Name: Preparando um 68Ga-rotulado arginina glicina aspartato (RGD)-peptídeo para angiogênese (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Aprenda a preparar peptídeos RGD marcados com Gálio-68 para imagem molecular em oncologia. Este protocolo simplificado permite avaliar a eficácia biológica de análogos radiofarmacos com alta pureza radioquímica.

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Este trabalho foi apoiado por um programa de desenvolvimento da pesquisa nacional Fundação da Coreia (NRF) subvenção financiada pelo governo coreano (n º 2017M2A2A6A02019904) e pesquisa Nuclear.

Todos os experimentos com animais foram conduzidos em conformidade com as orientações para o cuidado e o uso de animais de pesquisa em protocolos aprovados pelo Instituto de Coreia de radiológica e Comitê de estudos médico Ciências Animal. Todos os reagentes e solventes foram comprados e utilizados sem mais purificação. NOTA-RGD-peptídeos foram preparadas de acordo com a literatura métodos15.
Cuidado: 68Ga emite tanto pósitrons e raios gama. Todos os experimentos, incluindo contacto directo ou indirecto com substâncias radioactivas, devem ser efectuados por treinados e autorizados pelo pessoal. Ao manusear materiais radioativos, devem ser usados equipamento de proteção adequado, blindagem, distintivo do dosímetro de radiação e anéis e um medidor de pesquisa.
1. radioativos RGD-peptídeos com 68GaCl3
Nota: 68Ga (t1/2 = 68 min, β+ = 89% e CE = 11%) foi obtido o 68Ga / gerador de Ge de68.
<ol><li>Eluir a 68GaCl3 do gerador com 4 mL de 0,05 M de HCl.</li>
	<li>Purga com nitrogênio a 80 ° C por 30 min secar 68GaCl3 (333 kBq, 1 mL) em um frasco de reação de 5 mL.</li>
	<li>Adicionar uma solução de peptídeo-RGD (100 µ g) em 1 M de acetato de sódio (100 µ l, pH 5-6) para o frasco de reação contendo 68GaCl3 da etapa 1.2.</li>
	<li>Aqueça a mistura de reação a 80 ° C por 5 min. Então, acalme-se até à temperatura.</li>
	<li>Purifica o produto bruto com a cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC). Use o seguinte sistema: uma coluna de C-18, uma taxa de fluxo de 0,5 mL/min, um declive gradiente de acetonitrilo de 1.17%/min (5% - 40% em 30 min) e componentes de eluição: A = 0,1% ácido trifluoroacético (TFA) em acetonitrila, B = 0,1% TFA na água. Nota: O HPLC é equipado com um fotodiodo matriz e um detector de radioatividade. A 68Ga-RGD-peptídeo foi coletado em um tempo de retenção de 12,5 min (Figura 2).</li>
	<li>Purifica o resultante 68Ga-RGD-peptide usando um sistema de extração de fase sólida.<ol>
<li>Transferir a solução através de um cartucho de fase reversa C18 e lave com 2 mL de solução salina.</li>
		<li>Eluir 68Ga-RGD-peptídeo com 0,7 mL de etanol a 95%. Remover o solvente a 80 ° C sob gás nitrogênio por 20 min e reconstituir com fosfato salino (PBS) antes do uso.</li>
		<li>Filtrar o radiolabeled do produto através de um filtro de 0,22 µm estéril e formular em 1 mL de solução salina estéril.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verificar o rendimento de radioquímica por cromatografia de camada fina rádio (TLC).<ol>
<li>Spot 1 µ l sobre uma placa de cromatografia de camada fina instantânea (ITLC, 10 cm de comprimento). Desenvolva a placa em uma câmara contendo o eluente (ácido cítrico em solução aquosa 0,1 M, pH 5,0) até 9 cm de distância do local. Nota: O fator de retenção para 68Ga-RGD-peptide é 0 e o factor de retenção não tenha reagido 68Ga3 + é 1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Calcule a atividade final específica da relação de radioatividade correspondente para a não-radioactividade como nmol/MBq. Nota: Após a injeção de 100 µ l de formulado 68Ga-RGD-peptide para HPLC, a quantidade de componente não-radioativo foi calculada a partir da curva de calibração padrão usando nonradioactive Ga-RGD-peptídeo.</li>
</ol>2. in Vitro absorção celular
Nota: Células de glioblastoma humano Uppsala 87 Glioma maligno (U87MG) foram cultivadas em meios da águia modificados de Dulbecco (DMEM), suplementados com 10% fetal bovino soro e 1% penicilina-estreptomicina. As células foram cultivadas em pratos de 150 mm a 37 ° C numa atmosfera de 5% CO2umidificada. As células foram colhidas ou dividir por tripsinização: tripsina 0,25% (p/v) e 0,02% (p/v) ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) em PBS a 37 ° C, por 3-5 min.
<ol><li>Células de U87MG sementes em placas de 6-poços em uma densidade de 1 x 106 células/poço.</li>
	<li>Incube as celulas com 68Ga-RGD-peptide (111 kBq) a 37 ° C para 30, 60, 90 e 120 min. preparar as amostras em triplicata.</li>
	<li>Lavar as células 2 x com 2 mL de PBS e colheita por tripsinização. Use tripsina 0,25% (p/v) e 0,02% (p/v) o ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) em PBS a 37 ° C por 3-5 min.</li>
	<li>Recolha a suspensão de células (500 µ l) e medida em um contador-γ.</li>
	<li>Calcule a porcentagem absorção do composto pelas células por % (contagens nas contagens de células/total).</li>
</ol>3. in Vitro estabilidade de soro
<ol><li>Adicione 500 µ l de soro rato recentemente preparada, 500 µ l de soro humano e 500 µ l de PBS. Incube a mistura a 37 ° C por 2 h.</li>
	<li>Avaliar por ITLC os intervalos de tempo especificado (30, 60, 90 e 120 min). Manchar a alíquota de 1-2 µ l da mistura para a placa ITLC (fase móvel: ácido cítrico de 0,1 M). Desenvolva a placa como na etapa 1.7. Nota: 68Ga3 + é esperado para mover-se com a frente do solvente, Considerando que o composto rotulado permanecerá na origem.</li>
</ol>4. determinação da Lipofilicidade
<ol><li>Adicionar 68Ga-RGD-peptide (3,7 MBq, 3,7 µ l) para o sistema de octanol-PBS (1:1, v/v, total 1 mL).</li>
	<li>Misture os frascos vigorosamente durante 5 min à temperatura ambiente e centrifugar 10.000 x g por 5 min à temperatura ambiente.</li>
	<li>Tirar 100 µ l amostras de cada camada e medir a radioatividade com um contador de γ. O valor relatado log P baseia-se na média das três amostras.</li>
</ol>5. tumor modelo
Nota: Camundongos BALB/c (6-8 semanas velho, fêmea, n = 23) foram utilizados para este estudo. Os ratos foram posteriormente utilizados para estudos de PET (n = 3) e biodistribuição (n = 20) quando os volumes de tumor chegaram a 200-300 mm3 (1-2 semanas após o implante).
<ol><li>Carrega pilhas do tumor em 28 G, seringas de insulina 1/2 polegada.</li>
	<li>Injete células de U87MG (5 x 106) em 100 µ l de PBS para a região do braço esquerdo.</li>
	<li>Anestesia o mouse com 2% de isoflurano em gás oxigênio durante a injeção de célula.<ol>
<li>Certifique-se de que o mouse tem sido anestesiado pela perda do pedal retirada reflexa seguir beliscar com a pinça entre os dedos do pé direito traseiro. Não abandone um animal até que ele recuperou a consciência suficiente para manter a prostração esternal.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. quantificação in Vivo de αvβ3 integrina usando PET
<ol><li>Anestesia os ratos com 2% de isoflurano em oxigênio.<ol>
<li>Certifique-se de que o mouse tem sido anestesiado pela perda do pedal retirada reflexa seguir beliscar com a pinça entre os dedos do pé direito traseiro. Não abandone um animal até que ele recuperou a consciência suficiente para manter a prostração esternal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque a cabeça no centro do pórtico do PET.</li>
	<li>Administre por via intravenosa solução Ga-RGD-peptide (MBq 7.4, 200 µ l) a 68para o enxerto do mouse modelo através da veia da cauda para 1 min.</li>
	<li>Ao mesmo tempo, realizar um PET scan no modo de lista (análise dinâmica) para 150 min. Nota: Os dados brutos de PET foram reconstruídos por um frame de tempo definido pelo usuário (isto é, cada 30 min). Após a verificação do animal de estimação, uma varredura de microtomografia computadorizada (CT) (50 kVp de raios-x, 0.16 mA) foi conduzido para a correção da atenuação.</li>
</ol>7. biodistribuição Ex Vivo
<ol><li>Injete a veia da cauda do modelo do rato de xenoenxertos 68Ga-RGD-peptide (0.37 MBq, 200 µ l). Anestesia o mouse com 2% de isoflurano em gás oxigênio durante as injeções. Nota: Camundongos BALB/c, conforme descrito na seção 5, foram divididos em quatro grupos e sacrificados em pontos de tempo diferente (n = 5 por grupo).</li>
	<li>Acorda os ratos imediatamente após a administração de 68Ga-RGD-peptídeo e sacrificá-los em 30, 60, 90 e 120 min postinjection com a eutanásia de dióxido de carbono. Nota: Os tecidos de interesse foram extraídos. Alvos selecionados foram o sangue, músculo, coração, pulmão, fígado, baço, estômago, intestino, rins, ossos e tumor.</li>
	<li>Pesar o tecido e medir a radioatividade com um contador de γ. Nota: Os resultados foram expressos como a percentagem de dose injetada por grama de tecido (% ID/g).</li>
</ol>

<ol><li>Friedlander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definition+of+Two+Angiogenic+Pathways+by+Distinct+alpha+v+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Definition of Two Angiogenic Pathways by Distinct alpha v integrins.</a> Science. 270 (5241), 1500-1502 (1995).</li>
<li>Janssen, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Targeting+with+Radiolabeled+alpha+v+beta+3+Integrin+Binding+Peptides+in+a+Nude+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Tumor Targeting with Radiolabeled alpha v beta 3 Integrin Binding Peptides in a Nude Mouse Model.</a> Cancer Research. 62, 6146-6151 (2002).</li>
<li>Kok, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+functional+evaluation+of+RGD-modified+proteins+as+%CE%B1v%CE%B23+integrin+directed+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation and functional evaluation of RGD-modified proteins as αvβ3 integrin directed therapeutics.</a> Bioconjugate Chemistry. 13 (1), 128-135 (2002).</li>
<li>Garanger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+multifunctional+molecular+conjugate+vector+for+targeting%2C+imaging%2C+and+therapy+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">New multifunctional molecular conjugate vector for targeting, imaging, and therapy of tumors.</a> Molecular Therapy. 12 (6), 1168-1175 (2005).</li>
<li>Dijkgraaf, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+integrin+expression+in+tumours+with+68Ga-labelled+mono-%2C+di-+and+tetrameric+RGD+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">PET imaging of αvβ3 integrin expression in tumours with 68Ga-labelled mono-, di- and tetrameric RGD peptides.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 38 (1), 128-137 (2011).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+cyclic+RGD+dimers+with+Gly3and+PEG4linkers%3A+Promising+agents+for+tumor+integrin+%CE%B1v%CE%B23+PET+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled cyclic RGD dimers with Gly3and PEG4linkers: Promising agents for tumor integrin αvβ3 PET imaging.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 36 (6), 947-957 (2009).</li>
<li>Li, Z. B., Chen, K., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+multimeric+RGD+peptides+for+microPET+imaging+of+integrin+%CE%B1v%CE%B23expression%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled multimeric RGD peptides for microPET imaging of integrin αvβ3expression.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 35 (6), 1100-1108 (2008).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isomerism+and+solution+dynamics+of+90Y-labeled+DTPA-biomolecule+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Isomerism and solution dynamics of 90Y-labeled DTPA-biomolecule conjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 12 (1), 84-91 (2001).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycosylated+RGD-containing+peptides%3A+tracer+for+tumor+targeting+and+angiogenesis+imaging+with+improved+biokinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Glycosylated RGD-containing peptides: tracer for tumor targeting and angiogenesis imaging with improved biokinetics.</a> Journal of Nuclear Medicine. 42 (2), 326-336 (2001).</li>
<li>Sivolapenko, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+metastatic+melanoma+utilising+a+technetium-99m+labelled+RGD-containing+synthetic+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Euroean+Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Imaging of metastatic melanoma utilising a technetium-99m labelled RGD-containing synthetic peptide.</a> Euroean Journal of Nuclear Medicine. 25 (10), 1383-1389 (1998).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+Imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+Integrin+Expression+Using+18+F-labeled+RGD-containing+Glycopeptide+and+Positron+Emission+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Noninvasive Imaging of αvβ3 Integrin Expression Using 18 F-labeled RGD-containing Glycopeptide and Positron Emission Tomography.</a> Cancer Research. 61, 1781-1785 (2001).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+trivalent+metal+ion+complexes+of+the+tetraacetate+derivatives+of+12-%2C+13-+and+14-membered+tetraazamacrocycles%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of trivalent metal ion complexes of the tetraacetate derivatives of 12-, 13- and 14-membered tetraazamacrocycles.</a> Inorganica Chimica Acta. 190 (1), 37-46 (1991).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+the+Fe%28III%29%2C+Ga%28III%29+and+In%28III%29+chelates+of+N%2CN%E2%80%B2%2CN%E2%80%B3-triazacyclononanetriacetic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of the Fe(III), Ga(III) and In(III) chelates of N,N′,N″-triazacyclononanetriacetic acid.</a> Inorganica Chimica Acta. 181 (2), 273-280 (1991).</li>
<li>Shetty, D., Lee, Y. S., Jeong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+radiopharmaceuticals+for+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled radiopharmaceuticals for positron emission tomography.</a> Nuclear Medicine Molecular Imaging. 44 (4), 233-240 (2010).</li>
<li>Shin, U. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+Preliminary+Evaluation+of+68Ga-NOTA-Biphenyl-c%28RGDyK%29+for+the+Quantification+of+Integrin+%CE%B1v%CE%B23%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+Korean+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Synthesis and Preliminary Evaluation of 68Ga-NOTA-Biphenyl-c(RGDyK) for the Quantification of Integrin αvβ3.</a> Bulletin of the Korean Chemical Society. 38 (12), 1415-1418 (2017).</li>
<li>Cai, W., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodality+Molecular+Imaging+of+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multimodality Molecular Imaging of Tumor Angiogenesis.</a> Journal of Nuclear Medicine. 49, suppl2 113-128 (2008).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

No presente estudo, apresentamos um protocolo para preparar um radiopeptide visando αvβ3 integrina e sua avaliação biológica. Desenvolvimento de drogas tradicional envolve um procedimento complicado. Requer uma grande quantidade de material de referência e um tempo relativamente longo de avaliação. Embora a metodologia sugerida não pode substituir o processo de avaliação delicado, este sistema pode ser usado para fins de triagem. Esta proposta sistema reduziria consideravelmente o tempo e custo....

Angiogênese é um processo biológico que é caracterizado pelo desenvolvimento de novos vasos sanguíneos. Entre muitos fatores angiogenetic, αvβ3 integrina está associada a invasividade, porque a integrina é altamente expressa em vasos de tumor angiogênico mas está ausente no tecido normal1.
Radiolabeled peptídeos de ligação ao receptor, com domínio de aspartato (RGD) glicina de arginina, que tem uma elevada afinidade para os receptores integrinas αvβ3 , são considerados promissores angiogênese agentes2,3 de imagem , 4 , 5 , 6 , 7. foram criados vários radiofármacos para PET e suas propriedades biológicas foram validadas em vários modelos animais8,9,10,11. Em termos de um radionuclídeo, 68Ga tem várias vantagens sobre outros radioisótopos. Em primeiro lugar, tem uma elevada acessibilidade para utilizadores e é economicamente vantajoso porque um ciclotron não é necessária. Em segundo lugar, 68Ga-baseado os medicamentos radiofarmacêuticos produzem alta resolução espacial comparada com a tomografia por emissão de fóton único computadorizada (SPECT), permitindo a quantificação mais precisa. Por último, o Half-Life 67,71 minutos de 68Ga pode ser suficiente para a preparação de pequenos peptídeos ou proteínas.
Para produzir um complexo estável com 68Ga, foram desenvolvidos muitos quelantes. Quelantes representativas são o ácido 1,4,8,11-tetraazacyclotetradecanetetraacetic (Roberta), ácido 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-etilenodiaminotetracético (DOTA), ácido 1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triacetic (NOTA), diethylenetriaminepentaacetic ácido (DTPA) e N, N'-di(2-hydroxybenzyl) etilenodiamina-N, N'-ácido diacetic (HBED). NOTA tem sido relatado para formar um complexo altamente estável com 68Ga (log estabilidade constante 30.98)12,13,14.
O objetivo do presente estudo é fornecer um protocolo conciso para o desenvolvimento de um novo radiopeptide (Figura 1). Por exemplo, preparamos 68Ga-rotulado RGD-peptídeos e presentes métodos de avaliação biológica destes análogos em um modelo de transplante.

<table><tbody><tr><td>68Ga/68Ge gerador</td><td>ITG</td> <td>Company-10</td> <td>mCi&nbsp;</td></tr><tr><td>Solução de cloreto de hidrogênio</td><td>Sigma-aldrich</td><td>84429</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de sódio</td><td>Sigma-aldrich</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>C18 cartucho de fase reversa</td><td>Waters</td><td>WAT020515</td><td></td></tr><tr><td>0,22-&mu; m filtro estéril</td><td>Milllipore</td><td>SLGV033RS</td><td></td></tr><tr><td>Scanner Radio-TLC</td><td>Bioscan</td><td>AR2000</td><td></td></tr><tr><td>Papel ITLC</td><td>Agilent</td><td>SGI001</td><td></td></tr><tr><td>Ácido cítrico</td><td>Sigma-aldrich</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>HPLC</td><td></td><td></td> <td>Waters-Waters 1525 sistema contendo bomba binária, matriz de fotodiodos (Waters 2998), detector de radioatividade (Raytest, Gabi)</td></tr><tr><td>Acetonitrila</td><td>J.T. Baker</td><td>14-650-359</td><td></td></tr><tr><td>Ácido trifluoroacético</td><td>Sigma-aldrich</td><td>302031</td><td></td></tr><tr><td>Meio Eagle modificado de Dulbecco&nbsp;</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>soro fetal</td> bovino Frascos <td>T175 16000044</td><td></td><td>Thermo fisher scientific</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Corning</td><td>CLS431080</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>penicilina-estreptomicina</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>15240112-contador</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Perkin</td> Elmer-1480 <td></td><td>Wizard 3</td></tr><tr><td>Seringa Insunlin</td><td>Becton Dickinson</td><td>326105</td><td></td></tr><tr><td>bomba Synringe</td><td>Harvard Aparelho</td><td>70-4500</td><td></td></tr><tr><td>micro-PET/CT</td><td>Siemens Inveon</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

preparando um 68ga-rotulado arginina glicina aspartato (rgd)-peptídeo para angiogênese

Preparing a 68Ga-labeled Arginine Glycine Aspartate (RGD)-peptide for Angiogenesis

Avα β3 integrina é uma molécula de adesão heterodimérica envolvidos na angiogênese e migração de células do tumor. A integrina é overexpressed em células endoteliais tumor angiogênico, onde normalmente tem uma baixa concentração. Esta expressão específica de αvβ3 torna um biomarcador válido para antiangiogênica e drogas de imagem. Como uma modalidade de imagem funcional, tomografia por emissão de pósitrons (PET) fornece informações sobre bioquímicos e fisiológicos muda na vivo, devido a sua alta sensibilidade única na escala nanomolar. Daí, baseada em radiometal radiofármacos de PET recebeu grande atenção para a quantificação não-invasivo de angiogênese do tumor. Este artigo fornece um protocolo sistêmico para preparar um novo peptídeo radiometal-etiquetados para a avaliação da angiogênese. Este protocolo contém informações sobre confiabilidade radioquímica, Lipofilicidade, absorção celular, estabilidade de soro e propriedades farmacocinéticas. A 68Ga-RGD-peptídeo é um dos ligantes PET representativas em direção αvβ3 integrina. Aqui, apresentamos um protocolo para preparar um 68Ga-RGD-peptídeo e a avaliação da sua eficácia biológica.

A quelação de 68GaCl3 com o NOTA-RGD-peptide era simples, sendo o rendimento radiolabeling 99%. Impurezas de reação foram removidas com êxito como mostrado na Figura 2. A pureza radioquímica de 68Ga-RGD-peptídeo era superior a 99%, sendo atividade específica ao final da síntese 90-130 MBq/nmol (Figura 3).
A absorção de célula valores par...

Avα β3 integrina é um tipo de proteína de adesão que é altamente expressa em células endoteliais ativadas submetidos a angiogênese. Assim, avaliar a integridade da integrina é de grande interesse em Oncologia. Aqui, apresentamos um método para preparar radiopeptides Ga-rotulado de 68e um método para avaliar sua eficácia biológica.

Preparando um 68Ga-rotulado arginina glicina aspartato (RGD)-peptídeo para angiogênese

The &#945;v&#946;3 integrin is a heterodimeric adhesion molecule involved in tumor cell migration and angiogenesis. The integrin is overexpressed in ...

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave na preparação do Gálio 68 rotulado RGD-Peptídeo e o método para a avaliação biológica de seus análogos. A principal vantagem dessa técnica é que é um protocolo sistêmico simples para o desenvolvimento de um novo peptídeo rotulado por radiometal. Demonstrando o procedimento será Ki-Hye Jung, um pós-doutor do nosso instituto.Comece usando ácido clorídrico molar de 0,5 molar para elute radiolabeled gálio triloreto de um gerador de gálio radiolabeled. Purgue o composto em frasco de reação de cinco mililitros com gás nitrogênio a 80 graus Celsius. Seguido pela adição de 100 microgramas de acetato de glicina de arginina ou peptídeo RGD em um acetato de sódio molar ao composto seco.Aqueça a mistura de reação a 80 graus Celsius durante cinco minutos antes de permitir que a mistura esfrie à temperatura ambiente. Para purificar o produto bruto com cromatografia líquida de alto desempenho, adicione a solução a uma coluna C18 e passe a solução através de um cartucho em faseversa C18. Lave o cartucho com dois mililitros de soro fisiológico e elute o peptídeo radiolabeled com 0,7 mililitros de 95% de etanol seguido pela remoção do solvente a

preparing-68ga-labeled-arginine-glycine-aspartate-rgd-peptide-for

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Medicine

Medicina

Adulto normal tecido vascularizado mamíferos que carece de angiogênese fisiológica e que não tenha sido exposto a uma intervenção cirúrgica é usado para estudar: (i) o início e desenvolvimento da angiogênese após a administração intraperitoneal de agentes de teste, e (ii) a modificação da angiogênese após a administração sistêmica de selecionados agentes de teste.

Rat Assay Angiogenesis Mesentery

Para demonstrar imagem molecular do câncer MR com um pequeno peptídeo alvo MRI agente de contraste específico para proteínas do plasma coagulado no estroma tumoral em um modelo de câncer de próstata do rato.

MR Imagem Molecular do cancro da próstata com um pequeno Molecular CLT1 Peptide alvejado agente de contraste

Um procedimento para o isolamento de EOB-DTPA e complexação subsequente com Ga naturais (III) e 68 Ga é aqui apresentado, bem como uma análise aprofundada de todos os compostos e investigações sobre a eficiência rotulagem, a estabilidade in vitro e o octanol / água coeficiente de distribuição do complexo marcado radioactivamente.

As investigações sobre o Complexo Ga (III) de EOB-DTPA e sua<sup&gt; 68</sup&gt; Ga Radiolabeled Analogue

Apresentamos um protocolo para a síntese de hidrogéis funcionalizados com RGD como dispositivos para liberação de células e fármacos. O procedimento envolve cicloadição de alcino-azida catalisada por cobre (CuAAC) entre ácido poliacrílico modificado com alcino (PAA) e um derivado RGD-azida. Os hidrogéis são formados por policondensação assistida por micro-ondas e suas propriedades físico-químicas são investigadas.

A Síntese de hidrogéis RGD-funcionalizado como uma ferramenta para aplicações terapêuticas

Um protocolo para a síntese de guanidinas modificada-alquilo baseados na utilização dos precursores correspondentes é apresentada.

Modificação e funcionalização do Grupo de guanidina por precursores sob medida

Um protocolo para a síntese de um 1,2-Ditiolano modificado de peptídeo e a caracterização das estruturas supramoleculares resultantes do peptide auto-montagem.

Síntese e caracterização de 1,2-Ditiolano modificado peptídeos auto-montagem

São descritas técnicas para a geração de uma biblioteca de peptídeos curtos que podem ativar células de mastro através do receptor MRGPRX2. As técnicas associadas são fáceis, baratas e podem ser estendidas a outros receptores celulares.

Peptídeos de triagem que ativam mrgprx2 usando células HEK projetadas

A superfície TGT é uma plataforma inovadora para estudar o crosstalk fator de crescimento integrin. O design flexível da sonda, a especificidade do ligante de adesão e a modulação precisa das condições de estimulação permitem avaliações quantitativas robustas da interação EGFR-integrin. Os resultados destacam a EGFR como uma mecânica integrin de ajuste 'mecano-organizador', influenciando a montagem de adesão focal e a disseminação celular.

Sondas de tether medidor de tensão para quantificar fator de crescimento mediado mecânica integrin e adesão

Este estudo desenvolveu um método não invasivo e em tempo real para avaliar a distribuição do ligante morte programada 1 em todo o corpo, baseado em imagens tomográficas por emissão de pósitrons do antagonista D-dodecapeptídeo [68Ga]. Essa técnica apresenta vantagens sobre a imunohistoquímica convencional e melhora a eficiência na identificação de pacientes apropriados que se beneficiarão da terapia de bloqueio do ponto de verificação imune.

Desenvolvimento de um traçador PET com 68peptídeos D marcados com gálio para a expressão do ligante morte programada 1 por imagem

Esta pesquisa descreve o processo automatizado para produção de [68Ga]Ga-3BP-3940 com o sintetizador GAIA V2, para imagens PET da proteína de ativação de fibroblastos. Os resultados dos testes de controle de qualidade realizados em três lotes de teste também são apresentados.

Preparação automatizada de [68Ga]Ga-3BP-3940 em um módulo de síntese para imagens PET do microambiente tumoral

Aprenda a preparar peptídeos RGD marcados com Gálio-68 para imagem molecular em oncologia. Este protocolo simplificado permite avaliar a eficácia biológica de análogos radiofarmacos com alta pureza radioquímica.

Preparando um ⁶⁸Ga-rotulado arginina glicina aspartato (RGD)-peptídeo para angiogênese

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