Detection of Small GTPase Prenylation and GTP Binding Using Membrane Fractionation and  GTPase-linked Immunosorbent Assay

Javad Alizadeh; Shahla Shojaei; Simone da Silva Rosa; Adel Rezaei Moghadam; Amir A. Zeki; Mohammad Hashemi; Marek J. Los; Joseph W. Gordon; Saeid Ghavami

doi:10.3791/57646

$Deteção de pequena GTPase Prenilação e GTP ligação usando o fracionamento de membrana e ensaio de...$

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Biochemistry
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Detection of Small GTPase Prenylation and GTP Binding Using Membrane Fractionation and GTPase-linked Immunosorbent Assay

Deteção de pequena GTPase Prenilação e GTP ligação usando o fracionamento de membrana e ensaio de imunoabsorção ligada de GTPase

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13:51 min

November 11, 2018

DOI: 10.3791/57646-v

Javad Alizadeh^1,2, Shahla Shojaei^1,2,3, Simone da Silva Rosa¹, Adel Rezaei Moghadam^1,2, Amir A. Zeki⁴, Mohammad Hashemi⁵, Marek J. Los^6,7,8, Joseph W. Gordon^1,9, Saeid Ghavami^1,2,10

¹Department of Human Anatomy and Cell Science, Rady Faculty of Health Sciences, Max Rady College of Medicine,University of Manitoba, ²Biology of Breathing Theme, Children Hospital Research Institute of Manitoba,University of Manitoba, ³Department of Biochemistry, School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences,Isfahan University of Medical Sciences, ⁴Division of Pulmonary, Critical Care, and Sleep Medicine, Department of Internal Medicine,Center for Comparative Respiratory Biology and Medicine, ⁵Department of Clinical Biochemistry, School of Medicine,Zahedan University of Medical Sciences, ⁶Department of Molecular Biology, School of Pharmacy with the Division of Laboratory Medicine in Sosnowiec,Medical University of Silesia, ⁷Centre de biophysique moléculaire - UPR 4301,Centre national de la recherche scientifique (CNRS) CS80054, ⁸LinkoCare Life Sciences AB, ⁹College of Nursing and Children's Hospital Research Institute of Manitoba, Rady Faculty of Health Sciences,University of Manitoba, ¹⁰Health Policy Research Center, Institute of Health,Shiraz University of Medical Sciences

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Aqui descrevemos um protocolo para investigar a Prenilação e guanosina-5'-trifosfato (GTP)-carregamento de GTPase. Esse protocolo consiste em dois métodos detalhados, nomeadamente o fracionamento de membrana e uma GTPase-lig da imunoabsorção do ensaio. O protocolo pode ser utilizado para medir a Prenilação e GTP carregamento de diferentes outras GTPases pequenas.

O pequeno Rho GTPase é uma proteína de uma superfamília com diversas funções celulares. Por exemplo, essas proteínas estão envolvidas na regulação do destino celular, resposta celular a um estresse, motilidade celular e ciclo celular. A atividade de uma pequena proteína Rho GTPase é regulada por modificação pós-translacional.

Essas modificações estão envolvidas na regulação rigorosa de sua atividade. Como exemplo, a prenilização da proteína e o vínculo GTP são a modificação pós-tradução mais importante dessas proteínas. Meu laboratório recentemente modificou e desenvolveu método simples para investigar a modificação pós-translacional dessas proteínas superfamílias.

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