Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

Gustavo Diaz; Chandler Bridges; Megan Lucas; Yong Cheng; Jeff S. Schorey; Karen M. Dobos; Nicole A. Kruh-Garcia

doi:10.3791/57467

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Digestão de proteínas, ultrafiltração e cromatografia de exclusão para otimizar o isolamento do Exosomes do Plasma de sangue humano e soro

Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

JoVE Journal
Bioquímica

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Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

Digestão de proteínas, ultrafiltração e cromatografia de exclusão para otimizar o isolamento do Exosomes do Plasma de sangue humano e soro

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09:22 min

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April 13, 2018

DOI:

10.3791/57467-v

DOI:

10.3791/57467-v

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09:22 min

April 13, 2018

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Gustavo Diaz¹, Chandler Bridges¹, Megan Lucas¹, Yong Cheng², Jeff S. Schorey², Karen M. Dobos¹, Nicole A. Kruh-Garcia¹

¹Department of Microbiology, Immunology and Pathology,Colorado State University, ²Department of Biological Sciences, Eck Institute for Global Health,University of Notre Dame

Transcrição

Summary

Aqui, apresentamos um protocolo para purificar exosomes do plasma e soro com reduzida co purificação de proteínas do sangue não-exosomal. O protocolo otimizado inclui ultrafiltração, tratamento com proteases e cromatografia de exclusão. Reforçada purificação de exosomes análises benefícios a jusante, incluindo a quantificação mais precisa de vesículas e caracterização proteômica.