Name: Murino colostomia Distal, um novo modelo de colite de diversão em camundongos C57BL/6 (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Aprenda a realizar colostomia distal murina para estudar colite de diversão em camundongos C57BL/6. Este modelo reproduz características histológicas humanas sem necessidade de animais geneticamente modificados.

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Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pela autoridade veterinária do governo (turismo für Landwirtschaft, und Lebensmittelsicherheit Fischerei Mecklenburg-Vorpommern, (LALLF M-V)).
1. pré-operatório cuidados e preparação do Animal
<ol><li>Após a chegada na instalação de animais, dividir os animais (C57Bl/6) em grupos de tamanho similar, cada grupo da gaiola juntos e manter grupos constante em todas as experiências. Nota: Use animais do mesmo sexo. Os resultados descritos foram obtidos com ratos masculinos. Nota: Se animais machos são usados, começando juntos quando eles são 7 semanas de idade, para que possa estabelecer-se uma hierarquia de grupos de gaiola, minimizando assim o risco de comportamento agressivo durante as experiências.</li>
	<li>Pelo menos uma semana antes da cirurgia, alternar para uma alta energia (> 14 MJ/kg) e rica em proteínas (> 20%) alimentar contendo todos os oligoelementos essenciais e vitaminas (para obter detalhes, consulte lista de materiais). Nota: Assegurar todos os ratos pesar pelo menos 25 g quando a cirurgia é realizada.</li>
	<li>Induzi a anestesia e analgesia pela injeção intraperitoneal de cetamina (87 mg/kg, i.p.) e cloridrato de xilazina (13 mg/kg, i.p.). Espere até que o mouse tolera estimulação mecânica, por exemplo, arremesso de dedo do pé, sem resposta motora.</li>
	<li>Prenda o mouse seguiram com fitas na posição supina sobre uma subjacência de calor posicionada a mesa de operação, garantindo o posicionamento durante a operação estável e evitando uma esmagadora perda de calor do corpo. Nota: A subjacência de calor deve ter uma temperatura de superfície de 36 ° C a 40 ° C; a temperatura de operação deve ser de 21 ° C.</li>
</ol>2. distal colostomia operação
<ol><li>Raspe o cabelo abdominal. Antes de iniciar a cirurgia, desinfecte o campo de operação três vezes, utilizando álcool 70% e um Iodofor. Cubra o campo de operação, a garantia de condições assépticas.</li>
	<li>Realizar uma laparotomia mediana de 15 mm por incisão da musculatura abdominal e o peritônio ao longo da linea alba, minimizando assim a perda de sangue.</li>
	<li>Use dois DeBakey atraumática pinça, puxe cuidadosamente o ceco, íleo terminal e ascendente e o cólon transverso da cavidade peritoneal. Nota: Tenha cuidado para limitar estritamente a manipulação mecânica do intestino para evitar danos às estruturas mesentéricas.</li>
	<li>Identifica o polo cecal, o cólon ascendente e intestino delgado (figuras 1a e 1b). Nota: A identificação correta do cólon ascendente é fundamental para colocação da colostomia. Em casos onde a anatomia da região ileocecal é ambígua, a presença de Peyer identifica o intestino delgado, e a presença de fezes formadas caracteriza o cólon.</li>
	<li>Use uma régua para determinar a posição da futuro da colostomia. Ele deve ser colocado 20mm distal à válvula ileocecal para uma colostomia distal.</li>
	<li>Efectue uma segunda incisão de 3 mm na parede abdominal no quadrante superior direito. Puxe o segmento de cólon anteriormente identificados através desta incisão para formar um loop, tomando cuidado para não distorcer o loop.</li>
	<li>Passe cuidadosamente uma cânula de calibre 22 i.v. flexível através do mésocôlon. Tome cuidado para não danificar estruturas vasculares mesentéricas.</li>
	<li>Retorno do intestino para a cavidade peritoneal.</li>
	<li>Corrigi as duas extremidades do tubo flexível para a pele com pontos simples e uma sutura absorvível (por exemplo, Poliglactina 910 ou fibras c de 1/2 de 4-0).</li>
	<li>Antes de fechar a laparotomia, realizar ressuscitação com fluidos usando uma injeção intraperitoneal de soro fisiológico a 0,9% 0,5 mL.</li>
	<li>Feche o peritônio e a camada muscular com uma sutura contínua usando uma sutura absorvível (por exemplo, Poliglactina 910 ou fibras c de 1/2 de 4-0). Feche a pele com uma sutura contínua usando uma sutura absorvível (por exemplo, Poliglactina 910 ou fibras c de 1/2 de 4-0).</li>
	<li>Abra o loop exteriorização do cólon através da realização de uma transecção subtotal usando uma tesoura bem. Evite todos os ferimentos para o mesentério. Não transecto completamente o cólon.</li>
	<li>Corrigir a cada abertura da colostomia usando três pontos único da cheio-espessura no peritônio e pele usando um monofil, sutura absorvível (por exemplo, polydioxanone ou monofil 3 de 6-0/8s). O loop aferente, que é uma final-colostomia funcional, e o loop eferente, que é uma fístula mucosa, sejam claramente separadas neste momento (Figura 1C). Nota: O tempo de operação deve ser menos de 20 minutos para limitar as perdas térmicas e fluidas.</li>
	<li>Após terminar a cirurgia, desinfectar instrumentos usando uma solução de desinfecção aldeído livre em um banho ultra-sônico de acordo com as instruções do fabricante.</li>
</ol>3. operação sham (Colotomy)
<ol><li>Execute as etapas 1.1. através de 2.4.</li>
	<li>Use uma régua para determinar a posição de futuros colotomy. O colotomy deve ser posicionado à mesma distância da válvula ileocecal como a colostomia no grupo experimental.</li>
	<li>Abra o cólon pelo menos dois terços sua circunferência usando tesouras bem.</li>
	<li>Fechar o colotomy com uma única camada, espessura total interrompido sutura usando um monofil, sutura absorvível (por exemplo, polydioxanone, monofil 3 de 6-0/8s). Nota: O tempo de operação deve ser menos de 20 minutos para um cirurgião tarimbado, limitando perdas térmicas e fluidas.</li>
	<li>Execute os passos 2.10. , 2.11. e 2.14.</li>
</ol>4. pós-operatório cuidados
<ol><li>Retorno de animais de suas gaiolas. Proporcionam um ambiente bem temperado de 37 ° C (por exemplo, com uma lâmpada infravermelha) até que os ratos são totalmente acordados. Em seguida, manter os ratos em um ambiente de temperatura e umidade-regulamentados (21 ° C; 30% ± 10% umidade relativa). Permita o livre acesso à comida e água potável. Para facilitar a penetração de fluidos, fornecem adicional ensopados de água alimentação animal.</li>
	<li>Iniciar analgesia pós-operatória injetando buprenorfina de peso de corpo de 0,1 mg/kg s.c. quando animais mostram resposta à estimulação mecânica. Tenha cuidado para evitar a depressão respiratória.</li>
	<li>Suplemento de água potável com tramadol 1mg/mL para analgesia contínua durante a primeira semana pós-operatória.</li>
	<li>Para compensar a diminuição da ingestão de líquidos devido à mobilidade reduzida, fornecer um bloco sólido beber na gaiola durante a primeira semana pós-operatória.</li>
	<li>Pesar os animais e o escore de comportamento animal diariamente durante a primeira semana, em dois dias durante o restante do primeiro mês e a cada três dias durante o segundo mês usando o escore de severidade de doença descrito em Kleinwort et al 6.</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

Todos os autores declaram que eles têm não tem interesses concorrente.

O modelo murino de DC apresentado neste protocolo confiável reproduz as características histopatológicas de DC humana (por exemplo, de novo desenvolvimento de folículos linfoides da submucosa de segmentos intestinais inflamados, cripta encurtamento e reduções em número de células de Goblet). Além desta vantagem, este modelo é induzido por um fator desencadeante muito semelhante e apresenta-se com um curso clínico de moderada a leve gravidade como é o caso em humanos mais afetados.
<p class="jove_con...

Nos últimos anos, um número substancial de colite não-infecciosas entidades diferentes de doenças clássica inflamatória intestinal (IBD; i. e., ulcerosa de Crohn doença ou colite) tem sido clinicamente e histopatologicamente caracterizada em seres humanos. Os mecanismos fisiopatológicos, levando ao desenvolvimento destas formas de colite não são completamente compreendidos parcialmente, porque os modelos animais apropriados são escassos. Colite de diversão é uma dessas entidades recentemente descritas. Embora o termo foi inventado em 1980 por Glotzer1, a descrição inicial de um fenótipo semelhante foi dada em 1972 por Morson2. A doença se desenvolve em 50% a 91% dos pacientes com desvio de enterostomy, e sua intensidade clínica varia de3,4. Tendo em conta a incidência anual de cerca de 120.000 pacientes de colostomia em Estados Unidos da América, esta entidade de doença constitui um importante problema de saúde.
O objetivo geral de desenvolver este protocolo foi fornecer um modelo murino de DC que se baseia em um gatilho de colite semelhante ao observado em humano DC e que reproduz as características histopatológicas primárias da doença humana. Em contraste com outros modelos de colite murino, indução de colite em nosso modelo não requer animais geneticamente modificados (por exemplo, ratos transgénicos de IL-7, caderina N dominante negativos ratos ou camundongos TGFβ- / - ), o aplicativo de quimicamente irritante de substâncias (por exemplo, dextrano sulfato de sódio (DSS) - colite induzida, ou trinitrobenzeno sulfônico (neutrófilos) - induzido colite), ou a transferência de populações de células específicos em camundongos deficientes imunes (como a transferência dealta CD45RB modelo de colite) (para uma revisão, ver5). Em contraste com outros modelos, o sistema imunológico intacto do nosso modelo DC permite avaliação do mecanismo imunológico envolvido no desenvolvimento da DC. A limitação de inflamação da mucosa do segmento intestinal excluído permite a avaliação de sua repercussão na imunidade da mucosa em outras partes do trato gastrintestinal, sobre a homeostase imune em outros compartimentos imunes do trato intestinal (por exemplo, , Do Peyer patches e mesenteriale dos gânglios linfáticos) e sobre a homeostase imune de todo o organismo. Finalmente, o nosso modelo constitui um instrumento apropriado para investigar os mecanismos de controlo locais estímulos inflamatórios provenientes de alterações no ambiente local normal para o local microbiome tanto antígenos alimentares.

<table><tbody><tr><td>Material de operação</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>heat underlay, 6 watts</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 70% (com metiletilcetona)</td><td>Farmácia do Hospital Universitário Greifswald</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores de madeira, cabeça de algodão pequena unilateral, bastão de madeira, comprimento de 150 mm</td><td>Centramed GmbH, Alemanha</td><td>8308370</td><td>para desinfecção do campo de operação</td></tr><tr><td>Scissor</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>Pinça DeBakey atraumática</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Cânula de segurança i.v. 22G</td><td>Braun Melsungen AG, Alemanha</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 trançado violeta; V-5 17 m 1/2c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (Seringas com agulha com interior estéril)</td> <td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecilpropan-1,3-diamina)</td> <td>ANTISEPTICA, Alemanha</td><td>18824-01</td><td>desinfecção de instrumentos cirúrgicos em banho ultrassônico</td></tr><tr><td>Medicamentos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>cetamina 10%, 100 mg / mL (cloridrato de cetamina)</td> <td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/mL (cloridrato de xilazina)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Braun Melsungen AG, Alemanha</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0,3 mg/mL (buprenorfina)</td><td>Bayer, Alemanha</td><td>PZN: 01498870</td><td>0,1 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Tramal Drops, 100 mg/mL (cloridrato de tramadol)</td><td>Gr&uuml; nenthal GmbH, Alemanha</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL de água potável</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxona)&nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, Alemanha</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg de peso corporal i.p.</td></tr><tr><td>metronidazol 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Alemanha</td><td>PZN: 05543515</td><td>12,5 mg/kg de peso corporal i.p.</em</td></tr><tr><td>>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Alemanha</td><td>&nbsp; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>Solid Drink Dehyprev Vit BIO, bolsas</td><td>TripleATrading, Holanda</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Alemanha</td><td></td><td>microscopia de luz</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&nbsp;</td><td>Abaxis, EUA</td><td>770-9000</td><td>Analisador de hematologia veterinária de 50 &micro; l EDTA-sangue venoso</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX (banho ultrassônico)</td><td>Bandelin electronics, Alemanha</td><td>RK 100 H</td><td>desinfecção de instrumentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 software</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Versão 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murino colostomia distal, um novo modelo de colite de diversão em camundongos c57bl/6

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Colite de diversão (DC) é uma condição clínica frequente, ocorrendo em pacientes com segmentos intestinais excluídos o fluxo fecal como resultado de um desvio enterostomy. A etiologia desta doença permanece mal definida mas parece diferir da clássica Enteropatias inflamatórias tais como a doença de Crohn e colite ulcerativa. Pesquisa teve como objetivo decifrar os mecanismos fisiopatológicos, levando ao desenvolvimento desta doença tem sido severamente dificultada pela falta de um adequado modelo murino. Este protocolo gera um modelo murino de DC que facilita o estudo da função do sistema imunológico e sua interação com o microbiome no desenvolvimento da DC. Nesse modelo, usando animais C57BL/6, partes distais do cólon são excluídas do fluxo fecal, criando uma colostomia distal, provocando o desenvolvimento de leve a moderada inflamação nos segmentos excluídos do intestino e reproduzindo as lesões de marca registrada do ser humano DC com uma resposta inflamatória sistêmica moderada. Em contraste com o modelo de rato, um grande número de modelos de murino geneticamente modificados no fundo C57BL/6 está disponível. A combinação destes animais com o nosso modelo permite que as funções potenciais de individuais citocinas, quimiocinas ou receptores de moléculas bioativas (por exemplo, interleucina (IL) -17; Il-10, chemokine CXCL13, chemokine receptores CXCR5 e CCR7 e o receptor de esfingosina-1-fosfato 4) para ser avaliado na patogénese da DC. Em grande parte a disponibilidade de cepas de congenic do mouse sobre o fundo de C57BL/6 facilita a transferência de experiências para estabelecer os papéis de tipos de células distintas envolvidos na etiologia da DC. Finalmente, o modelo oferece a oportunidade de avaliar as influências de intervenções locais (por exemplo, modificação do local microbiome ou terapia anti-inflamatória local) sobre imunidade mucosal em segmentos intestinais afetados e não afetados e na homeostase imune sistêmica.

Cirurgia é bem tolerada no experimental (colostomia) e grupos de Souza (colotomy). Mortalidade perioperatória não deve exceder 10%, quando a gestão de cirurgia e perioperatório é executada corretamente. Na primeira semana pós-operatória, perda de peso significativa é vista em ambos os grupos, experimentais e sham. Animais do grupo farsa atingir seu nadir de peso, geralmente em direção ao quarto dia de pós-operatório, mas ocorre um dia depois no grupo experimental. Perda de peso é mais pro...

Murino colostomia distal fornece um modelo murino para colite de diversão humana, uma colite linfocítica predominantemente no segmento de cólon excluído do fluxo fecal.

Murino colostomia Distal, um novo modelo de colite de diversão em camundongos C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

O objetivo geral deste protocolo é facilitar o estudo do papel do sistema imunológico e sua interação com o microbioma no desenvolvimento da colite de desvio. Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave sobre a colite por desvio, que ocorre em ambos os segmentos excluídos do fluxo fecal e afeta até 90% dos pacientes com enterostomia de desvio. A principal vantagem dessa técnica é que ela não requer animais geneticamente modificados, o uso de substâncias quimicamente irritantes ou a transferência de populações de células específicas para camundongos imunodeficientes para induzir colite.Ao chegar ao biotério, divida os ratos em grupos de tamanho semelhante. Enjaular cada grupo e mantê-los constantes durante os experimentos. Pelo menos uma semana antes da cirurgia, mude para um alimento de alta energia e alta proteína contendo todos os oligoelementos e vitaminas essenciais.Para se preparar para a cirurgia após anestesiar o animal de acordo com o protocolo de texto, use fita adesiva para estabilizar o animal em decúbito dorsal em uma almofada de aquecimento para evitar a perda de calor corporal. Em seguida, verifique se o mouse tolera estimulação mecânica, por exemplo, pinça do dedo do pé sem resposta motora.Antes de iniciar a cirurgia, desinfete o campo de operação três vezes com álcool 70% e um iota 4. Cubra o campo de operação para garantir condições assépticas. Realize uma laparotomia média de 15 mm incisando os músculos abdominais e o peritônio ao longo da linha alba, minimizando assim a perda de sangue.Em seguida, usando duas pinças atraumáticas debakey, puxe cuidadosamente o ceco, o íleo terminal e o cólon descendente e transverso da cavidade peritoneal. Tenha o cuidado de limitar a manipulação mecânica do intestino para evitar lesões nas estruturas mesentéricas e manter a profusão ideal do intestino. Em seguida, identifique o pólo cecal, o cólon ascendente e o intestino delgado.Se a anatomia da região ileocecal for ambígua, a presença de placas de Peyer identifica o intestino delgado e a presença de formas aturas caracteriza o cólon. Use uma régua para determinar a posição da futura colostomia. Deve ser colocado 20 mm distal à válvula ileocecal para uma colostomia distal.Faça uma segunda incisão de 3 mm na parede abdominal no quadrante superior direito. Em seguida, puxe o segmento do cólon previamente identificado através desta incisão para formar uma alça, tomando cuidado para não distorcer a alça. Passe cuidadosamente uma cânula IV flexível de calibre 22 através do mesocólon, tomando cuidado para não danificar as estruturas vasculares mesentéricas.Em seguida, retorne o intestino à cavidade peritoneal. Usando pontos simples e uma sutura reabsorvível, fixe ambas as extremidades do tubo flexível na pele. Antes de fechar a laparotomia, realize a ressuscitação fluídica usando uma injeção intraperitoneal de 0,5 mL de solução salina a 0,9%.Feche o peritônio e a camada muscular com uma sutura reabsorvível contínua. Em seguida, feche a pele de maneira semelhante. Usando uma tesoura fina, abra a alça de cólon exteriorizada realizando uma transecção subtotal.Evite todas as lesões no mesentério e não atravesse completamente o cólon. Com uma sutura absorvível monofil, fixe cada abertura de colostomia usando três pontos únicos de espessura total no peritônio e na pele. A alça aferente, que é uma colostomia final funcional, e a alça eferente, que é uma fístula de muco, estão claramente separadas neste ponto.Para realizar uma colotomia, após identificar o polo cecal, cólon ascendente e intestino delgado conforme demonstrado para a colostomia distal, use uma régua para determinar a futura posição da colotomia que deve ser posicionada à mesma distância da válvula ileocecal que a colostomia. Usando uma tesoura fina, abra o cólon pelo menos dois terços de sua circunferência. Usando uma sutura absorvível monofil, feche a colotomia com uma sutura interrompida de espessura total antes de realizar a ressuscitação fluídica e o fechamento do peritônio e da pele como antes.Após o procedimento, devolva os animais às suas gaiolas e coloque-os sob uma lâmpada infravermelha a 37 graus Celsius até que estejam totalmente acordados antes de devolvê-los a um ambiente com temperatura e umidade controladas. Quando os animais apresentarem resposta à estimulação mecânica, inicie a analgesia pós-operatória, injetando 0,1 mg por kg de peso corporal, buprenorfina SC. Verifique cuidadosamente se há sinais de depressão respiratória. Suplemente a água potável com 1 mg por mL de tramadol para analgesia contínua durante a primeira semana pós-operatória.Para compensar a diminuição da ingestão de líquidos devido à mobilidade reduzida, forneça uma almofada de bebida sólida na gaiola durante a primeira semana de pós-operatório. Finalmente, pese os animais e pontue o comportamento animal diariamente durante a primeira semana, a cada dois dias durante o restante do primeiro mês e a cada três dias durante o segundo mês. A cirurgia é bem tolerada tanto no grupo experimental quanto no simulado.A perda de peso é mais pronunciada no grupo experimental, atingindo 21,7% do peso corporal inicial. Em contraste, os animais simulados perdem 10,8% de seu peso corporal inicial. A mortalidade total durante os primeiros 60 dias de pós-operatório é de cerca de 40% no grupo colostomia e cerca de 10% no grupo simulado.A maioria dos óbitos ocorreu durante a primeira semana de pós-operatório, sendo as causas de óbito apresentadas nesta figura. A colostomia distal em camundongos resulta no desenvolvimento de colite predominantemente linfocítica, reproduzindo as características histológicas marcantes da DC humana. O comprimento da cripta portadora de células caliciformes é reduzido após 30 dias nos segmentos intestinais excluídos.O número absoluto de células caliciformes também é significativamente reduzido em criptas no segmento intestinal excluído após 14 dias de pós-operatório. A lesão característica da DC, o desenvolvimento de folículos linfóides na mucosa, requer uma duração mais longa do desvio das fezes. Embora um número aumentado de folículos linfóides possa ser observado já em duas semanas, as diferenças tornam-se significativas após dois meses.Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar uma colostomia distal murina. Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em menos de 20 minutos se executada corretamente. Este modelo pode ser combinado com outros modelos geneticamente modificados ou experimentos de transferência em cepas de camundongos congênitas, a fim de abordar o papel dos mediadores inflamatórios de populações celulares específicas e a patogênese da colite de desvio.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Dextran sulfato de sódio (DSS), administrada na água de beber é um modelo de lesão inflamatória estabelecida murino de colite aguda. Este protocolo descreve o método para o tratamento DSS ea preparação dos tecidos.

Modelagem Colite murino utilizando Dextran Sulfato de Sódio (DSS)

Nós demonstramos um protocolo em que a administração do agente genotóxico azoximetano (AOM), seguido por três ciclos da pró-inflamatória de sódio sulfato de agente de dextrano (DSS) de forma rápida e consistentemente gera tumores do cólon em ratos com semelhanças morfológicas e moleculares para as observadas em humanos colite Associadas cancro.

Câncer de modelagem Colite Associada com Azoximetano (OMA) e sulfato de sódio Dextran (DSS)

Neste vídeo, descrevemos um procedimento cirúrgico para gerar alça de cólon proximal de camundongo ou segmento pcLoop seguido de injeção intraluminal de marcadores fluorescentes no segmento para estudar a permeabilidade epitelial intestinal.

Geração do modelo de alça de cólon proximal de camundongo: um procedimento cirúrgico para gerar alça de cólon proximal e medir a permeabilidade intestinal pela detecção de marcadores fluorescentes no soro após injeção intraluminal

Este vídeo demonstra uma técnica para gerar um modelo murino de colite induzido por produtos químicos - uma doença inflamatória intestinal. O camundongo pode consumir uma solução de sulfato de sódio dextrano (DSS) por um período adequado. Após o consumo, o DSS danifica o muco e a barreira da camada epitelial no cólon, permitindo que os micróbios intestinais entrem no tecido subjacente - onde são detectados pelas células imunes residentes para mediar uma resposta imune exagerada, resultando em...

Uma técnica para gerar um modelo murino de colite induzida por sulfato de dextrano e sódio

Citrobacter infecção rodentium fornece um modelo útil para o estudo de infecções bacterianas entéricas, bem como resposta imune do hospedeiro e colite em ratos. Este protocolo descreve a medição da integridade da barreira, a carga de patógenos e danos histológicos permitindo a caracterização completa de agentes patogénicos e de acolhimento contribuições para colite infecciosa murino.

O<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Modelo de Rato: Contribuições Estudar patógeno e hospedeiro para Colite Infecciosa

Ao longo dos últimos anos, novas endoscópios geração surgiram como importantes auxiliares de pesquisa de diagnóstico para a avaliação de colite murina e tumores colorectais. Apresentamos aqui um protocolo detalhado para a avaliação endoscópica de inflamação e tumores colo-rectal em ratos, bem como um novo sistema de pontuação que utiliza identificadores decimais para documentar a gravidade endoscópico de colite e tumores colorectais.

A colonoscopia flexível em camundongos para avaliar a gravidade da colite e colorretal Tumores Usando um sistema validado endoscópica Scoring

É apresentado um protocolo para o estabelecimento de um modelo de ratinho geneticamente modificado de câncer colorretal por infecção segmentar adeno-cre e sua vigilância através de colonoscopia de alta resolução.

Um modelo de mouse de engenharia genética de câncer colorretal esporádico

Obstruções intestinais são um bloqueio parcial ou total do intestino que pode causar dor abdominal, náuseas, vômitos e impedindo a passagem das fezes. Este procedimento para criar obsructions parcial intestinal em camundongos é confiável em estudar os mecanismos subjacentes do crescimento celular patológica e morte no intestino.

Um modelo do rato de obstrução Intestinal parcial

Fuga anastomótica ou avaria após a cirurgia é das principais causas de mortalidade e morbidade pós-operatória. A cirurgia para a criação de uma anastomose colônica é um método confiável e reprodutível para estudar os mecanismos de cicatrização de anastomoses.

Criação de uma anastomose colônica em ratos

O protocolo apresentado descreve uma remoção cirúrgica facile do apêndice (remendo caecal) em um rato seguido pela indução do cancro colorretal da doença de entranhas inflamatório-associado. Este modelo murino do apendicectomia permite a investigação do papel biológico do apêndice na patogénese da doença gastrintestinal humana.

Modelo de apendicectomia Murina de colite crônica câncer colorretal associado por localização precisa do remendo de Caecal

Descrevemos um modelo murino de íleo paralítico pós-operatório gerado por manipulação intestinal. A função do trânsito gastrointestinal, as alterações patológicas e a ativação das células imunes foram avaliadas 24 h após a cirurgia.

Modelo Murino de Íleo Pós-Operatório

Aprenda a realizar colostomia distal murina para estudar colite de diversão em camundongos C57BL/6. Este modelo reproduz características histológicas humanas sem necessidade de animais geneticamente modificados.

Murino colostomia Distal, um novo modelo de colite de diversão em camundongos C57BL/6

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