Name: Isolamento dos Cardiomyocytes Atrial de um modelo do rato de metabólicas relacionadas com síndrome de insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: Aprenda o isolamento de cardiomiócitos atriais viáveis de ratos com síndrome metabólica usando o método de Langendorff otimizado. Esta técnica permite estudar o acoplamento excitação-contração em células funcionais para pesquisa de insuficiência cardíaca.

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Esta pesquisa foi apoiada pelo DZHK (centro alemão de pesquisa Cardiovascular, D.B.), o EKFS (Else-Kröner-Fresenius Stiftung, F.H.) e pelo BMBF (Ministério alemão de educação e pesquisa), bem como a BIH-Charité financiados pelo programa cientista clínico por Charité - Universitätsmedizin Berlim e Berlim Institute of Health (F.H.).

<ol><li>Alberti, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harmonizing+the+metabolic+syndrome%3A+a+joint+interim+statement+of+the+International+Diabetes+Federation+Task+Force+on+Epidemiology+and+Prevention%3B+National+Heart%2C+Lung%2C+and+Blood+Institute%3B+American+Heart+Association%3B+World+Heart+Federation%3B+International+Atherosclerosis+Society%3B+and+International+Association+for+the+Study+of+Obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Harmonizing the metabolic syndrome: a joint interim statement of the International Diabetes Federation Task Force on Epidemiology and Prevention; National Heart, Lung, and Blood Institute; American Heart Association; World Heart Federation; International Atherosclerosis Society; and International Association for the Study of Obesity.</a> Circulation. 120 (16), 1640-1645 (2009).</li>
<li>International Diabetes Federation Task Force on Epidemiology and Prevention. IDF Consensus Worldwide Definition of the Metabolic Syndrome. , Available from:
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<li>Goette, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EHRA%2FHRS%2FAPHRS%2FSOLAECE+expert+consensus+on+atrial+cardiomyopathies%3A+definition%2C+characterization%2C+and+clinical+implication%5BTitle%5D)+AND+%22EP+Europace%22%5BJournal%5D)">EHRA/HRS/APHRS/SOLAECE expert consensus on atrial cardiomyopathies: definition, characterization, and clinical implication.</a> EP Europace. 18 (10), 1455-1490 (2016).</li>
<li>Schotten, U., Verheule, S., Kirchhof, P., Goette, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiological+mechanisms+of+atrial+fibrillation%3A+a+translational+appraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Pathophysiological mechanisms of atrial fibrillation: a translational appraisal.</a> Physiological Reviews. 91 (1), 265-325 (2011).</li>
<li>Hohendanner, F., DeSantiago, J., Heinzel, F. R., Blatter, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dyssynchronous+calcium+removal+in+heart+failure-induced+atrial+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Dyssynchronous calcium removal in heart failure-induced atrial remodeling.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 311 (6), H1352-H1359 (2016).</li>
<li>Hohendanner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inositol-1%2C4%2C5-trisphosphate+induced+Ca2%2B+release+and+excitation-contraction+coupling+in+atrial+myocytes+from+normal+and+failing+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inositol-1,4,5-trisphosphate induced Ca2+ release and excitation-contraction coupling in atrial myocytes from normal and failing hearts.</a> The Journal of Physiology. 593 (6), 1459-1477 (2015).</li>
<li>Tada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+mineralocorticoid+receptor+on+experimental+cerebral+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Role of mineralocorticoid receptor on experimental cerebral aneurysms in rats.</a> Hypertension. 54 (3), 552-557 (2009).</li>
<li>Iwasaki, Y. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrial+fibrillation+promotion+with+long-term+repetitive+obstructive+sleep+apnea+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Atrial fibrillation promotion with long-term repetitive obstructive sleep apnea in a rat model.</a> Journal of the American College of Cardiology. 64 (19), 2013-2023 (2014).</li>
<li>Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrial+natriuretic+factor-SV40+T+antigen+transgenes+produce+tumors+and+cardiac+arrhythmias+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Atrial natriuretic factor-SV40 T antigen transgenes produce tumors and cardiac arrhythmias in mice.</a> Science. 239 (4843), 1029-1033 (1988).</li>
<li>Claycomb, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HL-1+cells%3A+a+cardiac+muscle+cell+line+that+contracts+and+retains+phenotypic+characteristics+of+the+adult+cardiomyocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">HL-1 cells: a cardiac muscle cell line that contracts and retains phenotypic characteristics of the adult cardiomyocyte.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (6), 2979-2984 (1998).</li>
<li>Sartiani, L., Bochet, P., Cerbai, E., Mugelli, A., Fischmeister, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+expression+of+the+hyperpolarization-activated%2C+non-selective+cation+current+I%28f%29+in+immortalized+HL-1+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Functional expression of the hyperpolarization-activated, non-selective cation current I(f) in immortalized HL-1 cardiomyocytes.</a> The Journal of Physiology. 545 (Pt 1), 81-92 (2002).</li>
<li>Louch, W. E., Sheehan, K. A., Wolska, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+in+cardiomyocyte+isolation%2C+culture%2C+and+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Methods in cardiomyocyte isolation, culture, and gene transfer.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 51 (3), 288-298 (2011).</li>
<li>Gunduz, D., Hamm, C. W., Aslam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Isolation+of+High+Quality+Cardiomyocytes%2C+Endothelial+Cells%2C+and+Fibroblasts+from+an+Adult+Rat+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Isolation of High Quality Cardiomyocytes, Endothelial Cells, and Fibroblasts from an Adult Rat Heart.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), e55601(2017).</li>
<li>Li, D., Wu, J., Bai, Y., Zhao, X., Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+mouse+cardiomyocytes+for+cell+signaling+and+in+vitro+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult mouse cardiomyocytes for cell signaling and in vitro cardiac hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (87), e51357(2014).</li>
<li>Graham, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+functional+characterization+of+adult+mouse+cardiomyoctyes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes.</a> Journal of Visualized Experiments. (79), e50289(2013).</li>
<li>Roth, G. M., Bader, D. M., Pfaltzgraff, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+physiological+analysis+of+mouse+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and physiological analysis of mouse cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51109(2014).</li>
<li>Thum, T., Borlak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+cultivation+of+Ca2%2B+tolerant+cardiomyocytes+from+the+adult+rat%3A+improvements+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Xenobiotica%22%5BJournal%5D)">Isolation and cultivation of Ca2+ tolerant cardiomyocytes from the adult rat: improvements and applications.</a> Xenobiotica. 30 (11), 1063-1077 (2000).</li>
<li>Egorova, M. V., Afanas'ev, S. A., Popov, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+isolation+of+cardiomyocytes+from+adult+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">A simple method for isolation of cardiomyocytes from adult rat heart.</a> Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 140 (3), 370-373 (2005).</li>
<li>Kohncke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Kv+channel+recordings+in+murine+atrial+and+ventricular+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and Kv channel recordings in murine atrial and ventricular cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50145(2013).</li>
<li>Wagner, E., Brandenburg, S., Kohl, T., Lehnart, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+tubular+membrane+networks+in+cardiac+myocytes+from+atria+and+ventricles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Analysis of tubular membrane networks in cardiac myocytes from atria and ventricles.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e51823(2014).</li>
<li>Hohendanner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+metabolic+syndrome-related+atrial+decompensation+in+a+rat+model+of+HFpEF%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of metabolic syndrome-related atrial decompensation in a rat model of HFpEF.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 115, 10-19 (2017).</li>
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<li>Smyrnias, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+T-tubule+system+in+adult+rat+ventricular+and+atrial+myocytes%2C+and+its+role+in+excitation-contraction+coupling+and+inotropic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Comparison of the T-tubule system in adult rat ventricular and atrial myocytes, and its role in excitation-contraction coupling and inotropic stimulation.</a> Cell Calcium. 47 (3), 210-223 (2010).</li>
<li>Pritchett, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diastolic+dysfunction+and+left+atrial+volume%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Diastolic dysfunction and left atrial volume: a population-based study.</a> Journal of the American College of Cardiology. 45 (1), 87-92 (2005).</li>
<li>Linz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+A+mediates+susceptibility+to+atrial+tachyarrhythmia+and+impairment+of+atrial+emptying+function+in+Zucker+diabetic+fatty+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Cathepsin A mediates susceptibility to atrial tachyarrhythmia and impairment of atrial emptying function in Zucker diabetic fatty rats.</a> Cardiovascular Research. 110 (3), 371-380 (2016).</li>
<li>Ackers-Johnson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simplified%2C+Langendorff-Free+Method+for+Concomitant+Isolation+of+Viable+Cardiac+Myocytes+and+Nonmyocytes+From+the+Adult+Mouse+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">A Simplified, Langendorff-Free Method for Concomitant Isolation of Viable Cardiac Myocytes and Nonmyocytes From the Adult Mouse Heart.</a> Circulation Research. 119 (8), 909-920 (2016).</li>
<li>Ramanathan, T., Skinner, H. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/bjaed/article-abstract/5/2/61/422091">Coronary blood flow.</a> Continuing Education in Anaesthesia Critical Care & Pain. 5 (2), 61-64 (2005).</li>
<li>Bond, M. D., Van Wart, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+individual+collagenases+from+Clostridium+histolyticum%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of the individual collagenases from Clostridium histolyticum.</a> Biochemistry. 23 (13), 3085-3091 (1984).</li>
<li>Deel, E. D., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28485491">In vitro model to study the effects of matrix stiffening on Ca(2+) handling and myofilament function in isolated adult rat cardiomyocytes.</a> The Journal of Physiology. 595 (14), 4597-4610 (2017).</li>
<li>Wuensch, E., Heidrich, H. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14058277">[On the Quantitative Determination of Collagenase].</a> Hoppe-Seyler's Zeitschrift für physiologische Chemie. 333, 149-151 (1963).</li>
<li>Conceicao, G., Heinonen, I., Lourenco, A. P., Duncker, D. J., Falcao-Pires, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+heart+failure+with+preserved+ejection+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Netherlands+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Animal models of heart failure with preserved ejection fraction.</a> Netherlands Heart Journal. 24 (4), 275-286 (2016).</li>
<li>Horgan, S., Watson, C., Glezeva, N., Baugh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+diastolic+dysfunction+and+heart+failure+with+preserved+ejection+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Failure%22%5BJournal%5D)">Murine models of diastolic dysfunction and heart failure with preserved ejection fraction.</a> Journal of Cardiac Failure. 20 (12), 984-995 (2014).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Aqui, primeiro descrevemos um protocolo para o isolamento de célula única ACMs de um modelo do rato de MetS-relacionados HFpEF que mostra marcada remodelação atrial22. O procedimento é excepcionalmente desafiador como tecido adiposo excessivo pode fazer a preparação cirúrgica, bem como a canulação da aorta, cada vez mais difícil. O guia de solução de problemas fornecidas na tabela 2 endereços os problemas mais comuns do processo de isolamento.
<table border="1" fo:keep-togethe...

MetS descreve um conjunto de fatores de risco para doenças cardiovasculares e diabetes mellitus tipo 2 e inclui uma aumento da pressão arterial, dislipidemia (gerado triglicerídeos e abaixou o colesterol da lipoproteína de alta densidade), aumentou o jejum glicose e obesidade central1. A prevalência mundial de MetS é estimada em 25 – 30% e constantemente crescente2. HFpEF é uma síndrome clínica heterogênea, frequentemente associada com MetS. A remodelação cardíaca durante HFpEF e suas fases anteriores (ou seja, doença cardíaca hipertensiva) também é acompanhada por uma remodelação dos átrios3. Função contrátil reduzida e mudanças estruturais da aurícula esquerda têm sido associadas com aumento da mortalidade, fibrilação atrial e insuficiência cardíaca de início novo4. Remodelamento atrial é caracterizada por alterações em função de canais de íon, homeostase de Ca2 + , estrutura atrial, ativação de fibroblastos e tecido fibrose5. Deixou a remodelação atrial HFpEF MetS-relacionados e seu subjacente mecanismos patológicos são ainda mal compreendidos e exigem uma investigação mais aprofundada. Modelos animais provaram ser uma ferramenta valiosa e levar a muitos avanços no campo de cardiomiopatias atrial6,7,8,9.
Estudos com cardiomyocytes isolado de célula única são frequentemente usados para confirmar e complementar os achados na vivo . Um isolamento e cultura de pilha subsequente potencial, permitem a investigação de sinalização de vias, correntes de canal iônico e acoplamento excitação-contração. Em condições fisiológicas, cardiomyocytes não se proliferam. A fusão entre as sequências reguladoras transcriptional de um fator de natriuretic atrial e um vírus simian 40 grande T antígeno em ratos transgénicos levou à criação das ACMs imortalizados primeiros, denominado AT-110. O desenvolvimento de células de AT-1 deu origem a células HL-1, que só não podem ser passadas em série, mas também espontaneamente contraem11. Eles, no entanto, mostram diferenças estruturais e funcionais, em comparação com células recém isoladas, tais como uma ultraestrutura menos organizada, uma alta ocorrência de desenvolver miofibrilas11e um-o hyperpolarization interno atual12. O isolamento dos cardiomyocytes ventricular (VCM) em ratos e camundongos de uma variedade de modelos é bem estabelecida13,14,15,16,17,18 , 19. geralmente, o coração extirpado é montado um aparato de Langendorff e retrogradely pintado com uma Ca2 +-buffer livre que contém enzimas digestivas, tais como colagenases e proteases. Cálcio é reintroduzido em seguida de forma gradual às condições fisiológicas. No entanto, apesar de protocolos dedicados ao isolamento da ACMs estão disponíveis20,21, devido ao aumento de fibrose e diferenças de pressão-relacionados, sua utilidade em modelos de doenças com remodelação atrial é limitada.
Neste artigo, temos implementado um protocolo para a isolação de atrial cardiomyocytes de célula única de animais que apresentem atrial remodelação (i.e., em especial para o modelo do rato de ZFS1 para HFpEF MetS-relacionados)22. Protocolos de isolamento existentes foram otimizados e complementados por um dispositivo simples, feitos sob medido para controlar e modificar a pressão intraluminal das cavidades cardíacas, levando a rendimentos mais elevados dos cardiomyocytes morfologicamente e funcionalmente intactos. O protocolo seguinte fornece o pesquisador com um guia passo a passo, uma descrição detalhada do equipamento feito sob medido, uma lista de soluções, bem como um abrangente Guia de solução de problemas.

<table><tbody><tr><td>ZSF-1 Rato obeso</td><td>Charles River Laboratories, Inc.</td><td></td><td>21 semanas de idade</td></tr><tr><td>Tesoura de íris fina</td><td>Ferramentas de ciência fina GmbH</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica</td><td>Ferramentas de ciência fina GmbH</td><td>14001-18</td><td></td></tr><tr><td>Micro pinça de curativo (curva, serrilhada)</td><td>Aesculap, Inc.</td><td>Pinça de Tecido BD312R</td><td></td></tr><tr><td>(reta, 1 x 2 dentes)</td><td>Aesculap, Inc.</td><td>Pinça de amarração BD537R</td><td></td></tr><tr><td>(angular)</td><td>Aesculap, Inc.</td><td>MA624R</td><td></td></tr><tr><td>Guilhotina de Roedores e Pequenos Animais</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td></td> Câmara de indução de baixo custo DCAP <td></td></tr><tr><td>3.0 L</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>SOMNO-0730&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Conjunto de Infusão com Asas de Borboleta 21 G</td><td>Hospira, Inc.</td><td></td><td></td>181106101</tr><tr><td>Abbocath 16 G</td><td>Hospira, Inc.</td><td>0G7149702</td><td></td></tr><tr><td>Agulha hipodérmica Microlance</td><td>Becton Dickinson GmbH</td><td>301300</td><td>modifique a agulha para fazer cânula</td></tr><tr><td>Seringa Perfusor Original Braun 50 ml</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>8728810F</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Braun Inject Solo 10 ml</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>2057926</td><td></td></tr><tr><td>Beaker 50ml</td><td>Duran Group (DWK Life Sciences GmbH)</td><td>21 106 17</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri Duroplan (100 x 20 mm)</td><td>Duran Group (DWK Life Sciences GmbH)</td><td>21 755 48</td><td></td></tr><tr><td>Seraflex Suture USP 3/0</td><td>SERAG-WIESSNER GmbH & Co. KG</td><td>IC208000</td><td></td></tr><tr><td>VWR Barcos de pesagem quadrados descartáveis 100ml</td><td>VWR, Inc.</td><td>10803-148</td><td></td></tr> Cloreto de sódio <tr><td>de superfície</td><td></td><td></td><td></td>de isopor</tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>71380</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto</td><td>de potássio Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>P4504</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de potássio monobásico</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>P5379</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de sódio dibásico</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de magensium heptahidratado</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td></td><td></td>230391</tr><tr><td>Cloreto de magensium</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Taurina</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>T0625</td><td></td></tr><tr><td>Glicose</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>2,3-Butanodiona monóxido</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>Solução de cloreto de cálcio (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>21115</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Roche (Sigma-Aldrich, Inc.)</td><td>LIBTM-RO</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Rotexmedica GmbH</td><td>3862357</td><td></td></tr><tr><td>Forene (Isoflurano)</td><td>Abbvie Deutschland GmbH & Co. KG</td><td>10182054</td><td></td></tr><tr><td>Laminina da membrana basal do sarcoma murino Engelbreth-Holm-Swarm</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>WillCo prato com fundo de vidro 500&micro; l 0.005mm</td><td>WillCo Wells B.V.</td><td>HBST-3522</td><td></td></tr><tr><td>Fluo4 AM</td><td>Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Inc.)</td><td>F14201</td><td>5&micro; M por 20min na RT</td></tr><tr><td>Di-8-ANNEPS</td><td>Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Inc.)</td><td>D3167</td><td>10&micro; M por 45 min a 37&deg; C&nbsp;</td></tr><tr><td>Mitotracker RED FM</td><td>Invitrogen (Thermo Fisher Scientific, Inc.)</td><td>M22425</td><td>20nM por 30 min a 37&deg; C</td></tr><tr><td>Recipiente de reação encamisado 500 ml</td><td>Gebr. Rettberg GmbH</td><td>107024414</td><td></td></tr><tr><td>Recipiente de reação encamisado 1000 ml</td><td>Gebr. Rettberg GmbH</td><td>107025414</td><td></td></tr><tr><td>Armadilha de bolhas encamisada</td><td>Gebr. Rettberg GmbH</td><td>134720001</td><td></td></tr><tr><td>ED termostato de imersão de aquecimento</td><td>Julabo GmbH</td><td>9116000</td><td></td></tr><tr><td>Reglo Digital MS-2/6 bomba peristáltica</td><td>Ismatec (Cole-Parmer Gmbh)</td><td>ISM 831</td><td></td></tr><tr><td>Voltcraft Termômetro 302 K/J</td><td>Conrad Electronic SE</td><td>030300546</td><td></td></tr><tr><td>Tubing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSM 700 microscópio</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software de imagem ZEN 2.3</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>410135-1011-240&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de aquecedor de canal único TC-324B</td><td>Warner Instruments, LLC</td><td>64-2400</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de perfusão de 8 canais</td><td>Warner Instruments, LLC</td><td>64-0185</td><td></td></tr><tr><td>Aquecedores de solução em linha multilinha de 8 canais</td><td>Warner Instruments, LLC</td><td>64-0105</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento dos cardiomyocytes atrial de um modelo do rato de metabólicas relacionadas com síndrome de insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada

Isolation of Atrial Cardiomyocytes from a Rat Model of Metabolic Syndrome-related Heart Failure with Preserved Ejection Fraction

Neste artigo, descrevemos um procedimento otimizado, Langendorff-baseado para o isolamento de célula única cardiomyocytes atrial (ACMs) a partir de um modelo do rato da síndrome metabólica (MetS)-relacionadas com a insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada (HFpEF). A prevalência de HFpEF relacionados com MetS está aumentando, e atrial cardiomiopatias associadas a remodelação atrial e fibrilação atrial são clinicamente altamente relevantes como a remodelação atrial é um preditor independente de mortalidade. Estudos com cardiomyocytes isolado de célula única são frequentemente usados para confirmar e complementar os achados na vivo . Rarefication de vasos circulatórios e fibrose do tecido intersticial representam um fator potencialmente limitante para o isolamento de célula única bem-sucedida do ACMs de modelos animais da doença.
Abordámos esta questão empregando um dispositivo capaz de regular manualmente a pressão intraluminal de cavidades cardíacas durante o procedimento de isolamento, aumentando substancialmente o rendimento do ACMs morfologicamente e funcionalmente intactos. As células adquiridas podem ser usadas em uma variedade de experiências diferentes, tais como cultura de células e imagiologia funcional de cálcio (ou seja, acoplamento excitação-contração).
Nós fornecemos o pesquisador com um protocolo passo a passo, uma lista de soluções otimizadas, completa instruções para preparar o equipamento necessário e um abrangente Guia de solução de problemas. A implementação inicial do processo pode ser bastante difícil, uma adaptação bem sucedida permitirá ao leitor realizar os isolamentos de ACM do estado-da-arte em um modelo do rato de HFpEF relacionados com MetS para um amplo espectro de experiências.

Com 21 semanas de idade, 60 – 90% dos ACMs viáveis (estima-se, como descrito no passo 6.1), após a readequação de cálcio (passo 5.4 – 5.7), pode ser isolado de ratos obesos ZSF-1 por esse método (Figura 4A). Em ratos, ACMs são caracterizados por uma diferente e mais fenótipo heterogêneo em relação ao VCMs24,25. Figura 4B mostra um ACM individual com membranas preservadas ...

Aqui, descrevemos um procedimento otimizado, Langendorff-baseado para o isolamento de célula única cardiomyocytes atrial de um modelo do rato de metabólica relacionadas com síndrome de insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada. Uma regulação manual da pressão intraluminal de cavidades cardíacas é implementada para render funcionalmente intactos miócitos apropriados para estudos de acoplamento excitação-contração.

Isolamento dos Cardiomyocytes Atrial de um modelo do rato de metabólicas relacionadas com síndrome de insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada

In this article, we describe an optimized, Langendorff-based procedure for the isolation of single-cell atrial cardiomyocytes (ACMs) from a rat model of ...

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da função individual dos cardiomiócitos e permite estudar excitação-contração-acoplamento. A principal vantagem dessa técnica é que um alto rendimento de cardiomiócitos atriais viáveis de corações com cardiomiopatia atrial pode ser isolado e usado para experimentos subsequentes. Comece colocando uma cânula com a ponta longa e afiada removida em cima do aparelho de Langendorff e inicie o fluxo.Ligue o módulo de aquecimento e ajuste para que o tampão de perfusão na ponta da agulha mantenha a temperatura desejada para perfusão. Quando a calibração da temperatura estiver concluída, transfira a cânula para uma seringa de 10 ml cheia de tampão de canulação gelado. Coloque dois nós duplos prontos sobre a cânula para uma canulação rápida e subsequente da aorta.Remova o coração do rato eutanasiado e heparinizado beliscando a base do coração com uma pinça e puxando suavemente para baixo em direção à cauda do animal. Corte a aorta enquanto mantém uma tração no coração, deixando um segmento de 5 mm de comprimento da aorta preso ao coração. Transferir rapidamente o coração para 50 ml de tampão de canulação gelada num copo de 50 ml.Es

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Medicine

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Descrevemos o isolamento de miócitos atriais humanos, que podem ser utilizados para a intracelular de...

Isolamento de miócitos atriais humanos para Medições Simultâneas de Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Transitórios e correntes de membrana

O conhecimento atual sobre a base celular de doenças cardíacas se baseia principalmente em estudos em modelos animais. Aqui nós descrevemos e validar um novo método para obter simples cardiomiócitos viáveis ​​a partir de pequenas amostras cirúrgicas do miocárdio ventricular humano. Miócitos ventriculares humanos podem ser usados ​​para estudos eletrofisiológicos e testes de drogas.

Isolamento e caracterização funcional de Ventricular Humano cardiomiócitos a partir de amostras cirúrgicas frescos

Vários protocolos foram desenvolvidos e descritos para o isolamento de diferentes tipos de células cardíacas a partir de um coração de rato. Aqui, descreve-se um protocolo otimizado que permite o isolamento de tipos de células cardíacas maiores (cardiomiócitos, células endoteliais e fibroblastos) de alta qualidade de uma única preparação, reduzindo os custos experimentais.

Isolamento Simultâneo de Cardiomiócitos de Alta Qualidade, Células Endoteliais e Fibroblastos de um Coração de Rato Adulto

Este protocolo é usado para isolar cardiomiócitos atriais únicos do coração do rato adulto usando uma abordagem de digestão do pedaço. Esta aproximação é usada para isolar os miócitos atrial direito ou esquerdos que podem ser usados para caracterizar a electrofisiologia atrial do miócitos em estudos da remendo-braçadeira.

Isolamento de miócitos atriais de camundongos adultos

Apresentado é um protocolo para o isolamento de cardiomiócitos ventriculares humanos e animais de fatias miocárrias cortadas por vibratome. Altos rendimentos de células tolerantes ao cálcio (até 200 células/mg) podem ser obtidos a partir de pequenas quantidades de tecido (&lt;50 mgs). O protocolo é aplicável ao miocárdio exposto à isquemia fria por até 36 h.

Isolamento de Cardiomiócitos Ventriculares Humanos de fatias de miocárdio cortadas por vibratome

Um método é descrito para o isolamento simultâneo de miócitos e não miócitos tanto da atria quanto dos ventrículos de um único coração de rato adulto. Este protocolo resulta em rendimentos consistentes de miócitos cardíacos altamente viáveis e não miócitos e detalha condições ideais de cultura específica celular para fenotipagem e análise in vitro.

Isolamento simultâneo e cultura de miócitos atrial, miócitos ventriculares e não-miócitos de um coração de rato adulto

Desenvolvemos um método simple para isolar células cardíacas individuais de camundongos de alta qualidade pela técnica de perfusão antegrada. Este método é livre de Langendorff e útil para isolar miócitos ventriculares e atrial ou células intersticiais, como fibroblastos cardíacos ou progenitores.

Um método de perfusão antegrada para isolamento cardiomiocócito de camundongos

Modelos murinos permitem estudar os principais mecanismos da arritmogênese. Para isso, cardiomiócitos de alta qualidade são necessários para a realização de medidas de patch-clamp. Aqui, é descrito um método para isolar miócitos murinos atriais e ventriculares via perfusão retrógrada de Langendorff baseada em enzimas, que permite medidas simultâneas de transientes de cálcio e corrente de cálcio tipo L.

Isolamento de miócitos murinos atrial e ventricular de alta qualidade para medidas simultâneas de Ca2+ transitórios e corrente de cálcio tipo L

Este protocolo descreve modificações do método Langendorff, incluindo a profundidade da cannulação de aorta para isolamento simultâneo de miócitos atrial e ventricular de camundongos adultos.

Modificações do Método Langendorff para Isolamento Simultâneo de Miócitos Atrial e Ventricular de Camundongos Adultos

O padrão-ouro em cardiologia para experimentos funcionais celulares e moleculares são os cardiomiócitos. Este artigo descreve adaptações à técnica não-Langendorff para isolar cardiomiócitos de camundongos.

Um Método Simples e Eficaz para Isolar Consistentemente Cardiomiócitos de Camundongos

Aprenda o isolamento de cardiomiócitos atriais viáveis de ratos com síndrome metabólica usando o método de Langendorff otimizado. Esta técnica permite estudar o acoplamento excitação-contração em células funcionais para pesquisa de insuficiência cardíaca.

Isolamento dos Cardiomyocytes Atrial de um modelo do rato de metabólicas relacionadas com síndrome de insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada (Vídeo) | JoVE Journal

Isolamento dos Cardiomyocytes Atrial de um modelo do rato de metabólicas relacionadas com síndrome de insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada

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