Modelo murino aspiração orofaríngea da Pneumonia bacteriana associada e hospitalares

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da resistência a antibióticos sobre novas terapêuticas com tratamento de pneumonia associada à ventilação mecânica. A principal vantagem dessa técnica é que ela replica com precisão a infecção clínica de maneira rápida e facilmente reprodutível. Para inocular os camundongos, pendure o primeiro animal anestesiado pelos incisivos superiores em um barbante forte e fino.

Prenda-o a um objeto fixo acima da superfície operacional, a uma altura aproximadamente duas vezes o comprimento do corpo do mouse. Use uma pinça estéril para puxar suavemente a língua e transfira a língua para dedos estéreis e enluvados para permitir o acesso à faringe oral. Pressione o êmbolo de uma micropipeta até a primeira parada para colocar 50 microlitros do inóculo na faringe oral, até que o camundongo inale a suspensão bacteriana, por aspiração reflexiva.

O camundongo parará de respirar por alguns segundos quando o inóculo for colocado na faringe oral e, eventualmente, a aspiração reflexiva fará com que a suspensão bacteriana seja inalada, indicativo pelo ruído crepitante característico do líquido entrando nos pulmões. Em seguida, retorne o animal à sua gaiola, com monitoramento, até a decúbito total. No desfecho experimental apropriado, corte a traqueia, a artéria pulmonar e a veia pulmonar para permitir a remoção do tecido pulmonar.

Para análise histopatológica da progressão da doença, coloque os pulmões em um molde de amostra. E encha o molde com composto de temperatura de corte ideal, até que o tecido esteja completamente submerso. Em seguida, congelar as amostras a 80 graus Celsius negativos, até ao seu corte e análise.

Para estimar a carga bacteriana, transferir o tecido pulmonar colhido para um frasco cónico de 50 mililitros e determinar a sua massa com uma balança analítica. Em seguida, transfira cinco mililitros de PBS estéril para o frasco. Homogeneizar o tecido pulmonar com um homogeneizador de tecidos.

E realizar diluições em série no PBS homogeneizado e estéril, para atingir aproximadamente 1000 unidades formadoras de colônias, ou UFC, por milímetro, com base na carga bacteriana esperada nos pulmões infectados. Coloque 100 microlitros de cada diluição em placas individuais de ágar soja tríptica. E use contas de vidro para distribuir uniformemente os homogeneizados.

Em seguida, armazene as placas em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius durante a noite. Antes de calcular o número de unidades formadoras de colônias por diluição. É necessário infectar os camundongos com várias concentrações de inóculo, para determinar o LD 100.

Sob essas condições experimentais representativas, duas vezes 10 elevado à oitava UFC por camundongo era muito alto. Cinco vezes 10 elevado ao sétimo e duas vezes 10 elevado ao sétimo, eram muito baixos. E uma vez 10 elevado ao oitavo estava certo A coloração de hematoxilina e ee-ah-zin de seções pulmonares antes e 24 horas após a aspiração oral faríngea das espécies bacterianas comumente encontradas na pneumonia associada à ventilação mecânica em humanos, normalmente resulta em inflamação alveolar substancial.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar que o inóculo deve ser preparado e atomiado de forma idêntica de experimento para experimento para obter resultados reprodutíveis. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como recapitular a pneumonia associada à ventilação mecânica usando um modelo de camundongo.