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DOI: 10.3791/57401-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a method for rapidly monitoring the generation of cytotoxic T lymphocytes (CTLs) using CFSE stained OT-I proliferation. This technique is beneficial for evaluating adjuvant efficacy in vaccine development against intracellular pathogens and cancer.
Apresentamos aqui um pedido de uma norma técnica imunológica (CFSE manchado OT-eu proliferação) destinados a monitorar rapidamente mediada por adjuvante T linfócitos citotóxicos (CTL) geração in vivo. Esta estimativa rápida das capacidades CTL é útil para o desenvolvimento de vacinas profiláticas contra patógenos intracelulares, bem como as vacinas terapêuticas do câncer.
O objetivo geral deste experimento é determinar a capacidade dos adjuvantes de interesse de gerar linfócitos T citotóxicos, monitorando a proliferação de células T OT1 CD8 positivas coradas com CFSE transferidas adotivamente nos linfonodos e baços de drenagem de animais receptores imunizados. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da vacinologia, como a potência de um adjuvante para gerar uma resposta celular de citotoxicidade. A principal vantagem dessa técnica é que você pode determinar não apenas a capacidade CTL de um adjuvante, mas também se isso é local ou sistêmico e você pode fazê-lo apenas em quatro dias.
Demonstrando o procedimento estará uma técnica em nosso laboratório, Elena Reinhard. Para isolar as células T CD8 positivas para coxa 1.1 de camundongos OT1, primeiro colha o baço e os linfonodos inguinais, axilares e cervicais de acordo com protocolos padrão, colocando todos os órgãos em um filtro de malha de poros de 100 micrômetros em uma placa de Petri de 60 milímetros contendo três a cinco mililitros de meio completo em gelo por camundongo à medida que são coletados. Não colha em grandes baços ou linfonodos OT1 porque as células T desses tecidos linfáticos podem ser leucêmicas e proliferarão mesmo sem estimulação, confundindo os resultados do ensaio.
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