Name: Avaliação da coagulação do Plasma no tecido do fígado em um modelo Animal grande na Vivo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Aprenda a avaliar a coagulação por plasma no fígado em modelo suíno in vivo. Este protocolo utiliza termografia infravermelha e Doppler a laser para monitorar temperatura e microcirculação, oferecendo relevância clínica para cirurgia hepática.

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Os autores têm sem agradecimentos.

Foram seguidas as regras regidas pela legislação alemã para estudos em animais, bem como princípios de laboratório Cuidado Animal (National Institutes of Health publicação Ed. 8, 2011). É dada permissão oficial do escritório governamental de cuidado animal (turismo für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, Recklinghausen, Alemanha).
1. os animais
<ol><li>Use os porcos landrace alemão feminino (25-30 kg de peso) alojados em gaiolas abertas.</li>
	<li>Use 5 animais por grupo (argônio e hélio).</li>
	<li>Permitir que os animais se adapte ao ambiente pelo menos uma semana antes dos experimentos. Animais rápidos durante 24 h antes da cirurgia, com livre acesso à água.</li>
</ol>2. anestesia
<ol><li>Bom os animais com uma injeção intramuscular de atropina (0,1 mg/kg BW), ketamina (15 mg/kg de peso corporal [BW]) e xilazina (10mg/kg BW) 10 minutos antes da indução da anestesia.</li>
	<li>Acesso venoso periférico é estabelecido pela colocação de uma cânula de calibre 22, em uma veia da orelha.</li>
	<li>Induzi anestesia geral por injeção intravenosa de propofol 2 mg/kg de peso corporal.</li>
	<li>Coloque o animal na posição supina e realizar uma incisão longitudinal da pele no sulco jugular ao longo de um comprimento de 2 cm. Locate veia mediante a preparação romba do tecido subcutâneo. Inserir a cânula, então o fio de Seldinger.</li>
	<li>Retrair a cânula e inserir 14 p. cateter sobre o fio-guia. Recue o fio guia. Conectar o cateter à extensão e fixar o cateter por uma cinta ou uma sutura.</li>
	<li>Puxe a língua para fora e insira o laringoscópio reta. Use a ponta do laringoscópio para puxar para baixo a epiglote. Introduza o tubo pelas cordas vocais. Coloque a braçadeira no âmbito da glote e inflar.</li>
	<li>Ventile com oxigênio de 40% em 20-26 respirações/min e um volume corrente de 10 ml/kg para manter a tensão de dióxido de carbono parcial end-tidal entre 36 e 42 mm Hg.</li>
	<li>Manter a anestesia com isoflurano em uma concentração de 1-1,5% e fentanil em uma concentração de 3-4 µ g/kg/h.</li>
	<li>Fornecemos a solução de lactato de Ringer em uma taxa inicial de 4 mL/kg/h e a aumentar após a laparotomia para uma taxa de infusão constante de 8 mL/kg/h.</li>
</ol>3. cirurgia e coagulação do Plasma
<ol><li>Coloque o animal na posição supina sobre uma mesa cirúrgica padrão.</li>
	<li>Desinfectar a pele através da aplicação de um desinfetante cirúrgico padrão (2-Propanol 45 g/100 g, 1-Propanol 10 g / 100g, bifenil-2-ol 0,2 g/100 g) com um cotonete cirúrgico por 3 vezes.</li>
	<li>Realizar uma laparotomia mediana ampla do processo xifoide até o púbis com um bisturi e instalar retractores cirúrgicos.</li>
	<li>Ligue o dispositivo de coagulação do plasma, abrir a garrafa de gás argônio ou hélio, dependendo o gás portador usados. Ajuste o fluxo de gás para a potência de saída de 3 L/min. coagulação selecionar dispositivo conforme desejado. Nota: Ambos os gases nobres, o argônio ou hélio, pode ser usados para a coagulação do plasma. Efeitos de coagulação são comparáveis. Consulte a referência7 para obter detalhes.</li>
	<li>Execute coagulação do plasma no lobo esquerdo do fígado, como descrito anteriormente,7. Use um molde de titânio (abertura quadrada 1 x 1 cm2) para padronizar a zona de coagulação. Coagular por 5 s, com uma distância de sonda de 1 cm. Os coagulations com as configurações de energia diferentes podem ser executadas lado a lado com uma curta distância entre os coagulations de 5 mm (Figura 1).</li>
	<li>Para a colheita do fígado, divida todas as conexões ligamentares para o fígado. Isolar e dividir o pedículo hepático acima a flexão duodenal superior deixando partes longas de veia porta e ducto biliar comum. Dividir a veia cava acima e abaixo do fígado e recuperar o órgão.</li>
	<li>Depois da colheita, o fígado, os porcos foram sacrificados por administração intravenosa de 0,16 g/kg BW pentobarbital.</li>
	<li>Para os experimentos de pressão de ruptura, metade do lobo hepático medial esquerdo ressecção com tesoura afiada. O corte de plasma-coagular (100W de potência de saída) de superfície ou selar a superfície de corte com selante de fibrina (Figura 2).</li>
</ol>4. a microcirculação medição
Nota: Espectroscopia Doppler Laser pode determinar o fluxo de sangue no tecido através da medição o efeito Doppler causado pelo movimento de eritrócitos. O sinal do Laser se correlaciona com o número de eritrócitos em movimento. Espectroscopia Doppler laser está em uso clínico (por exemplo, transplante de medicina) e tem sido validado várias vezes15.
<ol><li>Ligue o medidor de fluxo Doppler laser e Espectrofotômetro. Use uma sonda plana.</li>
	<li>Tome medidas de linha de base para o fluxo e a velocidade. Salvar ou anotar os valores.</li>
	<li>Realize a coagulação conforme descrito abaixo dos 3,5.</li>
	<li>Coloque a sonda plana em sites de coagulação e medida de fluxo e velocidade. Mais uma vez, salvar ou anotar valores.</li>
	<li>Repita para todas as configurações de energia do dispositivo coagulador.</li>
</ol>5. temperatura medição
<ol><li>Alternar o sistema (câmera termográfica, caderno e termômetro infravermelho) e deixá-lo correr pelo menos 1h antes de realizar as medições.</li>
	<li>Ajustar o foco e ver os quadros da câmera termográfica no site da coagulação. Sequências de infravermelhas podem ser detectadas com a resolução espacial de 1024 x 768 pixels com uma resolução de temperatura maior que 20 mK. Ter em conta, que a região da coagulação e do tecido circundante — afectados pela transferência de calor — situa-se no meio da exibição. Nota: Deve incluir tantos pixels do quadro quanto possível para uma ótima resolução espacial.</li>
	<li>Registar o processo de coagulação com o Coagulador plasma na superfície do fígado com a câmera termográfica durante um período de 2-min.</li>
	<li>Analisar sequências de imagem com o software de análise de Termografia: definir regiões de interesse. Nota: O Software calcula o curso da temperatura média correspondente ao longo do tempo.</li>
</ol>6. medição de profundidade coagulação
<ol><li>O lobo hepático medial esquerdo da colheita com uma tesoura afiada.</li>
	<li>Impostos especiais de consumo os sites de coagulação com 1 cm de espessura. Cortado em segmentos longitudinais espessura de 3 mm para processamento adicional.</li>
	<li>Amostras de tecido Fix a 4 ° C durante a noite com neutro 10% tamponada de formalina. Aqueça a parafina 2 ° C, sobre o ponto de fusão e incorporar as fatias. Processo durante a noite.</li>
	<li>Realize a coloração de hematoxilina/eosina.<ol>
<li>Deparaffinize e hidratar o tecido posteriormente mergulhando em 2 x xileno, 100% de etanol (EtOH), 95% EtOH, 70% EtOH, deionizada H2O por 2 min cada.</li>
		<li>Manche a amostra de tecido com solução de hematoxilina Meyer por 3 min.</li>
		<li>Agora lave na água da torneira por 5 min.</li>
		<li>Manche o tecido com solução de eosina por 3 min.</li>
		<li>Enxaguar em 2 x EtOH 95% e, em seguida, xileno por 3 min cada. Monte com o meio de montagem padrão.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ligue o sistema (microscópio câmera conectada, software de imagem). Ver todas as secções com ampliação de 40 X.</li>
	<li>Criar a imagem de um micrômetro de objeto em uma ampliação de 40 X. Recalibrar pressione o botão na janela de objectivos. Selecione calibração manual. Desenhe uma linha na imagem micrômetro de 100 µm. Enter 0,1 mm de caixa de diálogo e pressionar Okey.</li>
	<li>Selecione o comprimento no modo de exibição > controles de análise > janela de anotações e medições. Medida da superfície do fígado à margem de coagulação com o mouse. Exportar ou observe o resultado. Repita a medição em outro local no mesmo slide. Nota: Profundidade de coagulação pode ser facilmente diferenciada do tecido hepático normal pela margem afiada entre os cordões de hepatócitos normais e a zona de necrose com citoplasma encolhida, núcleos picnóticos e zonas de hemorragia.</li>
	<li>Calcule a média de duas medições.</li>
</ol>7. explosão de medição de pressão
<ol><li>Ligue o sistema (bombas automáticas, medidor de pressão). Prepare as amostras de fígado de acordo com a etapa de 3.7. Nota: Use duas bombas paralelas ligadas através de uma torneira de 3 vias. A pressão máxima de 1.500 mm Hg não pode ser obtida com uma única bomba.</li>
	<li>Isole a veia porta, artéria hepática comum e ducto biliar com tesoura no pedículo tátil. Prenda a veia porta com uma pinça overholt e ligate com uma sutura monofil 4-0. Fixar a artéria hepática comum uma pinça overholt e ligate com uma sutura monofil 4-0.</li>
	<li>Insira o cateter Ch-16 no ducto biliar comum e ligate com uma sutura de seda 2-0. Conectar o cateter às bombas automáticas, instalar a torneira de 3 vias com medidor de pressão (Figura 3).</li>
	<li>Encha a seringa de perfusão com soro fisiológico.</li>
	<li>Comece bombas automáticas com uma taxa de entrega de 99 mL/h.</li>
	<li>Monitorar o medidor fígado corte de superfície e pressão para pressão de ruptura de escapamento e registro. Nota: Para mais fácil reconhecimento de fugas, azul patente pode ser adicionado à solução salina (azul patente 2ml + soro 18ml). É mais fácil de observar a pressão de ruptura até notar o tempo de perda de pressão no medidor de pressão.</li>
</ol>

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<li>Nykonenko, A., Vávra, P., Zonča, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomic+Peculiarities+of+Pig+and+Human+Liver%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant+Off+J+Middle+East+Soc+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver.</a> Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).</li>
<li>Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., Müller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+spectrometry+%28O2C+device%29+of+intraoperative+microperfusion+predicts+organ+function+after+kidney+transplantation%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study.</a> Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).</li>
<li>Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiofrequency+ablation+of+porcine+liver+in+vivo%3A+effects+of+blood+flow+and+treatment+time+on+lesion+size%5BTitle%5D)+AND+%22AnnSurg%22%5BJournal%5D)">Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size.</a> AnnSurg. 227, 559-565 (1998).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Modelos de roedores para cirurgia hepática são estabelecidos por um longo tempo16. No entanto, grandes modelos animais oferecem certas vantagens: nenhum equipamento microcirúrgico é necessária como equipamento operacional padrão para os seres humanos pode ser aplicado, técnicas cirúrgicas são comparáveis para uso clínico e métodos de avaliação clínica padrão podem ser transferido para os experimentos. Por exemplo, testes de sangue padrão clínico pode ser realizado sem a necessidade de métodos de e...

Coagulação de plasma de argônio (APC) é um instrumento amplamente utilizado em cirurgia abdominal por mais de três décadas,1,2. É uma técnica padrão para a realização da hemostasia secundária depois de superfície para evitar posteriores hemorragias3de corte principal hepatectomy selando o fígado. Coagulação do plasma é uma forma especializada de radiofrequência eletrocautério, que fornece a energia elétrica através de um arco de gás ionizado. Fornecendo monopolar hemostática electrotécnico, esta técnica sem contacto tem a vantagem de prevenir o eletrodo para manter o tecido4. O feixe de gás ionizado é automaticamente direcionado para a área da menor resistência elétrica e é virado quando a resistência aumenta devido à dessecação para outras áreas ainda não ressecadas. Isso produz uma profundidade limitada uniforme de coagulação5,6. Fatores que influenciam o efeito de coagulação são a ativação tempo, a potência do dispositivo da coagulação e a distância da sonda para o tecido. Hélio é outro gás de transporte, que pode ser usado para de coagulação do plasma7. Clínicos recentes estudos concentrados em desfechos clínicos, ao invés de8,achados histológicos e funcional3,9, enquanto estudos experimentais centrada-se em vitro investigações10 ou experimentos em órgãos perfundidos isolados11.
O protocolo subjacente permite o estudo dos efeitos de coagulação do plasma em um modelo animal grande perto a aplicação clínica, usando o equipamento padrão humano em suínos: microcirculação é avaliada de forma não invasiva por um fluxômetro Doppler laser e Espectrofotômetro, que é uma ferramenta padrão clínica para esta indicação12,13. Mudanças de temperatura durante a coagulação são monitoradas com um termómetro de infravermelho e uma câmera termográfica. A profundidade da coagulação é medida em hematoxilina/eosina histológica manchada seções após a colheita de amostras de tecido. Para a comparação com outros meios para hemostasia secundária, são realizados experimentos de pressão de explosão. Em contraste com as técnicas descritas anteriormente14, estas são realizadas em órgãos explantados excluir pressão arterial relacionados com efeitos. Além da descrito investigações sobre os efeitos locais de coagulação do plasma, testes de sangue padrão também possa ser realizado em modelo porcino.

<table><tbody><tr><td>Xilazina 20 mg/mL</td><td>Vetoquinol GmbH</td><td>Xilapan</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina 100 mg/mL</td><td>Ceva GmbH</td><td>Ceva Injeção de</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina Atropina 100 mg / 10 mL</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie GmbH</td><td>Atropinsulfat K&ouml; hler 100mg Amp.</td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>Fresenius Kabi GmbH</td><td>Propofol 1% MCT Fresenius</td><td></td></tr><tr><td>Fentanil</td><td>KG Rotexmedica GmbH</td><td>Fentanil 0,5mg Rotexmedica</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Abbot GmbH</td><td>Forene 100% (V/V) 250 mL</td><td></td></tr><tr><td>Solução de lactato de Ringer</td><td>Baxter Deutschland GmbH</td><td></td><td>sódio 131mmol/l, potássio 5 mmol/l, cálcio 2 mmol/l, cloreto 111 mmol/l, lactato 29 mmol/l</td></tr><tr><td>Disinfactante cirúrgico</td><td>Sch&uuml; lke & Mayr GmbH</td><td>Kodan Tinktur forte gef&auml; rbt 1l 104804</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio motorizado</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Eclipse TE2000-E</td><td></td></tr><tr><td>Câmera de microscópio</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>Digitalsight DS-Qi1Mc</td><td></td></tr><tr><td>Software de imagem</td><td>Nikon Instruments Europe</td><td>NIS elements Vers. 4.40</td><td></td></tr><tr><td>Coagulador de plasma</td><td>S&ouml; ring GmbH</td><td>CPC-1000</td><td></td></tr><tr><td>Gás argônio</td><td>Linde AG</td><td>Argon 4.8&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Gás hélio</td><td>Linde AG</td><td>Helium 4.8</td><td></td></tr><tr><td>O2C</td><td>LEA Medizintechnik GmbH</td><td>O2C Versão 1212</td><td>com sonda LF-2 ou LF-3</td></tr><tr><td>Termómetro infravermelho</td><td>Voltcraft</td><td>VOLTCRAFT IR 260-8S</td><td></td></tr><tr><td>Câmara termográfica</td><td>InfraTec GmbH</td><td>VarioCAM HD head 820</td><td></td></tr><tr><td>Software de análise termográfica</td><td>InfraTec GmbH</td><td>IRBIS 3</td><td></td></tr><tr>Solução <td></td><td>de hematoxilina de Mayer</td><td>Merck 1.09249</td><td></td></tr><tr><td>Solução de eosina</td><td>VWR International GmbH</td><td>Merck 1.09844</td><td></td></tr><tr><td>Rollerpump Masterflex L/S easy Load</td><td>Cole-Parmer Instrument Company</td><td>modelo 7518-10</td><td></td></tr><tr><td>Perfusorpump</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>Perfusor secura FT</td><td></td></tr><tr><td>Medidor de pressão digital</td><td>Greisinger eletrônico</td><td>GMH 3161</td><td></td></tr><tr><td>Perfusorserse, 50 mL</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8728810 F</td><td></td></tr><tr><td>Linha Perfusor, Tipo IV Padrão, PVC Luer lock</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 8722960</td><td></td></tr> torneira <tr><td>de 3 vias, Dicofix C35C</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>REF 16494 C</td><td></td></tr><tr><td>Silk 2-0. 3 métrica</td><td>Resorba</td><td>REF H5F</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0 Sutupak</td><td>Ethicon</td><td>V1224H</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0,9 %</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação da coagulação do plasma no tecido do fígado em um modelo animal grande na vivo

Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo

Coagulação do plasma como uma forma de eletrocautério é usada em cirurgia de fígado por décadas para selar a superfície de corte grande fígada após grande hepatectomy para prevenir hemorragias em um estágio posterior. Os efeitos exatos de coagulação do plasma no tecido do fígado são examinados somente mal. No nosso modelo de suínos, os efeitos de coagulação podem ser examinados perto a aplicação clínica. Um combinado do laser Doppler fluxômetro e espectrofotômetro documentos microcirculação muda durante a coagulação, a profundidade do tecido de 8 mm canaliza, fornecendo informações quantificáveis sobre hemostasia além da impressão clínica subjetiva. A temperatura no local de coagulação é avaliada com uma termômetro infravermelho prior e post coagulação e com uma câmera termográfica durante a coagulação, a medição da temperatura do feixe de gás não é possível devido o limite superior dos dispositivos. A profundidade da coagulação é medida microscopicamente em hematoxilina/eosina manchada seções após a calibração de um micrômetro de objeto e dá uma informação exata sobre a configuração-coagulação profundidade-relação de poder. O efeito da selagem é examinado em ductos biliares, como não é possível para um Coagulador plasma selar vasos maiores. São realizados experimentos de pressão de ruptura na explantados órgãos para governar para fora a pressão arterial relacionados com efeitos.

Microcirculação: Utilizar o dispositivo de diagnóstico para hemostasia após a coagulação do plasma pode ser demonstrada por alterações da microcirculação. Sangue capilar fluxo (exibido como unidades arbitrárias (AU)) diminui de um valor de base de 142.7 ± 76.08 AU para 57.78 ± 49.57 AU em 25 W dispositivo potência, para 48,5 ± 7.26 AU em 50 W e para 5,04 ± 1,31 AU em 100 W (Figura 4).
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Aqui nós apresentamos um protocolo para avaliar experimentalmente a coagulação do plasma no tecido do fígado na vivo. Em um modelo de suínos, microcirculação é examinada pelo laser Doppler, profundidade de coagulação é medida histologicamente, temperatura no local de coagulação por termômetro infravermelho câmera termográfica e duto efeito de vedação é documentada por pressão de ruptura experimentos.

Avaliação da coagulação do Plasma no tecido do fígado em um modelo Animal grande na Vivo

Plasma coagulation as a form of electrocautery is used in liver surgery for decades to seal the large liver cut surface after major hepatectomy to prevent ...

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da cirurgia clínica do fígado sobre a relação da profundidade de ajuste de energia da coagulação do plasma de argônio e hélio e o próprio processo de coagulação do plasma. As principais vantagens desta técnica são que o modelo animal de grande porte é semelhante à aplicação clínica e que nenhum equipamento especial é necessário. A termografia infravermelha pode ser usada para monitorar a distribuição e a deterioração da temperatura, mas também para monitorar a frequência respiratória e as tortas.Além disso, os processos inflamatórios podem ser monitorados por termografia infravermelha. Demonstrando o procedimento estará Pascal Paschenda, um técnico do nosso grupo. Pelo menos uma hora antes de iniciar o procedimento, ligue o notebook da câmera termográfica e o termômetro infravermelho.Quando o equipamento estiver pronto, coloque uma porca German Landrace fêmea anestesiada de 25 a 30 kg em decúbito dorsal em uma mesa cirúrgica padrão e use um cotonete cirúrgico padrão para desinfetar a área cirúrgica três vezes com um desinfetante cirúrgico padrão. Em seguida, use um bisturi para fazer uma laparotomia larga da linha média do processo xifóide até o púbis e instale afastadores cirúrgicos para expor o tecido hepático. Para obter medições de microcirculação de linha de base, ligue o medidor de vazão e o espectrofotômetro doppler a laser e use uma sonda plana para medir o fluxo e a velocidade.Em seguida, ligue o dispositivo de coagulação de plasma, abra a garrafa de gás transportador apropriada e ajuste o fluxo de gás para três litros por minuto. Selecione a potência de saída apropriada do dispositivo de coagulação e use um molde de titânio com uma abertura quadrada de um por um centímetro quadrado para padronizar a zona de coagulação. Em seguida, use uma distância de sonda de um centímetro para coagular a região por cinco segundos.Para medir a microcirculação pós-coagulação, coloque a sonda plana em cada local de coagulação para medir o fluxo e a velocidade de cada local. Para medir a temperatura em cada local, ajuste o foco da câmera termográfica e coloque o quadro sobre o primeiro local de coagulação de modo que a região de coagulação e o tecido circundante afetado pela transferência de calor fiquem localizados no meio do campo de visão. Registar o processo de coagulação com o coagulador plasmático na superfície do fígado com uma câmara termográfica durante um período de dois minutos.Em seguida, analise as sequências de imagens com o software de análise de termografia apropriado. Para medir a pressão de ruptura, primeiro ligue as bombas automáticas e o medidor de pressão. Em seguida, divida todas as conexões ligamentares com o fígado e divida o pedículo hepático acima da flexura duodenal superior, deixando intactas longas porções da veia porta e do ducto colédoco.Em seguida, divida a veia caval acima e abaixo do fígado para permitir a recuperação do órgão. Usando uma tesoura afiada, ressecção metade do lobo medial esquerdo do fígado e coagule a superfície de corte com plasma. Isole a veia porta, a artéria hepática comum e o ducto biliar no pedículo hepático.Usando uma pinça de retenção, prenda a veia porta. Em seguida, use uma sutura monofil 4.0 para ligar o vaso. Clampeie a artéria hepática comum com um segundo par de pinças de sustentação e ligue a artéria com outra sutura monofil 4.0.Insira um cateter French 16 no ducto colédoco, ligando o ducto com sutura de seda 2.0. E conecte o cateter às bombas automáticas. Instale uma torneira de três vias com um medidor de pressão e encha uma seringa de profusão com solução salina.Inicie as bombas automáticas com uma taxa de entrega de 99 mililitros por hora. Em seguida, monitore a superfície de corte do fígado e o medidor de pressão quanto a vazamentos e registre a pressão de ruptura. Neste experimento representativo, o fluxo sanguíneo capilar diminuiu cerca de 60% desde a linha de base a 25 watts de potência de saída do dispositivo, 66% a 50 watts e quase 100% a 100 watts.Nenhuma mudança na temperatura foi observada durante ou após a coagulação plasmática. A coagulação plasmática cria uma zona superficial de necrose que pode ser facilmente distinguida do parênquima hepático normal. Após a coagulação do plasma de hélio, a profundidade de coagulação aumenta significativamente em correlação direta com a potência de saída do dispositivo de plasma aplicado.Observe que as medições de pressão de ruptura realizadas na superfície de corte do lobo medial esquerdo explantado não demonstram diferença após a coagulação com plasma de hélio ou argônio. Usando essas técnicas, o último para quantificar o efeito coagulatório local e estimar o efeito de selamento do ducto biliar da coagulação plasmática. Essas técnicas também podem ser usadas para comparar diferentes médias de bilio e hemostasia em um ambiente cirúrgico semelhante ao de pacientes humanos.Além disso, os efeitos hemostáticos e biliostáticos da coagulação plasmática podem ser aplicados após hepatectomias importantes no mesmo modelo. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como avaliar os principais efeitos da coagulação do plasma de argônio e hélio em um modelo animal de grande porte.

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Este vídeo descreve um procedimento para perfusão hepática de camundongo através da veia porta usando solução de colagenase antes de isolar as células hepáticas.

Perfusão hepática murina in vivo: um método para infundir o fígado de roedor com solução através da veia porta

A imagem intravital estável de alta resolução de células imunes no fígado é um desafio. Aqui, fornecemos um método altamente sensível e confiável para estudar a migração e as interações célula-célula de células imunes no fígado de camundongo por longos períodos (cerca de 6 horas) por microscopia de varredura a laser multifotônica intravital em combinação com monitoramento de terapia intensiva.

Long Term Intravital Multiphoton Microscopia de imagem de células imunes no saudáveis ​​e doentes do fígado por meio CXCR6.Gfp Reporter Mice

A hemorragia descontrolada, uma importante causa de mortalidade entre os pacientes com trauma, pode ser modelada utilizando uma laceração hepática padrão em um modelo murino. Este modelo resulta em perda de sangue consistente, sobrevivência e permite o teste de agentes hemostáticos. Este artigo fornece o processo passo a passo para executar este modelo valioso.

Choque hemorrágico não controlado modelado via laceração hepática em ratos com monitorização hemodinâmica em tempo real

Aqui descrevemos um protocolo detalhado para medição invasiva dos parâmetros hemodinâmicos, incluindo pressão portal, fluxo sanguíneo esplâncnico e hemodinâmica sistêmica para caracterizar a síndrome de hipertensão portal em ratos.

Caracterização hemodinâmica invasiva da síndrome hipertensiva-Portal em ratos cirrose

Há uma escassez de doadores de fígado significativo, e expandiram-se critérios para doadores de fígado. Normotérmica ex vivo fígado perfusão (NEVLP) foi desenvolvido para avaliar e modificar a função do órgão. Este estudo demonstra um modelo do rato de NEVLP e testa a capacidade do peguilado-catalase, para atenuar a lesão hepática de preservação.

Um pequeno modelo Animal de perfusão de fígado normotérmica Ex Vivo

Estabelecemos uma nova técnica cirúrgica para um modelo de perfusão na vivo único lóbulo hepático em ratos como um pré-requisito para estudar mais na vivo parcial fígado engenharia no futuro.

Uma nova técnica cirúrgica como fundamento na Vivo parcial engenharia fígado de rato

Este protocolo fornece um método simples e confiável para a produção de fatias hepáticas de corte de precisão viável de camundongos. As amostras de tecido ex vivo podem ser mantidas condições de cultura de tecidos de laboratório por vários dias, fornecendo um modelo flexível para examinar a patobiologia hepática.

Murine Precision-Cut Liver Slices como um modelo ex vivo de biologia hepática

O modelo de sangramento de veia traseira refinada (TVT) em camundongos anestesiados é um método in vivo sensível para a avaliação do sangramento hemofílico. Este modelo de sangramento otimizado da TVT usa perda de sangue e tempo de sangramento como pontos finais, refinando outros modelos e evitando a morte como ponto final.

Modelo de sangramento da transeção da veia da cauda em hemofilia totalmente anestesiada um camundongo

Uma metodologia detalhada para estabelecer um modelo minimamente invasivo de embolia pulmonar em ratos usando coágulos sanguíneos autólogos é descrita. Métodos adicionais para quantificar a área infartada e visualizar a árvore arterial pulmonar também são fornecidos.

Estabelecimento de um modelo minimamente invasivo de embolia pulmonar em ratos usando coágulos sanguíneos autólogos

A maioria dos estudos envolvendo o aparelho de Langendorff usa modelos de pequenos animais devido ao aumento da complexidade dos sistemas para mamíferos maiores. Descrevemos um sistema de Langendorff para modelos animais de grande porte que permite o uso em uma variedade de espécies, incluindo humanos, e aquisição de dados relativamente fácil.

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Aprenda a avaliar a coagulação por plasma no fígado em modelo suíno in vivo. Este protocolo utiliza termografia infravermelha e Doppler a laser para monitorar temperatura e microcirculação, oferecendo relevância clínica para cirurgia hepática.

Avaliação da coagulação do Plasma no tecido do fígado em um modelo Animal grande na Vivo

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