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Rápida na Vivo avaliação dos recursos de geração de linfócitos de T citotóxicos do adjuv...
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JoVE Journal Medicine
Rapid In Vivo Assessment of Adjuvant’s Cytotoxic T Lymphocytes Generation Capabilities for Vaccine Development

Rápida na Vivo avaliação dos recursos de geração de linfócitos de T citotóxicos do adjuvante para desenvolvimento de vacinas

Full Text
9,311 Views
09:03 min
June 19, 2018

DOI: 10.3791/57401-v

Darío Lirussi1, Thomas Ebensen1, Kai Schulze1, Elena Reinhard1, Stephanie Trittel1, Peggy Riese1, Blair Prochnow1, Carlos A. Guzmán1

1Department of Vaccinology and Applied Microbiology,Helmholtz Centre for Infection Research

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a method for rapidly monitoring the generation of cytotoxic T lymphocytes (CTLs) using CFSE stained OT-I proliferation. This technique is beneficial for evaluating adjuvant efficacy in vaccine development against intracellular pathogens and cancer.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunology
  • Vaccinology
  • Cancer research

Background

  • Cytotoxic T lymphocytes play a crucial role in the immune response.
  • Adjuvants are substances that enhance the body's immune response to an antigen.
  • Monitoring CTL generation can inform vaccine development.
  • Rapid assessment methods are needed for timely vaccine evaluation.

Purpose of Study

  • To evaluate the ability of various adjuvants to generate CTLs.
  • To determine the local versus systemic response of CTLs.
  • To provide a quick assessment method for CTL capacity.

Methods Used

  • Adoptive transfer of CFSE stained OT1 CD8 positive T cells.
  • Monitoring proliferation in draining lymph nodes and spleens.
  • Harvesting lymphoid organs according to standard protocols.
  • Using a 100 micrometer pore mesh strainer for cell isolation.

Main Results

  • Demonstrated the ability to assess CTL generation within four days.
  • Identified the potency of adjuvants in generating cytotoxic responses.
  • Provided insights into the systemic and local immune responses.
  • Validated the method for future vaccine research.

Conclusions

  • The method is effective for rapid evaluation of CTL generation.
  • It can significantly aid in the development of vaccines.
  • Further studies can expand on the findings related to adjuvant efficacy.

Frequently Asked Questions

What is the significance of CTLs in immunology?
Cytotoxic T lymphocytes are essential for targeting and destroying infected or cancerous cells.
How does the CFSE staining method work?
CFSE staining allows for tracking cell division and proliferation by measuring fluorescence intensity.
What are adjuvants and their role in vaccines?
Adjuvants enhance the immune response to vaccines, improving their effectiveness.
Why is rapid assessment of CTL generation important?
Quick evaluations can accelerate vaccine development and response to emerging pathogens.
What are the potential applications of this research?
This research can inform the design of both prophylactic and therapeutic vaccines.
Who conducted the experiment?
The procedure was demonstrated by technician Elena Reinhard in the lab.

Apresentamos aqui um pedido de uma norma técnica imunológica (CFSE manchado OT-eu proliferação) destinados a monitorar rapidamente mediada por adjuvante T linfócitos citotóxicos (CTL) geração in vivo. Esta estimativa rápida das capacidades CTL é útil para o desenvolvimento de vacinas profiláticas contra patógenos intracelulares, bem como as vacinas terapêuticas do câncer.

O objetivo geral deste experimento é determinar a capacidade dos adjuvantes de interesse de gerar linfócitos T citotóxicos, monitorando a proliferação de células T OT1 CD8 positivas coradas com CFSE transferidas adotivamente nos linfonodos e baços de drenagem de animais receptores imunizados. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da vacinologia, como a potência de um adjuvante para gerar uma resposta celular de citotoxicidade. A principal vantagem dessa técnica é que você pode determinar não apenas a capacidade CTL de um adjuvante, mas também se isso é local ou sistêmico e você pode fazê-lo apenas em quatro dias.

Demonstrando o procedimento estará uma técnica em nosso laboratório, Elena Reinhard. Para isolar as células T CD8 positivas para coxa 1.1 de camundongos OT1, primeiro colha o baço e os linfonodos inguinais, axilares e cervicais de acordo com protocolos padrão, colocando todos os órgãos em um filtro de malha de poros de 100 micrômetros em uma placa de Petri de 60 milímetros contendo três a cinco mililitros de meio completo em gelo por camundongo à medida que são coletados. Não colha em grandes baços ou linfonodos OT1 porque as células T desses tecidos linfáticos podem ser leucêmicas e proliferarão mesmo sem estimulação, confundindo os resultados do ensaio.

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