Rab10 Phosphorylation Detection by LRRK2 Activity Using SDS-PAGE with a Phosphate-binding Tag

Genta Ito; Taisuke Tomita

doi:10.3791/56688

Deteção de fosforilação Rab10 pela atividade LRRK2 utilizando SDS-PAGE com um Tag de ligação de f...

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Biochemistry

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Rab10 Phosphorylation Detection by LRRK2 Activity Using SDS-PAGE with a Phosphate-binding Tag

Deteção de fosforilação Rab10 pela atividade LRRK2 utilizando SDS-PAGE com um Tag de ligação de fosfato

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08:55 min

December 14, 2017

DOI: 10.3791/56688-v

Genta Ito¹, Taisuke Tomita^1,2

¹Laboratory of Brain and Neurological Disorders, Graduate School of Pharmaceutical Sciences,The University of Tokyo, ²Laboratory of Neuropathology and Neuroscience, Graduate School of Pharmaceutical Sciences,The University of Tokyo

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

O presente estudo descreve um método simples de detectar níveis endógenos de fosforilação de Rab10 pela rica em leucina repetição quinase 2.

O objetivo geral deste experimento é detectar a fosforilação de Rab10 por LRRK2 usando SDS-PAGE com uma etiqueta de ligação de fosfato. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo de pesquisa de Parkinson, como como as mutações da doença em LRRK2 afetam a fosforilação de Rab10. A principal vantagem desta técnica é que se pode ter uma estimativa aproximada da estequiometria da fosforilação de Rab10 usando um western blot simples.

Muitas das etapas deste protocolo são bastante padronizadas e são descritas com detalhes suficientes pelo protocolo de texto que acompanha este vídeo. Aqui, queremos mostrar as etapas que mais se beneficiam da instrução visual. Prepare placas de células HEK293 transfectadas conforme descrito no protocolo de texto.

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