Name: Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Aprenda a técnica de sutura circumlimbal para induzir hipertensão ocular crônica em ratos e camundongos. Este método minimamente invasivo permite elevar a pressão intraocular de forma reversível, facilitando estudos sobre glaucoma e recuperação das células ganglionares da retina.

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Este trabalho é financiado pela National Health e Conselho de pesquisa médica da Austrália projeto grant (1046203), bolsa de futuro de Conselho de pesquisa australiano (FT130100338).

Todos os procedimentos experimentais foram realizados de acordo com o Australian código de práticas para o cuidado e o uso de animais para fins científicos, definida pelo Conselho de pesquisa médica e nacional de saúde na Austrália. Aprovação ética foi obtida do Comitê de ética Howard Florey Institute Animal (aprovação número 13-044-hum e 13-068-hum para ratos e ratos, respectivamente).
1. medição de pressão intra-ocular em ratos conscientes
<ol><li>Ajuste o tonometer de rebote de laboratório para o rato. Swaddle o rato acordado em um pedaço de pano macio para acalmar o animal. Expor a cabeça e o pescoço. Pressione cuidadosamente o tronco em uma mão, com as costas do animal encostadas no peito do investigador. Nota: Não é necessária anestesia tópica.</li>
	<li>Use a outra mão para trazer o tonometer rebote perto do olho do rato, de modo que a ponta da sonda IOP é aproximadamente 2-3 mm longe e perpendicular ao ápice da córnea. Use a mão direita para medir IOP no olho direito e mão esquerda para o olho esquerdo do animal.</li>
	<li>Aguarde alguns segundos para o rato para acalmar e pressione o botão de medição de uma vez. Observar que a ponta da sonda IOP suavemente atingiu o ápice da córnea uma vez; e ouvir o bip de tonometer rebote de uma vez. Nota: Um único sinal do tonometer confirma sucesso medição, que pode ser lido a partir da tela de LCD. Um duplo sinal sonoro indica um erro de medição. Erros de medição podem surgir de fatores tais como a distância de trabalho inadequados entre a sonda e a córnea, uma inclinação excessiva na orientação do tonometer, ou a sonda atingir a pálpebra ou uma parte não-central da córnea. Consulte o manual de tonometer rebote do fabricante para mais detalhes sobre erros de medição.</li>
	<li>Repita a etapa 1.3 dez vezes em um intervalo de 1-2 segundo, partir destas medições derivar um valor médio de IOP para esse ponto do tempo. Redefina o tonometer após a leitura deth 5.</li>
	<li>Para monitoramento serial, medir IOP ao mesmo tempo do dia e sob condições de iluminação consistente para minimizar a variação devido a diurnal IOP ciclo20,21.</li>
</ol>2. medição de pressão intra-ocular em camundongos conscientes
<ol><li>Ajuste o tonometer rebote para o mouse de acordo com as instruções do fabricante.</li>
	<li>Para refrear o mouse com a mão, posicione o mouse no topo de uma gaiola de grade e puxe delicadamente a cauda para trás. Nota: Isto irá pedir o animal para segurar na grade do metal com suas patas dianteiras e a tentativa de se puxar para a frente, o que vai ligeiramente esticar seu corpo.<ol>
<li>Use a outra mão para agarrar a pele solta imediatamente atrás das orelhas. Prenda a parte inferior do corpo do animal, segurando a cauda entre o dedo anelar e o dedo médio (ou entre o dedo mindinho e a palma da mão). Nota: Não tente agarrar a pele muito apertada, para evitar asfixia e aplicando pressão sobre os olhos.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Com a mão livre agora (inicialmente segurando a cauda), trazer o tonometer rebote perto do olho do rato, para que a ponta da sonda IOP é aproximadamente 2-3mm de e perpendicular ao ápice da córnea. Para medir o outro olho, gire o mouse para que o outro olho está agora em frente o tonometer.</li>
	<li>Espere para o mouse acalmar e pressione o botão de medição de uma vez. Observar que a ponta da sonda IOP suavemente atingiu o ápice da córnea; com um único bip confirmando a medida bem sucedida. Nota: Um duplo sinal sonoro indica um erro de medição. Pode ajudar a ter uma segunda leitura do experimentador e documento as leituras de IOP enquanto o primeiro experimentador leva as medições.</li>
	<li>Repita a etapa 2.4 para obter dez leituras bem sucedidas para derivar um IOP. Redefina o tonometer após a leitura deth 5. Permita um intervalo de 1-2 segundos entre leituras.</li>
	<li>Conforme medição serial em ratos, medir rato IOP ao mesmo tempo do dia e sob condições de iluminação consistente.</li>
</ol>3. indução de elevação da pressão intra-ocular em ratos anestesiados e camundongos
<ol><li>Limpe o banco cirúrgico com clorexidina 0,5% em etanol a 70%. Cobrir o banco com cortinas estéril. Autoclave todo equipamento cirúrgico previamente. Certifique-se de todos os experimentadores usam equipamento de protecção adequado (máscaras cirúrgicas, vestidos e luvas esterilizadas).</li>
	<li>Para induzir anestesia geral, coloca o animal em uma câmara de indução. Entrega 3-3,5% de isoflurano com O2 a uma taxa de fluxo de 3 L/min.<ol>
<li>Manter a anestesia com isoflurano 1,5% no 2 L/min entregado através de uma máscara de rosto roedores durante a cirurgia. Garantir suficiente profundidade da anestesia pela ausência de um reflexo de pitada de pata.</li>
		<li>Evite a depressão respiratória, ajustando a taxa de fluxo quando necessário para manter a taxa respiratória em cerca de 60 respirações por minuto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Selecione aleatoriamente um olho para induzir hipertensão ocular, com o olho contralateral para servir como um controle não tratado. Instile uma gota de solução oftálmica de 0,5% proxymetacaine para anestesia tópica. Para limpar a superfície ocular, lave os olhos com 3 mL de solução salina estéril.</li>
	<li>Cubra o animal com um pano cirúrgico estéril, fenestrado, expondo o olho a ser suturado.</li>
	<li>Realize uma sutura em bolsa na conjuntiva bulbar ao redor do globo. Em ratos, tecer a sutura nylon paralela 7/0 e 2 mm posterior ao limbo (Figura 1). Em camundongos, coloque a sutura de nylon 10/0 a 1 mm posterior ao limbo.<ol>
<li>Tome cuidado para não penetrar a esclera. Uma súbita dilatação pupilar durante o procedimento cirúrgico indica que provavelmente foi penetrada a esclera.</li>
		<li>Âncora de sutura na conjuntiva usando 5-6 pontos de ancoragem em ratos e 4-5 pontos de ancoragem em camundongos.</li>
		<li>Evite a compressão direta sobre as veias principais episcleral rosqueando a sutura sob a conjuntiva no cruzamento destas veias. Nota: Enquanto nós recomendamos evitar a compressão da veia episcleral principais em ratos, isso não é rotineiramente feito em ratos devido à baixa visibilidade destas veias nos olhos de rato. Mesmo que as veias principais não são compactadas diretamente, é provável que as pequenas embarcações no plexo de veia episcleral estão sob pressão, que pode ser um fator contribuinte para a elevação sustentada do IOP (veja a discussão para o mecanismo de elevação de IOP).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Apertem a sutura em bolsa, amarrando um nó corrediço depois seguido de um segundo nó simples (Figura 1). Para evitar um pico IOP pós-cirúrgica excessivamente alto, ter um assistente medir o IOP imediatamente antes de apertar o segundo nó.<ol>
<li>Se o IOP é encontrado para ser demasiado elevado, ajuste o nó de deslizamento, parcialmente, liberando a tensão em uma extremidade da sutura (seta na Figura 1A).</li>
		<li>Depois que o IOP desejada é alcançada (idealmente de 30 a 60 mmHg em ratos ou 30-40 mmHg em ratos), gravata fora o segundo nó, mantendo uma força puxando contínua sobre o efeito da sutura (seta na Figura 1).</li>
		<li>Após o segundo nó foi apertada, apare as pontas da sutura para minimizar qualquer sensação de corpo estranho. Monitore o animal durante a recuperação da anestesia geral. Nota: É importante usar o slipknot quando o primeiro nó para garantir adequada compressão interna no olho. Após várias semanas geralmente Note-se que as extremidades se tornam incorporadas na conjuntiva.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. monitorização IOP
<ol><li>Medir a primeira IOP em 2 minutos pós-operatório sob anestesia de isoflurano. Posteriormente, monitore IOP quando o roedor recuperou a consciência conforme os passos acima 1 e 2. Nota: Monitore o IOP duas vezes durante o primeiro dia (2 minutos e 1 hora), diariamente, na primeira semana e uma vez ou duas vezes por semana depois disso.</li>
</ol>5. análise da função e estrutura da retina
<ol><li>No ponto experimental final desejado (no caso depois de 8 semanas em ratos e 12 semanas em ratos), sob anestesia geral com injeção intraperitoneal de xilazina/cetamina, medir a função da retina com a electroretinogram vez (ERG) conforme descrito mais pormenorizadamente noutro lugar15,16,17. Nota: Nós encontramos robustos disfunção de células ganglionares, afinamento de camada de fibras nervosas da retina e gânglio célula perda para durações entre 8 a 12 semanas. Outros têm empregado com sucesso por períodos mais longos de IOP elevação14,15.</li>
	<li>Imediatamente após a medição de ERG, medir a espessura da camada retinal da fibra do nervo (RNFL) e da espessura da retina total usando o domínio espectral coerência óptica tomografia computadorizada (SD-OCT) 16,18.</li>
	<li>No final do estudo longitudinal, eutanásia dos animais sob anestesia profunda.<ol>
<li>Dissecar a retina para histologia18, por exemplo imunocoloração de retina toda a montagem, usando um anticorpo específico da célula (RGC) ganglionares da retina como RNA-proteína com vários anticorpos emenda (RBPMS) ou específicas do cérebro homeobox/POU domínio 3A de proteína (Brn3a)16,19,22.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9093024">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Experimental Eye Research. 64 (1), 85-96 (1997).</li>
<li>Feng, L., Chen, H., Suyeoka, G., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+laser-induced+mouse+model+of+chronic+ocular+hypertension+to+characterize+visual+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A laser-induced mouse model of chronic ocular hypertension to characterize visual defects.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), (2013).</li>
<li>Chiu, K., Chang, R., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+chronic+ocular+hypertension+model+on+SD+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Laser-induced chronic ocular hypertension model on SD rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (10), 549(2007).</li>
<li>Quigley, H. A., Addicks, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+experimental+glaucoma+in+primates.+I.+Production+of+elevated+intraocular+pressure+by+anterior+chamber+injection+of+autologous+ghost+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Chronic experimental glaucoma in primates. I. Production of elevated intraocular pressure by anterior chamber injection of autologous ghost red blood cells.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 19 (2), 126-136 (1980).</li>
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<li>Weber, A. J., Zelenak, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+glaucoma+in+the+primate+induced+by+latex+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Experimental glaucoma in the primate induced by latex microspheres.</a> Journal of Neuroscience Methods. 111 (1), 39-48 (2001).</li>
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<li>Foulsham, W. S., Fu, L., Tatham, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+improvement+following+glaucoma+surgery%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Visual improvement following glaucoma surgery: a case report.</a> BMC Ophthalmology. 14, 162(2014).</li>
<li>Anderson, A. J., Stainer, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+control+experiment+for+studies+that+show+improved+visual+sensitivity+with+intraocular+pressure+lowering+in+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">A control experiment for studies that show improved visual sensitivity with intraocular pressure lowering in glaucoma.</a> Ophthalmology. 121 (10), 2028-2032 (2014).</li>
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<li>Zhao, D., et al. ARVO abstract number 3696 - B0043. annual meeting of Association for Research in Vision and Ophthalmology, Honolulu, Hawaii, USA. , (2018).</li>
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<li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+Circumlimbal+Suture+Model+of+Chronic+IOP+Elevation+in+Mice+and+Assessment+of+Changes+in+Gene+Expression+of+Stretch+Sensitive+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Characterization of the Circumlimbal Suture Model of Chronic IOP Elevation in Mice and Assessment of Changes in Gene Expression of Stretch Sensitive Channels.</a> Frontiers in Neuroscience. 11, 41(2017).</li>
<li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), (2016).</li>
<li>Van Koeverden, A. K., He, Z., Nguyen, C. T., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29739991">Systemic hypertension is not protective against chronic IOP elevation in a rodent model.</a> Scientific Reports. 8 (1), 7107(2018).</li>
<li>Rodriguez, A. R., de Sevilla Muller, L. P., Brecha, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNA+binding+protein+RBPMS+is+a+selective+marker+of+ganglion+cells+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">The RNA binding protein RBPMS is a selective marker of ganglion cells in the mammalian retina.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (6), 1411-1443 (2014).</li>
<li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twenty-four-hour+pattern+of+mouse+intraocular+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Twenty-four-hour pattern of mouse intraocular pressure.</a> Exp Eye Research. 77 (6), 681-686 (2003).</li>
<li>Jia, L., Cepurna, W. O., Johnson, E. C., Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+intraocular+pressure+elevation+after+aqueous+humor+outflow+obstruction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Patterns of intraocular pressure elevation after aqueous humor outflow obstruction in rats.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (6), 1380-1385 (2000).</li>
<li>Nadal-Nicolas, F. M., Jimenez-Lopez, M., Sobrado-Calvo, P., Nieto-Lopez, L., Canovas-Martinez, I., Salinas-Navarro, M., Vidal-Sanz, M., Agudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brn3a+as+a+marker+of+retinal+ganglion+cells%3A+qualitative+and+quantitative+time+course+studies+in+naive+and+optic+nerve-injured+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Brn3a as a marker of retinal ganglion cells: qualitative and quantitative time course studies in naive and optic nerve-injured retinas.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50 (8), 3860-3868 (2009).</li>
<li>Liu, H. H., Flanagan, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Chronic+Ocular+Hypertension+Induced+by+Circumlimbal+Suture%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension Induced by Circumlimbal Suture.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (1), 353-361 (2017).</li>
<li>Liu, H. H., He, Z., Nguyen, C. T., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+functional+loss+in+a+rat+model+of+chronic+intraocular+pressure+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+%26+Physiological+Optics%22%5BJournal%5D)">Reversal of functional loss in a rat model of chronic intraocular pressure elevation.</a> Ophthalmic & Physiological Optics. 37 (1), 71-81 (2017).</li>
<li>Liu, H. H., Zhang, L., Shi, M., Chen, L., Flanagan, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+laser+and+circumlimbal+suture+induced+elevation+of+intraocular+pressure+in+albino+CD-1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparison of laser and circumlimbal suture induced elevation of intraocular pressure in albino CD-1 mice.</a> PLoS One. 12 (11), 0189094(2017).</li>
<li>Shen, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraocular+Pressure+Induced+Retinal+Changes+Identified+Using+Synchrotron+Infrared+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intraocular Pressure Induced Retinal Changes Identified Using Synchrotron Infrared Microscopy.</a> PLoS One. 11 (10), 0164035(2016).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

A sutura de circumlimbal é um novo modelo de hipertensão ocular crônica. Além dos estudos, do qual os resultados representativos são oriundos de16,18, este modelo animal tem sido utilizado em uma série de recentes estudos15,23,24,25 ,26. Comparação entre estes relatórios anteriores mostra que o método...

Modelos animais fornecem que uma plataforma importante para a investigação do laboratório de celular processos subjacentes patogênese de glaucoma, bem como avaliar possíveis intervenções terapêuticas. Foram desenvolvidos vários modelos inducible para produzir elevação sustentada da pressão intra-ocular (Pio), o mais importante fator de risco para o glaucoma. Métodos que foram aplicados para elevar o IOP incluem: injeção salina hipertônica no episcleral veias1, fotocoagulação laser da malha trabecular2 ou do estroma veias3e injeção intracameral de substâncias tais como fantasma vermelho glóbulos4, microbeads5,6 e viscoelástico agentes7. Cada abordagem tem suas vantagens e limitações.
Um bom modelo para o glaucoma deve imitar o processo da doença, com mínima complicação como trauma, inflamação e mídia opacidades. Estas complicações são frequentemente associadas com os procedimentos utilizados para induzir a elevação do IOP e podem confundir a interpretação dos resultados. Por exemplo, paracentese de câmara anterior, mesmo quando substâncias estranhas não são introduzidas, tem demonstrado causar trauma e inflamação que não é representativa de típica mudança glaucomatous8,9. A importância de evitar a inflamação, além de manter a claridade ótica facilita na vivo imaging e Eletrofisiologia para monitorar a progressão da doença. Embora não está claro em que medida estas complicações podem afetar as investigações de doença, pode ser melhor evitar penetrar o olho durante a indução de modelo. A abordagem de sutura circumlimbal evita a penetração do globo e facilita na vivo avaliação longitudinal da estrutura da retina e função. Mais importante, este modelo difere dos anteriores em sua capacidade de retornar o IOP para valores basais remoção da sutura quando necessário. Normalização de IOP pode ser útil para estudar o celular e moleculares correlações do gânglio reversível e irreversível celulares lesão10,11,12,13,14.
Este artigo centra-se na técnica de indução de modelo. Caracterização da lesão retiniana induzida por este modelo em ratos e camundongos pode ser encontrada em maior detalhe em outro lugar15,16,17,18,19.

<table><tbody><tr><td>solução salina normal</td><td>Baxter International Inc</td><td>AHB1323 Manter a</td><td>hidratação da córnea durante a cirurgia</td></tr><tr><td>Clorhexadina 0,5%</td> <td>Orion Laboratories</td><td>27411, 80085</td><td>Desinfecção do instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Isoflurano 99,9%</td> <td>Abbott Australasia Pty Ltd</td><td>CAS 26675-46-7</td><td>Nome Proprietário: Anestésico por inalação Isoflo(TM). Anestésico inalatório de grau farmacêutico misturado com gás oxigênio para procedimento de sutura</td></tr><tr><td>lubrificante ocular</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>1618611</td><td>Nome Proprietário: Genteal, lubrificante ocular para manter o outro olho úmido</td></tr><tr><td>Suporte de agulha (microcirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>555419NT</td><td>Para segurar a agulha durante a cirurgia ocular</td></tr><tr><td>Proxymetacaína 0.5%</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>CAS 5875-06-9</td><td>Analgesia ocular tópica</td></tr><tr><td>Tesoura (microcirurgia)</td> <td>Instrumentos de precisão mundiais</td><td>501232</td><td>Para cortar o coto de sutura excessivo durante a ligadura</td></tr><tr><td>Cortina cirúrgica</td><td>Suprimentos médicos vitais</td><td>GM29-612EE</td><td>Garantir ambiente estéril durante</td></tr><tr><td>a cirurgia Agulha de sutura para ratos (microcirurgia) Agulhas</td> <td>médicas Ninbo</td><td>151109</td><td>8-0 sutura de nylon fixada com agulha redonda, ponta 3/8, agulha dupla, comprimento da sutura 30cm</td></tr><tr><td>Agulha de sutura para camundongos (microcirurgia)</td><td>Agulhas médicas Ninbo</td><td>160905</td><td>10-0 sutura de nylon presa com agulha redonda, ponta 3/8, agulha dupla, comprimento da sutura 30cm</td></tr><tr><td>Pinças (microcirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500342</td><td>Manipular tecidos durante a cirurgia ocular</td></tr><tr><td>tonômetro</td> <td>de reboteTONOLAB, iCare, Helsínquia, Finlândia</td><td>TV02</td><td>para monitorização da pressão intraocular</td></tr></tbody></table>

um modelo de glaucoma induzido por sutura circumlimbal em ratos e camundongos

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

A sutura de circumlimbal é uma técnica para induzir o glaucoma experimental em roedores por cronicamente elevar a pressão intra-ocular (Pio), um conhecido fator de risco para o glaucoma. Este protocolo demonstra um guia passo a passo sobre essa técnica no longo Evans ratos e camundongos C57BL/6. Sob anestesia geral, uma "" sutura em bolsa é aplicada na conjuntiva, ao redor do Equador e para trás ao limbo do olho. O olho companheiro serve como um controle não tratado. Ao longo da duração do nosso estudo, que foi um período de 8 semanas para ratos e 12 semanas para ratos, IOP manteve-se elevado, medida regularmente pelo tonometria de rebote em animais conscientes sem anestesia tópica. Em ambas as espécies, os olhos suturados mostraram electroretinogram características consistentes com disfunção da retina interna preferencial. Tomografia de coerência óptica mostrou desbaste seletivo da camada retinal da fibra do nervo. Histologia da retina rato na secção encontrada reduzida densidade de células na camada de células ganglionares, mas nenhuma mudança nas outras camadas celulares. Coloração de retinae rato apartamento montado com um marcador específico de células ganglionares (RBPMS) confirmou a perda de células ganglionares. A sutura de circumlimbal é um simples, minimamente invasiva e econômica maneira de induzir hipertensão ocular que leva à lesão de células ganglionares em ratos e camundongos.

Os seguintes resultados em ratos18 e ratos16 foram anteriormente relatados e são resumidos aqui. A sutura circumlimbal produziu um padrão semelhante de elevação IOP em ratos e camundongos (Figura 2). Um breve spike IOP, até 58,1 ± 2,7 mmHg em ratos e 38,7 ± 2,2 mmHg em camundongos, verificou-se imediatamente após o procedimento de sutura. Em ratos, magnitude IOP gradualmente reduzida ao longo do tempo a ser 44 ±...

Hipertensão ocular crônica é induzida pela aplicação de uma sutura de circumlimbal em ratos e camundongos, levando à deterioração funcional e estrutural das células ganglionares da retina consistentes com glaucoma.

Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

Esta abordagem fornece uma maneira reprodutível e minimamente invasiva de elevar o IOP por longos períodos de tempo. Isso nos ajudará a entender melhor o glaucoma. Uma vantagem dessa técnica é que a elevação do IOP é facilmente reversível, permitindo que os pesquisadores investiguem as habilidades dos olhos para se recuperar da elevação da pressão crônica.Uma demonstração visual deste método é fundamental, pois suturar e amarrar um nó de tensão são difíceis de aprender lendo um manuscrito sozinho. Para auxiliar bem, recomendamos que uma nova técnica, pratique a sutura sob microscópio. Comece esfregando o rato acordado em um pedaço de pano macio para acalmar o animal.Segure suavemente o tronco em uma mão, com os animais de volta apoiados contra o peito dos investigadores, e exponha a cabeça e o pescoço. Use a outra mão para trazer o tonômetro rebote perto do olho de rato, de modo que a ponta da sonda interocular esteja a aproximadamente dois a três milímetros de distância, e perpendicular ao ápice da córnea. Espere alguns segundos para o rato se acalmar, em seguida, pressione o botão de medição uma vez.Observe a parte superior da sonda IOP bata suavemente no ápice da córnea uma vez,

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra a indução do glaucoma em um rato anestesiado pela injeção de solução salina hipertônica na veia episcleral. A solução salina entra na malha trabecular através do canal de Schlemm, causando cicatrizes nos tecidos, que bloqueiam a saída do humor aquoso e aumentam a pressão intraocular. A pressão elevada danifica as células ganglionares da retina, levando ao glaucoma.

Uma técnica de injeção de solução salina hipertônica para induzir glaucoma em ratos

Neste vídeo, um rato anestesiado passa por um procedimento ocular onde esferas magnéticas são injetadas na câmara anterior sob um campo magnético para bloquear o ângulo iridocorneano. Esse bloqueio obstrui a malha trabecular, impedindo a drenagem do humor aquoso e levando ao aumento da pressão intraocular, danificando as células ganglionares da retina e o nervo óptico. Isso desenvolve uma condição semelhante ao glaucoma.

Indução experimental de glaucoma via obstrução do ângulo iridocorneano em um modelo de camundongo

Fonte: Lani-Louzada, R., et al., Cauterização de círculo completo do plexo vascular límbico para glaucoma induzido cirurgicamente em roedores. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra a indução e monitoramento da pressão intraocular (PIO) elevada em um modelo de rato. O processo envolve a cauterização dos vasos sanguíneos límbicos, resultando em oclusão do vaso e PIO elevada. O rato é então autorizado a se recuperar e a PIO é monitorada regularmente nos olhos experimental e de controle para...

 Indução de Pressão Intraocular Elevada em Modelo de Rato

Hipertensão ocular crônica é induzida pelo uso de fotocoagulação a laser da malha trabecular em rato olhos. A pressão intra-ocular (IOP) é ​​elevada durante vários meses após o tratamento com laser. A diminuição da acuidade visual e sensibilidade ao contraste de animais experimentais são monitorados por meio do teste optomotor.

Um modelo de rato induzida por laser de crônica Ocular Hypertension para Caracterizar defeitos visuais

Apresentamos um método para induzir pressão intraocular elevada (PIO), injetando microesferas magnéticas no olho do rato, para modelar o glaucoma. Isso leva a fortes aumentos de pressão e morte neuronal extensa. Este protocolo é fácil de executar, não requer injeções repetidas e produz aumentos estáveis de PIO de longa duração.

Experimental Glaucoma induzida pela injeção de microesferas magnéticas Ocular

Aqui, nós apresentamos um protocolo para induzir hipertensão ocular no olho murino que resulta na perda de células ganglionares da retina observada no glaucoma. microesferas magnéticas são injectados na câmara anterior e atraído para o ângulo iridocorneal utilizando um magnete para bloquear o escoamento do humor aquoso.

A Magnetic Microbead Oclusão Modelo para induzir Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma em Ratos

O glaucoma é caracterizado por danos às células ganglionares da retina. A indução de glaucoma em modelos animais pode fornecer informações sobre o estudo desta doença. Aqui, descrevemos um procedimento que induz a perda de RGCs em um modelo de rato in vivo e demonstra a preparação de retinas de montagem inteira para análise.

Glaucoma de indução de Procedimento em um<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de Rato e Whole mount-Retina Preparação

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir hipertensão ocular e neurodegeneração glaucomatous nos olhos do rato por injeção intracameral de óleo de silicone e o procedimento para a remoção de óleo de silicone da câmara anterior para retornar pressão intraocular elevada para Normal.

Um modelo reversível da hipertensão ocular óleo-induzida do silicone nos ratos

Aqui, descrevemos o uso da tomografia de coerência óptica de domínio espectral (SD-OCT) para visualizar estruturas retinianas e oculares in vivo em modelos de degeneração da retina, glaucoma, retinopatia diabética e miopia.

Avaliações estruturais in vivo de doenças oculares em modelos de roedores utilizando tomografia de coerência óptica

O objetivo deste protocolo é caracterizar um novo modelo de neurodegeneração glaucomatosa baseado na cauterização térmica 360° do plexo vascular limbal, induzindo hipertensão ocular subaguda.

Cauterização em círculo completo do plexo vascular limbal no glaucoma induzido cirurgicamente em roedores

Aprenda a técnica de sutura circumlimbal para induzir hipertensão ocular crônica em ratos e camundongos. Este método minimamente invasivo permite elevar a pressão intraocular de forma reversível, facilitando estudos sobre glaucoma e recuperação das células ganglionares da retina.

Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos

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