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Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV)

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Scanning Electron Microscopy (SEM)

3.10: Ion-Exchange Chromatography

3.15: Cyclic Voltammetry (CV)

86,704 Views

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11:41 min

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April 30, 2023

Overview

Fonte: Laboratório do Dr. Andrew J. Steckl — Universidade de Cincinnati

Um microscópio eletrônico de varredura, ou SEM, é um poderoso microscópio que usa elétrons para formar uma imagem. Permite imagens de amostras condutoras em ampliações que não podem ser alcançadas usando microscópios tradicionais. Microscópios de luz modernos podem alcançar uma ampliação de ~1.000X, enquanto o MEI típico pode atingir ampliações de mais de 30.000X. Como o SEM não usa luz para criar imagens, as imagens resultantes que ele forma estão em preto e branco.

As amostras condutoras são carregadas no estágio amostral do SEM. Uma vez que a câmara de amostra atinja o vácuo, o usuário passará a alinhar a arma eletrônica no sistema ao local adequado. A arma eletrônica dispara um feixe de elétrons de alta energia, que viajam através de uma combinação de lentes e aberturas e eventualmente atingem a amostra. À medida que a arma eletrônica continua a disparar elétrons em uma posição precisa na amostra, elétrons secundários saltarão da amostra. Estes elétrons secundários são identificados pelo detector. O sinal encontrado a partir dos elétrons secundários é amplificado e enviado para o monitor, criando uma imagem 3D. Este vídeo demonstrará as capacidades de preparação, operação e imagem da sem.

Principles

Elétrons são gerados pelo aquecimento pela arma eletrônica, que age como um cátodo. Estes elétrons são impulsionados para o ânodo, na mesma direção da amostra, devido a um forte campo elétrico. Depois que o feixe de elétrons é condensado, ele entra na lente objetiva, que é calibrada pelo usuário para uma posição fixa na amostra. (Figura 1)

Uma vez que os elétrons atingem a amostra condutora, duas coisas podem acontecer. Primeiro, os elétrons primários que atingiram a amostra serão escavados através dela até uma profundidade que depende do nível de energia desses elétrons. Em seguida, os elétrons secundários e recattered atingirão a amostra e refletirão para fora dela. Esses elétrons refletidos são então medidos pelo detector de elétrons secundários (SE) ou backscattered (BS). Após o processamento do sinal, uma imagem da amostra é formada na tela. ¹

No modo SE, elétrons secundários são atraídos por viés positivo na frente do detector por causa de sua baixa energia. A intensidade do sinal é variada dependendo do ângulo da amostra. Portanto, o modo SE fornece imagens altamente topográficas. Por outro lado, no modo BS, a direção dos elétrons é quase diretamente oposta à direção do feixe eletrônico e a intensidade de detecção é proporcional ao número atômico da amostra. Portanto, é menos topográfico, mas útil para imagens composicionais. O modo BS também é menos afetado pelo efeito de carregamento na amostra, o que é benéfico para amostras não condutoras. ¹

Figura 1. Esquema do SEM.

Procedure

1. Preparação da Amostra

Coloque a amostra no stub da amostra. Se necessário, a fita de carbono pode ser usada para ligar a amostra adesivamente ao stub.
Coloque a amostra em um sistema de sputtering de ouro. Usando uma sputter mini-ouro, sputter ouro para 30 s a ~ 70 mTorr pressão. Uma espessura de camada de ouro diferente pode ser necessária dependendo da geometria da amostra. Uma superfície mais áspera ou porosa requer um tempo mais longo de sputtering.
Remova o stub do sistema de sputtering dourado.

2. Inserção de amostras e Startup SEM

Desabasse a câmara SEM, permitindo que a câmara atinja pressão nominal.
Abra o compartimento de amostras SEM e tire o estágio amostral.
Insira o stub de amostra contendo a amostra no estágio. Aperte o stub no lugar.
Se a distância z não puder ser controlada por software, certifique-se de que o estágio da amostra com amostra tenha altura adequada para obter a melhor imagem.
Coloque o estágio amostral na câmara de amostras. Feche o compartimento de amostras.
Ligue as bombas e deixe o sistema atingir o vácuo. O sistema notificará o usuário quando isso estiver concluído.
Abra o software SEM. Selecione tensão de operação desejada variando de 1 a 30 kV. Maior tensão de operação dá melhor contraste de imagem, mas pode produzir menor resolução se as cargas se acumularem na amostra.

3. Capturando a Imagem SEM

Inicie ‘Auto Focus’ no software SEM clicando no ícone chave. Isso adquirirá uma imagem focada da amostra para usar como ponto de partida.
Certifique-se de que a ampliação está definida para o nível mínimo de zoom de 50X.
Selecione o modo ‘digitalização rápida’.
Ajuste o foco no modo grosseiro até que um foco áspero seja adquirido.
Ajuste o estágio manualmente usando os botões externos para que a região de interesse seja visível no visor.
Aumente o nível de ampliação até que o recurso desejado seja observado. Ajuste o botão de foco grosseiro para focar aproximadamente a imagem nesta ampliação. Em seguida, melhore o foco usando o botão de foco fino para obter uma imagem focada no nível de ampliação desejado. Esta etapa será repetida sempre que o nível de ampliação for aumentado.
Uma vez alcançada a ampliação desejada, ajuste o botão de foco fino para melhorar a clareza.
Para otimizar a clareza da imagem, aumente a ampliação perto do nível máximo e, em seguida, concentre a imagem usando o botão de foco fino. Se uma imagem clara não puder ser obtida, ajuste a estigma na direção x e y. Continue ajustando o foco e as estigmas até que a imagem mais clara seja obtida no nível exagerado de ampliação.
Depois de atingir uma imagem de qualidade da amostra, volte ao nível de ampliação desejado. A imagem pode ser tirada pressionando o botão de foto no modo ‘foto lenta’ ou ‘foto rápida’. O modo ‘foto lenta’ dá melhor qualidade e alta resolução da imagem.

4. Fazer medições usando o software SEM

Na lista suspensa ‘Painéis’, selecione ‘M. Ferramentas’.
Várias medidas como comprimento, área e ângulo podem ser medidas diretamente no software SEM. Para realizar uma dessas medidas, clique no ícone desejado na janela M. Ferramentas.
Role até o local de medição na imagem SEM. As medições são feitas clicando na imagem para criar pontos de referência que serão analisados pelo software. Os pontos de dados medidos podem ser inseridos diretamente na imagem, se desejado pelo usuário.
As imagens são então salvas no computador.

A microscopia eletrônica de varredura, ou SEM, é uma técnica poderosa usada em química e análise de materiais que usa um feixe de elétrons digitalizado para analisar a estrutura da superfície e a composição química de uma amostra.

Microscópios de luz modernos são limitados pela interação de ondas de luz visíveis com um objeto, chamado difração. A menor distância solucionável entre dois objetos, ou a resolução lateral, varia dependendo do tamanho do padrão de difração em comparação com o tamanho do objeto. Como resultado, os microscópios leves têm uma ampliação máxima de até 1.000X e uma resolução lateral de até 200 nm em situações ideais.

O SEM não é limitado pela difração, pois usa um feixe de elétrons em vez de luz. Portanto, um SEM pode atingir ampliações de até um milhão de X com resolução lateral subnómetro. Além disso, o SEM não se limita aos recursos de imagem apenas no plano focal, como acontece com a microscopia leve. Assim, objetos fora do plano focal são resolvidos, em oposição à microscopia de luz onde eles parecem embaçados. Isso fornece até 300 vezes mais profundidade de campo com SEM.

Os químicos usam amplamente o SEM para analisar a composição, estrutura e forma da superfície de entidades nanoescala, como partículas catalisadoras.

Este vídeo delineará os princípios do instrumento SEM e demonstrará os fundamentos da preparação e operação da amostra SEM em laboratório.

No SEM, as amostras devem ser condutoras para imagens convencionais. Amostras não condutoras são revestidas com uma fina camada de metal, como o ouro. As imagens são então geradas através da varredura de um feixe focalizado de elétrons de alta energia através da amostra.

O feixe de elétrons usado no SEM é gerado por uma arma eletrônica, equipada com um cátodo de filamento de tungstênio. Os elétrons são impulsionados em direção ao ânodo, na direção da amostra, por um campo elétrico.

O feixe de elétrons é então focado em lentes condensadoras, e entra na lente objetiva. A lente objetiva deve ser calibrada pelo usuário para concentrar o feixe de elétrons em uma posição fixa na amostra. O feixe focalizado é então rasterizado através da amostra.

Quando os elétrons primários interagem com a amostra, eles encapsulam a uma profundidade que depende da energia do feixe de elétrons. Essa interação com a superfície resulta na emissão de elétrons secundários e recattered, que são então medidos por seus respectivos detectores.

A intensidade do sinal dos elétrons secundários emitidos varia dependendo do ângulo da amostra. Superfícies perpendiculares ao feixe liberam menos elétrons secundários e, portanto, parecem mais escuras. Na borda das superfícies, mais elétrons são liberados e a área parece mais brilhante. Este fenômeno produz imagens com aparência 3D bem definida, como mostra esta varredura SEM de amianto.

Em contraste, elétrons rescattered são refletidos na direção oposta do feixe de elétrons. A intensidade de detecção aumenta com o aumento do número atômico da amostra, permitindo a aquisição de informações composicionais de uma superfície, como mostrado nesta imagem de backscatter de inclusões no vidro.

Agora que os princípios do instrumento SEM foram delineados, o funcionamento básico de um SEM será demonstrado em laboratório.

Para começar, cubra a amostra colocando-a em um stub de amostra. Certifique-se de que a amostra está completamente seca e desgaseada. Se necessário, a fita de carbono condutora de dois lados pode ser usada para aderir a amostra ao stub. Coloque a amostra em um sistema de sputtering. Sputter alguns nanômetros de ouro na amostra. A espessura da camada de ouro variará dependendo se o revestimento interferir com a morfologia da amostra.

Remova a amostra do sistema de sputtering. Certifique-se de que há uma ponte condutora desde a superfície da amostra até a amostra metálica.

Uma vez revestida a amostra, ela está pronta para ser image. Para isso, primeiro desabase a câmara de amostra SEM e permita que a câmara atinja pressão nominal.

Abra o compartimento de amostra SEM e remova o estágio da amostra. Coloque o stub sobre o estágio da amostra e aperte o stub no lugar.

Se a distância entre a lente e a amostra, chamada de distância de trabalho, não puder ser controlada pelo software, certifique-se de que o estágio e o stub tenham a altura adequada para obter uma imagem.

Coloque o estágio da amostra na câmara de amostra e feche o compartimento.

Ligue as bombas de vácuo e deixe o sistema bombear para baixo.

Para começar a imagem, abra o software SEM. Selecione a tensão de operação desejada variando de 1 a 30 kV. Com materiais de alta densidade, devem ser utilizadas tensões de aceleração mais altas. Selecione baixa tensão acelerada para materiais de baixa densidade.

A maioria dos softwares SEM inclui um recurso de foco automático. Isso adquirirá um foco da amostra para usar como ponto de partida.

Defina a ampliação para o nível mínimo de zoom de 50X.

O SEM tem diferentes modos de varredura, como varredura rápida e varredura lenta. O modo de varredura mais rápido oferece uma taxa de atualização mais rápida da tela com menor qualidade. Selecione o modo de varredura rápida para começar, a fim de encontrar a amostra e iniciar o foco grosseiro.

Ajuste o foco do curso até que a imagem fique mais nítida. Em seguida, ajuste o posicionamento do palco para que a região de interesse possa ser vista no visor.

Primeiro, concentre-se na menor ampliação usando o foco grosseiro. Em seguida, aumente o nível de ampliação até que o recurso desejado seja observado. Ajuste o foco do curso para focar aproximadamente a imagem nesta ampliação. Se necessário, ajuste um foco grosseiro quando a ampliação aumentar.

Em seguida, ajuste o foco fino para melhorar ainda mais a imagem. Repita essas etapas de foco cada vez que a ampliação for aumentada.

Distorções assimétricas do feixe podem causar desfoque da imagem, chamada tigmatismo, mesmo quando a amostra está bem focada. Para diminuir esse efeito, aumente a ampliação para o nível máximo e concentre a imagem usando o foco fino. Em seguida, ajuste a estigma na direção x e y para remodelar o feixe.

Continue ajustando as configurações de foco e estigma até que a imagem esteja o mais focada possível no aumento do nível de ampliação.

Em seguida, retorne ao nível de ampliação desejado.

A imagem SEM pode ser adquirida no modo “foto lenta” ou “foto rápida”. O modo “foto rápida” cria uma imagem de menor qualidade, mas é adquirido mais rapidamente. O modo “foto lenta” cria uma imagem de maior qualidade, mas pode saturar a superfície com elétrons.

Para medir recursos dentro da imagem capturada, utilize as ferramentas de medição do software.

A maioria dos instrumentos inclui opções de medição, como comprimento, área e ângulo.

Para determinar o comprimento, selecione a distância a ser medida na imagem SEM. Clique na imagem para criar os pontos de referência que serão analisados pelo software.

Quando terminar, desligue o MEI de acordo com as diretrizes dos fabricantes.

A microscopia eletrônica de varredura é usada para imagens de uma ampla gama de amostras.

O SEM pode ser usado para imagens complexas e materiais altamente estruturados, como uma membrana de fibra de carbono.

A amostra apresentou alto grau de porosidade e estrutura tridimensional; uma propriedade que é altamente desejável para aplicações como a catálise.

O SEM também pode ser usado para imagens de amostras biológicas, como bactérias. Neste exemplo, os cabelos como apêndices, ou pili, de bactérias intestinais foram imageados com SEM.

Helicobacter pylori foram cultivados em placas de ágar de sangue, e as bactérias semeadas em deslizamentos de tampa de vidro.

Foram montadas amostras totalmente secas e revestidas com 5 nm de paládio-ouro para tornar a amostra condutora.

Finalmente, a amostra foi imageda utilizando SEM. H. pylori eram facilmente visíveis, com pili nanoescala mensurável.

Este exemplo descreve como o tecido cerebral pode ser incorporado em uma resina estável, e então imagedo em três dimensões usando um feixe de íons focalado e SEM.

Primeiro, o tecido cerebral foi fixado e embutido na resina. Em seguida, a região de interesse identificou e cortou com um microtome.

A amostra foi então inserida no microscópio eletrônico de varredura do feixe de íons focalizado para imagens tridimensionais. O feixe de íons focalado foi então usado para remover sequencialmente camadas finas da amostra. Cada camada foi imageda antes da remoção usando backscatter SEM.

Você acabou de assistir a introdução do JoVE à microscopia eletrônica. Agora você deve entender os princípios básicos de operação do SEM e como preparar e analisar uma amostra SEM.

Obrigado por assistir!

Results

O SEM, visto na Figura 2a,tem sido utilizado para fazer medições e adquirir fotos de amostras. A amostra consistia em sal de cloreto de sódio (NaCl). Foi colocado no stub como visto na Figura 2b, em seguida, alguns nanômetros de ouro foi sputtered sobre ele para torná-lo condutivo. A amostra condutora foi então colocada na área amostral SEM, conforme visto na Figura 2c.

As imagens SEM foram obtidas nos níveis de ampliação 50X, 200X, 500X, 1.000X e 5.000X, como visto na Figura 3. A Figura 3a mostra uma visão olho-de-pássaro da amostra de sal na ampliação de 50X. A Figura 3b então se aproxima de uma partícula de sal individual em uma ampliação de 200X. A Figura 3c mostra este mesmo nível de ampliação, mas inclui medições de área e diâmetro feitas dentro do software SEM. A figura 3d então amplia para 500X, mostrando a área de interesse na partícula de sal. A Figura 3e mostra uma ampliação de 1.000X, permitindo observar o canto da partícula de sal que foi danificada. A Figura 3f mostra uma ampliação de 5.000X, permitindo que o usuário visualize a estrutura da partícula salgada.

Figura 2. a Imagem de SEM. (b) Sal naCl colocado na amostra com fita de carbono. c Amostragem colocada em fase amostral SEM após ser tratada com revestimento dourado.

Figura 3. Imagens SEM da amostra em vários níveis de ampliação: (a) 50X, (b) 200X, (c) 200X com medições, (d) 500X, (e) 1.000X e (f) 5.000X.

Applications and Summary

O SEM é uma ferramenta muito poderosa que é comum na maioria das instituições de pesquisa por causa de sua capacidade de imagem de qualquer objeto que seja condutor, ou tenha sido tratado com um revestimento condutor. O SEM tem sido utilizado para imagens de objetos como dispositivos semicondutores,² membranas biológicas,³ e insetos,⁴ entre outros. Também utilizamos o SEM para analisar nanofibras e materiais à base de papel, biomateriais, estruturas micropatteradas. Claro, existem materiais, como líquidos, que não podem ser colocados em um SEM padrão para imagem, mas o desenvolvimento contínuo de microscópios eletrônicos de varredura ambiental (ESEM) permite tal funcionalidade. ESEM é semelhante ao SEM na qual usa uma arma eletrônica e analisa a interação eletrônica com a amostra. A principal diferença é que o ESEM é dividido em duas câmaras separadas. A câmara superior consiste na arma eletrônica e entra em um estado de alto vácuo, enquanto a câmara inferior contém a amostra e entra em um estado de alta pressão. Como a área da amostra não precisa entrar em um vácuo, amostras molhadas ou biológicas podem ser usadas durante o processo de imagem. Outro benefício do ESEM é que a amostra não precisa ser revestida com material condutor. No entanto, o ESEM tem algumas desvantagens de baixo contraste de imagem e pequena distância de trabalho devido ao ambiente gasoso na câmara amostral. . A regra geral é que se você for capaz de revestir uma amostra com uma camada condutora, ela pode ser imageda em um SEM, permitindo que quase todos os objetos sólidos sejam analisados.

References

Goldstein, J., Newbury, D., Joy, D., Lyman, C., Echlin, P., Lifshin, E., Sawyer, L., Michael, J. Scanning Electron Microscopy and X-ray Microanalysis. 3^rd Ed. Springer, New York, NY. (2003).
Purandare, S., Gomez, E.F., Steckl, A.J. High brightness phosphorescent organic light emitting diodes on transparent and flexible cellulose films. Nanotechnology. 25, 094012 (2014).
Masuda, Y., Yamanaka, N., Ishikawa, A., Kataoka, M., Aral, T., Wakamatsu, K., Kuwahara, N., Nagahama, K., Ichikawa, K., Shimizu, A. Glomerular basement membrane injuries in IgA nephropathy evaluated by double immunostaining for a5(IV) and a2(IV) chains of type IV collagen and low-vacuum scanning electron microscopy. Clinical and Experimental Nephrology. 1-9. (2014).
Kang, J.H., Lee, Y.J., Oh, B.K., Lee, S.K. Hyun, B.R. Lee, B.W, Choi, Y.G., Nam, K.S., Lim, J.D. Microstructure of the water spider (Argyroneta aquatic) using the scanning electron microscope Journal of Asia-Pacific Biodiversity. 7 484-488 (2014).

Transcript

Scanning electron microscopy, or SEM, is a powerful technique used in chemistry and material analysis that uses a scanned electron beam to analyze the surface structure and chemical composition of a sample.

Modern light microscopes are limited by the interaction of visible light waves with an object, called diffraction. The smallest resolvable distance between two objects, or the lateral resolution, varies depending on the size of the diffraction pattern as compared to the object size. As a result, light microscopes have a maximum magnification of up to 1,000X and a lateral resolution of up to 200 nm in ideal situations.

SEM is not limited by diffraction, as it uses a beam of electrons rather than light. Therefore, an SEM can reach magnifications of up to one million X with sub-nanometer lateral resolution. In addition, SEM is not limited to imaging features only in the focal plane, as with light microscopy. Thus, objects outside of the focal plane are resolved, as opposed to light microscopy where they appear blurry. This provides up to 300 times increased depth of field with SEM.

Chemists widely use SEM to analyze surface composition, structure, and shape of nanoscale entities, such as catalyst particles.

This video will outline the principles of the SEM instrument, and demonstrate the basics of SEM sample preparation and operation in the laboratory.

In SEM, samples must be conductive for conventional imaging. Non-conductive samples are coated with a thin layer of metal, such as gold. Images are then generated by scanning a focused beam of high-energy electrons across the sample.

The electron beam used in SEM is generated by an electron gun, fitted with a tungsten filament cathode. The electrons are propelled toward the anode, in the direction of the sample, by an electric field.

The electron beam is then focused at condenser lenses, and enters the objective lens. The objective lens must be calibrated by the user to focus the electron beam on a fixed position on the sample. The focused beam is then raster scanned across the sample.

When the primary electrons interact with the sample, they tunnel to a depth that is dependent on the electron beam energy. This interaction with the surface results in the emission of secondary and backscattered electrons, which are then measured by their respective detectors.

The signal intensity of the emitted secondary electrons varies depending on the angle of the sample. Surfaces perpendicular to the beam release fewer secondary electrons, and therefore appear darker. At the edge of surfaces, more electrons are released and the area appears brighter. This phenomenon produces images with a well-defined 3D appearance, as shown in this SEM scan of asbestos.

In contrast, backscattered electrons are reflected in the opposite direction of the electron beam. Detection intensity increases with increasing atomic number of the sample, enabling the acquisition of compositional information of a surface, as shown in this backscatter image of inclusions in glass.

Now that the principles of the SEM instrument have been outlined, the basic operation of an SEM will be demonstrated in the laboratory.

To begin, sputter coat the sample by placing it onto a sample stub. Make sure that the sample is completely dry and degassed. If necessary, double-sided conductive carbon tape may be used to adhere the sample to the stub. Place the sample into a sputtering system. Sputter a few nanometers of gold onto the sample. The thickness of the gold layer will vary depending on if the coating interferes with the morphology of the sample.

Remove the sample from the sputtering system. Ensure that there is a conductive bridge from the sample surface to the metal stub.

Once the sample has been coated, it is ready to be imaged. To do so, first vent the SEM sample chamber and allow the chamber to reach nominal pressure.

Open the SEM sample compartment, and remove the sample stage. Place the stub onto the sample stage, and tighten the stub in place.

If the distance between the lens and sample, called the working distance, cannot be controlled by the software, ensure that the stage and stub have the proper height to obtain an image.

Put the sample stage into the sample chamber, and close the compartment.

Turn on the vacuum pumps and allow the system to pump down.

To begin imaging, open the SEM software. Select the desired operating voltage ranging from 1–30 kV. With high-density materials, higher acceleration voltages should be used. Select low accelerating voltage for low-density materials.

Most SEM software includes an auto focus feature. This will acquire a focus of the sample to use as a starting point.

Set the magnification to the minimum zoom level of 50X.

SEM has different scan modes such as fast scan, and slow scan. Faster scan mode provides faster refresh rate of the screen with lower quality. Select the fast scan mode to begin, in order to find the sample and begin coarse focusing.

Adjust the course focus until the image becomes sharper. Next, adjust the stage positioning so the region of interest can be seen on the display.

First, focus at the lowest magnification using the coarse focus. Then, increase the magnification level until the desired feature is observed. Adjust the course focus to roughly focus the image at this magnification. If necessary, adjust a coarse focus when the magnification increased.

Then, adjust the fine focus to further improve the image. Repeat these focusing steps every time the magnification is increased.

Asymmetrical beam distortions can cause blurring of the image, called astigmatism, even when the sample is well focused. To diminish this effect, increase the magnification to the maximum level, and focus the image using the fine focus. Then adjust the stigmation in both the x and y direction to reshape the beam.

Keep adjusting the focus and stigmation settings until the image is as focused as possible at the increased magnification level.

Then return to the desired magnification level.

The SEM image can be acquired in either “slow photo” or “fast photo” mode. The “fast photo” mode creates a lower quality image, but is acquired faster. The “slow photo” mode creates a higher quality image, but may saturate the surface with electrons.

To measure features within the captured image, utilize the software’s measurement tools.

Most instruments include measurement options such as length, area, and angle.

To determine length, select the distance to be measured on the SEM image. Click on the image to create the points of reference that will be analyzed by the software.

When finished, shut down the SEM according to the manufacturers guidelines.

Scanning electron microscopy is used to image a wide range of samples.

SEM can be used to image complex and highly structured materials, such as a carbon fiber membrane.

The sample showed a high degree of porosity and three dimensional structure; a property that is highly desirable for applications such as catalysis.

SEM can also be used to image biological samples, such as bacteria. In this example, the hair like appendages, or pili, of gut bacteria were imaged with SEM.

Helicobacter pylori were grown on blood agar plates, and the bacteria seeded onto glass cover slips.

Fully dried samples were mounted, and coated with 5 nm of palladium-gold to make the sample conductive.

Finally, the sample was imaged using SEM. H. pylori were easily visible, with measurable nanoscale pili.

This example describes how brain tissue can be embedded into a stable resin, and then imaged in three dimensions using a focused ion beam and SEM.

First, brain tissue was fixed and embedded in resin. Then the region of interest identified and sliced with a microtome.

The sample was then inserted into the focused ion beam scanning electron microscope for three-dimensional imaging. The focused ion beam was then used to sequentially remove thin layers of the sample. Each layer was imaged prior to removal using backscatter SEM.

You’ve just watched JoVE’s introduction to scanning electron microscopy. You should now understand the basic operating principles of SEM and how to prepare and analyze an SEM sample.

Thanks for watching!

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