Name: Laboratório de criação de moscas estáveis e outros Muscoid Diptera (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Aprenda a criar moscas estáveis (Stomoxys calcitrans) para entomologia e manejo de gado usando materiais locais e meio de quatro ingredientes. Este método simples facilita pesquisas sobre desenvolvimento e controle de pragas.

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Gostaríamos de agradecer a Anthony Weinhold e os inúmeros estudantes que trabalharam connosco ao longo dos anos para suporte técnico, bem como sugestões para melhorar nosso procedimentos de criação de inseto.

1. ovo coleção (Figura 1)
<ol><li>Preparar a incitar a taça, coloque uma das extremidades do pano ~ 500 mL copo cheio de água morna (~ 40 ° C). Sobrepõem-se os lados do copo e fixe com um elástico. Dobre a ponta solta do pano volta por cima da taça.</li>
	<li>Lugar Copa a incitar na gaiola de moscas de 8 – 10 dias de idade para as mulheres Gravid de ~ 2 h. estável voa será ovipositar no pano.</li>
	<li>Remova a incitar a taça de ovos gaiola e enxaguar fora o pano egging em uma panela pequena com lavagem de garrafa.</li>
</ol>2. prepare Pan criação Larval
<ol><li>
Preparar o meio (quantidades para 1 pan de criação)
	<ol>
<li>Combinar o farelo de trigo (500 g), aparas de madeira (200 g) e farinha de peixe (115 g) em panela de prato plástico 10L e misture bem.</li>
		<li>Adicionar o bicarbonato de amónio (50 g) de água (~ 25 ° C, 1600 mL) e misture até dissolver.</li>
		<li>Adicione a solução de água de ingredientes secos e misture para não garantir nenhum material unwetted. Nível médio em panela mas não comprimir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Adicione os ovos de mosca estáveis
	<ol>
<li>Faça um sulco raso em média o comprimento da bandeja.</li>
		<li>Depósito de 1 mL de ovos de mosca estáveis (~ 8.000 ovos) no sulco com pipeta de ovo (Figura 2). Nota: Pipeta de ovo feita por um corte de uma pipeta graduada plástica no ponto desejado, inserir 100 mesh tela e colagem pipeta junta novamente.</li>
		<li>Cubra os ovos com uma fina camada do meio para evitar a dessecação.</li>
		<li>Cubra a panela com fronha, fechar com uma faixa de borracha e etiqueta. Colocar panelas no quarto larval (23 ± 2 ° C, 30 – 50% RH e 12:12 [L:D] h fotoperíodo). Nota: Desenvolvimento Larval leva de 10 a 14 dias do tempo de oviposição.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. processamento pupa, as larvas se mover para a borda do meio 7 – 9 dias após a oviposição e Pupariate por dias 13 ou 14
<ol><li>Casulos de colher, localizados principalmente em torno das bordas da panela sob a crosta que se forma na superfície do meio, para fora e colocado em uma panela limpa.</li>
	<li>Encha a panela, com casulos, ½ a ¾ cheio de água. Separar grupos de casulos e médio. Componentes de farelo e proteína de trigo do meio de afundam-se enquanto pupários > 1 dia de idade flutuador19.</li>
	<li>Remova materiais flutuantes, casulos e alguns componentes médios com uma peneira e lavagem através de uma série de peneiras (5 #, 7 #, #12, #20) para remover o restante médio. A peneira #12 recolhe o casulo e a #20 evita que resíduos sólidos entrando pelo ralo. Casulos de lavagem entre peneiras com um pulverizador de pia.</li>
	<li>Casulos de enxágue, em peneira #12, em uma panela limpa. Encha a panela com ½ cheio de água. Despeje pupários flutuante em um coador e deixe escorrer o excesso de água.</li>
	<li>Transferência drenado pupários para tela de secagem com o ventilador e deixar até secar (Figura 3).</li>
</ol>4. pupa prateleira, um método alternativo para a coleta de pupários é com uma prateleira Pupal18
Nota: A prateleira é feita de um pedaço de plástico corte da extremidade de uma panela de prato de 10 L (10,2 cm de altura x 10,2 cm de largura x 31,9 cm de comprimento).
<ol><li>Prepare o suporte conforme descrito no ponto 2.1. Cone médio em panela de ~2.5 cm no fundo uma ponta de ~7.5 cm profundo no outro.</li>
	<li>
Coloque a prateleira no meio na parte rasa da criação pan e fita para evitar larvas se rastejando ao lado da prateleira (Figura 4).
	<ol>
<li>Saturar a esponja (~14.5 x 9.0 x 4.5 cm3, celulose regenerada) e cobrir com um pano embebido de água (30.5 x 42 cm2, algodão) e lugar na prateleira de cerca de meia polegada do meio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Adicione os ovos, conforme descrito no ponto 2.2 e proceder como anteriormente.
	<ol>
<li>Verifique panelas diariamente para garantir que a esponja permaneça úmida.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Casulos de enxaguamento da plataforma, esponja e pano em um prato limpo panela e despeje no coador, 14 dias após a oviposição.</li>
</ol>5. controle de qualidade
<ol><li>Pese todos os casulos produzidos no pan (peso total)..</li>
	<li>Isolar 100 casulos, pesar e colocado em uma placa de Petri de 9 cm.</li>
	<li>Contagem e sexo adultos ~ 5 a 8 dias mais tarde para determinar a taxa de surgimento e proporção sexual. Loja de placas de Petri com adultos surgiu em um freezer para a contagem em uma data posterior, se necessário. Moscas são sexadas pela forma de seus olhos e a largura da placa fronto-orbital20 ou genitália em pequeno aumento.</li>
	<li>Peso total de registro, peso de 100 casulos e número de surgiu adultos machos e fêmeas.</li>
</ol>6. preparação de sangue
<ol><li>Colete o sangue fresco de bovino de um matadouro local em baldes de 19 L contendo 70 g de citrato de sódio tribásico dihidrato em 500 mL de água. Mexa vigorosamente por 5-10 min de sangue e voltou para o laboratório.</li>
	<li>Sangue de tensão através de uma peneira para remover os coágulos e particionado em recipientes de 2 L, etiqueta com a data de colheita e armazenamento em um freezer (-20 ° C).</li>
	<li>Precisava de 2 dias antes do recipiente retire do congelador e coloque na geladeira. Sangue pode ser usado por ~ 2 semanas uma vez descongelados e armazenados no freezer por até 1 ano.</li>
</ol>7. adulta manutenção
<ol><li>Prepare as gaiolas, fundo de gaiola linha com papel pardo para facilitar a limpeza.</li>
	<li>Coloque 50 g de pupas de mosca secas estáveis (~ 3.500) em cada gaiola. Eclose adultos algumas horas a alguns dias após o processamento pupal.</li>
	<li>Lugar um sangue fresco embebido guardanapo feminino em cima de cada gaiola para alimentação. Começam a alimentar-se dentro de 24 h de adulto eclosão e repetir diariamente, até um dia antes da oviposição (9-10 dias após a emergência).</li>
	<li>Após a oviposição (secção 1), coloque a gaiola no congelador para 4 – 8 h e depois limpar, removendo o papel, enxaguando Ivo dos lados e andar com água quente e esfregar todas as superfícies com detergente e cloro. Lave as gaiolas com água quente e deixe para secar.</li>
</ol>

<ol><li>Cook, D. F., Dadour, I. R., Keals, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+fly%2C+house+fly+%28Diptera%3A+Muscidae%29%2C+and+other+nuisance+fly+development+in+poultry+litter+associated+with+horticultural+crop+production%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Stable fly, house fly (Diptera: Muscidae), and other nuisance fly development in poultry litter associated with horticultural crop production.</a> J. Econ. Entomol. 92 (6), 1352-1357 (1999).</li>
<li>Dominghetti, T. F., de Barros, A. T., Soares, C. O., Cançado, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stomoxys+calcitrans+%28Diptera%3A+Muscidae%29+outbreaks%3A+current+situation+and+future+outlook+with+emphasis+on+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Bras.+Parasitol.+Vet%22%5BJournal%5D)">Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae) outbreaks: current situation and future outlook with emphasis on Brazil.</a> Rev. Bras. Parasitol. Vet. 24 (4), 387-395 (2015).</li>
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<li>Berkebile, D. R., Weinhold, A. P., Taylor, D. B. <a target="_blank" href="http://www.bioone.org/doi/abs/10.3958/059.034.0410">A new method for collecting clean stable fly (Diptera:Muscidae) pupae of known age.</a> Southwest. Entomol. 34 (4), 469-476 (2009).</li>
<li>Champlain, R. A., Fisk, F. W., Dowdy, A. C. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/jee/article-abstract/47/5/940/2205735">Some improvements in rearing stable flies.</a> J. Econ. Entomol. 47 (5), 940-941 (1954).</li>
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<li>Friesen, K., Berkebile, D. R., Wienhold, B. J., Durso, L., Zhu, J., Taylor, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+parameters+associated+with+stable+fly+%28Diptera%3A+Muscidae%29+development+at+hay+feeding+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Environmental parameters associated with stable fly (Diptera: Muscidae) development at hay feeding sites.</a> Environ. Entomol. 45 (3), 570-576 (2016).</li>
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<li>Smith, J. P., Hall, R. D., Thomas, G. D. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/ee/article-abstract/14/6/881/336737">Field studies on mortality of the immature stages of the stable fly (Diptera: Muscidae).</a> Environ. Entomol. 14 (6), 881-890 (1985).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Estável de moscas encontram-se desenvolvendo em uma ampla variedade de substratos na natureza e podem ser criadas em muitos tipos de mídia no laboratório. Nós usamos aparas de madeira e vermiculita como agentes de volume. Vermiculita funcionou bem, mas fez separação pupários de criação meio difícil e era caro (~$0.60/pan). Possivelmente por causa do rigor adicionado de separar pupários do meio, eclosão também foi menor com vermiculita, 57% vs. 75% de aparas de madeira. Aparas de Cottonwood foram comparáveis a vermiculita...

Estável de moscas, Stomoxys calcitrans (L.), são hematófagos moscas cujas mordidas dolorosas interrompem o comportamento de pastoreio de gado, causam dor e sofrimento para animais de companhia e interromper atividades recreativas humanas em todo o mundo. Imaturas estáveis moscas desenvolvem-se em fermentação vegetativa passa, muitas vezes contaminada com resíduos animais. Culturas e práticas agronômicas mudanças produziram graves surtos de moscas estáveis em resíduos de culturas, legumes em Austrália1, cana-de-açúcar no Brasil2e abacaxi em Costa Rica3. Embora apenas 14 estáveis moscas por animal são consideradas o limite económico4, foram feitas observações de mais de 2.000 moscas por animal durante recentes surtos5. Esses níveis de infestação reduzem a produtividade de anfitrião para perto de zero e podem causar mortalidade6. Como resultado de surtos associados agronomicamente, moscas estáveis recebendo renovado interesse e demanda por colônias de laboratório tem aumentado dramaticamente.
Quanto a todos os insetos holometamorphic, moscas estáveis obter todos os nutrientes necessários para o crescimento durante o estágio larval ou imaturo. Portanto, um importante componente de um sistema de criação é a dieta larval ou substrato. Foram observadas larvas de mosca estáveis desenvolvimento em uma ampla gama de substratos no campo7 e eles são dependentes da comunidade microbiana do substrato8,9. Substratos larvas naturais são compostos principalmente de decomposição ou fermentação vegetativas materiais frequentemente contaminados com resíduos nitrogenados.
Para a criação de laboratório, substratos larvas moscas estáveis são geralmente compostos por um material vegetativo e uma fonte de nitrogênio adicionado. Vários materiais foram usados para dietas larvas moscas estáveis. As dietas larvas primeiras imitaram substratos naturais e incluíam da fermentação, palha de aveia e de cavalo ou vaca estrume10,11. Fontes de carboidratos incluem trigo farelo12,13,14, alfafa refeição12,13,14 e uma formulação comercial desenvolvido por especialidades químicas Fabricantes Association (CSMA, 33% de farelo de trigo, farinha de alfafa de 27%, levedura de cerveja 40% grânulos)13,14,15,16. Fontes de nitrogênio incluem levedura suspensão12, farinha de peixe e de bicarbonato de amónio17. Volume de materiais inertes são frequentemente incluídos nas dietas, incluindo aveia cascos12, bagaço13, vermiculita16, lascas de madeira13,18 e peletizadas hulls do amendoim14.
Um objetivo principal do laboratório de criação é de produzir um produto que é como fisiologicamente semelhante ao "tipo selvagem" quanto possível, a fim de que experimentos de laboratório produzirá resultados refletindo de populações do campo. Isto requer que na criação e seleção ser minimizados para manter genético diversidade e recursos nutricionais ser comparáveis no campo. Objetivos secundários são para minimizar o trabalho e despesas. Um componente importante de minimizar despesas é o uso de componentes de dieta disponíveis localmente. A mosca de estábulo criação sistema apresentado foi desenvolvida para atender a estes objectivos.

<table><tbody><tr><td>Diamalt</td><td>Premier Malt Products, Inc., Saddle Brook, NJ</td><td>2540</td><td></td></tr><tr><td>CSMA Fly media</td><td>Purina Animal Nutrition, Arden Hills, MN</td><td>5S6Z</td><td></td></tr><tr><td>Thin Maxi Pad</td><td>The Tranzonic Co., Cleveland, OH, EUA</td><td>5001M</td><td></td></tr><tr><td>Calf Manna</td><td>MannaPro, Chesterfield, MO, USA</td><td>Manna Pro</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium</td><td>Bicarbonate Spectrum Chemical Manufacturing Corp, Gardena, CA</td><td>A1125</td><td></td></tr><tr><td>Farelo de trigo, Coarse</td><td>Siemer Milling Company, Teutopolis, IL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aparas de madeira</td><td>Tractor Supply Company, Brentwood, TN</td><td>502770699</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Fishmeal Consumer Supply Distributing, North Sioux City, SD</td><td>F1550</td><td></td></tr><tr><td>Gaiolas para adultos</td><td>All Aluminum Window Company, Lincoln, Ne</td><td>Custom</td><td>45 &vezes; 45 &vezes; 45 cm, 18 &vezes; Tela de alumínio de malha 16, acesso à meia</td></tr><tr><td>9 &vezes; pano de algodão preto de 28 cm</td><td>Robert Kaufman Fabrics, Los Angeles, CA</td><td>K040-114</td><td>Pano para ovos</td></tr><tr><td>10 L panelas de plástico</td><td>Rubbermaid, Saratoga Springs, NY</td><td>FG2951ARWHT</td><td>Panelas larvais</td></tr><tr><td>Stockinette, Algodão, rolo de 12 polegadas x 25 jardas</td><td>Tex-Care Medical Company, Burlington, NC</td><td>91311-225</td><td></td></tr></tbody></table>

laboratório de criação de moscas estáveis e outros muscoid diptera

Laboratory Rearing of Stable Flies and Other Muscoid Diptera

Estável de moscas, Stomoxys calcitrans, são pragas sérias de gado, seres humanos, animais de companhia e animais selvagens em todo o mundo. Durante os últimos 20 + anos, mudanças nas práticas agronômicas resultaram em graves surtos de moscas estáveis em vários países. Estes focos interrompeu a produção animal e recreação humana resultando em demandas públicas para aumentar os esforços de pesquisa e de gestão para esta praga. É apresentado um procedimento simples e de baixo custo para a criação de moscas estáveis para estudos de laboratório. O procedimento utiliza suprimentos, equipamentos e componentes da dieta disponíveis localmente. O procedimento pode ser adaptado para a criação de outras moscas de muscoid incluindo a mosca doméstica (Musca domestica), mosca do chifre (Haematobia irritans) e mosca do rosto (Musca autumnalis). O procedimento produz pupários mosca estável, com média de 12,5 mg e ~ 35% ovo para a sobrevivência de adulto. Cerca de 3000 moscas são produzidas em cada panela.

As larvas pupariate 10 a 14 dias e adultos emergem 14 – 16 dias após a oviposição. Tempo de geração, ovo a ovo, é ~ 24 dias. Dados de criação para maio de 2013 para de 2017 de Janeiro com três diferentes agentes de volume e duas colónias são apresentados na Figura 5. Cottonwood deu o melhor rendimento, 3867 ±1442 (<img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/57341/57341eq1.jpg"> ± desvio padrão) pupas pesando 12,5 mg ±1.6 com 74 ±19% eclosão produzindo 2.872 ±...

Um procedimento para a criação de moscas estáveis (Stomoxys calcitrans) é apresentado. O procedimento usa materiais localmente disponíveis para suprimentos, equipamentos e componentes de dieta.

Laboratório de criação de moscas estáveis e outros Muscoid Diptera

Stable flies, Stomoxys calcitrans, are serious pests of livestock, humans, companion animals and wildlife worldwide. During the last 20+ years, changes in ...

Este método pode ajudar a responder a questões-chave na entomologia pecuária, como o que as moscas estáveis precisam para o desenvolvimento. A principal vantagem dessa técnica é que ela é simples. O meio é composto por apenas quatro ingredientes.A propagação de Stomoxys calcitrans começa com a coleta de ovos de um estoque de moscas. Isso envolve a preparação de uma xícara de ovo. Mergulhe a ponta de um pano em uma jarra de 250 mililitros cheia de água a 40 graus Celsius.Em seguida, enrole o pano ao redor da parte externa do frasco e prenda o pano com um elástico. Dobre a ponta solta do pano por cima da jarra para limitar o acesso à água. Agora coloque este copo em uma gaiola de moscas de oito a 10 dias.Após duas horas, as fêmeas grávidas ovipositarão ovos suficientes para a próxima geração. Normalmente, 2.500 moscas produzem de oito a 40.000 ovos em duas horas. Em seguida, usando água, enxágue os ovos do pano de ovo em uma assadeira pequena e vazia.Teoricamente, os ovos podem sobreviver na água por oito a 12 horas. No entanto, é melhor limitar o tempo a cinco horas ou menos. Para criar larvas dos ovos, prepare o meio fresco em uma assadeira de plástico de 10 litros.Em seguida, faça

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fopius arisanus é um parasitóide de ovos-larvas de moscas da fruta Tephritid que é utilizado com sucesso no controle biológico dessas pragas importantes tropical. Descrevemos aqui um protocolo otimizado para a criação de F. arisanus em pequena escala, utilizando materiais facilmente disponíveis.

Um protocolo Optimizado para Criação Fopius arisanus, Um parasitóide de Frutas Tephritid Flies

Propusemos um sistema que utiliza sensores de pseudo-acústico de baixo custo, não invasivo ópticos para detectar automaticamente e com precisão, contar e classificar insetos voadores com base em seu som de vôo.

Vôo Detecção e Classificação Insect com sensores baratos

Este manuscrito relata um protocolo detalhado para cultivar, regularmente, uma população de Drosophila melanogaster usando uma gaiola de população de moscas.

Manutenção de um<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Gaiola População

Um método para a criação de Drosophila melanogaster sob condições axénicas e gnotobióticos é apresentada. embriões voam são dechorionated em hipoclorito de sódio, transferidos assepticamente à dieta estéril, e criados em recipientes fechados. Inoculando dieta e embriões com bactérias leva a associações gnotobióticos e presença de bactérias é confirmada por plaqueamento de corpo inteiro de Drosophila homogeneizados.

Elevando a mosca da fruta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sob axênicas e gnotobióticos Condições

O objetivo geral desses procedimentos é para estabelecer, manter e atualizar uma população em cativeiro de Eristalis tenax em um ambiente de pesquisa.

Criação e manutenção de longo prazo de Eristalis tenax Hoverflies para estudos de investigação

Este protocolo descreve uma metodologia de microinjeção que temos padronizado e utilizado por vários anos para entregar quantidades específicas de ácidos nucleicos diretamente a hemolinfa de mosquitos e moscas domésticas. Este protocolo resulta em mortalidade de injeção mínima e permite medições de dose correlacionado de fecundidade.

Reprodutível dsRNA Microinjection e Bioassay de oviposição em mosquitos e moscas domésticas

Descrevemos a metodologia e a importância do bioensaio de aplicação tópica para medir a suscetibilidade de inseticidas em mosquitos e moscas frutíferas. O ensaio apresentado é de alto rendimento, utiliza massa de insetos - permitindo assim calcular uma dose letal relativizada em massa em vez de concentração - e provavelmente tem menor variabilidade do que outros métodos semelhantes.

Bioensaio de aplicação tópico para quantificar toxicidade de inseticida para mosquitos e moscas de frutas

Este artigo descreve a manutenção laboratorial (incluindo acasalamento e alimentação) da mosca díptera inferior Bradysia (Sciara) coprophila.

Manutenção laboratorial da Bradisia (Sciara) coprophila da mosca dos dípteros inferiores: um novo / antigo organismo modelo emergente

Este artigo descreve protocolos detalhados para a manutenção de uma colônia laboratorial de Carausius morosus, incluindo procedimentos essenciais para manejo animal, manipulação de ovos, cuidados com ninfas recém-eclodidas, métricas representativas de desempenho e uma visão geral da longevidade e características biológicas da espécie.

Um Protocolo Padronizado para a Criação de Carausius morosus (Phasmatodea, Insecta) em Ambientes Laboratoriais

Comunidades microbianas na Natureza e Laboratório - Entrevista

Aprenda a criar moscas estáveis (Stomoxys calcitrans) para entomologia e manejo de gado usando materiais locais e meio de quatro ingredientes. Este método simples facilita pesquisas sobre desenvolvimento e controle de pragas.

Laboratório de criação de moscas estáveis e outros Muscoid Diptera

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