Name: Fluorescência Molecular Tomography para a imagem latente na Vivo de Glioblastoma Xenografts (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Aprenda a usar tomografia molecular por fluorescência para imagem não invasiva de glioblastoma em xenotransplantes. Este método permite monitoramento quantitativo in vivo de tumores cerebrais em tempo real.

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Agradecemos o Dr. Frederick Lang, MD Anderson Cancer Center para GBM-PDX neurospheres. Este trabalho foi apoiado pela derrota GBM pesquisa colaborativa, uma subsidiária da sociedade nacional de cérebro Tumor (Frank Furnari), R01-NS080939 (Frank Furnari), James S. McDonnell Foundation (Frank Furnari); Jorge Benitez foi apoiado por um prêmio de americana cérebro Tumor Association (ABTA); Ciro Zanca foi parcialmente apoiado por uma bolsa de pesquisa postdoctoral do americano-italiano Cancer Foundation. Frank Furnari recebe salário e suporte adicional do Instituto Ludwig para pesquisa do câncer.

O uso de animais de pesquisa experimental e agentes infecciosos, tais como lentivirus para transduce as células cancerosas, exigem aprovação prévia pelo programa institucional cuidados com animais e pelo Comitê institucional de biossegurança. Este protocolo segue as diretrizes de cuidado animal da Universidade da Califórnia em San Diego (UCSD).
1. rotulagem de células de Glioblastoma com FP635 ou FP720 construção
<ol><li>Produzir e purificar lentivirus de acordo com o protocolo descrito por Tiscornia et al 12
</li>
	<li>Células de cultura de aproximadamente 2,0 x 106 de uma linhagem de células de glioma humano com DMEM mais 10% soro bovino fetal (FBS) em um prato de 15 cm; ou cultura 2.0 x 106 glioblastoma humano paciente-derivado (GBM-PDX) esferas com DMEM/F12 médio de 1:1 com B27 suplemento mais humano recombinante fator de crescimento epidérmico (EGF; 20 ng/mL) e FGF (10 ng/mL) num balão T75.</li>
	<li>Manter todas as células em 37 ° C, umidade relativa de 100% e 5% de CO2.</li>
	<li>Dissocia as células.<ol>
<li>Para as células de glioma: Retire o sobrenadante as chapas e adicionando 3-5 mL de tripsina 1 X para as células de glioma.</li>
		<li>Para o GBM esferas: coletar as células pipetando as células para um tubo de 15 mL.<ol>
<li>Gire para baixo as esferas GBM a 200 x g por 5 min utilizando uma centrífuga de mesa à temperatura ambiente.</li>
			<li>Remover o sobrenadante e adicionar 3 a 5 mL de solução de desprendimento de células.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Incube a todas as células a 37 ° C por 10-15 min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cuidadosamente, dissociar as células pipetando subindo e descendo várias vezes (certifique-se de que as esferas e células de glioma são concluídas dissociada) e spin-down a 200 x g por 5 min.</li>
	<li>Remover o sobrenadante e ressuspender as células com 5 mL de meio pipetando subindo e descendo várias vezes. Determine a viabilidade celular por exclusão trypan azul.</li>
	<li>Placa de 1,0 x 106 das células-alvo em um prato de 10 cm com 5 mL de meio, de pipetagem.</li>
	<li>Transduce células com lentivirus expressando proteínas fluorescentes na multiplicidade de infecção (MOI) 5 como é descrito por Tiscornia et al 12 e incubar a 37 ° C.</li>
	<li>Após 24h, remover o meio das células transduzidas, adicionar 5 mL de meio fresco e incube por 48h adicional a 37 ° C.</li>
	<li>Dissocia as células infectadas em uma suspensão de célula única, conforme descrito nas etapas 1.4-1.6. Gire para baixo as células a 200 x g por 5 min e Resuspenda em 500 µ l de solução de classificação (tampão fosfato salino (PBS) com 1% FBS).</li>
	<li>Pipete a suspensão de eritrócitos para tubos de FACS. Co manche as células com 1 µ l/mL de 4', dicloridrato de 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) para excluir as células mortas. Controles negativos são necessárias para configurar as portas do citômetro de fluxo (não-transfectadas células e células não transfectadas / DAPI manchado).</li>
	<li>Classificar as células fluorescentes/DAPI-positivo-negativo em classificação de solução, conforme descrito por Brum et al . 13e coletar as células classificadas em um tubo cônico de 15 mL.</li>
	<li>Gire para baixo as células classificadas a 200 x g por 5 min, retire o sobrenadante e ressuspender em 5 mL de meio de cultura. As células classificadas em um prato de 10 cm por pipetagem de semente. Incube a 37 ° C, durante pelo menos 48-72 h.</li>
	<li>Expandir as células classificadas por dissociando as células seguintes etapas 1.4-1.6 e chapeamento em vários pratos para experiências na vivo . Nota: Para mais detalhes sobre a célula de triagem, preparação e purificação, consulte Brum et al . 13
</li>
</ol>2. intracraniana injeção de células de Glioblastoma iRFP-tag em camundongos imunodeficientes
Nota: Antes de iniciar a cirurgia certifique-se que a sala cirúrgica e ferramentas estejam limpas para o procedimento. Use o modelo imunodeficientes (Foxn1nu) masculinos ou femininos camundongos, entre 4-5 semanas de idade e 17-19 g para injeções intracranianas. Animais devem ser alojados pelo menos 3 dias após a chegada e antes da cirurgia.
<ol><li>Preparação da pilha<ol>
<li>Colheita e dissociar fluorescentes positivo-glioma células em uma célula única suspensão (etapas 1.4-1.6) e ressuspender 0,5 ou 1,0 x 106 células em 2 a 5 µ l de PBS por injecção por animal. Pipete a suspensão de células para um tubo de 1,5 mL microcentrifuga e lugar no gelo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Administração e preparação de anestesia<ol>
<li>Prepare-se 200 µ l de solução salina contendo cetamina (100 mg/kg) e xilazina (10mg/kg) por 20 gramas de peso do corpo do mouse. Pesar os animais e calcular a dose adequada de anestesia.</li>
		<li>Fornecer uma injeção intraperitoneal de anestesia e aplique pomada oftálmica nos olhos para evitar a desidratação. Para mais detalhes sobre esta etapa ver Kathleen et al 14 Coloque o animal em uma almofada térmica de água previamente aquecida a 37 ° C.</li>
		<li>Verifica que os animais são anestesiados, monitorando a resposta de pitada de dedo do pé (pedal reflex), geralmente dentro de 5-10 min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Injeção intracraniana<ol>
<li>Carregar um 5 µ l seringa Hamilton (agulha de ponta romba) com suspensão de células e montar no porta-sonda.</li>
		<li>Coloque o mouse em uma armação estereotáxica animal pequena e consertar a cabeça usando as barras de orelha e o adaptador de incisivo seguindo os detalhes descritos por Carvalho et al . 15
</li>
		<li>Desinfete com solução de 70% de etanol e betadine na cabeça. Certifique-se que o sítio cirúrgico está completo estéril. Executar uma média incisão com um bisturi pequeno e separar a pele e os tecidos conjuntivos.</li>
		<li>Coloque a seringa Hamilton sobre o ponto de bregma usando o micromanipulador.</li>
		<li>Mova a sonda titular ântero-posterior 1,0 mm e 2,0 mm lateral do ponto de bregma. Marque esta posição com um lápis.</li>
		<li>Neste local, cuidadosamente faça um buraco no crânio com uma broca Hand-Held do micromotor, aplicando leve pressão para baixo até que os vasos sanguíneos tornam-se visíveis. Não perturbem o parênquima aracnoide máter e o cérebro.</li>
		<li>Introduzir a agulha no orifício de trépano e avançar 3,0 mm abaixo da superfície pial.</li>
		<li>Configurar o volume (2-5 µ l) e a taxa de fluxo (1 µ l/min) de injeção usando um injector estereotáxica motorizado ou executar manualmente a injeção.</li>
		<li>Após a injeção, remova a agulha gradualmente por ascendente 1,0 mm cada 1 min e limpar o local da injeção com etanol a 70%.</li>
		<li>Perto da pele ferida com grampos cirúrgicos ou fazendo suturas cirúrgicas (muitas vezes referidas como pontos) e ver Kathleen et al 14 para mais detalhes.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Recuperação de animais<ol>
<li>Transferir o animal para uma almofada térmica de água (37 ° C) e monitorar a temperatura corporal, taxa de respiração e batimentos cardíacos, até a recuperação completa. Administre analgesia por protocolos padrão. Nota: Para obter mais informações sobre o procedimento estereotáxica, cirurgia e coordenadas, consulte outros relatórios5,14,15.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. FMT Imaging
Nota: De acordo com o objetivo experimental, o glioblastoma iRFP-tag células podem ser monitorado na vivo antes, durante ou após o tratamento. Para efeito de imagem, anestesiar animais utilizando uma câmara de indução de isoflurano, manter-se em uma gaveta de imagens durante a digitalização e imagem na estação de ancoragem do tonalizador a FMT.
<ol><li>Retire o animal da gaiola e coloque na câmara de indução de isoflurano. Fechar a câmara e ligar o fluxo de oxigênio e vaporizador para 3-5%.</li>
	<li>Monitorar o animal até que ele é completamente anestesiado, geralmente dentro de 1-2 min inconsciente animais não devem responder a estímulos externos.</li>
	<li>Remover o animal anestesiado da câmara e colocar o animal na gaveta de imagem, colocando o adaptador cabeça primeiro, seguido por sujeitar o animal voltada para baixo. Certifique-se de que a cabeça está localizada no centro da fita.</li>
	<li>Coloque a placa superior da fita em cima e aperte os botões de ajuste até 17 mm.</li>
	<li>Uma vez que o animal está seguro na gaveta da imagem latente, proceder-se à imagem inserindo a gaveta interna docking station de Imageador a FMT, onde o isoflurano é bombeado para manter o animal anestesiado.</li>
	<li>Execute o software imager e analisador clicando duas vezes o ícone do software.</li>
	<li>Na janela "Guia Experimental", selecione o "Database" e "Grupo de estudo".</li>
	<li>Vá para a janela de "Guia de Scan" e selecione o assunto a imagem clicando em "selecionar o assunto". Também, selecione o canal do laser no painel "Canal de Laser". Para as células FP635-etiquetadas, selecione "laser canal 635 nm" e para as células FP720-etiquetadas, selecione "canal 680 nm a laser".</li>
	<li>Adquira uma imagem clicando na opção "Captura" na janela "Guia Scan". Em seguida, ajuste o campo de verificação clicando e arrastando o campo de verificação da imagem capturada para um determinado número de locais de origem, geralmente dentro de 20-25 fontes para o lado ipsilateral.</li>
	<li>Marque a opção "Adicionar a fila de reconstrução" e bateu o "Scan" na janela "Guia Scan".</li>
	<li>Esperar até que a varredura for concluída e em seguida, remova o cartucho da imagem latente da docking station.</li>
	<li>Remover a placa superior da fita e coloque a animal de volta para a jaula.</li>
	<li>Repita as etapas 3.1-3.12 para o resto dos animais.</li>
</ol>4. análise de imagens
<ol><li>O software analisador e gerador de imagens, selecione a janela "Guia de análise".</li>
	<li>Carrega o dataset e o assunto para analisar clicando no botão "+" no painel "Seleção do conjunto de dados" da janela "Guia de análise".</li>
	<li>Uma vez que a imagem tenha sido carregada na janela "Guia de análises", realizar a região de análise de interesse (ROI), selecionando o ícone elipsoide, localizado no canto superior esquerdo da janela do "Guia de análise".</li>
	<li>Ajuste o limite como zero no painel "dados estatísticos" pelo botão direito coluna "limite" na janela "Guia de análise".</li>
	<li>O valor total no painel "Dados estatísticos" representa o sinal das células fluorescentes-tag glioblastoma implantadas no cérebro do rato.</li>
	<li>Repita as etapas 4.2-4.4 para o resto dos animais. Carregar ou remover um assunto novo, clicando no "+" ou "−" botão, respectivamente, no painel "Seleção do conjunto de dados" da janela "Guia de análise". Nota: Para obter mais informações sobre a imagem de FMT e operação de software, consulte20.
</li>
</ol>

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</ol>

Os autores declaram não há conflitos de interesses.

Xenografts tumor têm sido extensivamente usados em pesquisa de câncer e desenvolveu um número de técnicas de imagem bem estabelecidas: BLI; ressonância magnética (MRI); tomografia por emissão de positrões (PET), computado (CT); FMT. Cada uma dessas abordagens vem com prós e contras, mas no final se complementam com o tipo de informação fornecida. Um do mais comumente usado em vivo tecnologia de imagem é BLI5,6,7,</...

Câncer é uma das principais causas de mortes relacionadas com a doença em seres humanos no mundo industrializado. Com um extremamente elevado número de mortes, novos tratamentos são urgentemente necessários. Glioblastoma multiforme (GBM) é um tipo extremamente letal de câncer no cérebro, composto de populações heterogêneas de células cerebrais tumor estromal e imune. De acordo com o registro de tumor cerebral Central dos EUA, a incidência de tumores cerebrais primários não-malignas e malignas é aproximadamente 22 casos por 100.000. Aproximadamente 11.000 novos casos são esperados para serem diagnosticados nos EUA em 20171.
Estudos pré-clínicos investigam a probabilidade de um medicamento, procedimento ou tratamento eficaz antes de serem testadas em seres humanos. Um dos primeiros passos laboratoriais em estudos pré-clínicos é identificar potenciais alvos moleculares para tratamento medicamentoso usando células cancerosas implantadas no organismo hospedeiro, definido como modelos de xenoenxertos humana. Dentro deste contexto, os modelos de enxerto de tumor cerebral intracraniana usando xenografts paciente-derivado (PDXs) têm sido amplamente utilizados para estudar a biologia do tumor de cérebro, progressão, evolução e resposta terapêutica e mais recentemente para o desenvolvimento de biomarcadores, drogas triagem e personalizada medicina2,3,4.
Um dos mais acessíveis e não-invasivo na vivo por imagens métodos para monitorar xenografts intracranianas é bioluminescência de imagem (BLI)5,6,7,8. No entanto, algumas limitações BLI incluem administração de substrato e disponibilidade, estabilidade da enzima e luz têmpera e Dispersando durante aquisição9de imagem. Aqui nós relatamos o FMT infravermelho como uma alternativa de imagem método para monitorar modelos pré-clínicos glioblastoma. Neste método, a aquisição do sinal e quantificação de PDXs intracraniano implantados, expressando uma proteína fluorescente de infravermelho próximo iRFP72010,11 (doravante denominado como FP720) ou turboFP635 (doravante denominado como FP635), é executada com um sistema de imagem de FMT. Usando a tecnologia FMT, o ortotópico tumores podem ser monitorado na vivo antes, durante ou após o tratamento, de forma não-invasiva, livre de substrato e quantitativa para observações pré-clínicas.

<table><tbody><tr><td>DMEM/Glicose Alta&nbsp;</td><td>HyClone/GE</td><td>SH30022.1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 1:1&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11320-082</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>HyClone/GE</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Tecnologias celulares inovadoras</td><td>AT-104</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>HyClone/GE</td><td>SH30236.01</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento B27</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>recombinante humano EGF&nbsp;</td><td>Stemcell Technologies</td><td>2633</td><td></td></tr><tr><td>FGF recombinante humano</td><td>Stemcell Technologies</td><td>2634</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Corning</td><td>21-031-00</td><td></td></tr><tr><td>Tubos FACS</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62248</td><td></td></tr><tr><td>Blasticidina</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A1113903</td><td></td></tr><tr><td>p24 ELISA&nbsp;</td><td>Clontech</td><td>632200</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina</td><td>Zoetis</td><td>NADA 043-403</td><td>Substância controlada</td></tr><tr><td>Pomada</td><td>Dechron</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Sutura absorvível</td><td>CpMedical</td><td>VQ392</td><td></td></tr><tr><td>5 ul seringa</td><td>Hamilton</td><td>26200-U</td><td>Número de catálogo vendido por Classificador de Células Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td></td><td>Sony</td><td>SH8007</td><td></td></tr><tr><td>Quadro estereotáxico para mouse&nbsp;</td>Injetor estereotáxico motorizado <td>Stoelting</td><td>51730</td><td></td></tr><tr><td>Furadeira de mão Micromotor</td><td></td><td></td> Stoelting 53311 Almofada de aquecimento de mouse Foredom K1070<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td>&nbsp;<td></td></tr><tr><td></td>Sistema de Tomografia de Fluorescência <td>TP-22G</td><td></td>da <td>Ken Scientific Corporation</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Software de Imagem TrueQuant PerkinElmer</td><td>FMT 2500 XL</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td></td><td></td>7005319</tr><tr><td>Ultra-centrífuga Optima L-80 XP</td><td>Beckman Coulter</td><td>392049</td><td></td></tr><tr><td>Pratos de 100 mm Olympus</td><td>Plastics</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>Pratos de Cultura de Tecidos de 150 mm</td><td>Olympus Plastics</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>Frascos de Cultura de Tecidos T75</td><td>Corning</td><td>430720U</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cônicos de 50 mL</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cônicos de 15 mL</td><td>Olympus Plastics</td><td>28-101</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga Avanti J-20</td><td>Beckman Coulter</td><td>J320XP-IM-5</td><td></td></tr><tr><td>Tubo, Polipropileno, Parede fina, 5,0 mL</td> Tubo <td>de 326819</td><td></td><td>Beckman Coulter</td></tr><tr><td>, Parede fina, Polipropileno, 38,5 mL, 25 x 89 mm</td><td>Beckman Coulter</td><td>326823</td><td></td></tr><tr><td>Camundongos nus atímicos</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Código da cepa&nbsp; 490 (Homozigoto)</td><td>É necessária a aprovação prévia do Programa Institucional de Cuidados com os Animais e do Comitê Institucional de Biossegurança.&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr></tbody></table>

fluorescência molecular tomography para a imagem latente na vivo de glioblastoma xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Tumorigenicidade é a capacidade das células cancerosas para formar um tumor massa. É uma abordagem amplamente utilizada para determinar se as células forem oncogenicidade camundongos imunodeficientes a injectar por via subcutânea com células cancerosas e medindo a massa tumoral, depois torna-se visível e palpável. Ortotópico injeções de células de câncer visam introduzir o enxerto heterólogo no microambiente que mais se assemelha ao tecido de origem do tumor a ser estudada. Pesquisa de cancer do cérebro requer intracraniana injeção de células cancerosas para permitir a formação de tumor e análise no microambiente exclusivo do cérebro. A imagem na vivo de xenografts intracranianas monitora instantaneamente a massa tumoral de ratos orthotopically incorporada. Aqui nós relatamos o uso da fluorescência molecular tomografia computadorizada (FMT) de xenografts do tumor de cérebro. As células cancerosas são primeiro transfectadas com perto de infravermelhas proteínas fluorescentes e então injetadas no cérebro de ratos imunodeprimidos. Os animais são então digitalizados para obter informações quantitativas sobre a massa tumoral durante um período prolongado de tempo. Célula pré-rotulagem permite custo efetiva, reprodutível e confiável quantificação dos encargos tumor dentro de cada rato. Nós eliminou a necessidade de injeção de substratos de imagem e assim reduzir o stress dos animais. Uma limitação dessa abordagem é representada pela incapacidade de detectar massas muito pequenas; Entretanto, tem a melhor resolução para massas maiores do que outras técnicas. Pode ser aplicado para avaliar a eficácia de um tratamento medicamentoso ou alterações genéticas de linhas de células de glioma e amostras de paciente-derivado.

U87EGFRvIII de células de glioblastoma (u-87 células expressando over a variante do receptor de EGF III) foram cultivadas de acordo com a etapa 1.2. Lentivirus foi produzido e purificado conforme item 1.1. A concentração viral foi determinada pelo p24 análise de ELISA. As células foram transfectadas com lentivirus carregando infravermelhas proteínas fluorescentes conforme item 1.8. O plasmídeo codificação FP72010,11 foi gentilment...

Ortotópico intracraniana injeção de células de tumor tem sido usada na pesquisa do câncer para estudar a biologia do tumor de cérebro, progressão, evolução e resposta terapêutica. Aqui nós apresentamos fluorescência molecular tomografia computadorizada de xenografts tumor, que fornece em tempo real imagens intravital e quantificação de um tumor massa em modelos pré-clínicos glioblastoma.

Fluorescência Molecular Tomography para a imagem latente na Vivo de Glioblastoma Xenografts

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

O objetivo geral deste procedimento experimental é estabelecer um modelo de imagem pré-clínica de tumor cerebral usando tomografia molecular de fluorescência ou FMT. Este método pode ajudar a responder a questões-chave nos campos da biologia do tumor cerebral, pesquisa do câncer e descoberta de medicamentos sobre agressividade tumoral, heterogeneidade e capacidade de resposta ao tratamento. A principal vantagem dessa técnica é que os tumores podem ser monitorados in vivo antes, durante ou após o tratamento de maneira não invasiva, sem sutura e quantitativa.Outra vantagem desta técnica é a possibilidade de aplicação a outros tipos de modelos de xenoenxerto implantados em diferentes órgãos do animal. Comece semeando uma vez 10 até a sexta célula de glioblastoma em cinco mililitros de meio em um prato de 10 centímetros para incubação de 24 horas em uma incubadora de cultura de células. Na manhã seguinte, transduza as células com lentivírus, expressando uma proteína fluorescente apropriada de interesse em uma multiplicidade de infecção de cinco e devolva as células à incubadora.Após 24 horas, substituir o sobrenadante por cinco mililitros de meio fresco e incubar a cultura durante mais

fluorescence-molecular-tomography-for-vivo-imaging-glioblastoma

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Luciferase modificados xenotransplantes tumorais humanos cerebral intracraniana pode ser estabelecida em camundongos atímicos, com posterior acompanhamento do crescimento tumoral e resposta à terapia com imagem de bioluminescência. Em combinação com a análise de sobrevivência, o monitoramento bioluminescência é uma ferramenta de pesquisa essencial para ensaios pré-clínicos de terapias sendo considerado para o tratamento de tumores cerebrais.

Estabelecer xenoenxertos tumor intracraniano Cérebro com posterior análise do crescimento tumoral e resposta à terapia com imagem Bioluminescência

Implantação intracraniana de GL261 células em camundongos C57BL / 6 produz gliomas malignos que recapitulam muitas das características de glioblastoma multiforme humano. Usamos GL261 células expressando estavelmente luciferase para nos permitir...

Implantação intracraniana com 3D subseqüentes In Vivo Bioluminescent imagem de Gliomas murino

Tomografia de fluorescência difusa oferece uma abordagem de custo relativamente baixo e com elevado potencial de todo a...

Tomografia Computadorizada guiada por tomografia difusa no domínio do tempo de fluorescência em pequenos animais para localização de biomarcadores de câncer

Nós descrevemos um método integrado para a implantação, precisa estereotáxica de células de glioblastoma multiforme humano no cérebro de camundongos nude e série...

Implantação estereotáxica intracraniana e<em&gt; Em vivo</em&gt; Imaging Bioluminescent de xenoenxertos de tumores em um Sistema Modelo de Rato Glioblastoma Multiforme

Neste vídeo, descrevemos um protocolo para células de glioma geneticamente modificadas para expressar proteína fluorescente infravermelha ou iRFP. Essas células de glioma marcadas com fluorescência são úteis em imagens de tecidos profundos para entender o desenvolvimento de tumores cerebrais.

Marcação fluorescente de células de glioma: um método de transfecção baseado em vetor lentiviral para obter células de glioma que expressam proteína fluorescente para imagens de tecidos profundos

Neste vídeo, descrevemos a tomografia molecular de fluorescência ou FMT para imagens in vivo de xenoenxertos de glioblastoma marcados com proteína fluorescente em modelos de camundongos. A técnica é útil para elucidar os efeitos da terapêutica antitumoral em nível molecular.

Tomografia Molecular de Fluorescência: Uma Técnica de Imagem para Imagem In Vivo de Xenoenxertos de Glioblastoma Marcados com Proteína Fluorescente em Modelo de Camundongo

Fonte: Clark, A.J., et al. Imagem de bioluminescência de um modelo animal imunocompetente para glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra imagens de bioluminescência para rastrear a progressão do glioblastoma em um modelo de camundongo imunocompetente, usando células tumorais que expressam luciferase e luciferina para quantificar o crescimento do tumor de forma não invasiva.

Imagem de bioluminescência de um modelo de camundongo imunocompetente para glioblastoma

Nós estabelecemos um modelo de glioblastoma ortotópico cortical em camundongos para microscopia de dois fótons intravital que recapitula as restrições biofísicas normalmente no jogo durante o crescimento do tumor. Uma janela de vidro crônica substituir o crânio acima do tumor permite o acompanhamento da progressão do tumor ao longo do tempo por meio de microscopia de dois fótons.

Um Glioblastoma Rato modelo ortotópico Manter restrições Cérebro parênquima físicas e Adequado para intravital dois fótons Microscopia

As células de glioma GL261 fornecem um modelo animal imunocompetente útil de glioblastoma. Os objetivos deste protocolo são demonstrar técnicas adequadas para monitorar o crescimento do tumor intracraniano usando imagens de bioluminescência in vivo e verificar a utilidade das células GL261 modificadas com luciferase para estudar a imunologia tumoral e abordagens imunoterapêuticas para o tratamento do glioblastoma.

Bioluminescência imagem de um modelo animal para imunocompetentes Glioblastoma

Aqui usamos bioluminescentes, raio-x e positron-emissão calculado a tomografia computadorizada/tomografia computadorizada de imagem para estudar a atividade como a inibição de mTOR impactos tumores de medula óssea-incorporada do mieloma múltiplo em um modelo de transplante. Isto permite análises fisiologicamente relevantes, não-invasivo e multimodais do efeito antimieloma de terapias direcionamento incorporada a medula óssea mieloma tumores na vivo.

Imagem de tomografia computadorizada multimodal bioluminescentes e emissão positrônica Tomography/computacional de mieloma múltiplo Xenografts de medula óssea em camundongos NOG

Apresentamos uma nova abordagem para microscopia de dois fótons da liberação tumoral de nanopartículas de óxido de ferro marcadas fluorescente para glioblastoma em um modelo de camundongo.

Microscopia Intravital de Dois Fótons de Glioblastoma em Modelo Murino

Aprenda a usar tomografia molecular por fluorescência para imagem não invasiva de glioblastoma em xenotransplantes. Este método permite monitoramento quantitativo in vivo de tumores cerebrais em tempo real.

Fluorescência Molecular Tomography para a imagem latente na Vivo de Glioblastoma Xenografts

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