Avaliação não-invasiva da função de músculos levantadores em ratos

Este modelo pode ajudar a responder perguntas-chave no campo da função de contração muscular. Como o mecanismo de produção de força, durante a progressão da doença. A principal vantagem dessa técnica é que esse procedimento é um não invasivo, que pode ser realizado no mesmo animal em diferentes momentos, para monitorar a progressão e o tratamento da doença.

A demonstração visual deste método é fundamental, pois a alteração de qualquer uma dessas etapas pode levar a aumentar a variabilidade em seus resultados. Portanto, a prática pode permitir que você obtenha resultados mais consistentes. Para iniciar este procedimento, configure o grampo do joelho do mouse na plataforma, bem como a placa do mouse no transdutor.

Em seguida, ligue a plataforma de aquecimento a 37 graus Celsius. Abra o software dinâmico de controle muscular na área de trabalho. Na lista de drop down da configuração, selecione haste instantânea e altere os parâmetros de tempo de execução para 120 segundos.

Na base de autosave rotulada pela janela, insira o nome do local do arquivo de autosave. Clique na caixa de seleção à esquerda da janela base de autosave e altere-a para ativar a autosave. Na parte superior da tela de controle DMC, clique no sequenciador, que abrirá uma nova janela pop-up.

Selecione a sequência aberta e selecione o protocolo a ser usado. Em seguida, clique na sequência de carga e feche a janela. Para preparar o animal para experimento, remova o cabelo na perna direita do mouse com cortadores de cabelo elétricos.

Coloque o animal em uma posição supina na plataforma aquecida e limpe a perna direita com 70% de álcool e iodo. Neste ponto, ajuste o Isoflurane para 2% com fluxo de oxigênio a um litro por minuto. Coloque o pé na placa e fixe-o usando fita médica.

Em seguida, aplique o gel condutor na pele onde os eletrodos serão colocados. Em seguida, aperte o joelho para estabilizar a perna durante o procedimento. Use os botões na plataforma para posicionar seu membro traseiro, a fim de formar um ângulo de 90 graus no tornozelo.

Uma vez que o rato esteja preso na plataforma, posicione os eletrodos sob a pele da perna direita, um perto da cabeça da fíbula, e o outro eletrodo mais distally no lado lateral da perna. Os eletrodos são posicionados com cuidado para obter estimulação suficiente do nervo peroneal. Além disso, esta posição pode ser ajustada para atingir um pico estável, visualizado na tela.

Uma vez alcançados esses passos, ajuste o estimulador bi-fase de alta potência para obter uma estimulação do nervo peroneal que resulte em torque máximo de dorsiflexão. Durante a estimulação, gire o transdutor no sentido horário para produzir valores negativos, que são importantes para garantir que os eletrodos estão estimulando apenas os músculos flexores dorsi pelo nervo peroneal. Uma vez alcançada esta etapa, estabilize os eletrodos usando um grampo, a fim de evitar qualquer movimento durante o procedimento.

Alcançar o pico negativo lentamente e gradualmente é importante verificar se os eletrodos são colocados na posição correta, e a tensão é suficiente para alcançar a força máxima. Posteriormente, pare a haste instantânea no software. Na tela principal, ligue a sequência inicial do botão para iniciar a sequência de configuração anterior.

Uma vez que as medidas de força estejam concluídas, remova os eletrodos, remova a fita do pé e solte o grampo do joelho. Desligue o Isoflurane e mantenha a entrega de oxigênio por alguns minutos para ajudar na recuperação do animal. Uma vez que o rato começa a se mover e recupera a consciência, devolva-o para a gaiola.

Este gráfico mostra os dados da curva de frequência de força representativa de um rato através do tempo, onde o procedimento foi repetido uma vez por semana até que cinco pontos de tempo foram concluídos. Essas observações mostraram valores consistentes de produção de força ao longo dos pontos de tempo. Este procedimento também mostrou-se consistente entre diferentes camundongos, como indicado na área representativa, sob a curva da estimulação FFC, ao longo de cinco observações diferentes em seis camundongos testados uma vez por semana.

Após seu desenvolvimento, essa técnica permite que pesquisadores do campo de doenças neuromusculares investiguem alterações temporais na função muscular em modelos de espelhamento da doença.