Fonte: Laboratório do Dr. Ryoichi Ishihara — Delft University of Technology
A espectroscopia de Raman é uma técnica para analisar modos vibracionais e de baixa frequência em um sistema. Em química é usado para identificar moléculas por sua impressão digital Raman. Na física de estado sólido é usado para caracterizar materiais, e mais especificamente para investigar sua estrutura cristalina ou cristalina. Comparado com outras técnicas para investigar a estrutura cristalina (por exemplo, microscópio eletrônico de transmissão e difração de raios-X) a microespectroscopia de Raman não é destrutiva, geralmente não requer preparação de amostras, e pode ser realizada em pequenos volumes de amostra.
Para realizar a espectroscopia raman um laser monocromático é brilho em uma amostra. Se necessário, a amostra pode ser revestida por uma camada transparente que não é Raman ativa (por exemplo, SiO2) ou colocada em água DI. A radiação eletromagnética (tipicamente na faixa infravermelha próxima, visível ou perto de ultravioleta) emitida a partir da amostra é coletada, o comprimento de onda laser é filtrado (por exemplo, por um entalhe ou filtro de bandpass), e a luz resultante é enviada através de um monocromador (por exemplo, uma grade) para um detector CCD. Usando isso, a luz dispersa inelástica, originária da dispersão de Raman, pode ser capturada e usada para construir o espectro Raman da amostra.
No caso da microespectroscopia raman, a luz passa por um microscópio antes de chegar à amostra, permitindo que ela seja focada em uma área tão pequena quanto 1 μm2. Isso permite um mapeamento preciso de uma amostra, ou microscopia confocal, a fim de investigar pilhas de camadas. No entanto, é preciso ter cuidado para que o pequeno e intenso ponto laser não danifique a amostra.
Neste vídeo explicaremos brevemente o procedimento para a obtenção de um espectro raman, e um exemplo de um espectro Raman capturado a partir de nanotubos de carbono será dado.
A espectroscopia de Raman depende da dispersão de Raman, que é a dispersão inelástica de um fóton com modos de baixa frequência (por exemplo, modos vibracionais ou rotacionais) em um sistema de átomos ou dentro de moléculas. Isso contrasta com a espectroscopia de IR, que depende da absorção da luz IR por modos de baixa frequência em um sistema. Ambas as técnicas fornecem informações semelhantes, mas complementares. No entanto, isso não significa que as características vibracionais sejam raman e IR ‘ativos’, ou seja, eles aparecem quando sondados. Para moléculas, uma vibração é Raman ativa quando causa uma mudança na polarizabilidade, enquanto para espectroscopia de RI uma vibração é visível quando causa uma mudança no momento do dipolo. Isso significa que para a espectroscopia de Raman não é necessário nenhum momento de dipolo permanente. Para moléculas com um centro de simetria, ambos os métodos espectroscópicos são exclusivos mútuos. As ligações polares geralmente dão um sinal de Raman fraco, enquanto as ligações neutras geralmente são intensas por Raman, pois envolvem uma grande mudança na polarizabilidade durante as vibrações. Finalmente, dois draw-backs de espectroscopia de IR são que a água não pode ser usada como solvente e a preparação da amostra é mais complexa. Um espectroscópio Raman é, no entanto, mais caro.
O fóton emitido após a dispersão tem uma frequência menor ou maior do que o fóton incidente, que é chamado de dispersão de Stokes e anti-Stokes, respectivamente. As linhas Stokes e anti-Stokes têm a mesma mudança de energia, mas sua magnitude difere dependendo, por exemplo, da temperatura do substrato. Para moléculas, os fótons interagem com as ligações e vibrações em uma molécula que são sensíveis ao comprimento de onda laser usado. Isso faz com que a molécula seja saída para um estado de energia virtual por um curto período de tempo, após a qual ela inelasticamente emite um fóton. No caso de materiais de estado sólido, o fóton de entrada cria e o par de orifícios de elétrons, que pode se espalhar com um fônon na rede de cristal. Um fônon é uma quase-partícula, que descreve um movimento vibracional quantizado coletivo em uma rede de átomos ou moléculas em matéria condensada. Após este evento de dispersão, o buraco de elétrons se decomcai e emite um fóton com uma frequência deslocada.
O espectro desses fótons dispersos é o espectro Raman, que mostra a intensidade dos fótons dispersos versus a diferença de frequência (medida em números de ondas com unidades cm-1) aos fótons incidentes. Os picos só aparecem no espectro Raman se os modos vibracionais no sistema forem sensíveis ao comprimento de onda laser usado, e sua intensidade e localização podem diferir entre comprimentos de onda laser. Normalmente, os picos caem dentro de uma faixa de 500-2.000 cm-1, e picos de ordem mais altas podem ser encontrados em torno de múltiplos do número de ondas do pico raman de primeira ordem. A intensidade dos picos depende de muitos fatores, incluindo o poder do laser, foco, tempo de aquisição e a probabilidade de a dispersão ocorrer. Assim, as intensidades entre espectros não podem ser comparadas diretamente, e devem ser sempre convertidas em proporções de intensidade. A largura total ao meio máximo (FWHM) de um pico pode ser comparada diretamente entre diferentes medições.
A espectroscopia de Raman explora a dispersão da luz para coletar informações moleculares exclusivas do material sob investigação.
Quando a luz atinge uma molécula, a maior parte da energia não é absorvida, mas se espalha na mesma energia que a luz do incidente. No entanto, uma pequena fração de radiação dispersa aparece em energias diferentes da radiação incidente.
Essas mudanças de energia correspondem a estados vibracionais de moléculas e podem ser usadas para identificar, quantificar e examinar a composição molecular da amostra em análise.
Este vídeo introduzirá a teoria por trás dessa técnica, demonstrará um procedimento para realizar o mesmo em laboratório e apresentará algumas das maneiras pelas quais esse método está sendo aplicado nas indústrias hoje.
A interação da radiação com uma amostra pode ser considerada como colisões entre fótons e moléculas.
Um fóton de entrada excita a molécula a um estado virtual animado de curta duração do qual rapidamente se deteriorará de volta ao seu estado terrestre e emitirá um fóton disperso. Quando não há troca de energia ocorrendo, um fóton disperso tem o mesmo comprimento de onda que o fóton incidente, e isso é chamado de dispersão elástica de Rayleigh.
A dispersão de Raman representa moléculas submetidas à excitação vibracional ou relaxamento como resultado da interação inelástica com fótons. Se a molécula é elevada de um estado terrestre para um estado virtual animado e cai de volta para um estado vibracional de maior energia, então ela ganhou energia do fóton. Isso também se chama Dispersão Stokes.
Se uma molécula em uma energia vibracional mais alta, ganha energia e cai de volta para um estado terrestre mais baixo, então a molécula perdeu energia para o fóton, dando origem à dispersão anti-Stokes. À temperatura ambiente, o número de moléculas no estado terrestre é maior do que aquelas em um estado de energia mais alta, fazendo com que a dispersão de Stokes seja mais intensa e mais comumente examinada, do que a dispersão anti-Stokes.
Vibrações moleculares e rotações decorrentes dessas interações com fótons incidentes incluem alongamento simétrico e assimétrico, tesoura, balanço, abanamento e torção.
Essas vibrações moleculares são usadas não apenas na espectroscopia de Raman, mas também junto com ela com outras técnicas, como espectroscopia infravermelha. Uma vibração é “Raman-ativo”, ou detectável pela espectroscopia de Raman, quando causa uma mudança na polarizabilidade, ou na quantidade de distorção, de sua nuvem eletrônica. Uma vibração é infravermelha ativa quando induz uma mudança em seu momento dipolo.
Por exemplo, trechos simétricos, como a expansão do dióxido de carbono, fazem com que os elétrons se afastem dos núcleos e se tornem facilmente polarizados, mas não mudem o momento do dipolo. Um estiramento assimétrico, por outro lado, resulta em mudança no momento do dipolo, mas nenhuma mudança na polarizabilidade. Por essas razões, Raman e espectroscopia infravermelha são tratados como métodos complementares de análise química.
A espectroscopia de Raman é realizada brilhando um intenso laser monocromático em uma amostra. A radiação emitida da amostra é coletada, e o comprimento de onda laser é filtrado. A luz dispersa é enviada através de um monocromador para um detector ccd. Na microespectroscopia de Raman, o laser passa por um microscópio antes de chegar à amostra, permitindo a resolução espacial ao nível do míccro.
O espectro Raman de uma amostra é um gráfico de intensidade de radiação dispersa em função da mudança nos números de ondas do da radiação incidente. Formas e intensidades de pico podem indicar estrutura molecular, simetria, qualidade do cristal e concentração de material.
Agora que você entende a teoria por trás deste método, vamos explorar um protocolo para realizar a microespectroscopia de Raman em uma amostra.
Para iniciar o procedimento, ligue o laser necessário e selecione a óptica correta para o comprimento de onda utilizado. Dê ao laser 15 minutos para aquecer antes de começar o experimento. Enquanto isso, ligue o computador e carregue o software do instrumento.
Escolha o comprimento de onda correto para o laser usado. Realize a calibração necessária do espectroscópio Raman. Isso pode ser feito usando um wafer de silício colocado no estágio do microscópio, mas aqui uma amostra interna de referência de silício é usada. O espectro Raman é obtido usando uma energia e tempo de exposição apropriados. O silício deve dar um forte pico em torno de 520 números de ondas.
Uma vez calibrado, coloque a amostra sob o microscópio e concentre-se na camada de interesse. Um gabinete escuro é usado para remover a luz perdida. Certifique-se de que o caminho do laser não está obstruído por absorvedores de luz ou camadas ativas de Raman de modo a obter um espectro limpo.
Selecione a gama de números de ondas que devem ser escaneadas pelo monocromático. Selecione uma intensidade laser que produz sinal suficiente, mas não danifica o material sob investigação. Isso pode ser verificado por imagem no mesmo local duas vezes. Se o espectro mudar, pode ter ocorrido danos.
Se a amostra estiver em um gabinete completamente escuro, não é necessário uma varredura de fundo. Adquira o espectro da amostra.
Investigue os dados usando software apropriado e comparando com a literatura disponível. Os raios cósmicos aparecem como picos afiados e intensos que devem ser removidos. A interferência a laser com certos substratos ou contaminantes pode resultar em uma linha de base, que é removida montagem de uma curva apropriada para as regiões do espectro que não se espera conter picos raman originários da amostra. Para alguns materiais, os diferentes picos de Raman se sobrepõem a um grau que o pico de desconvolução pode ser necessário.
Após a competição dessas etapas, os espectros resultantes representarão dados qualitativos e quantitativos sobre as espécies presentes na amostra.
Aqui, examinaremos o espectro Raman de nanotubos de carbono, que são rolos únicos ou multicamadas muito pequenos ou multicamadas de folhas de grafeno. O espectro Raman retirado de nanotubos de carbono multi-paredes usando um laser de 514 nm é mostrado aqui.
Como os nanotubos de carbono são representados por treliças de cristal, suas vibrações são representadas por “modos” de vibração coletiva. O pico do modo G em 1.582 números de ondas está relacionado com a ligação carbono-carbono hibridizada sp2 que pode ser encontrada em qualquer material gracótico. Há também um proeminente pico D 1.350 números de ondas representa dispersão, causada por uma desordem na rede de cristal. A razão da intensidade dos modos G e D quantifica a qualidade estrutural do nanotubo.
Desenvolvimentos em lasers e tecnologias de computador fizeram da outrora tediosa espectroscopia de Raman uma das técnicas mais utilizadas para análise química.
As células de combustível de óxido sólido, ou SOFCs, têm o potencial de se tornar uma grande fonte de energia de baixas emissões nas próximas décadas. Essas células trabalham convertendo eletroquimicamente a energia de um combustível e um oxidante, neste caso, óxidos sólidos, em eletricidade. Ainda há alguma dificuldade em caracterizar o mecanismo eletroquímico dos materiais de células de combustível in situ. No entanto, a Espectroscopia de Raman está sendo cada vez mais usada para mapear mecanismos intrincados de reação química no ânodo.
Objetos de arte são examinados espectroscopicamente para revelar sua idade, composição e otimizar condições de conservação. A natureza não destrutiva da microespectroscopia de Raman torna-a adequada para este fim. Focando um laser na amostra de arte e plotando a intensidade da luz inestaticamente dispersa, podem ser obtidos espectros de pigmentos dos artistas, mídia de ligação ou vernizes. A espectroscopia de Raman é até usada para identificar falsificação de obras de arte.
Você acabou de assistir a introdução de JoVE à Espectroscopia raman para análise química. Agora você deve entender os princípios por trás do efeito Raman e como ele se aplica à espectroscopia de Raman, como realizar sua própria análise raman no laboratório, e algumas das maneiras emocionantes em que está sendo aplicada nas indústrias hoje.
Obrigado por assistir!
O espectro Raman retirado de nanotubos de carbono multi-paredes usando um laser de 514 nm é mostrado na Figura 1. A linha de base linear foi removida e os dados foram normalizados para a característica mais intensa em torno de 1.582 cm-1.
Vários picos podem ser observados, que se originam de diferentes características cristalinas da amostra. O pico D a 1.350 cm-1 origina-se formando duplo fônon elástico de ressonância dispersão com um defeito na rede de cristal. O pico G (1.582 cm-1) está relacionado com a ligação C-C hibridizada sp2 e pode ser encontrado em qualquer material gracótico. Este pico forte na verdade tem um ombro no lado direito do espectro, que é o pico D’ em torno de 1.620 cm-1. Este pico está novamente relacionado com defeitos.
Em números de ondas mais altas vários outros picos podem ser observados. O pico G’ (ou 2D) em torno de 2.700 cm-1 é o tom da banda D, e é causado por dois processos de dispersão de fônons inelásticos. Por causa disso, não precisa de defeitos e pode ser encontrado em amostras cristalinas altas. O mesmo acontece com a banda 2D em torno de 3.240 cm-1, que é o tom da banda D. Finalmente, o D+G em torno de 2.930 cm-1 é o tom combinado da banda D e G.
Figura 1. Espectro raman de nanotubos de carbono multi-paredes. O espectro foi obtido utilizando um laser de 514 nm, a linha de base linear foi removida mediante a montagem das áreas planas do espectro e o espectro é normalizado para o pico G.
A espectroscopia de Raman pode ser aplicada em uma ampla gama de campos, desde (bio)química até física de estado sólido. Em química, a espectroscopia de Raman pode ser usada para investigar mudanças em ligações químicas e identificar moléculas específicas (orgânicas ou inorgânicas) usando sua impressão digital raman. Isso pode ser feito na fase de gás, líquido ou estado sólido do material. Tem sido, por exemplo, usado na medicina para investigar os componentes ativos dos medicamentos, e os analisadores de gás Raman são usados para monitoramento em tempo real de gases respiratórios durante a cirurgia.
Na física de estado sólido, a espectroscopia de Raman é usada para caracterizar materiais e determinar sua orientação cristalina, composição, estresse, temperatura e cristalidade. Tem sido usado para identificar composições minerais, e pode ser usado em análises de evidências forenses. Também é possível observar plasmons, e outras excitações de baixa frequência do sólido usando espectroscopia de Raman. Especificamente para materiais gralíticos, tem sido usado para investigar a cristalinalidade, o diâmetro de nanotubos de parede única e dupla, e sua quiralidade. Para grafeno também pode ser usado para identificar o número de camadas de grafeno.
Uma grande vantagem da espectroscopia de Raman sobre outros métodos espectroscópicos é que normalmente não requer preparação de amostras se você pode se concentrar na amostra com um microscópio, pode analisar amostras de tamanho μm, não requer contato e não é destrutivo.
Raman spectroscopy exploits the scattering of light to gather molecular information unique to the material under investigation.
When light strikes a molecule, most of the energy is not absorbed, but scatters at the same energy as the incident light. However, a small fraction of scattered radiation appears at energies differing from the incident radiation.
These shifts in energy correspond to vibrational states of molecules and can be used to identify, quantify, and examine the molecular composition of the sample under analysis.
This video will introduce the theory behind this technique, demonstrate a procedure to perform the same in the laboratory, and present some of the ways in which this method is being applied in industries today.
The interaction of radiation with a sample can be thought of as collisions between photons and molecules.
An incoming photon excites the molecule to a short-lived virtual excited state from which it will quickly decay back to its ground state and emit a scattered photon. When there is no exchange in energy taking place, a scattered photon has the same wavelength as the incident photon, and this is called elastic Rayleigh scattering.
Raman scattering represents molecules undergoing vibrational excitation or relaxation as a result of inelastic interaction with photons. If the molecule is raised from a ground state to a virtual excited state and drops back to a higher energy vibrational state, then it has gained energy from the photon. This is also called Stokes scattering.
If a molecule in a higher vibrational energy, gains energy and drops back down to a lower ground state, then the molecule has lost energy to the photon, giving rise to anti-Stokes scattering. At room temperature, the number of molecules in the ground state is higher than those in a higher energy state causing Stokes scattering to be more intense and more commonly examined, than anti-Stokes scattering.
Molecular vibrations and rotations arising from these interactions with incident photons include symmetrical and asymmetrical stretching, scissoring, rocking, wagging, and twisting.
These molecular vibrations are used not only in Raman spectroscopy, but also along side it with other techniques, like infrared spectroscopy. A vibration is “Raman-active”, or detectable by Raman spectroscopy, when it causes a change in the polarizability, or the amount of distortion, of its electron cloud. A vibration is infrared-active when it induces a change in its dipole moment.
For example, symmetrical stretches, like expansion in carbon dioxide, cause electrons to move away from nuclei and become easily polarizable but do not change the dipole moment. An asymmetric stretch, on the other hand, results in change in dipole moment, but no change in polarizability. For these reasons, Raman and infrared spectroscopy are treated as complementary methods of chemical analysis.
Raman spectroscopy is performed by shining an intense monochromatic laser on a sample. Radiation emitted from the sample is collected, and the laser wavelength is filtered out. Scattered light is sent through a monochromator to a CCD detector. In Raman micro-spectroscopy, the laser passes through a microscope before reaching the sample, allowing spatial resolution at the micron level.
The Raman spectrum of a sample is a plot of intensity of scattered radiation as a function of shift in wavenumbers from that of incident radiation. Peak shapes and intensities can indicate molecular structure, symmetry, crystal quality, and concentration of material.
Now that you understand the theory behind this method, let’s explore a protocol to perform Raman microspectroscopy on a sample.
To begin the procedure, turn on the required laser and select the correct optics for the wavelength used. Give the laser 15 min to warm up before beginning the experiment. In the meantime, turn on the computer and load the instrument software.
Choose the correct wavelength for the laser used. Perform the required calibration of the Raman spectroscope. This can be done using a silicon wafer placed on the microscope stage, but here an internal silicon reference sample is used. The Raman spectrum is obtained using an appropriate exposure energy and time. The silicon should give a strong peak at around 520 wavenumbers.
Once calibrated, place the sample underneath the microscope and focus on the layer of interest. A dark enclosure is used to remove stray light. Make sure the path of the laser is not obstructed by light absorbing or Raman-active layers so as to obtain a clean spectrum.
Select the range of wavenumbers that should be scanned by the monochromator. Select a laser intensity that produces sufficient signal, but doesn’t damage the material under investigation. This can be checked by imaging the same spot twice. If the spectrum changes, damage may have occurred.
If the sample is in a completely dark enclosure, a background scan is not needed. Acquire the spectrum of the sample.
Investigate the data using appropriate software and by comparing with available literature. Cosmic rays appear as sharp and intense peaks that must be removed. Laser interference with certain substrates or contaminants can result in a baseline, which is removed by fitting an appropriate curve to the regions of the spectrum that are not expected to contain Raman peaks originating from the sample. For some materials, the different Raman peaks overlap to a degree that peak deconvolution might be necessary.
After these steps are competed, resulting spectra will represent qualitative and quantitative data on species present in the sample.
Here, we’ll examine the Raman spectrum of carbon nanotubes, which are very small, hollow single or multi-layered rolls of graphene sheets. The Raman spectrum taken from multi-walled carbon nanotubes using a 514 nm laser is shown here.
Because carbon nanotubes are represented by crystal lattices, their vibrations are represented by collective vibration “modes”. The G-mode peak at 1,582 wavenumbers is related to the sp2 hybridized carbon-carbon bond that can be found in any graphitic material. There is also a prominent D peak 1,350 wavenumbers represents scattering, caused by a disorder in the crystal lattice. The ratio of the intensity of the G and D modes quantifies the structural quality of the nanotube.
Developments in lasers and computer technologies have made the once tedious Raman spectroscopy one of the most widely used techniques for chemical analysis.
Solid Oxide fuel cells, or SOFCs, have the potential to become a major source of low emissions energy in the coming decades. These cells work by electrochemically converting the energy of a fuel and an oxidant, in this case solid oxides, to electricity. There is still some difficulty in characterizing the electrochemical mechanism of the fuel cell materials in situ. However, Raman Spectroscopy is now increasingly being used to map intricate chemical reaction mechanisms at the anode.
Art objects are spectroscopically examined to reveal their age, composition, and to optimize conditions for conservation. The non-destructive nature of Raman microspectroscopy makes it well suited for this purpose. By focusing a laser on the art sample and plotting the intensity of inelastically scattered light, spectra of artists’ pigments, binding media, or varnishes can be obtained. Raman spectroscopy is even used to identify falsification of art works.
You’ve just watched JoVE’s introduction to Raman Spectroscopy for Chemical Analysis. You should now understand the principles behind the Raman effect and how it applies to Raman spectroscopy, how to perform your own Raman analysis in the lab, and some of the exciting ways in which it is being applied in industries today.
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