Um cinética baseada em fluorescência Ca2 + mobilização ensaio para identificar agonistas do Receptor acoplado à proteína G, antagonistas e moduladores alostéricos

O objetivo geral deste ensaio baseado em células é identificar e caracterizar moléculas capazes de estimular ou inibir a mobilização intracelular de cálcio mediada por receptor acoplado à proteína G. Este método pode ser um ensaio valioso para a descoberta de medicamentos com receptores acoplados à proteína G, pois pode ser usado para rastrear moléculas que modificam os corpos de cálcio intracelulares mediados por receptores. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite que moléculas com propriedades agonísticas ou antagônicas sejam identificadas dentro de um mesmo ensaio.

Este ensaio pode ajudar na descoberta de novos candidatos a medicamentos que atuam em receptores acoplados à proteína G, prometendo alvos terapêuticos que desempenham um papel em muitas doenças humanas. No dia da passagem celular, cubra cada poço de uma placa de poliestireno de 96 poços de parede preta com fundo transparente com 100 microlitros de solução de gelatina a 0,1% e incube as placas por duas horas em temperatura ambiente. Enquanto a gelatina está solidificando, use uma solução de tripsina EDTA para levantar as células de interesse do fundo de seu frasco de cultura, ressuspendendo as células em meio de crescimento fresco em um tubo cônico de 50 mililitros depois de se separarem.