndrica com áreas redondas nos locais da gravidez. Isso pode ser descrito como pérolas em uma corrente.

Agora, prossiga com a imagem 2-D. Uma vez identificado o útero grávido, comece no local da gravidez mais próximo da bexiga e mova lenta e sequencialmente o cefálico para determinar a localização de todos os locais da gravidez. Salve a imagem.

Se o rim, baço ou fígado puderem ser vistos, a varredura é muito cefálica. Reposicione a sonda mais perto da bexiga e salve a imagem. Em seguida, imagine o corno uterino contralateral da mesma maneira.

Congele a imagem quando a armação do ultrassom estiver no centro do local da gravidez ou implantação e salve a imagem para análise. Agora ou mais tarde, use as imagens salvas para medir as posições de implantação usando a reação de decidualização hiperecogênica como marcador. Clique manualmente na ferramenta de medição e clique na localização de um local de implantação.

Em seguida, arraste o cursor para o próximo local de implantação e clique novamente para desenhar uma linha. O software então relata o comprimento da linha. Depois que todos os locais de implantação forem medidos, use a mesma técnica e prossiga para medir o tamanho do saco gestacional e o tamanho do polo fetal.

Após a imagem 2D, posicione a sonda em uma área que esteja no ponto médio aproximado da imagem 3D desejada. Por exemplo, se alguém estivesse imaginando uma maçã em 3D, posicione a sonda no núcleo. Assim que a sonda estiver posicionada corretamente, obtenha uma aquisição 3D.

O estágio motor 3-D percorrerá essa distância através do útero em uma série de etapas ou quadros. À medida que a varredura é obtida, certifique-se de que as estruturas pretendidas sejam completamente capturadas na varredura. Depois de coletar a digitalização, carregue-a para processamento de imagem.

Escolha os métodos paralelo e rotacional para processamento, que carregará todos os quadros de imagem 3D em uma caixa 3D. Em seguida, escolha o tamanho da etapa de 0,08 milímetros, comece em uma extremidade do bloco de imagem e percorra todos os quadros para se familiarizar com os dados. Em seguida, comece em uma extremidade da pilha e trace manualmente o contorno de um objeto de interesse.

Em seguida, prossiga para o próximo quadro e trace manualmente o contorno do objeto novamente. Continue esse processo até que todos os quadros tenham sido anotados manualmente. Depois de concluído, clique em concluir para obter uma imagem 3D e um cálculo do volume do objeto.

Para a imagem, escolha entre uma malha ou uma sobreposição sólida. Em seguida, opte por manter ou remover as informações da imagem ao redor para maior clareza. O ultrassom de alta frequência pode detectar o desenvolvimento de um local de implantação já 5,5 dias após a concepção.

Usando o endométrio decidualizado hiperecoico mais leve como marcador de locais de implantação, o número de locais de implantação e o espaçamento desses locais, a serem quantificados em 6,5 dias após a concepção. À medida que a gravidez progride para 7.5 dias após a concepção, um saco gestacional e um pólo fetal mais escuros e hipoecoicos são facilmente identificáveis. Reconstruções tridimensionais do útero de camundongo 6,5 dias após a concepção foram feitas nos formatos de malha e sobreposição sólida.

Aos 7,5 dias após a concepção, a varredura 3D foi igualmente reveladora. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como obter imagens de ultrassom precisas em 2D e 3D, para caracterizar uma gravidez sem interrupção. O tempo total necessário para uma aquisição de ultrassom, tanto em 2-D quanto em 3-D, é de aproximadamente 10 a 20 minutos nas mãos de um usuário experiente.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de manter seus movimentos pequenos e incrementais. Essa técnica abriu caminho para os pesquisadores explorarem fenótipos de gravidez normais e anormais no camundongo.