Deteção de 3-Nitrotyrosine em ambientes atmosféricos através de alta performance sistema Detector eletroquímico-cromatografia líquida

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave em pesquisas ambientais sobre Nitrapyrin e 3-nitrotyrosina. A principal vantagem desta técnica é que ela é um método único e altamente sensível para detectar 3-nitrotilrose em filtros de amostra de ar. Para coletar partículas suspensas totais ou partículas de menos de sete mícrons de tamanho, primeiro pese um filtro de quartzo de 3 meses e fixe-o em um amostrador de ar de alto volume. Cubra o filtro com um seletor de tamanho de partícula para coletar PM7 ou deixe o filtro descoberto para coletar partículas suspensas totais. Execute o amostrador de ar a 1000 litros por minuto continuamente durante sete dias. Carregue os pré-filtros em uma unidade de classificação de tamanho e instale a unidade de classificação de tamanho e um filtro de backup no amostrador de ar de baixo volume. Execute o amostrador de ar a 116 ninhadas por minuto continuamente durante sete dias para coletar PM2.5 no filtro de backup. Quando a amostragem termina, regissou o volume total de fluxo. Pesar o filtro e calcular o peso das partículas coletadas. Sele o filtro em um saco plástico e armazene-o a 30 graus Celsius.Em seguida, prepare 500 microliters de coquetel de protease não específico 6X e tampão de acetato e coloque-o em uma membrana de dalase com um corte de peso molecular de 5000 daltons. Mergulhe a membrana preenchida em 1 L do tampão de acetato e mexa-a a 4 graus Celsius por 24 a 36 horas, substituindo o tampão a cada 12 horas para remover indogenos 3-Nitrotilrosina e Nitrítmite.Em seguida, meça a concentração de proteína na solução de protease dialícida com um ensaio de proteína de ácido bicinchonônnico. Depois disso, retire um filtro do congelador e deixe-o aquecer à temperatura ambiente enquanto ainda estiver lacrado no saco. Em seguida, soque até cinco círculos de 6 milímetros de largura a partir da área coberta de material particulado do filtro, e coloque os círculos em um tubo de micro centrífugas de 1,5 mililitros. Prepare 300 microliters de tampão de acetato contendo 50